Effects of propofol on the mRNA expression of toll-like receptor 4 in BV-2 cells during mimic ischemia-reperfusion injury <Emphasis Type="Italic">in vitro</Emphasis>

This study investigated the effects of propofol on the mRNA expression of Toll-like receptor-4 （TLR4） in BV-2 cells during mimic ischemia-reperfusion （I/R） injury in vitro. BV-2 cells, a mouse microglia line, were cultured and divided into 4 groups at random： control group （group C）, ischemia/reperfusion group （group I/R）, low-dose propofol （25 μmol/L） intervention group （group PF25） and high-dose propofol （100 μmol/L） intervention group （group PF100）. The mRNA expression of TLR4 and NF-κB was measured by means of RT-PCR. TNF-α levels in the supernatants of BV-2 cells were detected by ELISA. The results showed that the mRNA expression of TLR4 and NF-κB was significantly higher in groups I/R, PF25 and PF100 than in group C （P〈0.01）. And the TNF-α level in the supernatants was elevated in groups I/R, PF25 and PF100 as compared with that in group C （P〈0.01）. After pre-treatment with propofol, the mRNA expressions of TLR4 and NF-κB and the TNF-α level were significantly decreased in groups PF25 and PF100 in comparison to those in group I/R （P〈0.01）. And the decrease in those indicators was more significant in group PF100 than in group PF25 （P〈0.01）. It was concluded that propofol exerted brain-protecting effects during I/R injury by suppressing the mRNA expressions of TLR4 and NF-κB and deceasing the TNF-α level.     

Toll样受体4拮抗剂TAK-242对C57BL/6小鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的：探讨TAK-242治疗对心肌缺血再灌注损伤（I/R）小鼠的保护作用及可能机制。方法将36只雄性C57BL/6小鼠随机分为3组：假手术组（sham组）、模型组（缺血30 min/再灌注24 h,I/R组）和治疗组〔I/R+TAK-242（3 mg/kg）〕。再灌注24 h后应用心脏超声检测小鼠心功能、TTC染色法测定心肌梗死面积、HE染色观察心肌病理改变、实时荧光定量PCR和Western印迹法检测心肌组织TLR4 mRNA和蛋白表达、ELISA检测血清IL-6、TNF-α、IL-10和高迁移率族蛋白B1（HMGB1）浓度。结果与sham组比较,I/R组小鼠左心室收缩期直径（LVIDs）缩短（P＜0.01）,左心室射血分数（LVEF）和左心室短轴缩短分数（LVFS）均有显著性降低（P＜0.01）,出现大面积心肌梗死以及严重心肌炎症病理改变,心肌TLR4表达上调（P＜0.01）,血清IL-6、TNF-α、IL-10和HMGB1浓度升高（P＜0.01）。与I/R组比较,TAK-242治疗组小鼠LVIDs有所延长（P＜0.05）,LVEF和LVFS显著提高（P＜0.01或P＜0.05）,心梗面积显著缩小（P＜0.01）,心肌炎症浸润减轻,心肌TLR4表达降低（P＜0.05）,血清促炎因子IL-6和TNF-α水平明显下降（P＜0.01）,而抗炎因子IL-10和HMGB1浓度进一步升高（P＜0.01）。结论 TAK-242治疗对I/R小鼠心肌具有保护作用,其作用机制可能与抑制炎症反应有关。     

愈痫灵方对PTZ致痫大鼠脑组织海马CA3区TLR4、NF-kB P65、TNF-α表达的影响

目的 探讨愈痫灵方对痫性大鼠脑组织海马区炎性反应因子表达的影响.方法 取健康雄性SD大鼠120只,从中随机选取10只作为正常对照组,10只作为假手术组,腹腔注射生理盐水;其余大鼠用戊四氮造模,将符合模型标准的大鼠随机分为愈痫灵组、丙戊酸钠组和模型组,每组10只.灌胃后采用免疫组织化学方法检测TLR4、NF-kB P65和TNF-α在海马CA3区的表达变化.结果 与正常组、假手术组比,模型组、愈痫灵方组、丙戊酸钠组均上调TLR4、NF-kB P65和TNF-α在脑组织海马CA3区的表达(P<0.01),但后两组表达均低于模型组(P<0.05),且愈痫灵方组抑制TLR4和NF-kB P65在脑组织海马CA3区表达的作用优于丙戊酸钠组(P<0.05),而TNF-α在脑组织海马CA3区的表达两组间无明显差异(P>0.05);结论 愈痫灵方可抑制PTZ致痫大鼠脑组织海马CA3区TLR4、NF-kB P65和TNF-α的表达,对癫痫反应中炎性因子的表达有一定的抑制作用.     

丙泊酚后处理对大鼠肝缺血再灌注损伤时Toll样受体4、NF-κB及血清TNF-α表达的影响

目的探讨丙泊酚后处理对大鼠肝缺血再灌注损伤的影响。方法成年健康Wistar大鼠60只,随机分为5组（n=12）：假手术组（S组）、缺血再灌注组（IR组）、丙泊酚1、2、4mg/kg后处理组（P1、P2、P4组）。用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法测定肝组织中TLR4 mRNA、NF-κB mRNA的表达,放射免疫法测定血清TNF-α的浓度,光镜观察肝组织形态学变化。结果与S组比较,各组TLR4 mRNA、NF-κB mRNA表达上调,TNF-α升高,差别均有统计学意义（P〈0.01）;与IR组比较,P1、P2、P4组TLR4 mRNA、NF-κB mRNA表达下调,TNF-α降低（P〈0.01）;与P4组比较,P1、P2组TLR4 mRNA、NF-κB mRNA表达下调,TNF-α降低（P〈0.01）;与P1组比较,P2组TLR4 mRNA、NF-κB mRNA表达下调,TNF-α降低（P〈0.01）。病理检查显示P1、P2、P4组肝组织结构损伤明显小于IR组。结论丙泊酚后处理减轻大鼠肝缺血再灌注损伤的机制可能与下调TLR4、NF-κB的表达,降低肝组织炎症反应有关。     

缺血预适应通过抑制TLR4/NF-KB信号通路保护大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的:研究缺血预适应对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用是否由toll样受体4(TLR4)/NF-kB途径所介导,以及是否与促进降钙素基因相关肽(CGRP)释放有关.方法:结扎Sprague-Dawley大鼠左冠状动脉前降支60 min,复灌3h造成心肌缺血再灌注损伤.缺血预适应为结扎大鼠左冠状动脉前降支5 min,复灌5min,共4个周期.RT-PCR分析心肌TLR4 mRNA表达.免疫组织化学法分析心肌TLR4和NF-κB蛋白表达.同时,测定心肌梗死面积、血浆CGRP浓度和血清肌酸激酶活性.结果:缺血预适应显著减少心肌梗死面积,降低肌酸激酶活性,增高血浆CGRP水平.心肌缺血再灌注可显著上调TLR4和NF-κB表达,缺血预适应可抑制其作用.结论:缺血预适应通过抑制TLR4/NF-κB信号通路保护大鼠心肌缺血再灌注损伤,其作用与促进CGRP释放有关.     

双氢青蒿素抑制LPS诱导的小胶质细胞炎症反应

目的 观察双氢青蒿素(dih ydroartemisinin,DHA)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的BV-2小胶质细胞神经炎症反应的影响及其机制.方法 LPS诱导BV-2小胶质细胞活化建立炎症模型,用不同浓度DHA(0.5、1、2、4μmol/L)处理细胞,CCK-8检测细胞活性;选取lμmol/L DHA干预细胞,倒置相差显微镜下观察细胞形态的变化;RT-PCR检测iNOS、IL-1β、IL-6、TNF-α基因表达水平;ELISA检测培养基中IL-1β、IL-6、TNF-α的表达水平;Western blot检测NF-κB、IκBα及TLR4的蛋白表达.结果 低剂量的DHA(＜2μmol/L)对BV-2细胞活性无明显影响(P＞0.05),DHA可抑制LPS引起的BV-2细胞形态变化,DHA抑制活化的BV-2细胞iNOS、IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA的表达(P＜0.01),减少IL-1β、IL-6、TNF-α炎症因子释放(P＜0.01),明显降低TLR4的蛋白表达,减少细胞质内IκBα的表达,并抑制NF-κB向核内移位(P＜0.01).结论 DHA可能通过作用于TLR4/NF-κB通路,抑制LPS诱导的BV-2小胶质细胞NF-κB的激活,从而抑制炎症因子的产生,发挥抗炎作用.     

血必净对内毒素刺激的THP-1细胞的影响

 目的 观察血必净对内毒素刺激的THP-1细胞的影响,并探究其是否具有诱导内毒素耐受的作用。方法 THP-1细胞先以不同浓度的血必净（10,25,50 mg/mL）作用不同时间（4,12,24 h),再用内毒素进行刺激。用ELISA法测定上清液中TNF-α水平,Real time-PCR技术检测TLR4和IRAK-M mRNA的表达差异。结果 不同浓度血必净不同时间作用下,各实验组细胞TNF-α分泌水平均无显著变化（P>0.05）。在高浓度（50 mg/mL）血必净组,作用24 h时细胞TLR4表达上调,是4 h时的1.547倍（P<0.05）;在作用24 h后,50 mg/mL血必净组IRAK-M表达上调,是对照组的1.349倍（P<0.05）;但其余各浓度及时间组细胞的TLR4和IRAK-M mRNA表达均无显著差异（P>0.05）。结论 血必净不能阻断内毒素刺激的THP-1细胞TNF-α的分泌,不能诱导内毒素耐受;高浓度血必净长时间作用后虽可能上调THP-1细胞TLR4和IRAK-M mRNA表达,但确切含义仍不清楚。     

呼吸道合胞病毒合并肺炎克雷伯菌感染所致肺炎与TLR4-NF-κB信号通路关系的初步研究

目的 探讨呼吸道合胞病毒( RSV)合并肺炎克雷伯菌( Kp)感染SD大鼠后,初步研究其所致肺炎与TLR4-NF-κB信号转导通路的关系. 方法 60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、RSV组、Kp组及RSV+Kp组,以RSV、Kp滴鼻感染SD大鼠,分别于感染后第0、1、3、5、7天不同时间点,测量其体重、肺指数( LI )的变化;HE染色观察肺的病理学改变;RT-PCR法检测肺组织中TLR4、NF-κB的mRNA表达;Western blot检测NF-κB蛋白的表达;ELISA法检测肿瘤坏死因子-α( TNF-α)和白细胞介素-1β( IL-1β)含量的变化.结果 与正常对照组相比,RSV组和Kp组均存在弥漫性肺泡间隔增厚和炎症细胞浸润,且随感染时间的延长,肺泡结构破坏逐渐加重, LI、TLR4 mRNA、NF-κB mRNA、NF-κB 蛋白、TNF-α和IL-1β的表达均升高,并与RSV和Kp感染之间存在时间依赖性关系;RSV+Kp组 LI、TLR4 mRNA、NF-κB mRNA、NF-κB蛋白、TNF-α和IL-1β的表达量进一步升高,肺组织炎症明显加剧. 结论 RSV和Kp混合感染具有协同作用,加重肺部炎症;RSV合并Kp感染可能通过 TLR4-NF-κB途径诱导肺部炎症反应,释放细胞因子TNF-α和IL-1β等.     

福辛普利拉对脂多糖诱导的单核细胞TLR4表达的抑制作用

目的 研究福辛普利拉（Fos）对人白血病单核细胞系THP1 Toll样受体4（TLR4）表达的抑制作用.方法 培养THP1细胞,并将其浓度调整为1×10~＋/mL,分为8组：对照组（正常THP1细胞）、脂多糖（LPS）刺激组（THP1细胞＋LPS）、DMSO组（THP1细胞＋LPS＋DMSO）及Fos干预组（THP1细胞＋LPS＋Fos,Fos质量浓度分别为0.25、0.5、1、5、10 μmol/L）.分别采用Real-time PCR法检测THP1细胞TLR4 mRNA的表达;Western blotting检测TLR4和NF-kB蛋白的表达;流式细胞仪检测TLR4蛋白的表达.结景LPS刺激组THP1细胞TLR4 mRNA和蛋白的表达均高于对照组（P〈0.05）;Fos干预组TLR4 mRNA和蛋白的表达均低于LPS刺激组,其中1、0.5 p.mol/L的Fos作用最明显.LPS刺激组NF-kB蛋白表达明显高于各Fos干预组（P〈0.05）.结论 Fos能有效下调LPS诱导的THP1细胞中TLR4的表达,并可有效抑制NF-kB的活性.     

芍药苷对高糖刺激的小鼠骨髓来源的巨噬细胞TLR4信号通路的影响

目的 探讨芍药苷( PF)对高糖刺激的小鼠骨髓来源的巨噬细胞( BMDMs) Toll 样受体4 ( TLR4)信号通路的影响.方法 分离骨髓来源的巨噬细胞作为研究对象,高糖作为刺激因素,芍药苷作为干预因素分组.将BMDMs分为7组:正常糖对照组( LG 组)、正常糖对照 +PF 组( LG +PF组)、高糖刺激组(HG组)、高糖刺激+PF组( HG+PF组)、TLR4 -/ -对照组(TLR4 -/-组)、TLR4 -/ -对照+高糖刺激组(TLR4 -/ -+ HG 组)、 TLR4 -/ -对照 + 高糖刺激 + PF 组(TLR4-/ -+HG+PF组).流式细胞术鉴定巨噬细胞的纯度及成熟度;CCK-8 检测 PF对 BMDMs活力的影响;Transwell检测各组BMDMs 的趋化功能;激光共聚焦法检测各组的TLR4和诱生型一氧化氮合酶( iNOS)的协同表达;qRT-PCR测定各组细胞中的肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β (IL-1β)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)及iNOS mRNA的转录表达;Western blot法检测各组总蛋白中iNOS、TLR4、髓样分化因子88( MyD88)、TIR结构域衔接蛋白( Trif)、磷酸化白介素-1受体相关激酶(p-IRAK1)、磷酸化干扰素调节因子3(p-IRF3)、核因子κB(NF-κB)p65和NF-κBp-p65蛋白的表达;ELISA法检测各组细胞培养上清液中促炎因子TNF-α、IL-1β和MCP-1的分泌情况.结果 与LG组比较,高糖刺激可以增加巨噬细胞的趋化功能;明显上调细胞TNF-α、IL-1β、MCP-1及iNOS mRNA的转录表达(P＜0. 01);同时HG组的iNOS 及 TLR4、MyD88、Trif、p-IRF3、NF-κBp65 和 NF-κBp-p65等信号通路蛋白表达水平明显增强(P＜0. 01);细胞培养上清液中分泌的 TNF-α、 IL-1β 及 MCP-1 水平增高( P ＜0. 01). PF和敲除TLR4基因均可以抑制高糖刺激导致的巨噬细胞的激活效应.结论 高糖可以诱导BMDMs细胞内的TLR4及下游信号传导通路表达上调,同时使巨噬细胞激活导致促炎因子表达上调;PF和敲除TLR4基因均可抑制TLR4信号通路的激活,并且使巨噬细胞促炎因子的表达下调.     

青藤碱对佐剂性关节炎大鼠TLR4/MyD88信号通路的影响

目的:探讨青藤碱对佐剂性关节炎大鼠TLR4/MyD88信号通路诱导炎症的影响。方法:选择清洁级SD大鼠40只,随机分为模型组、青藤碱组、甲氨蝶呤组及正常对照组。前3组大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂诱发大鼠佐剂性关节炎模型,正常对照组大鼠右后足跖皮内注射等量0.9%氯化钠注射液。4组分别干预4周后,取膝关节滑膜,采用Real-time PCR法检测TLR4 mRNA、MyD88 mRNA表达,ELISA法检测炎性因子TNF-α。结果:模型组大鼠膝关节滑膜组织TLR4 mRNA、MyD88 mRNA及炎性因子TNF-α表达均较正常对照组明显升高(P<0.01)。经青藤碱治疗后,TLR4 mRNA、MyD88 mRNA及炎性因子TNF-α表达均较模型组明显下降(P<0.01)。结论:青藤碱可改善佐剂性关节炎大鼠的关节炎症,该作用可能与抑制TLR4/MyD88信号通路有关。     

人脐带间充质干细胞外泌体miR-100对多囊卵巢综合征患者颗粒细胞炎症的影响

目的 探究人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)来源的外泌体miR-100对多囊卵巢综合征(PCOS)患者颗粒细胞炎症的影响。方法 选取2021年3月至2021年12月于石家庄市第四医院生殖医学中心就诊的70例PCOS患者为研究对象(PCOS组),同期70例因输卵管因素助孕治疗的非PCOS患者为对照(对照组),比较两组患者的临床基线资料及IVF妊娠结局相关参数。采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)检测患者颗粒细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)的表达。采用二元Logistic回归分析影响PCOS的危险因素。RT-qPCR验证hUC-MSCs外泌体中miR-100的表达水平。合成miR-100模拟物及其对照转染至人卵巢颗粒细胞KGN中,RT-qPCR检测miR-100的表达水平。在脂多糖(LPS)诱导的KGN炎症细胞模型中转染miR-100模拟物及其对照,RT-qPCR检测TNF-α、IFN-γ的mRNA表达水平。采用双荧光素酶报告基因系统检测miR-100对靶基因的调控作用。miR-100过表达后,Western blotting检测KGN炎症模型中Tol...     

黄芪汤调节TLR4/NF-κB信号通路改善高糖诱导足细胞损伤的研究

  目的  探讨黄芪汤对高糖诱导足细胞损伤的作用及机制。  方法  体外培养人足细胞, 采用30 mmol·L-1葡萄糖干预24 h诱导足细胞损伤, 分别设置对照组、模型组、黄芪汤低浓度组(10 μg·mL-1)、黄芪汤中浓度组(30 μg·mL-1)和黄芪汤高浓度组(100 μg·mL-1)。采用CCK-8法检测细胞增殖能力, 划痕实验检测细胞迁移能力,qPCR法检测TNF-α、IL-6等炎症因子mRNA表达, ELISA法检测足细胞上清TNF-α、IL-6的含量,Western blot法检测足细胞TLR4、NF-κB、p-NF-κB、TNF-α及IL-6蛋白表达。  结果  与对照组比较, 模型组细胞划痕愈合率明显降低(P < 0.01),足细胞中TNF-α、IL-6、CCL24 mRNA表达水平,上清液中TNF-α、IL-6的含量和TLR4、p-NF-κB/NF-κB、TNF-α及IL-6蛋白表达均显著增加(P < 0.05,P < 0.01)。与模型组相比, 黄芪汤组细胞划痕率明显升高(P < 0.01),足细胞中TNF-α、IL-6的含量和mRNA表达,以及TLR4、p-NF-κB/NF-κB、TNF-α、IL-6蛋白表达均显著减少(P < 0.05, P < 0.01)。  结论  黄芪汤能有效减轻高糖对人足细胞的炎症损伤, 增强细胞增殖、迁移能力, 抑制细胞凋亡, 其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路、下调炎症因子的表达有关。      

慢性胰腺炎患者胰腺和血清中TLR4信号通路关键因子 的检测及其意义

目的：检测慢性胰腺炎(CP)患者胰腺和血清中Toll样受体4(TLR4)信号通路关键应答基因的表达,阐明TLR4信号通路在CP发生发展过程中的意义。方法：收集24例CP和6例胰腺正常的良性病变患者的手术胰腺组织标本,分别进行TLR4 mRNA原位杂交和髓样分化蛋白88（MyD-88）、肿瘤坏死因子α（TNF-ɑ）免疫组织化学染色,利用电脑分析系统测量各个指标的积分光密度(IA)值。 采集84例CP患者及30例正常成人的空腹静脉血,ELISA法检测血清可溶性TLR4（sTLR4）、TNF-α、白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素12（IL-12）的水平,分光光度法检测血浆内毒素脂多糖（LPS）的水平。分析血浆LPS水平与各细胞因子的相关性。结果：与正常对照组比较,CP组患者胰腺组织TLR4 mRNA、MyD-88、TNF-ɑ表达水平均显著增加(P<0.01), 分别是正常对照的4.2、6.1及10.2倍;末梢血LPS、sTLR4、TNF-ɑ、IL-6和IL-12水平与正常对照组比较均升高(P<0.05或P<0.01);Bivariate 相关分伴有内毒素血症的CP患者血浆LPS水平与血清TNF-α、IL-6、IL-12水平呈正相关关系(r=0.859,P<0.01;r=0.688,P<0.01;r=0.539,P<0.05)。结论：LPS-TLR4信号通路及应答基因产物在CP患者胰腺及外周血中均上调,其在CP急性发作期和炎症进展过程中发挥重要作用。     

儿童原发性肾病综合征Toll样受体相关蛋白表达的相关性研究

目的 分析儿童原发性肾病综合征(PNS)患者Toll样受体相关蛋白TLR4和TLR7表达水平与肾损伤标记物和炎性因子的相关性,明确其临床价值。 方法 以宁波市北仑区人民医院2013年6月-2016年1月收治的92例儿童PNS患者为观察组,以37例健康肾脏组织为对照组,采用免疫组织化学实验测定组织TLR4和TLR7表达水平。根据TLR4和TLR7表达水平,进一步将患儿分为TLR4和TLR7表达均低于中位数组(A组,33例),TLR4和TLR7表达有一种低于中位数组(B组,29例),TLR4和TLR7表达均高于中位数组(C组,30例),采用全自动化学分析仪和ELISA试剂盒测定各组患儿外周血炎性因子IL-1β、IL-6及TNF-α水平,尿液肾损伤标记物NGAL、KIM-1水平。 结果 观察组患儿肾组织TLR4和TLR7的表达水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。各组之间NGAL、KIM-1水平不同,C组高于B组,B组高于A组,组间差异均有统计学意义(均P<0.05);Pearson相关性分析结果显示TLR4和TLR7表达水平均与尿液KIM-1水平呈正相关性(R2=0.627、0.682,P<0.05)。各组之间IL-1β、IL-6及TNF-α水平不同,C组高于B组,B组高于A组,组间差异均有统计学意义(P<0.05);Pearson相关性分析结果显示TLR4和TLR7水平均与血清IL-6及TNF-α水平呈正相关性(R2=0.586~0.655,P<0.05)。 结论 PNS患儿TLR4和TLR7表达水平与肾损伤程度及炎性反应程度密切相关,具有不可忽视的临床价值。      

妇科千金片对盆腔炎大鼠TLR2/4-NF-κB信号通路影响的研究

目的：观察妇科千金片对盆腔炎大鼠子宫 Toll 样受体2（ TLR2）、Toll 样受体4（ TLR4）、核转录因子 kappaB （ NF-κB ） mRNA 表达的影响,探讨妇科千金片调控 TLR2/4-NF-κB 信号通路对盆腔炎大鼠的抗炎机制。方法通过子宫注射混合菌液建立盆腔炎大鼠模型,将60只雌性 SD 大鼠随机分为5组,每组12只,即：空白组、假手术组、模型组、妇科千金片组、罗红霉素组,分别予以相应药物干预,运用免疫组化检测子宫组织中 TLR2、TLR4、NF-κB 的灰度值;运用实时荧光定量 PCR 检测子宫组织中 TLR2、TLR4、NF-κB 的 mRNA 表达变化。结果与空白组、假手术组比较,模型组的 TLR2、TLR4、NF-κB 灰度值显著降低（ P＜0.01）, TLR2、TLR4、NF-κBmRNA 的表达均显著升高（ P＜0.01）,表明模型成功;与模型组比较,妇科千金片组、罗红霉素组 TLR2、TLR4、NF-κB 灰度值均显著升高（ P＜0.01）, TLR2、TLR4、NF-κBmRNA 均显著降低（ P＜0.01）。结论妇科千金片对盆腔炎大鼠抗炎的作用机制,可能是通过调控 TLR2/4-NF-κB 炎性介质变化信号通路的传导而实现的。     

益气养阴方对Lewis肺癌移植小鼠肿瘤生长影响的实验研究

目的:通过不同剂量益气养阴方对Lewis肺癌移植小鼠肿瘤生长及肿瘤组织中Notch信号表达、CD4~+CD25~+Treg细胞比例及细胞因子IL-10、TNF-β表达影响的观察,探讨益气养阴方干预肺癌的量效关系及机制。方法:将60只近交系C57BL/6纯系小鼠行Lewis肺癌细胞移植造模后随机分为4组:模型组、化疗组、益气养阴方等效剂量组、益气养阴方大剂量组。模型组仅行造模;等效剂量组、大剂量组按小鼠体质量灌胃给药,每天3次;化疗组以CTX腹腔注射化疗,每周一次。记录各组小鼠瘤体大小,观察期满后留取标本行HE染色及Notch信号表达检测。结果:(1)肿瘤相对体积(RTV)及肿瘤相对抑制率:药物干预组RTV值均较模型组缩小(P0.01),组间比较大剂量组RTV均低于其他三组(P0.01),而化疗组RTV低于等效剂量组(P0.05);大剂量组肿瘤抑制率高于其他三组(P0.05);(2)肿瘤组织中Notch信号通路表达及CD4~+CD25~+Treg细胞:等效剂量组、高剂量组、化疗组Notch1mRNA表达、CD4~+CD25~+Treg均较模型组降低(P0.05),等效剂量组Notch1mRNA表达高于化疗组(P0.05);高剂量组较等效剂量组及化疗组Notch1mRNA表达量低(P0.05);等效剂量组、益气养阴高剂量组、化疗组Notch3mRNA表达均较模型组降低(P0.05),但等效剂量组Notch3mRNA表达与化疗组比较差异无统计学意义(P0.05);高剂量组较等效剂量组及化疗组Notch3mRNA表达量降低(P0.05);等效剂量组、高剂量组、化疗组Jagged1mRNA及HeslmRNA表达均较模型组降低(P0.05),等效剂量组与化疗组Jagged1mRNA及HeslmRNA表达量降低,差异具有统计学意义(P0.05);高剂量组较等效剂量组及化疗组Jagged1mRNA及HeslmRNA表达量降低(P0.05);(3)肿瘤组织中IL-10、TNF-β表达:药物干预各组肿瘤组织中IL-10、TNF-β表达均较模型组降低(P0.05)。药物干预组间比较:化疗组IL-10、TNF-β表达降低最明显,其次为高剂量组。结论:益气养阴方有抑制Lewis肺癌移植小鼠肿瘤生长的作用,且作用存在量效关系,提示较大剂量的益气养阴方可能更有利于抑制Lewis肺癌细胞生长,而这种抑制作用与调控肿瘤组织中Notch1信号通路及CD4~+CD25~+Treg细胞有关。     

丙泊酚对大鼠急性肾缺血再灌注损伤的抗氧化机制研究

目的:探讨丙泊酚预处理对急性肾缺血再灌注损伤(acute renal ischemia reperfusion injury,ARIRI)的抗氧化保护作用及其机制。方法:建立大鼠急性肾缺血再灌注损伤模型,健康雄性SD大鼠54只,随机分为3组:假手术组、缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)组、丙泊酚预处理组。缺血再灌注前15min、缺血再灌注后2h、24h分别检测血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及观察肾组织的病理学变化。结果:丙泊酚预处理组肾组织病理学变化明显轻于缺血再灌注组。与假手术组比较,缺血再灌注组中血清尿素氮、肌酐水平显著增加(P<0.05),而丙泊酚预处理组尿素氮、肌酐水平则低于缺血再灌注组(P<0.05)。丙泊酚预处理组血清超氧化物歧化酶和丙二醛水平与缺血再灌注组均有统计学差异(P<0.05)。结论:在急性肾缺血再灌注损伤中,丙泊酚能起到对肾脏的保护作用。     

参附注射液改善大鼠肝移植缺血再灌注后Kupffer细胞的激活

目的观察参附(Shenfu,SF)注射液预处理对大鼠肝移植缺血再灌注后Kupffer细胞中糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)、核转录因子κB(NF-κB)表达的影响,探讨参附预处理保护缺血再灌注损害(ischemia reperfu-sion injury,IRI)的机制。方法将雄性SD大鼠按完全随机分组法分为正常对照组、缺血再灌注组和SF组,其中缺血再灌注组、SF组建立肝移植缺血再灌注模型,于缺血再灌注后6 h分离培养受体移植肝脏的Kupffer细胞。通过RT-PCR、Westernblot和激光共聚焦显微镜技术、免疫荧光法、ELISA等实验技术检测Kupffer细胞GR的mRNA和蛋白表达、NF-κB的蛋白表达、培养上清中TNF-α的含量。结果缺血再灌注组Kupffer细胞GR mRNA和蛋白表达均明显低于正常对照组(P<0.01),缺血再灌注组NF-κB、培养上清TNF-α表达量(830.19±71.34)明显高于正常对照组NF-κB、培养上清TNF-α表达量(65.41±37.63,P<0.01)。与缺血再灌注组相比,SF组GR水平明显上升(P<0.01),NF-κB活性、TNF-α表达量(543.59±41.27)明显下降(P<0.01)。结论缺血再灌注损伤会导致Kupffer细胞GR的表达下调,NF-κB的激活;参附预处理可以改善肝移植缺血再灌注后Kupffer细胞的激活。     

利多卡因对脑缺血再灌注损伤大鼠海马组织细胞间NF-κB表达的影响

目的观察利多卡因对大鼠脑缺血再灌注损伤后海马组织细胞间NF-κB基因表达的影响,探讨利多卡因脑保护作用的机制。方法雄性SD大鼠32只,随机分为假手术组(A组)、缺血再灌注组(B组)、利多卡因大剂量组(C组)和利多卡因小剂量组(D组),缺血前10min腹腔注射。脑缺血10min再灌注24h时,断头处死大鼠。用RT-PCR技术检测海马组织NF-κB的表达,用免疫组织化学、蛋白印记(westernblot)方法检测NF-κB蛋白表达情况。结果脑缺血再灌注后海马组织NF-κBmRNA及蛋白表达水平增高,利多卡因可下调NF-κB表达,缺血再灌注后,海马区神经元细胞出现明显坏死,利多卡因可减轻海马区神经元损伤。结论利多卡因可能通过抑制NF-κB基因表达而对脑缺血再灌注损伤起到一定的保护作用。