预缺氧对PC12细胞缺氧后细胞内游离Ca^2＋的影响

目的：建立PC12细胞预缺氧模型；观察预缺氧对PC12缺氧后细胞内游离Ca^2＋的影响。方法：PC12细胞分为对照组、缺氧组、预缺氧组。检测缺氧及预缺氧对PC12细胞LDH释放率的影响；采用荧光分光光度法，检测PC12细胞内游离Ca^2＋浓度和PC12细胞线粒体膜电位的变化。结果：①缺氧组LDH释放率和细胞内游离Ca^2＋浓度比对照组显著升高（P〈0．01），而线粒体膜电位显著低于对照组；②预缺氧组LDH释放率和细胞内游离Ca^2＋浓度显著低于缺氧组（P〈0．01），线粒体膜电位显著高于缺氧组。结论：预缺氧对PC12细胞的缺氧损伤具有保护作用，其机制可能与减轻缺氧时细胞内的游离Ca^2＋浓度与稳定线粒体膜电位有关。     

神经类固醇对皮质酮诱导大鼠PC12细胞损伤的影响

神经类固醇是指在脑内合成的中枢源性类固醇和经血脑屏障进入中枢神经系统发挥作用的外周类固醇及它们的代谢衍生物。按神经类固醇与ＧＡＢＡ受体的作用方式 ,可将其分为γ 氨基丁酸 (ＧＡＢＡ)受体激动性和ＧＡＢＡ受体拮抗性神经类固醇 ,前者主要包括 3α 5α 四氢孕酮 (3α 5α ＴＨＰ)、3α 5β 四氢孕酮(3α 5β ＴＨＰ )等 ;后者主要有孕酮 (ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ ,ＰＲＯＧ)及脱氢表雄酮 (ｄｙｈｙｄｒｏｅｐｉａｎｄｒｏｓｔｅｒｏｎｅ ,ＤＨＥＡ)及它们的硫酸酯衍生物 (ＰＳ ,ＤＨＥＡＳ)。在应激反应中皮质酮大量释放 ,同时各…     

低氧训练对大鼠骨骼肌缺氧诱导因子-1α蛋白和血管内皮生长因子mRNA表达的影响

目的:探讨低氧训练对大鼠骨骼肌缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白和血管内皮生长因子(VEGF)基因表达的影响.方法:选用健康雄性SD大鼠72只,随机分为9组.采用递增负荷跑台训练及低氧、超低氧两种不同程度的递增低氧刺激,在运动中和运动后给予低氧处理.应用免疫组织化学、原位杂交、计算机显微图像分析等方法,检测HIF-1α、VEGF mRNA在骨骼肌组织中的定位及含量.采用相关分析方法,分析低氧训练骨骼肌HIF-1α蛋白表达对骨骼肌VEGF转录的促进作用.结果与结论:低氧和运动训练可增加骨骼肌组织HIF-1α蛋白和VEGF mRNA含量,低氧训练骨骼肌组织HIF-1α蛋白表达的增加对VEGF基因转录具有促进作用.     

缺氧诱导因子1促进血管生成的调控机制

创伤、肿瘤、血管栓塞等因素常导致机体相应组织产生缺血缺氧，通过新生血管可以有效缓解缺氧组织对氧和能量的需求，从而维持内环境稳定。缺氧诱导因子-1(hypoxia—inducible factor-1，HIF-1)对缺氧状态下的血管生成起核心调控作用。笔者就HIF-1的结构、对病理性血管生成的调控机制及其治疗策略进行综述。     

氧浓度非敏感性低氧诱导因子-1α表达载体的构建及其在PC12细胞系中的表达

目的 构建大鼠非氧浓度敏感性低氧诱导因子1α(HIF-1α)真核表达载体并观察其在PC12细胞系中的表达. 方法 应用RT-PCR从脊髓损伤区域的细胞总RNA中扩增HIF-1αcDNA,采用重叠延伸PCR的方法克隆获得缺失氧敏感性降解结构域(ODD)的HIF-1α突变体基因克隆,采用质粒_pEGFP-C1构建重组真核融合表达载体,将其转入培养的PC12神经细胞系中,应用所融合的绿色荧光蛋白的表达和Western blot鉴定其在细胞内的表达. 结果 通过重叠延伸PCR的方法成功扩增得到非氧浓度敏感性的HIF-1α突变体基因(HIF-1α△ODD)序列,并构建了过量表达缺失ODD的转录调控因子HIF-1α突变体的重组表达质粒()pEGFPC1-HIF-1α△ODD).将其转染PCI2细胞系后,Western blot和绿色荧光蛋白结果均表明HIF-1α△AODD蛋白能在PC12神经细胞系中正确表达. 结论 成功构建了_pEGFPC1-HIF-1α△ODD真核表达载体并在PC12细胞系中观察到融合蛋白表达.     

缺氧诱导因子与血管内皮生长因子在肾透明细胞癌中的表达

目的：研究肾透明细胞癌（CCRCC）中HIF-1α、HIF-2α的表达与VEGF、MVD的相关性及其对肿瘤病理分期的影响。方法：在40例CCRCC组织标本中,应用免疫组化方法检测HIF-1α、HIF-2α和VEGF的表达,用CD34单克隆抗体标记肿瘤微血管密度（MVD）。结果：HIF-1α染色阳性28例,HIF-2α染色阳性25例,VEGF染色阳性24例。Spearman等级相关分析发现HIF-1α、HIF-2α分别与VEGF表达程度呈正相关。HIF-1α、HIF-2α或VEGF阳性肿瘤组织的MVD值显著高于正常肾组织（P〈0.05）。未发现HIF-1α、HIF-2α和VEGF表达与肿瘤病理分期有关（P〉0.05）。结论：在CCRCC中HIF-1α、HIF-2α与VEGF表达相关,并可能诱导VEGF的过度表达,促进肿瘤血管生成,而且与CCRCC的侵袭性生物学行为密切相关,但其表达与肿瘤病理分期无相关性。     

人Slitrk1基因对PC12细胞增殖和分化的影响

目的研究人Slitrk1基因过表达对PC12细胞增殖和分化的影响。方法PCR扩增人Slitrk1 CDS,克隆到pcDNA4／myc-His A载体,构建重组质粒pcDNA4／St1,分别以空载体和重组质粒转染PC12细胞,RT-PCR法鉴定出阳性转染细胞,观察空载体转染的PC12细胞（pcDNA4／PC12）和过表达Slitrk1的PC12细胞（ST1／PC12）的表型并用MTT法检测细胞增殖情况。结果与空载体转染的PC12细胞相比,过表达Slitrk1基因的细胞增殖速度明显减慢。pcDNA4／PC12与野生型PC12细胞表型一致,均为悬浮成团生长,细胞少有突起,而ST1／PC12细胞大部分贴壁生长,突起多见,呈分化状态。结论过表达人Slitrk1基因能够抑制PC12细胞增殖,促进细胞的贴壁及突起长出。人Slitrk1基因可能有促进PC12细胞神经分化的作用。     

缺氧复合梭曼中毒后PC12细胞IL-6、GP130、JAK1、STAT1基因表达的变化

目的研究缺氧复合梭曼中毒后PC12细胞IL-6、GP130、JAK1、STAT1基因mRNA和蛋白表达的变化。方法制备缺氧复合梭曼中毒细胞模型,设对照组、梭曼中毒组、缺氧复合梭曼中毒组和Genistein抑制剂组。采用半定量RT-PCR和Western blot法检测各组PC12细胞IL-6、GP130、JAK1、STAT1基因mRNA和蛋白的表达水平,并对PCR产物进行测序。结果梭曼中毒后PC12细胞IL-6、GP130、JAK1、STAT1mRNA和蛋白表达水平升高,在中毒后12h达峰值,中毒后24h的表达量低于12h,与对照组比较均有显著差异。缺氧复合梭曼中毒组PC12细胞中IL-6、GP130、JAK1、STAT1 mRNA和蛋白表达水平6h后达峰值,且明显高于对照组、梭曼中毒组和Genistein抑制剂组。RT-PCR产物直接测序证实扩增产物片段与GenBank中相应序列相同。结论梭曼中毒或(和)缺氧后PC12细胞中JAK1/STAT1基因的表达增强,在缺氧复合梭曼中毒所致脑损伤中可能发挥重要作用。     

高原红细胞增多症骨髓缺氧诱导因子的表达分析

目的:探讨高原红细胞增多症患者骨髓活检组织中缺氧诱导因子(HIF-1α因子)的表达情况。方法:采集果洛州玛多县(海拔4 300m)高原红细胞增多症患者骨髓活检标本20例。对照组为我院住院非血液系统疾病患者10例(海拔2 260m)。应用免疫组织化学技术标记HIF-1α因子,观察骨髓组织中HIF-1α因子的表达情况。结果:高原红细胞增多症患者骨髓组织中HIF-1α因子(80%)明显高于对照组(10%)(P<0.001)。结论:高原红细胞增多症患者骨髓组织HIF-1α因子的表达明显增高,同时亦相应刺激骨髓组织中血管的显著形成。     

高住低训对大鼠骨骼肌低氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子基因表达的影响

目的探讨高住低训(HiLo)对大鼠骨骼肌中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)基因表达的影响。方法96只7周龄SD大鼠随机分为4组安静对照组、低氧对照组、常氧训练组和高住低训组。每组又分为3小组,分别是4、7和28天组。高住低训模型在模拟海拔4km(12.7%O2)的常压低氧舱居住,以中等强度(相当于55%~60%VO2max)进行常氧训练。采用RT-PCR法检测,半定量分析大鼠腓肠肌HIF-1α mRNA和VEGF mRNA表达。结果在4周观察期内,(1)单纯低氧或常氧训练引起的VEGF mRNA变化趋势与HIF-1α mRNA大致吻合开始迅速升高,然后随时间推移逐渐下降,但第28天时仍略高于对照组。提示低氧或常氧训练诱导的VEGF转录表达,可能通过以HIF-1α为核心转录因子的低氧信号转导通路来调节。(2)高住低训能诱导腓肠肌HIF-1α和VEGF mRNA表达,但其升高趋势会因时间差异而不同。提示,HiLo对HIF-1α和VEGF基因表达的影响,不是低氧和训练两种刺激的简单叠加,而是综合复杂作用的结果。     

高压氧对家兔随意皮瓣血管内皮细胞生长因子和缺氧诱导因子的影响

目的 探讨高压氧对家兔随意皮瓣毛细血管增殖作用的机制.方法 建立家兔背部随意皮瓣模型,予高压氧治疗,观察3 d和7 d时对照组和高压氧组皮瓣的成活情况,皮瓣中毛细血管密度及血管内皮细胞生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子(HIF-1)含量的变化情况.结果 3 d和7 d时,高压氧组皮瓣的成活面积明显高于对照组(P＜0.01);皮瓣毛细血管密度明显高于对照组(3 d时P＜0.05,7 d时P＜0.01);3 d和7 d时,高压氧组皮瓣VEGF表达明显高于对照组(P＜0.01),HIF-1、表达明显低于对照组(P＜0.05).结论 高压氧治疗提高随意皮瓣成活率的机制之一可能是通过增加皮瓣组织中VEGF的表达而促进新生毛细血管形成,高压氧治疗可下调皮瓣组织中HIF-1的表达.     

奥氮平对淀粉样β蛋白25-35诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的探讨奥氮平对淀粉样β蛋白25-35（Aβ25-35）诱导的PC12细胞凋亡的保护作用机制。方法以Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡,采用MTT比色分析测定细胞存活率,应用Western blot检测Aβ25-35以及奥氮平对PC12细胞Bax、Caspase-3表达的影响,结果10^-14～10^-5mol／L的Aβ25-35减低PC12细胞存活率,50μmol／L及100μmol／I。奥氮平预处理24h可提高PC12细胞存活率,相同浓度Aβ25-35奥氮平预处理组与非处理组比较差异显著（P〈0．05）;0．01、2、20μmol／L Aβ25-35处理的PC12细胞Bax表达增加,50μmol／L奥氮平预处理使0．01μmol／L和20μmol／L Aβ25-35诱导的PC12细胞Bax的表达减低（P〈O．05）;2μmol／L及20μmol／L Aβ25-35处理的PC12细胞Caspase-3的表达增高,5μmol／L奥氮平预处理能抑制其表达升高,与非预处理比较差异显著（P〈O．05）。结论奥氮平可对抗Aβ25-35对PC12细胞的毒性作用,其机制可能与抑制Bax、Caspase-3的表达有关。     

持续性压力对PC12细胞增殖和细胞骨架蛋白表达的研究

 目的 研究持续性压力对PC12细胞增殖和细胞骨架蛋白表达的影响.方法 利用自制压力可控性细胞损伤装置,对PC12细胞分别施加0.1、0.3、0.5 mPa的持续压力,且在不同压力值作用下分别持续加压10、30、60 min,应用MTT法和免疫组化染色法分析不同压力值及持续时间对PC12细胞增殖和细胞骨架蛋白表达的影响.结果 正常PC12细胞呈上皮样细胞生长,表现出神经细胞特性.当加压损伤后,PC12细胞出现凋亡、坏死现象.对照组MTT结果显示,PC12细胞的OD值随观察期延长而逐渐升高;而加压组中,当压力≥0.3 mPa、持续时间≥30 min后的细胞增殖显著受抑(P<0.05).β-tubulinⅢ免疫组化染色结果显示0.5 mPa压力作用10 min后,细胞骨架蛋白β-tubulinⅢ逐渐断裂降解,且降解程度随持续作用时间的延长而增强.结论 在急性压迫性脊髓损伤中,早期神经细胞增殖受限和β-tubulinⅢ蛋白降解,可随压力值和持续时间增加而增强,这种现象可能参与了ASCI后机械信号转变为生物学信号的过程.     

益肺活血颗粒对缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞内低氧诱导因子 1α和活性氧的影响

目的观察益肺活血颗粒对低氧培养大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth musclecells,PASMCs)内低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1 alpha,HIF-1α)和活性氧(reactive oxygen species,ROS)的影响。方法采用血清药理学方法制备不同浓度的益肺活血颗粒(yifeihuoxue granule,YFHXG)含药血清,采用组织块贴壁法原代培养大鼠PASMCs,取对数生长期PASMCs随机分为常氧组、缺氧组、缺氧+YFHXG组(16.5、3.3、0.66 g/kg)。用噻唑蓝比色法测定各组PASMCs的增殖效应,免疫组化法测定细胞内HIF-1α蛋白的表达,激光共聚焦显微镜测定细胞内ROS的含量。结果与常氧组相比,缺氧组PASMCs增殖明显活跃,HIF-1α蛋白表达及ROS含量增加;与缺氧组相比,缺氧+YFHXG高、中浓度组大鼠PASMCs的生长明显受抑制,而且HIF-1α蛋白表达及ROS含量降低。结论缺氧可以直接刺激PASMCs的增殖。YFHXG可以显著抑制低氧对大鼠PASMCs的促增殖作用,其机制可能是通过降低细胞内HIF-1α蛋白表达及ROS的水平来实现的。     

缺氧条件下血管活性因子对血管内皮细胞中血管内皮生长因子表达的影响

作者研究了在缺氧条件下脐静脉血管内皮细胞血管内皮生长因子 (VEGF)表达及缩血管活性物质内皮素、舒血管活性物质NO和NO抑制剂LNNA对VEGF基因表达的影响。体外培养人脐静脉血管内皮细胞经缺氧及血管活性物质处理、Northern杂交、酶联免疫检测和计算机图像分析等观察VEGFmRNA和蛋白表达水平。结果显示 :缺氧 6h内皮细胞可见VEGF表达 ,ET可促进VEGFmRNA的表达 ,NO可明显抑制VEGFmRNA的表达 ,NO抑制剂LNNA也影响VEGFmRNA的表达。ELISA检测VEGF蛋白水平分别为 6h组 ( 8.2± 1 .1 ) μg/L ,ET +6h组 ( 9.3 7± 1 .…     

高压氧辅助治疗对乳腺癌术后皮瓣愈合及血管内皮生长因子和缺氧诱导因子的影响

目的:探究高压氧辅助治疗对乳腺癌手术后皮瓣愈合及血管内皮生长因子(VEGF)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的影响。方法:选取长治医学院附属和平医院乳腺科2017年1月至2019年6月收治的132例乳腺癌患者作为研究对象,按随机数字表法分为对照组和观察组(每组66例)。对照组采用乳腺癌改良根治术,观察组在对照组治疗...     

缺氧条件下血管活性因子对血管内皮细胞中血管内皮生长因子表达的影响

文章探讨在缺氧条件下人脐静脉血管内皮细胞血管内皮生长因子 (ＶＥＧＦ)表达及缩血管活性物质内皮素、舒血管活性物质ＮＯ和ＮＯ抑制剂ＬＮＮＡ对ＶＥＧＦ基因表达的影响。采用体外培养人脐静脉血管内皮细胞、缺氧及血管活性物质处理、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交、酶联免疫检测和计算机图像分析等方法观察ＶＥＧＦｍＲＮＡ和蛋白表达水平。结果发现 ,ＶＥＧＦ基因在正常情况下及缺氧 3ｈ检测不出 ,而缺氧 6ｈ可见有ＶＥＧＦｍＲＮＡ表达。ＥＴ、ＮＯ、ＬＮＮＡ对血管内皮细胞处理后 ,检测到ＶＥＧＦｍＲＮＡ表达 ,ＥＴ能促进ＶＥＧＦｍＲＮＡ的…     

高原缺氧条件对大鼠肠黏膜组织及缺氧诱导因子-1α、诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的探讨高原缺氧条件对大鼠肠黏膜组织形态以及缺氧诱导因子(HIF)-1α和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响。方法将40只雄性Wistar大鼠均分为平原对照组及高原24h、48h、72h组,每组10只。平原对照组在常温环境下饲养1个月后处死,高原组在平原饲养1个月后于24h内急运至高原,建立高原缺氧模型,分别于到达高原后24、48、72h处死。分别在光镜和电镜下观察大鼠空肠上段的微观组织学变化,用图像测量软件测量绒毛高度、隐窝深度、黏膜厚度及绒毛表面积。免疫组化染色检测HIF-1α及iNOS在肠黏膜中的表达。结果高原24h组肠绒毛高度、隐窝深度、黏膜厚度及绒毛表面积分别为313.10±10.84、123.10±2.64、432.60±7.37μm和0.09±0.01mm2,与平原对照组(分别为322.00±12.68、127.70±7.24、447.50±21.93μm和0.10±0.01mm2)相比差异无统计学意义(P>0.05),高原48h组上述指标分别为279.00±9.80、101.10±7.11、376.40±19.05μm和0.06±0.01mm2高原72h组上述指标分别为235.80±19...