大黄素对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞损伤的作用及其机制研究

【目的】探讨大黄素对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞损伤的作用及其机制研究。【方法】肺泡上皮细胞A549随机分为对照组、模型组、20μg/mL组、40μg/mL组、80μg/mL组、160μg/mL组,对照组细胞常规培养,其余组细胞均经过肺炎链球菌感染,20μg/mL组、40μg/mL组、80μg/mL组、160μg/mL组细胞在感染后24 h分别加入不同浓度的大黄素(20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL、160μg/mL)处理。噻唑蓝(MTT)检测各组A549细胞的增殖;流式细胞术检测凋亡率;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;蛋白质印迹法检测A549细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)蛋白水平。【结果】与对照组相比,肺炎链球菌感染的A549细胞增殖活性、Bcl-2、β-catenin、Cyclin D1蛋白水平降低(P<0.05),凋亡率及IL-6、TNF-α、Bax和Cleaved Caspase-3蛋白水平增加(P<0.05);不同浓度大黄素促进肺炎链球菌感染的A549细胞增殖(P<0.05),抑制其凋亡(P<0.05),降低IL-6、TNF-α水平(P<0.05),增加Bcl-2蛋白水平(P<0.05),下调Bax和Cleaved Caspase-3蛋白水平(P<0.05),提高β-catenin、Cyclin D1蛋白水平(P<0.05)。【结论】大黄素可能通过调节Wnt/β-catenin信号通路从而促进肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞增殖,抑制其凋亡。     

rhuPAa-melittin的生物活性检测

目的 利用高纯度的rhuPAa-melittin进行人成纤维细胞和卵巢癌细胞进行活性检测,探讨rhuPAa-melittin对卵巢癌治疗作用及对正常细胞毒性作用。方法 利用高纯度的rhuPAa-melittin蛋白分别作用于人成纤维细胞和人卵巢癌细胞SKOV3 48 h,在490 nm波长处测定其吸光度,以反映活细胞的数量并间接反映rhuPAa-melittin对培养中细胞的生长抑制作用。结果 人卵巢癌细胞SKOV3组,在4μg/mL时对细胞抑制率已经达到了66.59%,在16μg/mL时,细胞已经全部死亡,差异有统计学意义(P<0.05)。而人成纤维细胞组,在4μg/mL时其对细胞的抑制率仅为达到7.3%,8μg/mL时抑制率为12.3%,16μg/mL时抑制率为22.0%。结论 rhuPAa-melittin对人卵巢癌细胞SKOV3细胞有着明显的抑制杀伤作用,而对于人成纤维细胞的抑制作用不明显。     

晚期糖基化终产物对人结肠癌细胞SW-480增殖的影响及其机制研究

目的观察晚期糖基化终产物（advanced glycosylation end prodrcts,AGE）对人结肠癌细胞株SW-480增殖的影响,并探讨其可能机制。方法不同浓度AGE干预SW-480细胞,噻唑蓝（MTT）法比较各组细胞活力,流式细胞术观察AGE对SW-480细胞周期的影响,蛋白质印迹法观察AGE对SW-480细胞CyclinD1表达的影响,端粒重复序列扩增法（telomeric repeat amplification protocol,TRAP）银染法观察AGE对SW-480细胞端粒酶活性的影响。MTT测细胞活力的检测设置空白对照组、100μg/mL小牛血清白蛋白（bovine serum albumin,BSA）组及50、100、500μg/mL AGE组,其余检测只设置100μg/mL BSA组和100μg/mL AGE组。结果 MTT结果示AGE促进SW-480细胞的增殖,且呈浓度依赖性。100μg/mL BSA组与100μg/mL AGE组72h后的细胞G0/G1期所占百分比分别为56.02%±0.58%、51.93%±1.01%,差异有统计学意义（P〈0.05）。蛋白质印迹法示100μg/mL AGE组72h后CyclinD1的表达较100μg/mL BSA组增加,差异有统计学意义（P〈0.05）。TRAP银染法检测示100μg/mL AGE干预SW-480细胞72h后可以增加端粒酶活性（P〈0.05）。结论 AGE可促进人结肠癌细胞SW-480生长,呈剂量依赖性。其作用机制可能与AGE上调CyclinD1的表达加速G1/S期转换及增加端粒酶活性有关。     

血卟啉单甲醚对人宫颈癌Hela细胞体外影响的研究

目的:初步探讨血卟啉单甲醚(hematoporphyrin monomethyl ether,HMME)介导的光动力疗法(HMME-PDT)对体外培养的人宫颈癌Hela细胞的杀伤效应及影响宫颈癌细胞光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)杀伤效应的主要因素。方法:通过采用不同光敏剂浓度、光照能量密度及细胞孵育时间介导的光动力作用于人宫颈癌Hela细胞,MTT法检测24h后的细胞生长抑制率。结果:光敏剂浓度<2.5μg/mL的不同组细胞生长抑制率有明显差异,光照能量密度≥1.5J/cm2及孵育时间≥4h的细胞之间生长抑制率差异无统计学意义。HMME 2.5μg/mL、光照能量密度1.5J/cm2和孵育时间≥4h可能是PDT对Hela细胞杀伤作用的最佳参数。结论:特定光源下,光敏剂的浓度、光照剂量及孵育时间是影响HMME-PDT效应的主要因素。     

定期无偿献血者NK细胞免疫功能的研究

目的 分析定期无偿全血捐献者、血小板捐献者的NK细胞数量以及细胞毒活性,评价定期捐血对机体NK细胞免疫功能的影响.方法 采用流式细胞术对三组人群(定期无偿全血、血小板和首次捐血者,后者为对照组)外周血中NK细胞群的数量进行分析.采用效/靶细胞混合培养的方法,计算出NK细胞对靶细胞的杀伤率.结果 全血捐献者NK细胞数量及其对靶细胞的杀伤率与对照组的差异无统计学意义(P>0.05);血小板捐献者NK细胞数量较对照组明显增高(P<0.05),而NK细胞杀伤活性明显降低(P<0.05).结论 本研究结果说明,全血捐献者献血间隔期较长(>3个月),机体有足够的时间来恢复NK细胞数量及其细胞毒性,而血小板捐献者献血间隔期短,机体通过NK细胞数量的增加来调节由于其功能降低对机体造成的影响.     

白细胞介素-1对β淀粉样蛋白胞毒及基因表达的调节作用

目的:研究β淀粉样蛋白(β-amyloidprotein,Aβ)的神经元毒性作用及白细胞介素1(interleukin-1β,IL-1β)对神经细胞β淀粉样蛋白前体(β-amyloidprecursorprotein,APP)基因表达以及对Aβ细胞毒性的调节作用。方法:以PC12细胞作为体外神经细胞模型,应用四唑盐(MTT)法检测Aβ,IL-1β对细胞活性的影响,应用RT-PCR法半定量分析IL-1β对APP基因表达的影响。结果:Aβ具有直接的神经细胞毒作用,与浓度以及聚集状态相关,以20μmol/L孵育3h毒性最大(q=5.62,P<0.01),而孵育7d者几乎没有毒性。IL-1β(浓度为20μg/L)与Aβ25-35(浓度为20μmol/L孵育3h)共同作用于细胞时,Aβ25-35的细胞毒作用被扩大,细胞活性从36.7%降到了13.2%(q=3.8,P<0.05);当IL-1β(浓度为20μg/L)与Aβ25-35(20μmol/L孵育7d)共同作用时,细胞活性迅速下降,从93%降到了7.7%(q=4.83,P<0.01)。IL-1β可以刺激PC12细胞APP751、770mRNA表达增加,与对照组相比,20μg/L组APPmRNA表达增加约为2倍(q=4.76,P<0.01),此后增加不明显;APPmRNA的表达在IL-1β(20μg/L)刺激6h达高峰,约为对照组的2倍(q=4.92,P<0.01)。结论:Aβ具有直接细胞毒作用,与浓度以及聚集状态相关。IL-1β可以扩大Aβ的细胞毒性作用。IL-1β可以刺激PC12细胞APPmRNA表达增加,具有剂量及     

一氧化氮在白细胞介素-1β诱导的基质金属蛋白酶-2活性上调中的作用

目的研究一氧化氮(NO)在白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)分泌的基质金属蛋白酶2(MMP2)活性上调中的作用,探讨IL1β调节MMP2活性的可能机制。方法组织贴块法培养VSMC。Zymography检测MMP2活性,Western印迹法分析MMP2蛋白表达水平,硝酸还原酶法及黄嘌呤氧化酶法分别测定细胞培养上清中NO及丙二醛(MDA)水平。结果IL-1β刺激后,细胞培养液的MMP2活性上升为对照组的(5.67±1.09)倍(P<0.05),而IL-1β氨基胍(AG)组MMP2活性则为对照组的(7.76±1.24)倍(P<0.05);IL-1β刺激后,细胞培养上清中MMP2蛋白表达量上升为对照组的(3.26±0.32)倍(P<0.05),而IL-1β+AG组MMP2蛋白表达量则为对照组的(4.35±0.48)倍(P<0.05);对照组细胞培养上清中NO、MDA水平分别为(2.89±0.81)μmol/g.protein、(8.85±2.80)μmol/g.protein,II-1β刺激后细胞培养上清中N0、MDA水平上升为(116.85±20.29)μmol/g.protein、(24.91±6.24)μmol/g.protein,IL1β+AG组NO水平[(36.78±7.18)μmol/g.protein]较Il-1β组降低(P<0.05),而MDA水平[(55.75±17.49)μmol/g.protein]则较IL1β组上升(P<0.05)。结论IL1β刺激VSMC后释放的NO可能通过抑制IL1β诱导的超氧化物的大量产生而对MMP2活性起抑制作用。     

黄芪多糖与Ⅰ型胶原协同促血管新生的细胞学研究

目的观察黄芪多糖载入Ⅰ型胶原促血管新生作用,探讨黄芪多糖与Ⅰ型胶原的协同作用。方法通过人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)增殖实验测定不同浓度黄芪多糖和胶原对细胞的增殖作用,并测量细胞迁移率;Western Blot方法验证血管生成素-1(Ang-1)、整合素蛋白αvβ3、血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果黄芪多糖浓度20μg/mL时促进HU-VEC生长作用最明显,此后随着浓度的升高,促生长的作用逐渐降低,但均显著高于对照组(P0.01);而黄芪和胶原合用,对细胞的促生长有协同作用,显著高于20μg/mL胶原组(P0.05)。20μg/mL黄芪多糖+20μg/mL胶原时HUVEC迁移能力最强;Western Blot结果提示Ang-1、VEGF和integrinαvβ3的表达随着黄芪和胶原浓度的增加而升高;20μg/mL黄芪多糖+胶原组达到最高。结论黄芪多糖能促进HUVEC的增殖和迁移,并上调Ang-1、VEGF和Integrinαvβ3的表达,具有促进血管新生的作用,且黄芪多糖和胶原具有协同作用。     

慢性气道阻塞性疾病的发病机制研究:转化生长因子β1对大鼠气道重塑的影响

目的:观察转化生长因子β1(transforminggrowthfactor-β1,TGF-β1)对大鼠气道平滑肌细胞(airwaysmoothmusclecell,ASMC)增殖的影响。方法:ASMC取自1只健康雄性SD大鼠。应用体外培养的方法,加入不同浓度的TGF-β1,通过MTT法观察其对ASMC增殖的影响。实验分4组:对照组犤20mL/L胎牛血清(FCS)/低糖Dulbecco最低必须培养液(DMEM)犦,100mL/LFCS/DMEM组,10μg/LTGF-β1组和100μg/LTGF-β1组。结果:细胞培养第2天,MTT法检测的10μg/LTGF-β1组A值(0.36±0.043)和100μg/LTGF-β1组(0.37±0.050)明显高于对照组(0.126±0.052)(t=5.44,7.63,P<0.05)和100mLFCS/DMEM组(0.182±0.051)(t=5.97,5.88,P<0.05)。100mLFCS/DMEM组(0.38±0.034)于细胞培养第3天A值与对照组(0.20±0.035)比较增高(t=8.18,P<0.05)。镜下观察发现,10μg/LTGF-β1组和100μg/LTGF-β1组ASMC于培养第3天铺满96孔培养板,而100mL/LFCS/DMEM组细胞于第5天铺满培养板。结论:TGF-β1对气道平滑肌细胞的增殖具有明显的促进作用。     

β-咔啉类生物碱对人胃癌细胞SGC-7901增殖的影响

目的 探讨β-咔啉类生物碱对人胃癌细胞SGC-7901增殖的影响。方法 通过体外培养人胃癌细胞株SGC-7901,将含有不同浓度(5、10、20、40μg/mL)β-咔啉类生物碱的培养液与SGC-7901细胞共同培养24 h和48 h。采用MTT比色法计算细胞抑制率;在荧光显微镜下用Hoechst 33258细胞核染色法观察细胞形态学改变;流式细胞仪检测凋亡率及基因组DNA琼脂凝胶电泳检测凋亡梯状条带。结果 β-咔啉类生物碱对SGC-7901细胞的损伤呈浓度依赖性;β-咔啉类生物碱分别作用24 h和48 h后半数抑制浓度(IC50)分别为17.79μg/mL和12.17μg/mL;荧光染色可观察到有细胞核固缩及核断裂的凋亡现象;流式细胞术显示:阴性对照组(0μg/mL)及β-咔啉类生物碱5、10、20、40μg/mL浓度组24、48 h凋亡率为别1.66%、11.27%、20.32%、30.66%、41.42%和3.84%、15.29%、23.34%、34.87%、49.54%,细胞凋亡率伴随给药浓度增加而增加;基因组DNA琼脂糖凝胶电泳检测到明显的凋亡梯状条带。结论 β-咔啉类生物碱能诱导人胃癌SGC-7901细胞发生凋亡,抑制细胞增殖。     

人参皂甙Rg3对Lewis肺癌细胞体外增殖及荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的探讨人参皂甙Rg3对Lewis肺癌细胞体外增殖及荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法将48只C57BL/6荷瘤小鼠随机分为Rg3高剂量组、Rg3低剂量组、DDP组和生理盐水组,每组12只,另选择12只正常小鼠每天1次灌注0.4mL生理盐水作为对照组。采用CCK-8法检测Lewis细胞增殖率,流式细胞仪测定肿瘤细胞凋亡情况,并比较各组小鼠自然杀伤细胞（NK）、淋巴因子激活杀伤细胞（LAK）、细胞毒性淋巴细胞（CTL）及血清肿瘤坏死因子（TNF）的活性。结果 15μg/mL与20μg/mL人参皂甙Rg3的抑制增殖作用显著强于10μg/mL,但15μg/mL与20μg/mL抑制增殖作用比较,差异无统计学意义;人参皂甙Rg3诱导Lewis肺癌细胞凋亡的作用随浓度的增加而增强,但当达到一定浓度（15μg/mL）后逐渐呈饱和状态。人参皂甙Rg3高、低剂量组NK、LAK、CTL活性和血清TNF水平均显著高于生理盐水组和DDP组,但低于对照组。结论人参皂甙Rg3可明显抑制Lewis增殖,诱导其凋亡,还可增强荷瘤小鼠的免疫功能。     

艾烟溶液干预人肺腺癌细胞活性氧和超氧化物歧化酶的活性

背景:艾灸生成物的安全性研究是近年来灸法领域的关注热点,探讨艾烟成分对人体器官、组织、细胞的生物学效应是研究艾灸安全性的重要方向。研究表明艾烟溶液可引起肺泡Ⅱ型上皮细胞A549凋亡,但具体机制尚不清楚。目的:观察艾烟采集物对肺泡Ⅱ型上皮细胞A549生长抑制率、细胞内活性氧、超氧化物歧化酶的影响,探讨艾烟采集物对A549的氧化损伤机制。方法:采用便携式空气采样器采集艾条燃烧产生的烟气颗粒物,加入DMEM培养基分别配制质量浓度0.5,0.4,0.3,0.2,0.1,0.05,0.025,0.01 g/L的艾烟溶液干预A549细胞。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞生长抑制率,2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐法观察细胞内活性氧信号强度,分光光度法测量并计算细胞超氧化物歧化酶活性。结果与结论:不同质量浓度艾烟溶液干预A549细胞4,6,8 h结果均显示,0.4,0.5 g/L艾烟溶液对A549细胞的生长抑制率高于0.01,0.025 g/L组(P<0.05)。质量浓度0.05,0.1 g/L艾烟溶液可降低肺A549细胞内活性氧的含量,但差异无显著性意义(P>0.05);高质量浓度0.4 g/L艾烟溶液可增加肺A549细胞内活性氧水平(P<0.01),降低超氧化物歧化酶活性(P<0.01)。结果证实,艾烟对A549细胞具有生物学活性,对细胞的过氧化作用可能是高浓度艾烟溶液抑制A549细胞生长的重要机制。     

高纯度CD3~-CD56~+CD16~+NK细胞体外扩增技术的研究

本研究探索高纯度CD3-CD56+CD16+NK细胞体外扩增技术。应用免疫磁珠分选法(MACS)分离出高纯度的CD3-CD56+CD16+NK细胞,置于含10%人AB血清的造血干细胞培养基(SCGM)中,加入细胞因子IL-2、IL-15、SCF组成不同培养体系进行体外扩增。采用细胞计数法、流式细胞术免疫表型分析和CCK-8试剂盒检测对K562细胞的杀伤率等方法比较不同培养体系对NK细胞增殖前后的数量、纯度及杀伤活性的影响;并采取相同方法对IL-2的浓度与NK细胞增殖效率及杀伤活性之间的关系进行探讨。结果发现,经免疫磁珠分选法所得的高纯度CD3-CD56+CD16+NK细胞扩增18天后,IL-2/IL-15/SCF组扩增倍数显著高于其他组(p0.05);含细胞因子组的NK细胞对K562细胞的杀伤活性显著提高,尤其是IL-2/IL-15组和IL-2/IL-15/SCF组在效靶比10∶1时杀伤活性均高达90%以上。低、中、高浓度IL-2组扩增倍数之间比较差异无显著性(p0.05),而在对K562细胞杀伤率的比较上,高浓度组明显高于低、中浓度组(p0.05)。结论:在10%人AB血清的SCGM中加入IL-2/SCF/IL-15细胞因子组合,可使经MACS纯化的NK细胞在体外高效地活化及增殖;本培养体系中IL-2浓度较低(1 000U/ml)时,NK细胞的扩增效率及对K562细胞的杀伤率与IL-2的浓度高低无相关性;而高浓度的IL-2(≥1 000U/ml)可进一步激活纯化后NK细胞的体外杀伤活性。     

不同质量浓度肉苁蓉总苷诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞样细胞的定向分化

背景:肉苁蓉及其所含的化学成分有神经保护作用,并能促进神经功能的恢复。目的:分析肉苁蓉总苷体外诱导骨髓间充质干细胞分化为神经细胞样细胞的最佳剂量。方法:分离培养Wistar大鼠骨髓间充质干细胞,并利用β-巯基乙醇及不同质量浓度肉苁蓉总苷诱导骨髓间充质干细胞,分为空白对照组、β-巯基乙醇对照组、肉苁蓉总苷100,200,300μg/L组进行观察。结果与结论:诱导7d后,与空白对照组比较,其他各组活细胞数明显增高(P<0.05);诱导第3天,与空白对照组比较,内苁蓉总苷各剂量组细胞Nestin、NSE阳性表达率明显增高(P<0.05)。100,200μg/L质量浓度肉苁蓉总苷可有效促进骨髓间充质干细胞增殖,并能够明显促进其向神经细胞样细胞分化,300μg/L质量浓度可以促进骨髓间充质干细胞增殖,但效果不及100,200μg/L组(P<0.05)。     

表阿霉素对K562细胞的杀伤作用的研究

【目的】探讨肿瘤化疗药物表阿霉素(E-ADM)对K562细胞杀伤作用的某些规律。【方法】采用流式细胞术-PI染色检测法对经不同浓度、不同时间E-ADM作用的K562细胞的磺化丙啶阳性(PI )细胞百分率和PI 细胞平均荧光强度(MFI)进行了检测和分析。【结果】K562细胞在不同浓度E-AEM作用后,无论是24h还是72h组,PI 细胞百分率和PI 细胞MFI,除0.01μg/mL组与对照组无明显差异外,其余各组均与对照组有显著性差异(P<0.01);并随E-ADM浓度增加而逐步升高。其中24h组,随E-ADM浓度增加PI 细胞百分率增高曲线呈‘S’型分布。PI 细胞百分率在E-ADM浓度为0.1、1.0和10.0μg/mL时,24h组均大于72h组(P<0.01);而PI 细胞MFI,24h各组均大于72h各组(P<0.01)。【结论】①E-AEM对K562细胞有明显的杀伤作用,杀伤细胞的浓度效应呈"S"形曲线分布;②E-ADM对K562细胞的杀伤效果,24h优于72h;③E-ADM杀伤K562细胞的最佳浓度为0.10μg/mL。该结果为E-ADM的临床应用提供了有价值的参考信息。     

β-榄香烯联合热疗和顺铂对人非小细胞肺癌A549细胞HSP70及耐药基因的影响

目的探讨β-榄香烯联合顺铂和热疗对A549细胞中HSP70、MDR1、Bax/Bcl-2基因表达的影响。方法 15μg/ml和60μg/ml榄香烯分别联合热疗和顺铂处理细胞后,RT-PCR及WesternBlot法检测HSP70-1、MDR1基因mRNA转录和蛋白表达;RT-PCR检测Bax/Bcl-2基因mRNA转录水平。结果各实验组HSP70-1基因mRNA转录水平差异无统计学意义,而各实验组HSP70蛋白表达水平除了37℃下顺铂4μg/ml组、榄香烯15μg/ml、顺铂4μg/ml联合60μg/ml榄香烯组外其余各组均显著升高,差异有统计学意义(t分别=7.48～55.76,P均<0.05);37℃下各实验组MDR1基因mRNA转录多数降低,顺铂4μ/ml联合榄香烯15μg/ml与37℃对照组相比,差异有统计学意义(t=93.38,P<0.05),42℃下顺铂4μg/ml联合15μg/ml榄香烯组与42℃对照组比较,差异具有统计学意义(t=7.99,P<0.05)。各实验组MDR1蛋白表达均较低,与对照组比较,差异无统计学意义;部分实验组Bcl-2基因mRNA水平降低,与对照组比较,差异具有统计学意义(t分别=4.41、3.97、5.11、3.43、4.88、4.52,P均<0.05),而Bax基因mRNA水平未见明显变化。结论 37℃下高浓度榄香烯联合顺铂可能是通过抑制MDR1、Bcl-2等耐药相关基因协同杀伤细胞,而42℃下低浓度榄香烯和顺铂主要是通过抑制Bcl-2基因活性起到协同杀伤效应。     

IL-12及IL-12P40对NK抗肿瘤功能的免疫调节

目的　通过对正常人及肿瘤患者血清中IL 12以及IL 12P4 0含量的检测 ,观察其分子对NK细胞抗肿瘤细胞细胞毒效应的影响 ,探讨IL 12、IL 12P4 0分子在NK细胞抗肿瘤功能上的免疫调节作用。方法　ELISA酶联免疫法检测IL 12、IL 12P4 0分泌水平以及MTT释放法检测NK细胞毒活性。结果　①肿瘤患者外周血PBMC中CD3 、CD5 6 细胞阳性率低于对照组 (P <0 0 5 )。②肿瘤患者NK细胞对NK敏感细胞K5 6 2以及NK不敏感细胞Raji和Ddaudi的杀伤活性均低于正常对照组 (P <0 0 5 )。③正常人外周血NK细胞经含肿瘤患者血清培养后 ,NK细胞杀伤活性明显下降 (P <0 0 5 )。④在肿瘤患者血清中 ,IL 12分泌水平为 14 3 31± 0 93pg ml,高于对照组 84 97± 3 7pg ml(P <0 0 5 ) ;IL 12P4 0含量为 2 2 4 90± 0 7pg ml,高于对照组 32 5 6± 0 7pg ml(P <0 0 5 )。⑤正常人NK细胞经不同浓度 ( 1μg ml、5 μg ml以及 10 μg ml)IL 12诱导后 ,在 5 μg ml、10 μg ml浓度NK细胞杀伤率均高于对照组 ;在肿瘤患者中 ,仅高剂量( 10g ml)IL 12组的杀伤率高于对照组。⑥这种诱导增高的NK细胞杀伤率可被外源性IL 12P4 0的加入而下调。结论　肿瘤患者血清中IL 12P4 0含量的增高可能与肿瘤密切相关的NK细胞功能下降有关。     

重组改构TNF-α与顺铂、吉西他滨联合对H1299细胞系杀伤作用

目的观察重组改构肿瘤坏死因子(TNF-α)在体外和顺铂、吉西他滨联合对人肺腺癌H1299细胞系杀伤作用。方法MTT法检测不同浓度TNF-α、顺铂、吉西他滨单药对H1299细胞的抑制率,一定浓度的TNF-α与不同浓度顺铂或吉西他滨联合时对H1299细胞的抑制率,有或无TNF-α作用下H1299细胞的平板克隆形成率和细胞生长曲线,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。结果在不同浓度TNF-α作用下,H1299细胞抑制率均为负值,与药物浓度无明显相关性;TNF-α对H1299细胞的细胞生长曲线和克隆形成率均无明显影响;TNF-α与顺铂联合时在顺铂浓度为10μg/m l时H1299细胞抑制率,明显高于单纯顺铂的作用(P<0.05);TNF-α与吉西他滨联合时在吉西他滨浓度为20、40μg/m l时对H1299细胞抑制率明显高于单纯吉西他滨的作用(P<0.05)。流式细胞分析各组细胞凋亡率与MTT结果一致。结论在体外重组改构肿瘤坏死因子与顺铂或吉西他滨联合应用明显增强后者对H1299细胞的杀伤作用,具有化疗增敏的作用。     

三氧化二砷（As2O3）诱导乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的实验研究

目的 观察不同浓度的三氧化二砷（As2O3）作用不同时间段后对乳腺癌细胞MCF-7的诱导凋亡作用和对β3GnT2 及β3GnT8表达的影响,并初步探讨其可能的作用机制.方法 不同浓度As2O3作用于乳腺癌细胞后,观察其对乳腺癌细胞生长状态的影响;用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法观察其对MCF-7细胞凋亡的影响;同时采用RT-PCR 和Western Blot 检测相关基因mRNA及蛋白的表达水平变化.结果 不同浓度的As2O3 均可抑制乳腺癌细胞株MCF-7生长,其抑制作用随剂量增大而加强,呈时间剂量依赖性.RT-PCR 结果显示：β3GnT2、β3GnT8在各个浓度As2O3剂量组作用下,与空白组比较,均有不同程度的变化.1μg/mL和2μg/mL浓度组、4μg/mL和40μg/mL浓度组在相同时间段下分别比较,均有统计学差异（P ＜0.05）.Western Blot 检测相关蛋白结果与mRNA表达水平基本一致.β3GnT2蛋白表达中,4μg/mL（4h）组、40μg/mL（4h） 组分别与4μg/mL（48h）浓度组比较,均有明显差异（P＜0.05）;而在β3GnT8蛋白表达中,40μg/mL（4h）、4μg/mL（48h） 浓度组分别与空白组比较,有显著性差异（P＜0.05）.结论 As2O3对MCF-7细胞有显著的体外生长抑制作用,其抑制作用呈剂量依赖性;As2O3在体外能诱导MCF-7细胞凋亡,凋亡效应与剂量呈正相关;As2O3还能下调β3GnT2和β3GnT8基因的表达.     

Vinorelbine对肺癌细胞增殖、凋亡以及细胞周期的影响

目的探究长春瑞滨(Vinorelbine)对人肺癌A549细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响以及可能作用机制。方法采用前瞻性研究通过不同浓度长春瑞滨(5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml)作用于肺癌A549细胞。四甲基噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖抑制率,膜联蛋白V-FITC(Annexin V-FITC)/碘化丙啶(PI)双染法分析细胞的凋亡率,流式细胞术检测细胞周期变化,Caspase-3活性检测试剂盒观察含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性,蛋白质印迹法(Western Blot)检测细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白的水平。结果与对照组相比,不同浓度长春瑞滨显著增加细胞的增殖抑制率(P0.05),且其抑制作用随着浓度的增加而增强;与对照组相比,长春瑞滨显著升高细胞的凋亡率(P0.05),上调细胞周期G2/M期和Casapse-3活性(P0.05),明显增加Bax/Bcl-2(P0.05)。结论长春瑞滨抑制肺癌细胞增殖,诱导其凋亡,阻碍细胞周期G2/M期,可能通过Caspase-3信号通路发挥作用。