巢式RT-PCR检测外周血中前列腺特异膜抗原mRNA

目的：应用巢式逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）检测外周血中前列腺特异膜抗原mRNA（PSM－mRNA)并探讨其临床意义。方法：取40例不同分期前列腺癌患者及对照组30例（15例良性前列腺增生患者，15例健康青年男性）周围静脉血各10ml，用巢式RT－PCR检测PSM－mRNA，并培养LNCaP细胞进行阳性对照。结果：共有24例前列腺癌血标本检测出PSM－mRNA(60.0%)，前列腺增生及健康对照组中无1例阳性，19例伴有远处骨转移的前列腺癌患者中16例检测到PSM-mRNA(84.2%)，未发现远处转移的21例中8例阳性（38．1％）。在10ml正常血液中加入10个LNCaP细胞，可检出PSM－mRNA。结论：PSM－mRNA可作为前列腺癌的辅助诊断指标，PSM－mRNA的检出率与前列腺癌分期（ABCD）、转移与否、血清PSA水平有相关性。     

巢式RT-PCR检测外周血中前列腺特异膜抗原mRNA

目的:应用巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测外周血中前列腺特异膜抗原mRNA(PSM-mRNA)并探讨其临床意义.方法: 取40例不同分期前列腺癌患者及对照组30例(15例良性前列腺增生患者,15例健康青年男性)周围静脉血各10 ml,用巢式RT-PCR检测PSM-mRNA,并培养LNCaP细胞进行阳性对照.结果:共有24例前列腺癌血标本检测出PSM-mRNA(60.0％),前列腺增生及健康对照组中无1例阳性;19例伴有远处骨转移的前列腺癌患者中16例检测到PSM-mRNA(84.2％),未发现远处转移的21例中8例阳性(38.1％).在10 ml正常血液中加入10个LNCaP细胞,可检出PSM-mRNA.结论:PSM-mRNA 可作为前列腺癌的辅助诊断指标,PSM-mRNA的检出率与前列腺癌分期(ABCD)、转移与否、血清PSA水平有相关性.     

前列腺特异性膜抗原cDNA的克隆及用于临床前列腺癌的检测

目的获得前列腺特异性膜抗原(PSMA)基因,应用巢式反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测前列腺癌(PC)患者外周血中PSMA mRNA.方法从人前列腺癌细胞系LNCaP中提取总RNA,经RT-PCR扩增PSMA基因,克隆入pUC19质粒中,用全自动荧光测序仪测定其序列.根据PSMA cDNA序列设计合成引物,应用巢式RT-PCR方法检测36例PC患者和23例前列腺增生(BPH)患者外周血中PSMAmRNA,结果与巢式RT-PCR方法检测前列腺特异抗原(PSA)mRNA比较.结果获得了PSMA基因(由2 253 bp组成,可编码751个氨基酸),与已发表的PSMA cDNA序列一致.应用巢式RT-PCR方法检测PC患者外周血PSMA mRNA灵敏度和特异度分别为66 7%和100.0%,与巢式RT-PCR方法检测PC患者外周血PSA mRNA(灵敏度和特异度分别为30.6%和87.0%)比较差异显著.结论成功地克隆了PSMA基因并应用于临床PC诊断,巢式RT-PCR方法检测患者外周血中PSMA mRNA在PC诊断中的真实性和可靠性明显优于PSA mRNA.     

巢式RT-PCR检测前列腺癌患者外周血中PSA mRNA和PSM mRNA的比较

目的　盲法比较研究巢式反转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测前列腺癌 (PC)患者外周血中前列腺特异性膜抗原(PSM)mRNA和前列腺特异性抗原 (PSA)mRNA在PC诊断中的真实性和可靠性 .方法　根据PSM和PSA的cDNA序列设计合成引物 .应用巢式RT PCR方法分别检测 36例PC患者和 2 3例前列腺增生 (BPH)患者外周血中PSMmRNA和PSAmRNA .结果　PSAmRNA和PSMmRNA阳性表达的灵敏度 (Sen)分别为 :2 9.7% ,6 7.6 % (P <0 .0 1) .特异度 (Spe)分别为 :86 .4 % ,10 0 .0 % (P <0 .0 5 ) .准确度 (Ac)分别为 :5 0 .8% ,79.8% (P <0 .0 5 ) .卡柏值 (κ)分别为 :0 .13(差 )、0 .6 (一般 ) .结论　应用巢式RT PCR方法 ,患者外周血中PSMmR NA在PC的诊断、微转移、术后随访、人群筛选中的真实性和可靠性明显优于PSAmRNA .     

前列腺特异性抗原密度在前列腺癌恶性程度中的意义

目的探讨血清中前列腺特异性抗原密度(PSAD)测定值在前列腺癌(Pca)恶性程度中的意义。方法回顾分析该院85例Pca并进行Pca根治术后的患者,分析比较术前前列腺特异性抗原(PSA)、PSAD和Gleason评分在Pca恶性程度中的意义。结果手术切缘有浸润者36例,PSAD平均值为(0.36±0.34)ng/mL;手术切缘无浸润者49例,PSAD平均值为(0.34±0.40)ng/mL,PSM阳性组明显高于PSM阴性,差异有统计学意义(P<0.01)。精囊有浸润者13例,PSA平均值为(19.1±22.8)ng/mL、PSAD平均值为(0.54±0.59)ng/mL;精囊无浸润者72例,PSA平均值为(10.8±6.6)ng/mL,PSAD平均值为(0.32±0.32)ng/mL,两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。淋巴结有转移者7例,Gleason评分平均值为6.92±0.98;淋巴结无转移者46例,Gleason评分平均值为6.71±1.28,两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 PSAD对于Pca恶性程度的判断比较准确,同时还可以作为预测Pca预后的一项指标,若同时联合三项指标可显著提高预测结果。     

前列腺癌患者外周血单个核细胞PSA mRNA表达

目的：检测前列腺癌患者及对照者外周血单个核细胞前列腺特异性抗原(PSA）mRNA表达,并探讨其临床意义。方法：选择39例前列腺癌患者,12例健康体检者作为对照,取5 mL静脉血,肝素抗凝,Ficoll密度梯度离心分离外周血单个核细胞,RT-PCR检测PSA mRNA表达。结果：①39例前列腺癌患者外周血单个核细胞PSA mRNA表达阳性检出率66.7%（26/39）,其中血清PSA＞20.0 μg·L^-1者23例,PSA mRNA表达阳性检出率87.9%（20/23）;血清PSA≤20.0 μg·L^-1者16例,PSA mRNA表达阳性检出率37.5%（6/16）。对照组未见阳性表达。②16例血清PSA≤20.0 μg·L^-1的前列腺癌患者PSA mRNA阳性表达的Gleason评分为：1~4分0/3,5~7分1/8,8~10分5/5,6例阳性者均为中、低分化癌。 结论：外周血单个核细胞PSA mRNA的检测在血清PSA＞20.0 μg·L^-1的前列腺癌患者中具有较高的敏感度,是一种可靠的检测方法。血清PSA≤20.0 μg·L^-1的前列腺癌患者外周血单个核细胞PSA mRNA的检测可以预示微转移的发生。     

人前列腺特异性抗原mRNA实时荧光POR定量标准品的构建

目的 构建实时荧光定量PCR（FQ-PCR）的标准品以定量检测人前列腺特异性抗原（PSA）mRNA的表达。方法 以Trizol裂解抽提法提取LNcaP细胞的总RNA。以RT-PCR法制备PSAcDNA目的片段并进行扩增；以A-T载体克隆法制备重组质粒，并转化EcoliDH5。菌提取重组质粒，联合用氨苄青霉素筛选法和筛选法、EcoRI限制性酶切和序列分析法鉴定特异性重组质粒。用聚乙二醇沉淀法提纯质粒并检测）．260nm吸光度，确定原液的重组质粒的拷贝浓度并以此制备FQPCR梯度标准品。结果 PSAcDNA目的片段成功制备并获得稳定的重组质粒。保持了目的片段的特异性和序列的完整性。结论 成功构建了实时荧光定量PCR标准品。     

前列腺癌患者前列腺特异性抗原检测的临床意义

探讨前列腺癌患者治疗前血清前列腺特异性抗原水平对评估ＰＣａ预后的价值。方法采用放射免疫分析法检测２４例预后良好和３３例预后不良的ＰＣａ患者治疗前的血清ＰＳＡ水平。结果两组病例治疗前血清ＰＳＡ水平显著高于正常对照组,ＰＣａ患者预后不良组治疗前血清ＰＳＡ水平亦显著高于预后良好组。结论ＰＣａ患者治疗前血清ＰＳＡ水平对评估其预后具有一定价值。     

中国人前列腺特异性膜抗原基因的克隆及鉴定

[目的]克隆中国人前列腺特异性膜抗原(prostate specific membrane antigen,PSMA)的cDNA全长,并将其连接到原核表达载体pET-30(a),构建PSMA的原核表达重组子.[方法]从前列腺癌患者活检组织中提取RNA,利用PSMA的cDNA中的EcoR Ⅰ位点,将PSMA分成两段分别做RT-PCR,然后再将其分别连接到pET-30(a)中,从而得到完整PSMA的cDNA的原核表达重组子pET-30(a)-PSMA,并对其进行鉴定.[结果]首次成功克隆到全序列的中国人PSMA的cDNA,并构建了PSMA的原核表达重组子pET-30(a)-PSMA,为以后的PSMA表达、纯化及其抗体库的筛选奠定了基础.[结论]分段克隆基因,然后将基因分别连接到同一载体,是有效地对一些长片段基因进行克隆的方法之一.     

人前列腺特异性抗原mRNA实时荧光PCR定量标准品的构建

目的构建实时荧光定量PCR(FQPCR)的标准品以定量检测人前列腺特异性抗原(PSA)mRNA的表达。方法以Trizol裂解抽提法提取LNCaP细胞的总RNA。以RTPCR法制备PSAcDNA目的片段并进行扩增;以AT载体克隆法制备重组质粒,并转化E.coliDH5α菌提取重组质粒,联合用氨苄青霉素筛选法和α筛选法、EcoRⅠ限制性酶切和序列分析法鉴定特异性重组质粒。用聚乙二醇沉淀法提纯质粒并检测λ260nm吸光度,确定原液的重组质粒的拷贝浓度并以此制备FQPCR梯度标准品。结果PSAcDNA目的片段成功制备并获得稳定的重组质粒,保持了目的片段的特异性和序列的完整性。结论成功构建了实时荧光定量PCR标准品。     

血清前列腺特异抗原检测在前列腺癌诊断中的意义探析

目的探讨血清总前列腺特异抗原(t-PSA)、游离PSA(f-PSA)/t-PSA在前列腺癌(PCa)诊断中的意义。方法回顾性分析109例PCa与前列腺良性增生(BPH)患者血清t-PSA、f-PSA/t-PSA值在前列腺癌鉴别诊断中的意义。结果 PCa与BPH 2组患者间t-PSA、f-PSA/t-PSA值差异有统计学意义(P<0.01),当t-PSA含量在4.0~10.0μg/L时,2组患者间t-PSA水平差异无统计学意义(P>0.05),而f-PSA/t-PSA差异有统计学意义(P<0.01)。当t-PSA含量在4.0~10.0μg/L时,f-PSA/t-PSA值分别为0.125,0.15,0.175时,对PCa的诊断敏感度为:56.0%,76.0%,88.0%;特异性为:93.8%,86.5%,78.2%。结论PCa患者t-PSA显著升高,f-PSA/t-PSA明显降低。当t-PSA含量在4.0~10.0μg/L时,t-PSA的诊断意义很小,选取f-PSA/t-PSA值为0.16作为临界值,既可保证较高的特异性,又不降低其敏感性。     

外周血差异显示编码3mRNA定量检测在前列腺癌患者诊断与治疗监测中的初步应用

目的探讨外周血差异显示编码3（DD3）mRNA定量检测在前列腺癌诊断和治疗监测中意义。方法用荧光定量逆转录聚合酶链反应（FQ—RT—PCR）方法对35例未治疗前列腺癌、58例内分泌治疗后前列腺癌、59例良性前列腺增生患者和10例健康男性志愿者外周血DD3mRNA含量进行定量检测,并对DD3mRNA诊断及疗效监测价值进行评价。结果未治疗前列腺癌组外周血DD3mRNA含量明显高于治疗后前列腺癌组、前列腺增生组和健康男性志愿者组,差异具有统计学意义（P〈0．01）。未治疗前列腺癌患者随着临床分期增加,外周血DD3mRNA含量也增高,差异具有统计学意义（P〈0．01）。当临界值为846拷贝／ml时,DD3mRNA曲线下面积为0．822（95％CI：0．725～0．919）,灵敏度、特异度分别为74．3％、89．8％。结论外周血DD3mRNA定量检测是前列腺癌诊断的良好指标,可作为内分泌治疗过程疗效监测的指标。     

前列腺癌患者癌组织前列腺干细胞抗原、血清前列腺特异抗原检测

目的:探讨前列腺癌(PCa)组织中前列腺干细胞抗原(PSCA)的表达及与血清前列腺特异抗原(PSA)的关系.方法:采用免疫组织化学方法检测36例PCa组织、20例前列腺高分级上皮样内瘤样病变(HG-PIN)及20例良性前列腺增生(BPH)组织中PSCA的表达,术前ELISA法检测血清PSA水平.结果:BPH组织中无PSCA表达,HG-PIN、PCa组织中PSCA阳性率分别为70.0%(14/20)、80.6%(29/36),高于BPH组织(P＜0.05).高分化、中分化、低分化PCa组织中PSCA的阳性率分别为6/11、14/16、9/9,依次增高(P＜0.05).PSCA阳性率与PCa患者血清PSA水平无相关性(r=0.215,P＞0.05).结论:PSCA有可能是一种新的PCa肿瘤标志物.     

前列腺特异性抗原的临床应用

前列腺癌 (Ｐｃａ)在欧美国家是最常见的恶性肿瘤之一。随着我国人口老龄化加剧及饮食结构的改变 ,其在我国人口中的发病率逐年上升。因此对Ｐｃａ的早期诊断及治疗越来越引起人们的重视。而前列腺特异性抗原 (ＰＳＡ)的测定则是诊断Ｐｃａ的重要指标 ,所以ＰＳＡ值在不同的水平 ,对判断患有Ｐｃａ的可能性大小及应采取哪些诊断及处理措施 ,则是临床医师在Ｐｃａ处理中面临的主要问题。现就近来有关方面的文献综述如下。1　ＰＳＡ <4.0ｎｇ ｍｌ时的应对措施有报道 ,大约有 2 5 %的Ｐｃａ患者ＰＳＡ值位于正常范围内[1 ] (即 0～ 3.99ｎｇ …     

前列腺特异性抗原检测在前列腺癌中的临床价值

前列腺特异性抗原(PSA)仅局限于前列腺腺管上皮胞浆内。分子量为33000~34000DaLtons,半衰期为2.2~3.5天。自Wang等首先应用免疫测定法从前列腺组织中分离并提纯出PSA后,国内外有关该抗原在前列腺癌(PC)的早期诊断、复发监     

前列腺特异性抗原检测在前列腺疾病中的临床应用

目的：测定前列腺疾病患者的前列腺特异性抗原浓度,对于前列腺疾病的早期诊断,肿瘤筛查有重要价值。方法：采用高灵敏的固相包被珠免疫放射测定法测定患者血清中的前列腺素特异性抗体浓度。结果：前列腺炎,前列腺增生及肿瘤,其PSA浓度均明显高于健康对照组。结论：前列腺素特异性抗体测定在前列腺疾病中的应用具有灵敏度高,特异性强,特别对于前列腺Ca的早期诊断,筛查及鉴别诊断有广泛的应用价值。     

血清游离/总前列腺特异性抗原比值在前列腺癌诊断中的应用

目的:探讨血清游离态PSA(F-PSA)和总PSA(T-PSA)及游离态/总(F/T)PSA比值作为前列腺疾病诊断指标的价值。方法:采用Abbott公司AxSYM化学发光免疫分析仪自动检测未经治疗的84例前列腺增生(BPH)病人和29例前列腺癌病人血清F-PSA和T-PSA,并计算F/T比值。结果:F/T百分率值在前列腺癌组中明显低于前列腺增生组(P<0.001)。若总PSA限定于4～10μg/L范围内,应用F/T百分率值可区别前列腺癌与前列腺增生(P<0.01),而两组总PSA差异无显著意义(P>0.05)。结论:F/T百分率值可用于区别前列腺癌与前列腺增生;总PSA在4～10μg/L范围时,应用F/T百分率值较总PSA为佳。     

前列腺癌组织PTI-1基因mRNA的表达意义

目的：探讨前列腺癌诱导基因1(PTI-1)在前列腺癌及前列腺增生症组织中的表达及其意义．方法：采用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)检测21例前列腺癌组织、12例前列腺增生症组织及9例正常前列腺组织中PTI-1 mRNA．结果：21例前列腺癌组织中15例阳性表达，阳性率为71．4％；12例前列腺增生症组织及9例正常前列腺组织中无一例阳性表达．结论：RT-PCR检测PTI-1基因mRNA可作为诊断前列腺癌的一种新方法。     

精浆前列腺特异性抗原的检测

目的建立一种检测精浆前列腺特异性抗原 (PSA)和精浆游离前列腺特异性抗原 (F PSA)的方法。方法用化学发光标记免疫技术稀释检测法 ,检测 30例健康男性 ,2 1例良性前列腺增生患者 (BPH组 )和 15例前列腺癌患者 (Pca组 )精浆PSA与F PSA浓度水平 ,用回收试验和重复性试验来验证检测的正确性 ,并进行统计学分析。结果健康男性、BPH组和Pca组精浆PSA分别为 (5 872 4 0± 2 34394 )、(70 80 4 0± 30 3985 )、(32 4 7.5± 10 4 5 .5 )ng/mL ;F PSA分别为 (4 1972 0± 14 86 37)、(4 84 4 13± 194 911)、(1396 .7± 2 6 8.2 2 )ng/mL。回收效果满意 ,重复性试验证明结果可靠、稳定。Pca组精浆PSA和F PSA的浓度明显低于健康男性和BPH组患者 (P <0 .0 0 0 1)。结论用化学发光标记免疫技术稀释检测法测定精浆PSA与F PSA浓度的结果可靠、稳定 ,对前列腺癌与良性前列腺增生的临床鉴别诊断有一定应用价值