重组人p53腺病毒联合顺铂对肺腺癌A549细胞基因表达的影响

目的 研究重组人p53腺病毒(rAd-p53)联合顺铂对肺腺癌A549细胞基因表达的影响,探讨rAd-p53增强顺铂对A549细胞抑制作用的机制.方法 通过基因芯片检测技术,比较rAd-p53联合顺铂与单独顺铂处理后的肺腺癌A549细胞肿瘤相关基因表达的差异,采用SAM软件对结果进行分析.结果 rAd-p53联合顺铂与单独顺铂处理的A549细胞比较,15个基因表达显著上调,28个基因表达显著下调.结论 rAd-p53增强顺铂对A549细胞的抑制作用与导入外源性p53基因后,p53基因表达上调并引起调控细胞周期、细胞增殖、细胞凋亡的一系列基因的表达变化.     

扶正增效方对肺腺癌细胞放射增敏的基因表达谱分析

目的：采用基因芯片研究扶正增效方对肺腺癌细胞放射增敏作用的具体靶点。方法：将10只裸鼠皮下接种PAa细胞，并随机分为单纯放射组（Ⅰ组，5只）、放射加增效方组（Ⅱ组，5只）。自接种之日起，Ⅱ组给予扶正增效方汤剂灌胃，Ⅰ组灌服等容积生理盐水。瘤体乍长至直径约1cm时，给予瘤体单次β电子线照射。照射后23h处死裸鼠，快速取瘤体，提取组织总RNA，分离mRNA。采用Affymetrix Human Genome U133 2．0Array基因芯片分析两组之间基因表达谱的差异。结果：两组的基因表达谱显示，差异基因共有857条．上调349条．下调508条，其中39条在GeneBank中登录；按照功能分为细胞周期、凋产、信号转导、代谢等类。结论：扶正增效方对肺腺癌细胞的放射增敏作用是复杂的，涉及多个基因表达的变化．还有大量未知靶点有待于进一步研究。     

羟基喜树碱联合足叶乙甙对肺腺癌细胞的放射增敏作用

目的：探讨拓扑异构酶（TOP0）Ⅰ抑制剂－羟基喜树碱（HCPT）与TOPOⅡ抑制剂足叶乙甙（VP-16）对肺腺癌细胞毒作用及放疗增敏作用。方法：MTT法检测HCPT、VP-16及二药在间隔不同时间应用对肺腺癌GLC-82的细胞毒作用及放疗增敏作用。结果：HCPT、VP-16单药及联合用药各实验组均对GLC-82细胞生长产生抑制作用，以HCPT＋VP-16（12h后）组对癌细胞的抑制作用最强（38．31％）。放疗后应用HCPT、VP-16可降低癌细胞存活率，其中以放疗＋HCPT＋VP-16组存活率最低。结论：HCPT与VP-16联合应用时抗癌效应呈时问依赖性，以间隔12h用药最佳。HCPT联合VP-16对肺腺癌放疗起增敏作用。     

腺病毒介导的野生型p53基因对人肺腺癌细胞放疗敏感性的影响

目的:研究腺病毒介导的野生型p53基因(Ad-p53)对人肺腺癌细胞生长及放疗敏感性的影响。方法:将重组的含野生型p53基因的腺病毒导入A549细胞,通过免疫细胞化学方法检测p53基因的表达。A549细胞分为4组:对照组、转染组、放疗组、转染联合放疗组。用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)和流式细胞仪检测p53基因以及联合放射治疗(2,4,6 Gy)对A549细胞生长抑制及凋亡的影响。结果:通过免疫细胞化学方法证实了p53基因在A549细胞中的表达。MTT法检测发现p53基因对A549细胞的生长抑制率为(50.60±5.69)%。当放射剂量为2,4,6 Gy时,A549细胞的生长抑制率分别为(16.06±4.35)%、(16.39±1.67)%、(17.73±4.68)%。当p53基因与放疗(2,4,6 Gy)联合作用时,抑制率分别为(80.60±5.35)%,(89.30±1.67)%、(90.30±2.01)%(P<0.01)。p53基因转染所产生的A549细胞凋亡率为(10.38±1.68)%。放疗(2,4,6 Gy)引起的细胞凋亡率分别为(3.98±0.72)%、(4.84±0.60)%、(5.40±0.70)%。当p53基因与放疗(2,4,6 Gy)联合作用时,凋亡率分别为(17.80±1.30)%、(19.03±0.54)%、(21.34±2.51)%(P<0.01)。结论:野生型p53基因与放疗对人肺腺癌细胞生长有协同抑制作用,增加了人肺腺癌细胞对放射治疗的敏感性     

腺病毒介导野生型p53基因对人肺腺癌细胞的抑制效应

目的：p53基因突变是人类肿瘤中常见的遗传学改变。将野生型p53基因导入一些肿瘤细胞中被证明能抑制其细胞增殖，因此做为肺癌基因治疗主要目的基因而备受关注。本研究旨在观察野生型p53基因对人肺腺癌细胞和裸鼠移植瘤的抑制效应，并对其抑癌机制进行分析，为今后肺癌基因治疗的临床试验提供科学依据。方法：采用重组体腺病毒Ad-p53基因转染人肺腺癌细胞系GLC－82；以裸鼠皮下移植瘤治疗试验观察Ad-p53基因的抑瘤效应；用流式细胞计数，DNA片断化及TUNEL分析探讨Ad-p53基因的抑癌机制。结果：导入Ad-p53基因后人肺腺癌GLC－82细胞生长能力显著下降，克隆形成能力受到明显抑制；并显著抑制裸鼠皮下移植瘤的生长；肺癌细胞发生凋亡，并出现明显的G1期阻滞现象。结论：腺病毒介导野生型p53基因（Ad-p53)对人肺腺癌细胞和裸鼠皮下移植瘤均有明显抑制效应，主要通过诱导癌细胞凋亡和参与细胞周期调控实现，进而提示Ad-p53基因有可能在人肺癌基因治疗中发挥重要作用。     

羟基喜树碱联合足叶乙甙对肺腺癌放射增敏作用的研究

放化疗是恶性肿瘤治疗的重要措施，如何提高治疗疗效是近年来研究的热点。实验表明，拓朴异构酶（TOPO）Ⅰ与TOPOⅡ抑制剂联合使用的抗癌效果高于单药．但依赖于给药的先后顺序与给药间隔。同时给药有拮抗作用．序贯给药有协同作用。目前国外对TOPOⅠ与TOPOⅡ抑制剂联合用药时的给药顺序、时间间隔的报告不一．国内尚未见报道。     

重组人p53腺病毒增强肝癌放疗敏感性的实验研究

目的 观察重组人p53腺病毒(recombinant human adenovinm p53,rAd-p53)联合放疗对肝癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用.方法 人肝癌细胞SMMC-7721荷瘤裸鼠18只,应用随机数字表法选取2只,1只瘤内注射rAd-p53,另1只注射PBS,注射后48 h处死动物取瘤,Western blot方法检测肿瘤P53蛋白表达;其余16只分为4组:对照组、单独放疗(IR)组、重组人pS3腺病毒(rAd-p53)治疗组和重组人p53腺病毒+放疗(rAd-p53+IR)联合治疗组.实验治疗第16天处死动物,绘制肿瘤生长曲线;光镜下观察肿瘤治疗后组织形态学变化;免疫组化S-P法检测Ki-67,TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡.结果 rAd-p53成功感染了肝癌裸鼠移植瘤细胞,并增强肝癌细胞P53蛋白的表达;rAd-p53+IR联合治疗组、IR组和rAd-p53治疗组的肿瘤生长抑制率分别为81.49%、30.74%和33.67%,其中rAd-p53+IR联合治疗组的肿瘤抑制最强(P<0.01).光镜下观察各治疗组的肿瘤组织均出现坏死,其中rAd-p53+IR联合治疗组肿瘤坏死较多;rAd-p53+IR联合治疗组肿瘤细胞表达Ki-67明显低于对照组、IR组和rAd-p53治疗组(P<0.01),而肿瘤细胞凋亡显著增加(P<0.01).结论 rAd-p53+IR联合治疗较单独放疗能显著抑制肝癌的生长,rAd-p53能增强肝癌对放疗敏感性.     

不同放射敏感性肺腺癌细胞株中DNA-PKcs蛋白的表达情况比较

目的 通过检测DNA-PKcs在肺腺癌细胞中的表达情况,探讨其与放射敏感性的关系.方法 成克隆实验分别测定肺腺癌细胞株A549、H1299照射后的剂量.存活曲线,Western blotting及DNA-PK活性分析法检测两株细胞中DNA-Pkcs的含量与活性.分析放射敏感性与DNA-PKcs的关系.结果 成克隆实验结果显示:肺腺癌细胞H1299较A549放射更敏感,SF2分别为A549:0.7412,H1299:0.2473.Western-blot显示A549和H1299积分光密度比值分别为:3.29±0.44、0.50±0.17,A549中DNA-PKcs的表达更高(t=10.37,P<0.001).DNA-PKcs活性检测结果为A549:8.29±1.37.H1299:2.47±1.09(t=5.76,P=0.005).结论 放射敏感性不同的肺腺癌细胞株中DNA-Pkcs的表达不同.提示DNA-PKcs可能是影响肺腺癌细胞放射敏感性的重要因素.

Abstract：

Objective To investigate DNA-dependent protein kinase catalytic subunit (DNA-PKcs) content and activity in lung adenocarcinoma cell lines and its correlation with radiosensitivity. Methods The content and activity of DNA-PKcs were analyzed in two lung adenocarcinoma cell lines A549 and H1299 by Western blotting and the Signa TECT DNA-PK assay kit. The dose-survival relationship for two cell lines was analyzed using clonogenic formation assay. Results A549 was more radiosensitive than H1299. The survival fractions at 2 Gy (SF2) were 0.7412 in A549 cell line and 0.2473 in H1299 cell line. The content of DNA-PKcs was significantly higher in A549 cells than in H1299 cells (t=10.37, P<0.001). The integrated optical densities were 3.29±0.44 in A549 cells and 0.50±0.17 in H1299 cells. DNA-PKcs activities in A549 and H1299 cells were 8.29±1.37 and 2.47±1.09, respectively, showing a significant difference between them (t=5.76, P=0.005). Conclusion DNA-PKcs is an important factor to affect the radiosensitivity of lung adenocarcinoma cell lines.     

低温热疗对肺腺癌细胞放射敏感性的影响

目的：研究低温热疗(≤42℃)对肺腺癌细胞株SPC-A-1的放射增敏作用及其对生长周期的影响。方法：集落形成率实验观察低温热疗的放射增敏作用;流式细胞仪观察细胞生长周期的变化。结果：单纯放射时细胞的Do、Dq值分别为1．693、2．453Gy,放射合并41．5℃加热时Do、Dq值分别为1．390、1．426Gy,热增敏比为1．218。放射及热放射后细胞周期出现了再分布。未处理组流式细胞仪检测到S期细胞比例为14．81％,照射6Gy后48、72h分别为18．80％和31．91％;照射后立即41．5‘12加热1h,48、72h的s期细胞分别为5．89％和9．08％。结论：低温热疗对肺腺癌细胞系有放射增敏作用,低温热疗能去除放射引起的细胞S期阻滞,其机制可能与加热抑制了肿瘤细胞对放射所致亚致死损伤和潜在致死损伤的修复能力有关。     

p27kip1基因转染增强放射抗拒人食管癌细胞的放射敏感性

目的研究腺病毒介导的p27kip1基因转染对人放射抗拒食管癌细胞放射敏感性的影响。方法以重组腺病毒介导的p27kip1基因转染人放射抗拒食管癌细胞EC9706R,免疫细胞化学法检测p27kip1表达;流式细胞仪检测转染前后肿瘤细胞周期,克隆形成实验检测p27kip1基因转染前后两种EC9706R细胞的放射敏感性。结果腺病毒转染后放射抗拒食管癌EC9706R细胞p27kip1表达明显升高,细胞周期结果显示G0/G1期阻滞;转染p27kip1前后放射敏感性参数检测结果比较:转染前EC9706R细胞SF2=67.4%,Dq=1.66 Gy,转染后SF2=49.7%,Dq=1.03 Gy,放射增敏比SERSF2、SERDq分别为1.36,1.61,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 p27kip1基因转染能增强人放射抗拒食管癌细胞的放射敏感性。     

p53重组腺病毒载体的构建

目的　构建 p5 3重组腺病毒载体以研究 p5 3过度表达与腺病毒感染对细胞生长的影响 .方法　将 p5 3c DNA克隆到转移载体 p Ad CMV/ p5 3重组质粒 ,用该重组质粒及p JM1 7质粒共转染 2 93细胞获得重组腺病毒 ,PCR法筛选含p5 3c DNA的重组病毒 .结果　在挑选的 5个空斑中 ,有 4个含 p5 3c DNA阳性重组腺病毒 .p5 3重组腺病毒可感染 2 93细胞并在 2 93细胞内进行有效的复制 .结论　成功构建了 p5 3重组腺病毒 ,为进一步研究 p5 3重组腺病毒的功能提供了条件     

重组人p53腺病毒注射液治疗颈部肿瘤30例疗效观察

目的：观察重组人p53腺病毒注射液治疗颈部肿瘤的可行性。方法：鼻咽癌颈部肿瘤患者60例分为观察组与对照组,每组30例,两组患者均接受放疗,观察组给予重组人p53腺病毒注射液,对两组患者进行一定护理。结果：观察组显效率为70％,有效率为30％。对照组显效率为17％,有效率为63％,两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：通过重组人p53腺病毒注射液治疗颈部肿瘤,进行心理护理、健康教育等正确的护理措施,使患者积极主动配合治疗,保证了治疗计划顺利进行,提高了中晚期鼻咽癌患者的治疗疗效和生存率。     

重组p53基因腺病毒注射液胸腔灌注治疗恶性胸水的临床疗效观察

目的观察重组p53基因腺病毒（rAd-p53）注射液胸腔灌注治疗恶性胸水的临床疗效。方法45例恶性胸水患者均行胸腔穿刺彻底引流后通过胸腔闭式引流管灌注rAd—p53,用量为1×1012VP×2支,4周后根据胸水量的变化进行疗效评价。结果45例患者中完全缓解（CR）20例,部分缓解（PR）19例,稳定（SD）4例,进展（PD）2例,总有效率达86．7％（39／45）。达到CR的20例病人中,有16例病人胸水在3个月内没有再出现。各肿瘤病种之间没有差异。所有患者主要副反应为自限性发热,体温在37．5℃～39．1℃之间,12h～24h后均可自行恢复正常。结论rAd-p53注射液胸腔灌注治疗恶性胸水的有效率高、疗效确切、副作用可以耐受,值得临床进一步应用观察。     

人肺腺癌细胞系GLC-82中p21WAF1和p53基因的过表达

目的 探讨p21^WAF1和p53基因过表达对人肺腺癌细胞生长和细胞凋亡的影响。方法 用带有p21cDNA的真核表达载体pCEP和带有p53的腺病毒表达载体pAdCMV,分别通过基因转染和腺病毒感染,使其在人肺腺癌细胞系(GLC—82)中过表达;通过流式细胞仪、透射电镜和原位末端分析(TUNEL)观察细胞的生长和凋亡情况。结果 p21过表达的细胞系G1期细胞增加,细胞生长抑制,克隆形成率下降,电镜下未见特征性凋亡小体,原位细胞凋亡分析未见凋亡信号;p53腺病毒感染的肿瘤细胞增殖明显抑制并出现死亡,原值细胞凋亡检测到凋亡信号。结论 P21和p53基因的过表达能够抑制人肺腺癌细胞的生长,其中p53能够诱发细胞凋亡,因此这两种基因在肿瘤基因治疗上有着广泛的应用前景。     

P53在人卵巢癌组织中的表达及临床意义

目的 检测抑癌基因P53(突变型)在卵巢癌中的表达,并结合卵巢癌临床参数如临床分期、病理类型等进行比较,了解P53在卵巢癌中的表达及其生物学行为的关系;方法采用SP免疫组化法检测60例不同性质卵巢组织中P53蛋白的表达水平.结果 上皮性卵巢癌,良性上皮性肿瘤,正常卵巢组织中三种指标的表达情况:P53蛋白为14/22、0/20、0/18,在上皮性卵巢癌中的表达率显著增高;P53表达与肿瘤分期和组织分化程度相关.结论 1.P53在正常卵巢组织、良性卵巢肿瘤及卵巢癌中表达逐渐增强,提示P53参与卵巢癌的形成,并与耐药有关.2.P53蛋白表达与卵巢上皮性肿瘤的良恶性、肿瘤细胞的分化程度、患者的临床分期有关,与恶性肿瘤的病理类型无关.     

p53基因在肺癌患者中的突变

目的　探讨肺癌组织中p5 3基因蛋白表达和肺癌患者血白细胞p5 3基因突变及其相互关系。方法　应用免疫组织化学S -P法检测肺癌组织中p5 3基因蛋白表达及聚合酶链反应 -单链构象多态性分析 (PCR -SSCP)检测其中肺癌患者血白细胞p5 3基因突变。结果　p5 3基因蛋白在 5 1例肺癌组织中的阳性表达率为 5 9% ,其中p5 3蛋白在鳞癌、腺鳞癌和腺癌的表达差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,但有淋巴结转移者 ( 77% )显著高于无淋巴结转移者 ( 4 5 % ,P <0 0 5 ) ,p5 3蛋白在肺癌癌旁正常肺组织及白细胞中均为阴性 ;5 1例肺癌患者中 2 8例血白细胞DNA均未见p5 3基因突变。结论　p5 3基因在肺癌患者血白细胞DNA未见突变 ,p5 3基因蛋白阳性的肺癌患者更易发生淋巴结转移     

介导p53基因转移的重组体腺病毒对人肺癌细胞的抑制作用

ｐ５３基因突变是肿瘤发生中的多发事件,导入野生型ｐ５３基因能抑制肿瘤细胞的生长。通过腺病毒载体介导。将野生型ｐ５３基因转导到人肺腺癌细胞系（ＧＬＣ－８２）中,证实对肺腺癌细胞生长具有明显的抑制作用,换制率达６１％。     

重组腺病毒p53基因联合TACE介入治疗原发性肝癌的探讨

目的探讨重组腺病毒p53基因（rAd-p53）联合肝动脉化疗栓塞术（TACE）治疗原发性肝癌的疗效及安全可行性。方法对临床明确诊断为原发性肝癌的16例患者,采用动脉途径rAd-p53＋TACE联合介入治疗,治疗30 d后按照2001年《肝癌介入治疗规范化条例（草案）》标准进行疗效评价。结果明显好转5例,好转6例,稳定4例,进展或恶化1例,除出现部分病人腹痛,发热,轻微恶心,咳嗽及短期内一过性丙氨酸和天冬氨酸氨基转氨酶升高外,未出现其他不良反应及并发症。结论动脉途径rAd-p53联合TACE治疗原发性肝癌是安全可行的,近期疗效满意。     

血管内皮生长因子、p53与肺癌的关系研究进展

血管内皮生长因子(VEGF)是一种与肿瘤关系最为密切的血管生成因子。VEGF对肺癌组织的生长和扩散有重要影响。p53是一种重要的抑癌基因。已有研究表明,野生型p53可以抑制VEGF的表达,并通过旁观效应抑制肿瘤的生长和转移,而突变型p53则可以上调VEGF的表达,促进血管生成并促进肿瘤的生长和转移,但也有相反的报道。本文就VEGF、p53蛋白与肺癌关系研究的进展简要综述。     

人胰腺癌组织K-ras,p53基因表达及其意义

目的：探讨Ｋ－ｒａｓ，ｐ５３基因表达与人胰腺癌临床生物学行为之间的关系。