蟾毒灵诱导骨肉瘤U-2OS和U-2OS/MTX300细胞系的凋亡

目的 研究蟾毒灵对人骨肉瘤细胞株的增殖抑制和诱导凋亡作用.方法 以不同浓度的蟾毒灵分别作用于骨肉瘤细胞U-2OS和甲氨蝶呤(MTX)耐药骨肉瘤细胞U-2OS/MTX300.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,Hoechst 33258荧光染色检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞周期,DNA琼脂糖凝胶电泳检测DNA ladder凋亡条带,Western blot法检测凋亡相关蛋白p53、bax和bcl-2的表达.结果 蟾毒灵能明显抑制骨肉瘤细胞的增殖,其对U-2OS和U-2OS/MTX300细胞的IC50值分别为(8.49±2.1)ng/ml和(10.19±1.7)ng/ml(P＞0.05).蟾毒灵处理U2OS和U-2OS/MTX300细胞48 h后,细胞均出现明显的染色质凝集,有典型的凋亡小体产生.同时,蟾毒灵能诱导骨肉瘤细胞凋亡,其作用机制是通过阻滞细胞周期于G2/M期、上调p53、bax表达和下调bcl-2的表达来实现.结论 蟾毒灵能显著抑制人骨肉瘤细胞U-2OS和U-2OS/MTX300的生长,并诱导细胞凋亡,其抗骨肉瘤作用不受MTX耐药的影响.     

蟾毒灵对人肝癌细胞HepG2细胞周期的影响及其机制研究

目的:探讨蟾毒灵对人肝癌细胞HepG2细胞周期的影响及其相关机制.方法:MTT方法检测蟾毒灵单体对肝癌细胞HepG2的生长抑制作用;FCM法检测蟾毒灵单体诱导HepG2细胞周期阻滞的作用;Western blot方法观察蟾毒灵单体对细胞周期相关蛋白的作用.结果:蟾毒灵能够抑制HepG2细胞的生长,该抑制作用呈时间和剂量依赖性.蟾毒灵能够诱导HepG2细胞周期阻滞于G2/M期.蟾毒灵对HepG2细胞周期的阻滞作用可能与cyclinB1、CDK1的表达下调有关.结论:蟾毒灵能够通过下调细胞周期相关蛋白的表达,诱导HepG2细胞阻滞于G2/M期.     

蟾毒灵对人肝癌细胞HepG2细胞周期的影响及其机制研究

目的：探讨蟾毒灵对人肝癌细胞HepG2细胞周期的影响及其相关机制。方法：MTT方法检测蟾毒灵单体对肝癌细胞HepG2的生长抑制作用;FCM法检测蟾毒灵单体诱导HepG2细胞周期阻滞的作用;WestelTlblot方法观察蟾毒灵单体对细胞周期相关蛋白的作用。结果：蟾毒灵能够抑制HepG2细胞的生长,该抑制作用呈时间和剂量依赖性。蟾毒灵能够诱导HepG2细胞周期阻滞于G2／M期。蟾毒灵对HepG2细胞周期的阻滞作用可能与cyclinB1、CDK1的表达下调有关。结论：蟾毒灵能够通过下调细胞周期相关蛋白的表达,诱导HepG2细胞阻滞于G2／M期。     

蟾毒灵抗肿瘤作用及其分子机制研究进展

蟾毒灵属于传统中药蟾酥中的蟾酥二烯羟酸内脂之一,其结构与地高辛相似,是一种拓朴异构酶Ⅱ抑制剂.它通过诱导细胞凋亡及阻滞细胞增殖周期进程而抑制肿瘤细胞增殖,同时还具有诱导肿瘤细胞分化及抗肿瘤血管生成作用.其作用机制与特定信号转导通路及癌基因和抑癌基因的表达有关.     

蟾毒灵抗肿瘤作用及其分子机制研究进展

蟾毒灵属于传统中药蟾酥中的蟾酥二烯羟酸内脂之一,其结构与地高辛相似,是一种拓朴异构酶II抑制剂。它通过诱导细胞凋亡及阻滞细胞增殖周期进程而抑制肿瘤细胞增殖,同时还具有诱导肿瘤细胞分化及抗肿瘤血管生成作用。其作用机制与特定信号转导通路及癌基因和抑癌基因的表达有关。     

蟾毒灵抗肿瘤作用分子机制

蟾酥在中医药抗肿瘤治疗方面已有悠久的历史,其单体蟾毒灵被认为是具有抗肿瘤活性的有效成分之一.从诱导肿瘤细胞凋亡、分化,抑制细胞增殖及血管生成,增强放化疗药物的敏感性等方面阐述蟾毒灵抗肿瘤作用的分子机制,可以为深入研究蟾毒灵及其发展和临床用药提供依据.     

蟾毒灵诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究进展

本文从蟾毒灵的药物作用靶点、对信号通路的改变、对相关基因及蛋白的调节等几个角度阐述蟾毒灵诱导肿瘤细胞凋亡的机制研究进展.     

蟾毒灵与紫杉醇协同抑制乳腺癌细胞增殖的机制

目的:研究蟾毒灵(Bufalin)与紫杉醇是否可协同抑制乳腺癌细胞增殖,探索可能的协同机制.方法:采用MTT法测定细胞活力、采用流式细胞术检测细胞凋亡,采用Western Blot法检测AKT、p-AKT、p38、p-p38、β-actin蛋白的表达.结果:MTT结果显紫杉醇和Bufalin可以剂量依赖方式抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖.两药联合作用可协同抑制MCF-7细胞增殖.流式分析显40nmoL/L的紫杉醇作用24小时可诱导乳腺癌MCF-7发生明显的G2M期阻滞和12.5％的细胞凋亡,10nmol/L的Bufalin作用24小时未诱导明显的细胞凋亡,10nmol/L的Bufalin与40nmol/L的紫杉醇联合作用24小时后可诱导23.7％的MCF-7细胞凋亡.Western Blot分析显紫杉醇作用后导致AKT和p38的活化,Bufalin与紫杉醇联合作用后可抑制紫杉醇诱导的AKT活化,增强紫杉醇诱导的p38活化.结论:Bufalin可通过抑制AKT的活化、上调p38的活化与紫杉醇协同抑制乳腺癌细胞增殖,诱导细胞凋亡.     

基于文献计量学分析的蟾毒灵研究现状及抗肿瘤作用机制

目的:了解中药提取物蟾毒灵（Bufalin）在相关生物学领域中的研究状况,总结蟾毒灵的抗肿瘤作用机制,旨在为进一步研究及应用提供参考。方法:通过对Web of Science 数据库中检索所有发表的关于蟾毒灵（Bufalin）药物研究的文献,利用数据库网页统计功能及CiteSpace 5.2分析软件统计分析文献的发表年代,来源期刊及高频主题词分布情况,抗肿瘤作用机制的发文情况并进行聚类分析。结果:共筛选出465篇关于蟾毒灵的文章,从2014年后每年约40篇以上文章发表,其中发表在核心区期刊（文章数量大于5篇）的文章主要集中在21种杂志中,影响因子主要为2~3分。通过对文献的搜索,总结蟾毒灵具有诱导凋亡和分化、抑制增殖、抑制血管生成、逆转多药耐药、抑制侵袭的作用,其作用机制可以通过多条信号通路发挥作用,包括PI3K-AKT,Hedgehog,MAPK,JNK,Wnt/β-catenin,TGF-β/Smad,整合素信号途径,NF-κB信号通路。结论:通过对蟾毒灵的文献计量分析,可以揭示该领域的研究现状及热点,为进一步研究及应用提供一定的参考。     

蟾毒灵抑制人结肠癌HCT116细胞侵袭机制探讨

目的 肿瘤侵袭转移的发生是影响结肠癌治疗的重要原因,结肠癌细胞黏附能力的下降以及迁移能力的增强是促进结肠癌细胞侵袭转移的重要原因.有研究发现,蟾毒灵具有抑制结肠癌细胞侵袭能力的作用,但其作用机制尚不明确.本研究探讨蟾毒灵对人结肠癌HCT116细胞侵袭的影响,并探索其可能的作用机制.方法 用蟾毒灵溶液干预结肠癌HCT116细胞,采用细胞划痕实验与细胞黏附实验检测蟾毒灵溶液对结肠癌HCT116细胞侵袭能力的影响;ELISA法检测蟾毒灵溶液干预结肠癌HCT116细胞培养基中细胞外泌TGFβ1蛋白的含量;蛋白质印迹法检测蟾毒灵干预后结肠癌HCT116细胞中P-smad3、smad4和钙黏链蛋白(E-cadherin)表达的变化;免疫荧光实验检测蟾毒灵干预后各组HCT116细胞中P-smad3与smad4蛋白表达的变化.结果 细胞划痕实验结果显示,低、中、高剂量蟾毒灵均可降低HCT116细胞迁移能力;细胞黏附实验显示,对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组黏附细胞平均值分别为833.33±7.80、877.00±17.75、1 304.00±15.82和1 406.00±20.53,相对黏附率分别为100％、105.24％、156.48％和168.73％,差异有统计学意义,x2 =297.597,P＜0.001.ELISA检测结果显示,对照组、低、中和高剂量细胞培养液中转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGFβ1)蛋白含量分别为(1 198.78±38.96)、(1 106.58±35.76)、(1 040.80±47.47)和(987.74±37.52) pg/mL,F=16.357,P=0.005.蛋白质印迹法检测结果显示,与对照组相比,中、高剂量蟾毒灵处理后HCT116细胞中P-smad3表达呈现明显下降;而smad4蛋白表达明显上调,组间差异有统计学意义,F=56.993,P＜0.001;低剂量蟾毒灵也可上调smad4蛋白的表达,t=5.342,P=0.006.各用药组HCT116细胞中E-cadherin蛋白的表达水平也随着蟾毒灵剂量的增加而增加,分别为对照组的2.514±0.385(t=4.833,P=0.008)、3.524±0.397(t=9.200,P=0.001)和3.937±0.318(t=10.675,P＜0.001)倍;免疫荧光法检测发现,蟾毒灵处理后结肠癌HCT116细胞中P-smad3与smad4蛋白的表达呈现出与蛋白质印迹法检测相似的趋势.结论 蟾毒灵可通过抑制TGFβ1/smad信号通路的信号传导抑制结肠癌HCT116细胞的侵袭.     

蟾蜍灵抗癌作用机制研究进展

 蟾蜍灵是传统中药蟾酥的有效成分之一,国内外许多研究证实它对多种白血病细胞和一些实体恶性肿瘤细胞有显著抑制增殖作用,其机制可能是通过抑制内皮细胞增生和血管生成、诱导细胞分化和凋亡等实现的。随着研究的不断深入,显示蟾蜍灵具有广泛的抗肿瘤作用,其发挥效用的浓度低,具有潜在的临床应用价值。     

外周血淋巴细胞和骨肉瘤细胞体外化疗药敏相关性研究

目的:研究外周血淋巴细胞和骨肉瘤细胞体外化疗药敏的相关性。方法:采用MTT法体外药敏试验检测30例骨肉瘤患者外周血淋巴细胞和其肿瘤细胞对14种化疗药物的敏感性。结果:经统计学处理,骨肉瘤患者外周血淋巴细胞与其肿瘤细胞的体外药敏试验对14种化疗药物的敏感性差异无显著性(P>0.05)。两种细胞药敏试验对CBP、DDP、EADM、MTX、THP、VM26中度敏感;对ADM、BLM、MMC、VCR低度敏感;对HCPT、DTIC、Vp-16不敏感。结论:骨肉瘤患者外周血淋巴细胞与其肿瘤细胞对化疗药物的敏感性具有良好的正相关性,外周血淋巴细胞化疗药敏检测对临床选择化疗药物具有重要的参考价值。     

Anti-cancer mechanism of bufalin

Bufalin is one of the major active components of Chan Su, a traditional Chinese medicine. Studies at home and abroad have confirmed that bufalin can inhibit cell proliferation significantly in many human leukemia and solid cancer cell lines by inhibiting endothelial hyperplasia and angiogenesis, and inducing cell differentiation and apoptosis. With the deepening of study,it is showed that bufalin has extensive anticancer activities and it has potential clinical value with very low drug concentration.     

EPHA2-siRNA质粒对骨肉瘤细胞生物学行为的影响

目的探讨骨肉瘤细胞中EPHA2基因表达对细胞增殖、凋亡以及仿血管发生的影响。方法应用pSiliencer质粒构建靶向EPHA2的siRNA质粒;脂质体转染siRNA质粒人骨肉瘤细胞,Western blot在蛋白水平检测转染前后细胞基因表达情况;采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、流式细胞仪结合Annexin V-FITC和PI染色以及HE染色观察转染前后骨肉瘤细胞增殖、凋亡及仿血管发生情况。结果成功构建了针对EPHA2的siRNA表达质粒;将质粒转染入骨肉瘤后,EPHA2基因在蛋白表达水平下调;骨肉瘤细胞增殖能力下降,并发生了早期凋亡,骨肉瘤细胞的仿血管发生受到抑制。结论EPHA2参与了骨肉瘤细胞增殖、早期凋亡和仿血管发生;利用RNA干扰技术靶向EPHA2基因治疗可能为骨肉瘤治疗提供新方法。     

p33ING1b增强骨肉瘤细胞U2OS对足叶乙甙的敏感性

背景与目的作为一个新的抑癌基因,ING1与p53有许多相似的生物学功能,如细胞生长抑制、DNA修复、凋亡和化疗敏感性等.本实验目的在于研究p33ING1b对骨肉瘤细胞药物敏感性的影响并探讨其作用机制.方法瞬时转染p33ING1b进入骨肉瘤细胞株U2OS后,用足叶乙甙(etoposide,VP-16)处理24 h,然后采用台盼蓝拒染法计数活细胞数并计算细胞生长抑制率,流式细胞仪、DAPI染色等方法检测细胞凋亡率,Western blot技术检测p53、p21WAF1、MDM2和Bax蛋白的表达.结果台盼蓝染色结果表明,瞬时转染p33ING1b进入骨肉瘤细胞株U2OS后,再用VP-16处理24 h,细胞生长抑制率明显增加[(63.1±5.1)%].流式细胞计数和DAPI染色检测结果表明,细胞凋亡率明显增加(62.7%).Western blot检测结果显示,外源性p33 ING1b高表达明显提高了p53及其下游基因p21WAF1和Bax蛋白的表达水平,转染p33ING1b进入骨肉瘤细胞株U2OS后,再用VP-16处理24 h,p53、p21和Bax蛋白表达增加.在各实验组中,MDM2的蛋白表达没有明显变化.结论p33ING1b能够上调p53蛋白,并上调p53下游因子--p21WAF1和Bax的表达水平,通过p53依赖性凋亡信号通路,提高骨肉瘤细胞U2OS对VP-16的敏感性.     

人乳腺癌细胞原代培养体外药敏试验研究

目的:探讨用ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATP-TCA)研究乳腺癌药物敏感性的异质性以及个体化治疗的可行性。方法:用ATP-TCA检测114例乳腺癌标本对13种单药或联合用药的敏感性。结果:个体之间的药物敏感性存在着明显的异质性。单药中有效的药物为紫杉醇、长春瑞滨、表阿霉素、丝裂霉素和阿霉素,敏感率分别为73·3%、64·1%、62·3%、49·9%和40·0%。联合用药(紫杉醇 表阿霉素,环磷酰胺 表阿霉素 氟尿嘧啶)的敏感率高于单药。结论:乳腺癌对抗癌药物的敏感程度存在着异质性。ATP生物荧光肿瘤药敏检测技术可用于为乳腺癌选择合适的化疗药物。     

Apoptosis induced by hyperthermia in Dunn osteosarcoma cell line in vitro

The effect of hyperthermia at 43.5^oC for 1h on Dunn osteosarcoma cells was studied. With sham-heated cells (37^oC, 1h) as the control, the hyperthermia treated cells were divided into five groups. Time 0 group was the cells that were harvested immediately after heated at 43.5^oC for 1h. Whereas time 3, 6, 12, and 24h groups were the cells that were collected respectively after reincubation at 37^oC for the above different time periods. The appearance of hyperthermiainduced apoptosis of Dunn osteosarcoma cells was demonstrated to be time dependent. With the confocal microscopic study and TUNEL staining, the morphological characteristics of apoptosis, condensed nuclei and fragmented nuclei were obvious when reincubated at 37^oC for 6h after hyperthermic treatment. This hyperthermia-induced apoptosis was further confirmed by flow cytometric analysis on DNA contents. The sub-G₁ region that was proposed as a marker of apoptotic cells was most significantly elevated at 6h after hyperthermic treatment and, thereafter, decreased to the levels of control values by 24h, as the apoptotic cells underwent secondary necrosis and degraded to debris. The DNA strand breaks, considered as the key biochemical event of apoptosis, were detected by the TUNEL assay. This study indicated that hyperthermia (43.5^oC for 1h) can induce apoptotic changes on osteosarcoma cells in vitro very rapidly (within 6h after treatment), and its occurrence might not be detected if the samples are not taken at several early time points after hyperthermia.     

蟾毒灵与顺铂协同抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖的机制探讨

目的 探讨蟾毒灵（Bufalin）联合顺铂对乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响,并探讨可能的协同机制。方法 采用MTT法检测空白对照组（仅培养液）、单纯细胞对照组和实验组的细胞增殖率,实验组加入不同浓度的顺铂或Bufalin单药或以固定比例（Bufalin∶顺铂=1 nmol／L∶1 μmol／L）联合作用24 h。分别采用20 nmol／L Bufalin、20 μmol／L顺铂单药或联合作用24 h,用流式细胞术检测细胞凋亡,并用Western Blotting检测活化的Met（p-Met）、Met、活化的Src（p-Src）、Src、PARP及其裂解cleaved PARP蛋白的表达。结果 MTT法检测显示,顺铂和Bufalin均以剂量依赖方式抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖。在顺铂≥0.1 μmol／L和Bufalin≥0.1 nmol／L时两药联合作用可协同抑制MCF-7细胞增殖（0＜CI＜0.433）。流式细胞术检测显示,20 μmol／L顺铂作用24 h可诱导（10.7±4.8）％ 的MCF-7细胞凋亡,而20 nmol／L Bufalin作用24 h未明显诱导细胞凋亡,20 nmol／L Bufalin与20 μmol／L顺铂联合作用24 h后可诱导（40.8±8.5）％的MCF-7细胞凋亡。Western Blotting检测显示,顺铂作用后可导致Met和Src活化,Bufalin与顺铂联合作用后可抑制顺铂诱导的Met和Src活化,同时上调PARP裂解。结论 Bufalin可能通过抑制顺铂诱导的Met和Src活化与顺铂协同抑制MCF-7细胞增殖,增强顺铂诱导的细胞凋亡。     

RNA干扰沉默DcR3对人胰腺癌细胞化疗药物敏感性影响的实验研究

背景与目的：大部分胰腺癌具有高表达诱骗受体-3(decoy receptor 3,DcR3)的特征,而后者与FasL凋亡途径相关,可能导致胰腺癌对化疗耐药。该研究旨在探讨RNA干扰沉默DcR3基因对人胰腺癌细胞化疗药物敏感性的影响及其可能机制。方法：构建带有DcR3-siRNA序列的稳定表达质粒,通过Lipofectamine^TM2000转染至人胰腺癌细胞AsPC-1细胞株,筛选出转染后稳定低表达DcR3的胰腺癌细胞,同时设未转染对照组(control组)和转染阴性质粒对照组(mock组)。应用ELISA和蛋白［质］印迹法(Western blot)检测各组AsPC-1细胞中DcR3的蛋白表达;MTT实验检测各组AsPC-1细胞对吉西他滨的敏感性;流式细胞术检测各组AsPC-1细胞凋亡情况;Western blot和实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测各组AsPC-1细胞中FasL、Caspase-8、Caspase-3蛋白和mRNA的表达。结果：转染DcR3-siRNA后AsPC-1细胞中DcR3蛋白较其他对照组明显降低;转染DcR3-siRNA后AsPC-1细胞对吉西他滨的敏感性显著增加;沉默DcR3基因可以上调FasL、Caspase-8和Caspase-3的表达并促进吉西他滨诱导的细胞凋亡。结论：RNA干扰沉默DcR3基因可激活FasL/Caspase凋亡途径,促进肿瘤细胞凋亡,增加人胰腺癌AsPC-1细胞对化疗药物的敏感性。