重组人促红细胞生成素对大鼠脊髓损伤后肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的 :探讨重组人促红细胞生成素 (rHuEPO)对大鼠脊髓损伤后肿瘤坏死因子 α (TNF α)表达的影响。方法 :SD大鼠 10 2只 ,随机分为 4组 :假手术组 ;脊髓损伤组 ;脊髓损伤 生理盐水 (NS)治疗组 ;脊髓损伤 rHuEPO治疗组。采用改良Allen’s脊髓损伤打击模型 ,以逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)法测定伤段脊髓组织TNF αmRNA的表达情况。结果 :TNF αmRNA在无损伤脊髓中即见有表达 ,脊髓损伤后 1h表达明显上调并达高峰 ;高表达持续至损伤后 2 4h ;rHuEPO治疗组脊髓伤后 6、 12、 2 4hTNF αmRNA表达明显低于NS治疗组。结论 :rHuEPO能明显抑制大鼠脊髓损伤后TNF αmRNA的表达。     

重组人促红细胞生成素对大鼠脊髓损伤后白细胞介素-10表达的影响及意义

目的　探讨重组人促红细胞生成素 (rHuEPO)对大鼠脊髓损伤后白细胞介素 10 (IL 10 )表达的影响。方法　SD大鼠 10 2只 ,随机分为 4组 ,采用改良Allen脊髓损伤打击模型 ,以逆转录 -聚合酶链反应(RT PCR)法测定伤段脊髓组织IL 10mRNA的表达情况。结果　正常脊髓组织内存在IL 10mRNA的表达 ;脊髓损伤后IL 10mRNA表达逐渐增强 ,在伤后 16 8h达高峰 (本实验的最后观察点 ) ;脊髓损伤后 30min注射rHuEPO能明显上调损伤脊髓组织内IL 10mRNA的表达。结论　脊髓损伤后IL 10mRNA表达逐渐增强 ;rHuEPO通过上调IL 10mRNA的表达 ,对脊髓继发性损伤可能有保护作用。     

大鼠脊髓损伤后单核细胞趋化蛋白-1、巨噬细胞炎症蛋白-2α基因表达的变化

目的：探讨大鼠脊髓损伤后单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、巨噬细胞炎症蛋白-1α(MIP-1α)mRNA表达的变化规律。方法：SD大鼠42只，随机分为7组，采用改良Allen’s脊髓损伤打击模型，以逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)法测定伤段脊髓MCP-1、MIP-1α mRNA表达情况。结果：正常脊髓组织内存在MCP-1、MIP-1α mRNA的表达，脊髓损伤后MCP-1、MIP-1αmRNA表达逐渐增强，MCF-1在伤后24h达到高峰，MIP-1α伤后6h达到高峰。结论：MCP—1、MIP-1α存在于正常的脊髓组织内，脊髓损伤后MCP-1、MIP-1α表达迅速增强，提示参与了继发性脊髓损伤过程，并可能是损伤因素。     

大鼠脊髓损伤后诱导型—氧化氮合酶基因表达变化的实验研究

目的：探讨大鼠脊髓损伤后诱导型-氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达的变化规律。方法：SD大鼠48只，随机分为8组，采用Allen’s脊髓损伤打击模型，以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定伤段脊髓组织iNOS mRNA表达情况。结果：iNOS mRNA在脊髓损伤前即有表达，损伤后早期无明显变化，伤后72h开始升高，l周时达到高峰。结论：脊髓继发性损害的持续时间可能大于传统观念，针对继发性损害所作的治疗应持续至脊髓损伤后较长的一段时间。     

大鼠脊髓损伤后诱导型一氧化氮合酶基因表达变化的实验研究

目的探讨大鼠脊髓损伤后诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达的变化规律.方法SD大鼠48只,随机分为8组,采用Allen's脊髓损伤打击模型,以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定伤段脊髓组织iNOS mRNA表达情况.结果iNOS mRNA在脊髓损伤前即有表达,损伤后早期无明显变化,伤后72h开始升高,1周时达到高峰.结论脊髓继发性损害的持续时间可能大于传统观念,针对继发性损害所作的治疗应持续至脊髓损伤后较长的一段时间.     

大鼠脊髓损伤后白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α基因表达的变化

目的 探讨大鼠脊髓损伤后白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达的变化规律。方法 SD大鼠42只，随机分为7组，采用改良Allen's脊髓损伤打击模型，以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定伤段脊髓组织IL-1β、TNF-α mRNA的表达情况。结果 正常脊髓组织内存在IL-1β、TN-αmRNA的表达，脊髓损伤后IL-1β、TNF-αmRNA表达迅速增强，在伤后1h达到高峰。结论 IL-1β、TNF-α存在于正常的脊髓组织内，脊髓损伤后IL-1β、TNF-α表达迅速增强，提示协同参与了继发性脊髓损伤过程，并可能是损伤性因素。     

大鼠脊髓损伤后单核细胞趋化蛋白-1、巨噬细胞炎症蛋白-2α基因表达的变化

目的:探讨大鼠脊髓损伤后单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、巨噬细胞炎症蛋白-1α(MIP-1α)mRNA表达的变化规律.方法:SD大鼠42只,随机分为7组,采用改良Allens脊髓损伤打击模型,以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定伤段脊髓MCP-1、MIP-1α mRNA表达情况.结果:正常脊髓组织内存在MCP-1、MIP-1α mRNA的表达,脊髓损伤后MCP-1、MIP-1α mRNA表达逐渐增强,MCP-1在伤后24h达到高峰,MIP-1α伤后6h达到高峰.结论:MCP-1、MIP-1α存在于正常的脊髓组织内,脊髓损伤后MCP-1、MIP-1α表达迅速增强,提示参与了继发性脊髓损伤过程,并可能是损伤因素.     

大鼠脊髓损伤后白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α基因表达的变化

目的 探讨大鼠脊髓损伤后白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达的变化规律。方法SD大鼠42只,随机分为7组,采用改良Allen's脊髓损伤打击模型,以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定伤段脊髓组织IL-1β、TNF-αmRNA的表达情况。结果 正常脊髓组织内存在IL-1β、TNF-αmRNA的表达,脊髓损伤后IL-1β、TNF-αmRNA表达迅速增强,在伤后1h达到高峰。结论 IL-1β、TNF-α存在于正常的脊髓组织内,脊髓损伤后IL-1β、TNF-α表达迅速增强,提示协同参与了继发性脊髓损伤过程,并可能是损伤性因素。     

大鼠脊髓损伤后诱导型-氧化氮合酶基因表达变化的实验研究

目的 :探讨大鼠脊髓损伤后诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)mRNA表达的变化规律。方法 :SD大鼠 48只 ,随机分为 8组 ,采用Allen’s脊髓损伤打击模型 ,以逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)法测定伤段脊髓组织iNOSmRNA表达情况。结果 :iNOSmRNA在脊髓损伤前即有表达 ,损伤后早期无明显变化 ,伤后 72h开始升高 ,1周时达到高峰。结论 :脊髓继发性损害的持续时间可能大于传统观念 ,针对继发性损害所作的治疗应持续至脊髓损伤后较长的一段时间     

七氟醚预处理对大鼠内毒素性急性肺损伤的影响

目的 探讨七氟醚预处理对大鼠内毒素性急性肺损伤的影响.方法 健康雄性SD大鼠24只,体重220～250 g,随机分为4组(n=6):对照组(c组)、内毒素组(LPS组)、七氟醚组(Sev组)和七氟醚预处理组(SP组).C组和LPS组机械通气30 min后分别静脉注射生理盐水和脂多糖(LPS)5 mg/kg;Sev组和SP组吸入七氟醚(呼气末浓度2.4%)30 min,洗脱5 min,然后分别静脉注射生理盐水和LPS 5 mg/kg.于给予LPS或生理盐水后6 h时,心脏放血处死大鼠,取肺组织,计算湿重/干重(W/D)比;采用弥漫性肺泡损伤(DAD)评分评价肺组织损伤程度;测定肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性、细胞因子诱导中性粒细胞化学趋化因子-1(CINC-1)含量、CINC-1和CINC-1 mRNA的表达水平.结果 与C组比较,LPS组和SP组肺组织W/D比、DAD评分、MPO活性和CINC-1含量升高,CINC-1和CINC-1 mRNA的表达上调(P<0.01),Sev组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与LPS组比较,SP组肺组织W/D比、DAD评分、MPO活性和CINC-1含量降低,CINC-1和CINC-1 mRNA的表达下调(P<0.01).结论 七氟醚预处理可减轻大鼠内毒素性急性肺损伤,可能与其抑制肺组织炎性反应有关.     

大鼠脊髓损伤后neuregulin基因产物胶质细胞生长因子的表达变化

目的探讨neuregulin基因产物胶质细胞生长因子（glial growth factor,GGF）在大鼠胚胎脊髓及正常成年脊髓内的表达及其在大鼠脊髓损伤后的表达变化及意义。方法采用改良Allen’S脊髓损伤打击模型,用逆转录一聚合酶链式反廊（RT—PCR）法检测胚胎大鼠脊髓内、正常成年大鼠脊髓内以及脊髓损伤后不同时间点伤段脊髓组织中GGFmRNA的表达。结果GGF在成年大鼠正常脊髓内有低水平表达,在胚胎脊髓中高水平表达。大鼠SCI后GGFmRNA的表达持续降低,在SCI后5d达到最低峰,之后GGFmRNA的表达可逐渐恢复。结论GGF在胚胎脊髓中高度表达,提示GGF在脊髓生长发育中起重要作用。大鼠脊髓损伤后GGF表达的降低可能与SCI后少突胶质细胞大量死亡或凋亡有关,与SCI后轴突无法再生、脱髓鞘的髓鞘再生困难有关。     

大鼠脊髓损伤后一氧化氮合酶基因表达的变化

目的　探讨大鼠脊髓损伤后3种类型一氧化氮合酶（NOS）mRNA表达的变化规律。方法　成年SD大鼠36只,随机分为种类6组,每组6只大鼠。建立大鼠脊髓压迫伤模型,以逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法测定伤段脊髓组织神经型（nNOS）、诱导型（iNOS）及内皮型（eNOS）一氧化氮合酶的mRNA表达情况。结果　脊髓压迫伤后nNOSmRNA及NOSRNA表达增强,伤后6h达到高峰0.633±0.012、1.236±0.207;iNOSmRNA表达亦增高,但在伤后24h才达到高峰1.043±0.049。结论　脊髓损伤后NOSmRNA的表达增强,但不同类型的NOSmRNA变化规律不同,增强或抑制不同NOSmRNA的表达可能减轻脊髓继发性损伤。     

低剂量他克莫司治疗大鼠急性脊髓损伤的实验研究

目的：探讨低剂量他克莫司（tacrolimus，又名FK506）对大鼠急性脊髓损伤是否具有神经保护作用。方法：雄性Wistar大鼠72只，随机分为假手术组（12只）、损伤组（30只）和FK506治疗组（30只）。采用Allen’s打击法致伤大鼠T10脊髓，假手术组仅做椎板切除术。FK506治疗组在脊髓损伤后5min一次性经尾静脉注射FK5060．3mg／kg，其余两组以相同方法给予等量生理盐水。致伤后30min、6h、24h、48h、72h取伤段脊髓组织行病理观察及原位末端标记法（TUNEL）检测神经细胞凋亡，伤后1、3、7、14、21d行脊髓功能BBB评分和斜板实验。结果：伤后3、7、14、21d，FK506治疗组斜板实验和BBB评分明显优于损伤组，两组间比较差异有显著性（P〈0．05）；伤后各时间点FK506治疗组脊髓损伤区出血坏死较损伤组轻；伤后6、24、48、72h神经细胞凋亡FK506治疗组较损伤组明显减少，两组间比较差异有显著性（P〈0．05）。结论：在大鼠急性脊髓损伤后早期应用低剂量他克莫司（0．3mg/kg）治疗对神经具有保护作用，可减少神经细胞凋亡，减轻脊髓继发性损伤，促进脊髓功能恢复。     

神经生长导向因子Slit2在成年大鼠急性脊髓损伤后的表达

目的观察Slit2在大鼠急性脊髓损伤后不同时点表达量的变化和分布，探讨轴突再生导向机制。方法成年SD大鼠采用Allen’s法制作脊髓损伤（SCI）模型，分别于损伤后第2、4、7、14天取材，半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）分析Sht2 mRNA表达水平变化，免疫组织化学法观察Slit蛋白在损伤脊髓区的分布情况。结果RT—PCR提示脊髓损伤后Slit2即开始出现转录上调，表达量持续增高并于第7天达到顶峰，之后逐步下降；免疫组织化学提示Slit2阳性信号先后出现在急性SCI区灰质胶质细胞及神经元胞质中，以前、后角及中央管周围较为聚集。结论大鼠SCI后有Slit2表达上调出现并在损伤脊髓灰质广泛分布，可能是轴索再生过程中生长锥导向性生长的关键调节者。     

急性脊髓损伤后促红细胞生成素受体的表达及其意义

目的探讨急性脊髓损伤后促红细胞生成素(EPO)及其受体(EPO-R)在脊髓内的表达。方法Wistar大鼠69只,随机分为三组：正常对照组(5只,不手术,作为后两组的对照)、假手术组(仅行椎板切除术)和脊髓损伤组。根据术后时间点不同后两组又分为1h、6h、12h、24h、3d、7d、14d和28d八个亚组(每组4只)。采用RT-PCR、Western blot免疫印迹法和免疫组织化学染色法检测EPO及EPO-R的表达。结果正常对照组、假手术组和脊髓损伤组在各时相点均未发现有EPO表达。正常对照组、假手术组未发现EPO-R的表达,脊髓损伤组在伤后1h未见EPO-R mRNA和蛋白的表达,6h开始有表达,12h有明显的表达,至24h达到高峰,3d和7d时仍维持在高表达水平,未见减弱,14d开始下降,至28d时仍有EPO-R蛋白的表达。免疫组化显示EPO-R阳性细胞主要位于神经元、少突胶质细胞、血管内皮细胞和脊髓中央管内室管膜细胞。结论大鼠急性脊髓损伤后脊髓内大量表达EPO-R,这是外源性EPO与EPO-R结合产生神经保护作用的分子基础。     

大鼠胚胎脊髓移植对损伤脊髓GAP-43 mRNA表达的影响

目的观察大鼠胚胎脊髓移植对损伤脊髓 GAP－ 43 mRNA表达和大鼠后肢功能恢复的影响。方法成年 Wistar大鼠 66只,随机被分为脊髓半切洞损伤应用胚胎脊髓移植组 (脊髓移植组, 30只 )、单纯脊髓半切洞损伤明胶海绵填充组 (单纯损伤组, 30只 )、正常对照组 (6只 )。术后第 1、 3、 7、 14、 28 d,对大鼠进行 Tarlov评分和斜板试验检查后肢功能。应用原位杂交的方法观察 GAP－ 43 mRNA的表达,记录阳性细胞数,采用计算机图像分析技术,进行定量分析。结果脊髓损伤后第 1 d,在脊髓移植组和单纯损伤组的损伤脊髓灰质中都可见到 GAP－ 43 mRNA的表达。于损伤后迅速增加,第 7 d时达到高峰。脊髓移植组 GAP－ 43 mRNA蛋白表达为 39.24± 6.83,约是单纯损伤组 (21.48± 7.83)的 2倍 (P< 0.05)。胚胎脊髓移植后可使损伤的脊髓中 GAP－ 43 mRNA持续高表达至术后第 28 d,而单纯损伤组仅持续到术后第 14 d。增加的 GAP－ 43 mRNA阳性细胞数与神经功能的改善平行。结论胚胎脊髓移植后可使损伤大鼠脊髓高表达 GAP－ 43 mRNA,并促进大鼠功能的恢复。     

Effects of nerve growth factor on neuronal nitric oxide production after spinal cord injury in rats

OBJECTIVE: To explore the protective effects of nerve growth factor (NGF) on injured spinal cord. METHODS: The spinal cord injury (SCI) model of Wistar rats was established by a 10 gx2.5 cm impact force on the T(8) spinal cord. NGF (60 microg/20 microl) was given to the rats of the treatment group immediately and at 2, 4, 8, 12, 24 hours after SCI. The level of neuronal constitutive nitric oxide synthase (ncNOS) and the expression of ncNOS mRNA in the spinal cord were detected by the immunohistochemistry assay and in situ hybridization method. RESULTS: Abnormal expression of ncNOS was detected in the spinal ventral horn motorneuron in injured rats. The levels of ncNOS protein in the NGF group were significantly lower than those in the normal saline group (P<0.05 ). The ncNOS mRNA expression was found in the spinal ventral horn motorneuron in injured rats and the expression in the NGF group was significantly decreased compared with that in the normal saline group (P<0.01). CONCLUSIONS: NGF can protect the injured tissue of the spinal cord by prohibiting abnormal expression of nitric oxide synthase and the neurotoxicity of nitric oxide.     

甲基强的松龙对大鼠脊髓损伤后GFAP、neurocan和phosphacan表达的影响

目的观察甲基强的松龙(MP)对大鼠脊髓损伤(SCI)后GFAP、neurocan和phosphacan表达的作用.方法36只成年Wistar大鼠随机分为3组,其中正常对照组4只,损伤组和治疗组各16只.正常对照组大鼠不损伤脊髓,治疗组大鼠采用局部压迫法损伤T9脊髓,损伤后立即尾静脉推注MP 30mg/kg,随后24h内每间隔6h推注MP(30mg/kg)一次,共给药5次.损伤组以同样方法损伤脊髓并推注等量生理盐水.分别于伤后3d、7d及14d切取损伤处脊髓标本,行RT-PCR及免疫组化检测GFAP、neurocan和phosphacan mRNA相对含量和蛋白表达.结果大鼠SCI后GFAP、neurocan和phosphacan mRNA相对含量增加.伤后3d、7d、14d,MP治疗组比损伤组GFAP mRNA含量均明显减少(P＜0.01);伤后3d、7d治疗组neurocan和phosphacan mRNA含量减少(P＜0.01);至伤后14d时含量改变不明显(P＞0.05).结论SCI后MP能抑制大鼠GFAP、neurocan和phosphacan表达.