异鼠李素对人肝癌HepG-2细胞增殖与凋亡影响的实验研究

目的：观察异鼠李素对人肝癌HepG-2细胞的增殖周期及凋亡的影响。方法噻唑蓝（Mar）法检测异鼠李素对肿瘤细胞生长的抑制作用,流式细胞仪检测异鼠李素对肿瘤细胞周期及凋亡的影响。结果MTr结果提示异鼠李素对人肝癌细胞的增殖有明显抑制作用,并随着作用浓度的增大,抑制作用逐渐增强,以100mg／L的异鼠李素培养基抑制作用最明显。流式细胞仪检测可见亚二倍体峰,提示异鼠李素有诱导入肝癌细胞凋亡作用。异鼠李素可通过诱导人肝癌细胞凋亡并将细胞阻滞在G0—G1期,使细胞不能进入s期进行DNA合成,最终使瘤细胞的体外增殖受到抑制。结论异鼠李素抑制人肝癌细胞的增殖。阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,可能具有一定抗肝癌作用。     

7-乙酰基-鲁山冬凌草甲素诱导HL-60细胞周期阻滞及其机制研究

目的研究7-乙酰基-鲁山冬凌草甲素（7-acetyl-lushanrubescensin A,ARA）对人急性髓系白血病细胞株HL-60的细胞增殖和细胞周期的影响,并对其作用机制进行探讨。方法MTT法检测ARA对HL-60细胞增殖的影响;在ARA作用HL-60细胞不同时间后,流式细胞仪检测细胞周期变化;Western印迹检测周期相关蛋白Rb、p（phospho）-Rb（ser795）、p-Rb（ser807/811）,细胞周期蛋白（cyclin）D1、cyclin D3、cyclin E2、CDK4及CDK6的蛋白表达;流式细胞仪检测细胞内活性氧（ROS）水平。结果ARA剂量依赖性地抑制HL-60细胞增殖,48h的IC50为（1.96±0.08）μmol/L。ARA诱导HL-60细胞发生明显的细胞周期G0/G1阻滞,具有时间和浓度依赖性。机制研究显示ARA引起Rb总蛋白出现移行条带,并抑制p-Rb（ser795）位点磷酸化,显著抑制CDK4的蛋白表达,并部分降低cyclin D3和cyclin E2的表达水平,但对cyclin D1和CDK6的作用则不明显。此外,ARA显著增加HL-60细胞内ROS水平,而抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）能够阻断ARA诱导的ROS升高及细胞周期阻滞。结论ARA能够明显抑制白血病细胞增殖,诱导细胞周期阻滞,其机制可能与抑制Rb活化和降低cyclin D3、cyclin E2和CDK4的表达水平相关,并且ROS在ARA介导的生物学效应中可能有重要作用。     

西妥昔单抗对人肝癌细胞HepG2的体外效应

目的探讨西妥昔单抗（爱必妥,cetuximab,Erbitux）对人肝癌细胞HepG2的体外效应。方法流式细胞术检测HepG2细胞表面表皮生长因子受体（EGFR）的表达。细胞划痕及Transwell实验检测西妥昔单抗对HepG2细胞迁移能力的影响。Western印迹检测西妥昔单抗对HepG2细胞EGFR、AKT及ERK表达及活化的影响。碘化丙啶（propidium lodide,PI）染色检测西妥昔单抗对细胞周期的影响。结果流式细胞分析结果显示,HepG2细胞表面存在较高水平的EGFR表达;细胞划痕及Transwell结果表明,西妥昔单抗对HepG2细胞迁移能力具有明显的抑制效应;Western印迹结果证明西妥昔单抗能显著降低HepG2细胞内EGFR、AKT及ERK的磷酸化水平;细胞周期分析显示西妥昔单抗作用24 h剂量依赖性影响HepG2细胞周期进程,并将其阻抑在G0/G1期。结论西妥昔单抗可以抑制高表达EGFR的肝癌细胞系HepG2胞内关键信号蛋白的活化,阻滞其细胞周期,抑制肝癌细胞的迁移能力。     

染料木黄酮联合5-FU对结肠癌HCT-116细胞株增殖及凋亡的影响

目的探讨染料木黄酮联合5-氟尿嘧啶对HCT-116细胞增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。方法经不同浓度的Gen和(或)5-FU处理HCT-116细胞后,用MTT法检测细胞的生长抑制效应;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期变化情况;RT-PCR检测Suvivin表达水平。结果 Gen与5-FU联合应用后能明显抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,使细胞发生S期阻滞,均较对照组和单用药组作用增强,并且下调了Suvivin的mRNA表达,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 Gen可抑制结肠癌HCT-116细胞的增殖,将细胞阻滞于S期,并诱导细胞的凋亡,与5-FU联合应用具有显著协同效应,其机制可能与下调Suvivin表达有关。     

6-溴异香兰素对HeLa细胞的增殖抑制及放射增敏作用

目的研究香兰素衍生物中的6-溴异香兰素（6-溴-5-羟基-4-甲氧基苯甲醛,BVAN08）对HeLa细胞增殖和放射敏感性的影响,为开发新的抗癌和放射增敏药物提供理论依据。方法利用MTT法检测细胞增殖,单细胞凝胶电泳检测细胞DNA损伤,流式细胞术检测细胞周期,克隆形成率法检测细胞放射敏感性,AnnexinⅤ/PI染色法检测细胞凋亡。结果研究表明BVAN08在10～20μmol/L以上浓度就显示出对HeLa细胞增殖的抑制作用,抑制程度具有剂量依赖性,抑制细胞存活的IC50值为19.07μmol/L。BVAN08能诱发细胞DNA双链断裂损伤,作用4h就开始诱发细胞周期G2/M阻滞,随时间延长阻滞更加明显。BVAN08明显降低DNA修复蛋白DNA-PKcs的表达水平,20μmol/LBVAN08与2Gyγ射线复合作用可以显著增加细胞对射线的敏感性,增加细胞凋亡率。结论 BVAN08抑制HeLa细胞增殖,提高细胞的放射敏感性,其放射增敏作用与降低DNA-PKcs蛋白表达水平和G2/M阻滞有关。     

吩噻嗪类药物对人胶质瘤U-251细胞的杀伤和放射增敏作用

目的观察吩噻嗪类化合物对肿瘤细胞的杀伤及放射增敏作用。方法三氟拉嗪（TFP）和吩噻嗪作用于体外培养的U-251细胞，克隆形成法检测辐射敏感性，流式细胞术检测细胞周期变化。结果TFP和吩噻嗪有明显的抑制U-251细胞增殖和提高其放射敏感性的作用，TFP的作用比吩噻嗪更加明显，20μmol／L的TFP可抑制4Gy照射后6h的G2/M阻滞的发生。结论TFP对人胶质瘤U-251细胞具有杀伤及放射增敏作用。     

蜂毒素对肝癌细胞磷脂酶A_2的影响

目的观察蜂毒素诱导细胞凋亡及对胞质型细胞磷脂酶A2(cPLA2)的影响。方法肝癌细胞BEL-7402体外培养,采用MTT法了解蜂毒素对肝癌细胞增殖的影响,用流式细胞术测定细胞凋亡,采用RT-PCR检测cPLA2的表达。结果蜂毒素在体外能够抑制肝癌细胞的增殖活性,并有诱导细胞凋亡的作用,RT-PCR检测显示,蜂毒素mRNA水平均具有激活cPLA2的作用。结论蜂毒素具有诱导肝癌凋亡及激活cPLA2的生物活性。     

榄香烯联合热疗体外对肝癌SMMU7721细胞增殖的影响

目的观察榄香烯联合热疗对肝癌细胞增殖的影响。方法采用肝癌细胞系SMMC7721体外培养,MTT法测定单纯热疗、单纯榄香烯及榄香烯联合热疗对细胞增殖的影响。另外用流式细胞术的方法测定对细胞增殖核抗原(PCNA)和细胞周期的影响。结果榄香烯联合热疗对肝癌细胞增殖的抑制作用比单纯热疗和单纯榄香烯强,并且能够降低细胞PCNA的表达,使细胞周期中的S细胞减少,阻滞细胞于G0/G1。结论 榄香烯联合热疗可以增强对肝癌细胞增殖的抑制作用。     

乳腺癌缺失基因1对肝癌生物学行为的影响

目的探讨乳腺癌缺失基因1（deleted in breast cancer 1,DBC1）对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法构建pcDNA3.1-DBC1的正义表达载体,转染肝癌细胞SMMC-7721,MTT法检测DBC1对肝癌细胞SMMC-7721生长增殖的影响,采用流式细胞术（FCM）检测DBC1对肝癌细胞SMMC-7721的细胞周期和细胞凋亡的影响。结果与转染空载体的SMMC-7721细胞相比,pcDNA3.1-DBC1正义表达载体转染上调DBC1的表达,可显著抑制肝癌细胞（SMMC-7721）增殖,升高G1期细胞比例（51.0%vs 64.9%,P=0.002）,降低S期细胞比例（29.7%vs 14.0%,P〈0.001）,诱导细胞凋亡（8.8%vs 24.6%,P〈0.001）。结论 DBC1通过抑制肿瘤细胞增殖,阻滞细胞周期进展,促进细胞凋亡,抑制肝癌的发生和发展。     

野生猕猴桃根黄酮提取物对胃癌MKN-49P细胞增殖影响

目的探讨野生猕猴桃根黄酮提取物对胃癌MKN-49P细胞增殖作用的影响及机制。方法采用CCK-8比色法、流式细胞术、Western Blot法检测野生猕猴桃根黄酮提取物对胃癌MKN-49P细胞增殖作用的影响。结果野生猕猴桃根黄酮提取物对胃癌MKN-49P细胞增殖有明显的抑制作用,且呈时间-浓度依赖性;其浓度升高,细胞凋亡增加,G1期细胞增加,S、G2/M期细胞减少,抑制周期蛋白CyclinD1表达降低。结论野生猕猴桃根黄酮提取物可抑制胃癌MKN-49P细胞增殖、促进细胞凋亡、阻滞细胞周期于G1期,其主要机制可能与抑制周期蛋白CyclinD1表达降低有关。     

水芹总酚酸对2．2．15细胞分泌HBsAg与HBeAg的抑制作用

目的观察水芹总酚酸对2．2．15细胞分泌HBsAg、HBeAg的抑制作用。方法以2．2．15细胞为研究对象,通过细胞毒性实验确定水芹总酚酸对细胞的最大无毒浓度（TC0）,在最大无毒浓度以下将药物用培养液对倍稀释成500、250、125μg·mL^-1加入2．2．15细胞进行培养,每4d换同浓度药物培养液;分别收集第4、8天以及停药后4d的培养液,酶联免疫法（ELISA）测定HBsAg、HBeAg含量。结果水芹总酚酸最大无毒浓度为500μg·mL^-1,在最大无毒浓度时对HBsAg、HBeAg具有明显的抑制作用,第8天时的抑制率分别为59．33％和90％,半数抑制浓度（IC50）分别为484．17、379．89μg·mL^-1,治疗指数（TI）分别为3．158、4．025,其中对HBeAg的抑制作用优于HBsAg。结论水芹总酚酸对2．2．15细胞分泌的HBsAg、HBeAg有显著的抑制作用。     

水芹总酚酸对正常小鼠免疫功能的影响

目的探讨水芹总酚酸对正常小鼠免疫功能的影响。方法用分光光度法测定血清溶血素含量,MTT法检测T淋巴细胞增殖能力及ELISA法测定脾细胞培养上清中IL-2的含量,碳粒廓清法测定小鼠外周血碳粒廓清指数。结果水芹总酚酸能够显著提高血清溶血素水平及脾细胞培养上清中IL-2水平,促进ConA诱导的T淋巴细胞增殖,提高正常小鼠外周血碳粒廓清指数。结论水芹总酚酸对正常小鼠的免疫功能具有增强作用。     

水芹总酚酸胶囊质量控制方法的研究

目的初步建立水芹总酚酸胶囊的质量控制标准。方法采用薄层色谱法对水芹总酚酸进行定性鉴别;采用Folin酚法测定水芹总酚酸含量;采用高效液相色谱法测定总酚酸中绿原酸含量,色谱条件：DiamonsilC18柱,流动相：A：乙腈-甲醇（10∶1）;B：0.4%磷酸,梯度洗脱;检测波长：325nm;流速：1ml/min;柱温：25℃。结果按现有生产工艺,水芹总酚酸胶囊总酚酸含量最高为32.42%,绿原酸最高为9.3%。结论 Folin酚法和高效液相色谱法能精确测定水芹总酚酸胶囊中总酚酸和绿原酸含量,可作为水芹总酚酸胶囊的质量控制方法 。     

水芹提取物抗运动性疲劳作用及初步机制分析

目的 观察水芹提取物对小鼠抗运动性疲劳的作用,并探讨其可能的作用机制.方法 采用Y1S-10B转轮式疲劳仪制备昆明种小鼠疲劳模型,测定运动力竭时间、血乳酸、血尿素氮和肝组织中肝糖原含量,观察水芹提取物的抗疲劳作用;测定血清乳酸脱氢酶活性、全血中血红蛋白浓度以及氧化损伤指标血清丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性,探讨水芹提取...     

水芹总酚酸抗四氯化碳所致肝纤维化作用的实验研究

目的探讨水芹总酚酸对四氯化碳所致大鼠慢性肝纤维化模型的保肝和抗肝纤维化作用及其可能机制。方法采用四氯化碳复制慢性肝损伤动物模型（40%四氯化碳橄榄油溶液,皮下注射,首次剂量按0.5ml/100g,以后按0.3ml/100g体质量,3天1次,共42d）。自造模之日开始,灌胃给药,1次/d,连续42d。末次给药后禁食24h,取大鼠血和肝脏,检测血清肝功能（ALT、AST、ALB、ALP、TP、ChE、LDH）指标、肝纤维化指标（HA、LN、Ⅲ-C、Ⅳ-C）和肝组织中SOD活力与MDA含量及免疫组化法测α-SMA、TGF-β1、TIMP-1的表达量和光镜下观察肝脏组织学变化。结果模型组大鼠有明显肝损伤和慢性纤维化表现;各给药组肝功能和肝纤维化均有不同程度的改善,病理组织学检查结果表明其肝脏病变程度均较模型组明显减轻。结论水芹总酚酸对慢性肝纤维化大鼠具有明显的保肝和抗纤维化作用,其机制可能与清除自由基和抗氧化作用以及抑制肝星状细胞的活化有关。     

紫杉醇衍生物对人喉癌细胞系Hep-2的抑制作用

目的：通过体外实验评价紫杉醇衍生物GT对人喉癌细胞系Hep-2的抑制作用。方法：应用MTT法测定GT对Hep-2细胞的增殖抑制作用；通过细胞形态学及流式细胞术考察GT对Hep-2细胞诱导凋亡的作用。结果：MTT实验显示GT对Hep-2细胞具有明显的增殖抑制作用；当GT作用细胞后，在光镜下能观察到较为典型的细胞凋亡的形态学变化，如细胞核固缩、染色质凝集成新月型紧贴于核膜周边，核碎裂、染色质断片化、凋亡小体形成等。流式细胞仪分析结果可见G2／M期的细胞比例明显增加，并出现典型的亚二倍体“凋亡小峰”。结论：GT对Hep-2细胞的生长有明显的抑制作用，其效果与紫杉醇基本相同，可使细胞分裂阻滞于G2／M期，并诱导肿瘤细胞凋亡，有进一步研究开发的价值。     

土茯苓提取物对消化道肿瘤细胞的体外作用

目的 探讨土茯苓提取物对消化道肿瘤细胞的体外作用.方法 采用MTS法,观察不同浓度的土茯苓提取物对4种消化道肿瘤细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期和细胞调亡率.结果 土茯苓提取物对Eca-109、SGC-7901和COLO205细胞有增殖抑制作用,抑制率与药物浓度呈正比,对JF305细胞无明显增殖抑制作用.其可诱导Eca-109、SGC-7901细胞S期细胞明显增加,细胞凋亡率随药物浓度的增加而增加.结论 土茯苓提取物对Eca-109和SGC-7901细胞具有抑制增殖、诱导S期细胞增加和诱导细胞凋亡的作用;对COLO205细胞增殖也有一定抑制作用,但对JF305无明显增殖抑制作用.     

乙型肝炎病毒基因组转染HepG2细胞的microRNA表达研究

目的 检测乙型肝炎病毒(HBV)全基因组转染对人肝母细胞瘤细胞系HepG2细胞中microRNA(miRNA)表达的影响,为进一步探讨肝细胞中HBV复制的分子生物学机制提供平台.方法 分别提取HepG2.2.15细胞(转染HBV全基因组的HepG2细胞,实验组)和其亲本HepG2细胞(对照组)的总RNA并分离miRNA,采用含509条探针的哺乳动物miRNA表达谱芯片对两组之间差异表达的miRNA进行分析.用SAM软件针对差异miRNA筛选的标准为在两组之间荧光强度差异4倍以上,差异miRNA的整体假阳性率为0.选择其中2个miRNA,应用实时荧光定量RT-PCR方法对芯片结果进行验证.结果 HepG2.2.15细胞与HepG2细胞间差异表达的miRNA共27个(占5.3%),其中7个表达上调,20个表达下调.miR-181d和miR-15a的实时荧光定量RT-PCR验证结果与芯片表达结果基本一致.结论 肝细胞中存在着与HBV复制相关的miRNA,这些上调和下调表达的miRNAs可能参与了HBV在肝细胞中的复制.     

水芹总酚酸对鸭乙肝病毒DNA的抑制作用

目的观察水芹总酚酸对鸭乙肝病毒（DHBV）DNA的抑制作用,验证其体内抗乙肝病毒作用。方法取造模成功雏鸭随机分成模型组、拉米夫定（50mg·kg^-1·d^-1）阳性药对照组、水芹总酚酸（125、250、500mg·kg^-1·d^-1）3个剂量组。自感染第7天灌胃给药,2次/d,共10d。分别留取感染第7天（0d）、给药5d、给药10d及停药3d的血清,斑点杂交、放射自显影测定血清中DHBV-DNA的OD值进行自身和组间比较;另取肝组织适量,10%甲醛固定,常规石蜡切片、HE染色,镜下观察肝组织病理变化。结果水芹总酚酸用药组在5d、10d和停药3d均对DHBV-DNA具有明显的抑制作用。病理学观察用药组鸭肝小叶结构基本完整,肝细胞变性改变明显较轻,点、灶状坏死散在分布;而模型组鸭肝实质细胞明显嗜酸性变、水肿、脂肪变等改变和弥漫分布的点、灶性坏死,表现为小叶周边肝细胞坏死广泛,界板参差不齐,浸润的炎细胞向小叶内延伸,两组肝组织比较差异显著。结论水芹总酚酸对乙肝病毒DNA具有显著的抑制作用,且具有较强的肝细胞保护作用。     

131Ⅰ-抗-c-erbB-2单抗对卵巢癌细胞SKOV3的抑制作用

目的观察^131Ⅰ标记针对癌蛋白p185为靶点的单克隆抗体在体外对卵巢癌细胞的抑制作用。方法用氯胺T法^131Ⅰ标记抗-c-erbB-2单克隆抗体(anti-c-erbB-2-McAb)，取不同浓度的^131Ⅰ-anti-c-erbB-2-McAb与SKOV3细胞共同培养，以流式细胞术检测其对SKOV3细胞生长的抑制作用。结果^131Ⅰ-anti-c-erbB-2-McAb在体外可明显抑制SKOV3细胞，^131Ⅰ-rmIgG的抑制作用较弱，未标记的anti-c-erbB-2-McAb对SKOV3细胞的生长几乎没有抑制作用：结论^131Ⅰ-anti-c-erbB-2-McAb能有效抑制肿瘤细胞生长，有可能用于卵巢癌的免疫导向治疗。