实寒证原发性痛经患者尿液代谢组学研究

目的:比较实寒证原发性痛经患者与正常组尿液内源性代谢物的差异,从整体角度阐释实寒证原发性痛经的病理生理学机制,揭示寒邪致痛经的生物学本质。方法:采用病证结合模式,以实寒证原发性痛经患者及正常组为研究对象,选择N-甲基-N-三甲基-硅基三氟乙酰胺(MSTFA)作为衍生化试剂对月经周期第2天(MC2)尿液代谢产物进行气相色谱-飞行时间质谱(GC-TOFMS)检测,得出两组总离子流色谱图(TIC),结合非监督的主成分分析(PCA)进行多维统计分析,寻找实寒证原发性痛经与正常组的差异代谢产物。结果:痛经组与正常组比较,差异代谢产物有葡萄糖、果糖、木糖醇、半乳糖、异柠檬酸、马尿酸、丙氨酸、甘氨酸8种;其中痛经组升高的有葡萄糖、果糖、木糖醇、半乳糖、异柠檬酸、马尿酸;降低的有丙氨酸、甘氨酸。结论:实寒证原发性痛经患者与正常组尿液的差异代谢物质涉及到糖、氨基酸代谢及肠道菌群的异常。     

基于代谢组学的实寒证、虚寒证原发性痛经患者尿液的比较研究

目的:比较实寒证、虚寒证原发性痛经患者尿液内源性代谢物的异同,从整体角度分析两证的病理生理学机制,揭示同病异证的生物学本质差异。方法:采用病证结合模式,以实寒证、虚寒证原发性痛经患者为研究对象,选择N-甲基-N-三甲基-硅基三氟乙酰胺(MSTFA)作为衍生化试剂对月经周期第2d(MC2)尿液代谢产物进行气相色谱-飞行时间质谱(GC-TOFMS)检测,得出两组总离子流色谱图(TIC),结合非监督的主成分分析(PCA)进行多维统计分析,寻找实寒证、虚寒证原发性痛经的差异代谢产物。结果:两组检测出的差异性代谢产物有葡萄糖、果糖、异柠檬酸、乳酸、甘氨酸、原藻醇、马尿酸7种。与实寒组比较,虚寒组升高的有乳酸,降低的有葡萄糖、果糖、异柠檬酸、甘氨酸、原藻醇、马尿酸。结论:实寒证、虚寒证原发性痛经患者尿液的差异代谢物质涉及到糖、氨基酸代谢及肠道菌群的异常,主要差异点为糖代谢。     

从检测血中FT3、FT4、T、E2及皮质醇等指标探讨寒证热证的本质

目的：探讨内分泌激素FT3、FT4、T、E2及皮质醇（cortisol,CO)水平与中医寒证热证的相关规律。方法：选实热、虚热、实寒、虚寒证患者202例及健康对照组50名，检测血中FT3、FT4、T、E2、CO指标。结果：（1）FT3、FT4数值热证高而寒证低，依次为虚热证组＞实热证组＞对照组＞实寒证组＞虚寒证组，提示热证基础代谢及氧消耗升高而寒证正相反。（2）CO值实证高而虚证低，依次为实寒证组＞实热证组＞对照组＞虚热证组＞虚寒证组，提示CO为形成虚实的因素之一而与寒热关系不显著。（3）性激素T热证高而寒证低；E2女性热证低而寒证高。提示T值高为形成热证的因素之一，E2值高为形成女性寒证的因素之一。结论：内分泌激素水平的高低是形成寒证热证的主要病理生理基础之一。     

温经汤治疗实寒证型月经病临床疗效及对子宫动脉血流参数的影响分析

目的:探讨温经汤治疗实寒证型月经病疗效,分析其对子宫动脉血流参数的影响。方法:选择实寒证型月经病患者150例,按照随机数字表法分为对照组和观察组,每组75例。对照组患者给予常规治疗,观察组在对照组治疗基础上给予温经汤治疗,比较两组患者治疗效果、子宫动脉血流参数的变化及不良反应发生情况。结果:观察组患者治疗总有效率显著高于对照组(P0.05)。治疗前,两组患者PSV、RI、PI均无显著差异(P0.05);治疗后,观察组患者PSV升高幅度和RI、PI降低幅度均显著大于对照组(P0.05)。两组患者均未发生明显不良反应。结论:温经汤治疗实寒证型月经病疗效显著,能有效改善子宫动脉血流情况。     

温经汤对实寒证月经病患者卵巢及子宫血流动力学的影响

目的:探讨采取温经汤治疗实寒证月经病患者卵巢及子宫血流动力学的影响。方法:选取温县人民医院2018年2月至2019年2月收治的136例实寒证月经病患者,将其随机分为对照组和观察组,各68例。对照组给予常规治疗,观察组在对照组的基础上辅以温经汤治疗,测定两组患者的收缩期峰值流速(PSV)、阻力指数(RI)、搏动指数(PI)等卵巢及子宫血流动力学参数,并进行比较分析。结果:两组患者卵巢及子宫血流动力学参数经过治疗后各项指标均有所改善,但观察组患者的PSV、RI、PI指标明显优于对照组,差异具有统计学意义(P 0.05)。结果:采用温经汤治疗实寒证月经病患者具有显著疗效,可以有效的改善卵巢及子宫血流动力学异常,减轻患者的症状。     

寒证和热证动物模型的建立方法及评价

目的:建立稳定、客观的中医寒证和热证的动物模型。方法:将72只Wistar大鼠(雌雄各半),随机分为正常对照组、寒证模型组和热证模型组。寒证模型组予冰水(0℃)灌胃和冷水(10℃)泡浴,热证模型组予乙醇溶液(0. 1 mg/ml～0. 3 mg/ml)和辣椒素(0. 2 mg/ml～0. 9 mg/ml)溶液灌胃,正常对照组予生理盐水灌胃。每组均予10 ml/kg灌胃,每日1次,连续5周。每日测定大鼠体征评分(R)、饮水量及摄食量,每周检测体重,取材前1 h测量大鼠肛温。造模结束后,测定大鼠大肠组织Na~+-K~+-ATP酶、Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶、琥珀酸脱氢酶(SDH)和乳酸脱氢酶(LDH)活性。HE染色,光镜下观察各组大鼠大肠组织学形态改变,并对病理组织学结果进行评分。结果:与正常对照组比较,寒证模型组6 相似文献   

加减温经汤对月经病实寒证患者生殖激素及5-HT、β-EP的影响

目的:探讨加减温经汤治疗月经病实寒证的作用机制,并从治疗角度反证月经病实寒证与5-HT、β-EP及生殖激素的关系.方法:对60例月经病实寒证患者给与加减温经汤治疗,连续服药3个月经周期.观察临床疗效,并测定治疗前后血清5-HT、β-EP及生殖激素的变化.结果:近期临床治愈22例(36.7%),有效28例(45.7%),无效10例(17.6%).治疗后血清FSH、LH、E2、β-EP较治疗前明显升高(P＜0.05,P＜0.05,P＜0.05,P＜0.01),PRL、5-HT明显降低(均为P＜0.05),有统计学意义.结论:加减温经汤在治疗月经病实寒证的同时,有改善生殖内分泌激素、调节致痛物质及镇痛物质的作用.     

强直性脊柱炎寒热证候的脊柱结构损伤特点

目的 探讨强直性脊柱炎(AS)的寒、热证候脊柱结构损伤特点及其与患者一般情况、症状、体征、实验室检查等因素的相关性.方法 60例AS患者辨证分为寒证组与热证组各30例.比较两组患者的脊柱结构损伤(mSASSS)评分,并对患者的mSASSS评分与年龄、性别、病程、骶髂关节X线分级等体征及实验室检查结果进行相关性分析. 结果 寒证组AS患者mSASSS评分较热证组高(P＜0.05);寒证组的mSASSS评分与年龄、病程、骶髂关节X线分级、Bath强直性脊柱炎功能指数、枕墙距、指地距、颌柄距呈正相关(P＜0.05),与胸廓活动度、Schober试验呈负相关(P＜0.05);热证组mSASSS评分与血沉、C反应蛋白呈正相关(P＜0.05).结论 寒证组的AS患者脊柱结构损伤程度较热证组重,热证组患者的脊柱结构损伤程度可能与炎症存在一定的相关性.     

加减温经汤对月经病实寒证患者血清NO/ET-1及TF/TFPI的影响

正寒邪是月经病常见的致病因素之一,寒主收引、主凝滞,故寒客冲任、血海瘀滞可导致痛经、月经后期、经血量少等病症。临床流行病学的相关调查表明,在经龄女性中,寒凝血瘀发病率达36%以上[1]。笔者应用加减温经汤治疗月经病实寒证取得较好的临床效果,拟通过检测月经病实寒证患者血清一氧化氮(nitric oxide,NO)、内皮素-1(endothelin-1,ET-1)和组织因子(tissue factor,TF)、组织因子途径抑制物(tissue     

痛 经 方 治 痛 经 效 好

痛经方治痛经效好陈惠娟痛经一证，临证常遇未婚者多，已婚者少，而瘀、实、热证多，虚、寒证少。笔者自拟痛经方结合辨证加减治疗痛经，临床疗效满意，现介绍如下。方药组成香附１０～１５ｇ，丹参１５～３０ｇ，桂枝６～１２ｇ，川芎５ｇ，泽兰１５ｇ，广木香、延胡索、...     

稳定性冠心病血瘀证的血浆定量蛋白质组学探析＊

目的 基于数据非依赖性采集的定量蛋白质组学技术（data independent acquisition，DIA）对稳定性冠心病血瘀证患者的血浆蛋白质进行研究分析，初步探索冠心病血瘀证的关键生物学过程与核心靶点。方法 选择中国中医科学院广安门医院心血管科收治的5例稳定性冠心病患者作为疾病观察组，同时选取健康成人5人作为对照组，采用DIA蛋白质组学技术对受试者的血浆进行检测，确定蛋白质表达量后进行差异蛋白质表达分析、GO富集分析、KEGG信号通路图查询和蛋白质互作网络分析。结果 在差异倍数为1.5倍时，疾病观察组相比于健康对照组，共鉴定到22个蛋白质下调，9个蛋白质上调。进一步的生物信息学分析表明，冠心病血瘀证的生物学过程与补体参与的慢性炎症反应有关，关键信号通路是补体与凝血级联反应的信号通路，核心蛋白质为C反应蛋白、转甲状腺素蛋白、补体因子H、维生素D结合蛋白等。结论 冠心病血瘀证的生物学过程与补体参与的慢性炎症反应有关。     

高通量测序筛选冠心病血瘀证相关lncRNA-miRNA-mRNA调控网络

目的:筛选冠心病血瘀证相关差异表达非编码RNA(lncRNA),微小RNA(microRNA,miRNA),信使RNA(mRNA),构建基因间调控网络,从转录组层面研究冠心病血瘀证物质基础和病理机制。方法:使用高通量测序技术,分别检测冠心病血瘀证、冠心病非血瘀证和正常(各5例)lncRNA,miRNA和mRNA表达情况,通过交联分析筛选冠心病血瘀证相关的差异基因表达谱。对获得的差异基因进行功能通路分析,根据基因间Pearson相关分析和star Base靶基因预测平台,构建基因间调控网络,通过网络拓扑分析,筛选其中的关键基因。在另一匹配队列中(每组各15例)对基因调控网络中的关键节点进行实时荧光定量PCR(Real-time PCR)验证。结果:39个lncRNA,229个miRNA和221个mRNA与冠心病血瘀证密切相关。功能与通路分析结果显示,冠心病血瘀证差异表达基因主要与免疫和炎症相关。共有9个lncRNA(均为下调),31个mRNA(11个上调,20个下调)和24个miRNA(14个上调,10个下调)构成共调控网络,包括76个基因间调控关系。CTA-384D8.35,CTB-114C7.4,RP11-567M16.6和hsa-miR-3158-3p是冠心病血瘀证基因调控网络中的关键节点。Real-time PCR结果验证了上述结果。结论:冠心病血瘀证存在lncRNA-miRNA-mRNA差异表达基因谱,其与免疫和炎症密切相关;差异表达基因间存在相互调控关系,并可依此构建冠心病血瘀证相关lncRNA-miRNA-mRNA调控网络。对冠心病血瘀证的物质基础进行深度挖掘,可为从转录组层面开展中医证型相关研究提供了一定的科学基础。     

基于TMT技术的柚皮素磷脂复合物抑制大鼠脉络膜新生血管形成的蛋白质组学研究

目的应用TMT标记结合生物信息学分析技术,研究柚皮素磷脂复合物(NPC)对大鼠实验性脉络膜新生血管形成的蛋白质组学的影响。方法建立大鼠脉络膜新生血管模型,随机分为模型组、NPC组和正常对照组,应用TMT标记技术进行蛋白质组学研究,通过检索数据库Gene Ontology Database,对筛查到的差异蛋白进行生物信息学分析。结果获得特有肽段序列10819个,蛋白质2717个。模型组和NPC组、模型组和正常对照组、NPC组和正常对照组,差异表达蛋白分别为113个(上调57个,下调56个)、314个(上调202个,下调112个)、90个(上调22个,下调68个)。通过分析得到这些差异蛋白具有结合作用、抗氧化活性、催化活性、转运活性、转录调节等重要的分子生物学功能。结论基于TMT技术的蛋白质组学方法有助于鉴定出脉络膜新生血管相关的差异蛋白质,为进一步研究柚皮素磷脂复合物抑制实验性脉络膜新生血管的机制提供依据。     

右归配方颗粒对肾阳虚型体外受精－胚胎移植患者卵巢颗粒细胞基因表达谱的影响

目的从基因组学角度探讨温肾阳中药对肾阳虚型体外受精-胚胎移植（in vitro fertilizationembryo transfer,IVF-ET）患者卵巢颗粒细胞基因表达谱的影响。方法 72例行IVF治疗的肾阳虚患者按照随机数字表法分为治疗组（36例）和对照组（36例）,治疗组服用右归配方颗粒联合促性腺激素（gonadotropin,Gn）,对照组服用安慰剂联合Gn,两组均在IVF治疗前连续用药3个周期。两组采用超排卵长方案治疗后,行穿刺取卵术。利用基因高通量测序技术对两组患者卵巢颗粒细胞基因表达谱进行分析,研究两组患者基因表达谱的差异,并对差异基因行基因本体（gene ontology,GO）分析和京东基因与基因组百科全书（kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）通路分析。结果通过对两组患者卵巢颗粒细胞基因表达谱的分析,共筛选到391个差异表达基因,其中上调基因238个,下调基因153个。差异表达基因参与的富集的分子功能是：与细胞增殖、凋亡有关的细胞周期调节蛋白,蛋白质泛素化,微管、微丝等细胞骨架的构建,线粒体及能量相关功能的因子,激素合成调节因子等;参与的通路是能量代谢通路和转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）信号通路。结论两组患者卵巢颗粒细胞基因表达谱存在明显差异,差异表达基因所涉及的生物学过程与肾阳虚导致的生殖细胞增殖、凋亡紊乱,线粒体产生能量过程受阻等有相关性。     

基于iTRAQ技术的慢性心力衰竭气虚血瘀证及气阴两虚证组差异蛋白质组学研究

目的:寻找慢性心力衰竭(CHF)(Chronic Heart Failure,CHF)气虚血瘀证及气阴两虚证的相关蛋白质组学特征,探讨证候发生发展机制的可能生物学通路。方法:研究设计分为CHF气虚血瘀证、气阴两虚证、健康对照组,利用i TRAQ标记定量结合串联质谱技术分析CHF气虚血瘀证及气阴两虚证的相关表达差异蛋白质,为蛋白质组学层面的疾病与证候生物学基础提供实验依据,可以在一定层面上揭示证的内涵。结果:与健康对照组比较,在CHF气虚血瘀证组表达差异蛋白质有16个,其中载脂蛋白E、半乳糖凝集素-3结合蛋白等11个蛋白质表达上调,维生素D结合蛋白、胰蛋白酶抑制剂等5个蛋白质表达下调;与健康对照组比较,在CHF气阴两虚证组表达差异的蛋白质有15个,其中补体9、间-α-胰蛋白酶抑制剂家族重链相关蛋白等10个蛋白质表达上调,前血清淀粉样蛋白P、维生素D结合蛋白等5个蛋白质表达下调。结论:蛋白质组检测结果能够反映CHF气虚血瘀证及气阴两虚证的生物学基础,从而能客观的评价证候特征,为病证结合的研究开拓了新的视野。     

“劳倦过度 房室不节”肾阳虚小鼠睾丸生殖相关基因的研究

目的:应用基因芯片技术探讨"劳倦过度、房室不节"肾阳虚模型小鼠睾丸生殖相关基因的改变,从基因水平上探讨肾阳虚证和"肾主生殖"的本质。方法:连续4周雄雌鼠按比例1:6同笼喂养,每天更换动情期雌鼠,雄鼠每日游泳,建立"劳倦过度、房室不节"肾阳虚小鼠模型。用小鼠全基因组Oligo芯片检测对照组和模型组睾丸基因,以二者荧光信号相对强度比值≥2和≤0.5筛选差异表达基因,查阅北京博奥生物分子注释系统,进行基因功能分类。结果:成功建立"劳倦过度、房室不节"肾阳虚小鼠模型,筛选出大量差异表达基因,其中上调2425个,下调3080个。上调基因前百位中已知基因41个,下调基因前百位中已知基因62个,主要涉及细胞结构/功能、物质/能量代谢、信号转导/传递、炎症/免疫、细胞凋亡、转录/翻译、增殖/分化及细胞周期等。结论:模型小鼠出现与生殖细胞增殖、凋亡、精子发生和运动、能量代谢相关的基因改变,揭示了肾阳虚证及"肾主生殖"的部分实质。     

针灸对克罗恩病患者结肠黏膜基因表达谱的影响

目的从基因表达谱的角度,探讨针灸治疗克罗恩病(CD)的效应机制。方法受试者签署知情同意书进行结肠镜检查,收集CD患者和健康者结肠黏膜。采用基因芯片技术检测健康志愿者及CD患者针灸治疗前后结肠黏膜的基因表达谱,筛选出针灸治疗CD的差异表达基因,结合生物信息学方法,对差异表达的基因进行GO和Pathway分析。结果针灸治疗CD后结肠黏膜组织炎症反应较治疗前明显减轻;与健康者比较,CD结肠黏膜差异表达基因共有3449个(上调2250个,下调1199个)。与治疗前比较,针灸治疗后CD结肠黏膜差异表达基因共有1926个(上调536个,下调1390个),其中CD结肠黏膜差异表达的基因能被针灸逆转的有388个(上调62个,下调326个);针灸可调控的CD中差异表达基因与疾病密切相关的生物功能主要有转录因子STAT磷酸化、ATP酶活性、B细胞介导的免疫、自然杀伤细胞相关免疫等,相关的通路主要有Toll-like受体信号通路、自噬调节系统、自然杀伤细胞介导的细胞毒作用。结论针灸能有效减轻CD患者结肠炎症反应,影响CD结肠黏膜组织异常的基因表达谱,其差异表达基因主要涉及细胞周期、免疫炎症反应、细胞自噬等生物学过程。     

基于蛋白质组学探讨仙连解毒方干预小鼠结直肠癌湿热瘀毒证模型的作用靶点及信号通路研究＊

目的 应用蛋白质组学方法探讨仙连解毒方（Xian-Lian-Jie-Du Decotion，XLJDD）治疗小鼠结直肠癌湿热瘀毒证模型的作用靶点及信号通路。方法 采用偶氮甲烷（AOM）/葡聚糖硫酸钠（DSS）结合高糖高脂饲料喂养的复合方法建立小鼠结直肠癌湿热瘀毒证模型，将小鼠分为空白对照（Control）组、湿热瘀毒证模型（Model）组、仙连解毒方处理（XLJDD）组。XLJDD组于造模同时开始给药（12.9 g·kg^-1），每周6次，共112天，末次给药4 h后，收集各组小鼠结直肠组织，迅速液氮保存。蛋白质质谱检测采用非数据依赖型采集模式（DIA），通过Protein Discovery 2.2软件进行蛋白质搜库鉴定，对蛋白及肽段信息定量分析，筛选各组差异表达蛋白，并对差异蛋白进行GO（Gene Oncology）和KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）富集分析。结果 Model组与Control组相比，共有差异表达蛋白267个，XLJDD组与Model组相比，共有225个差异表达蛋白，GO以及KEGG富集分析发现仙连解毒方干预后，发现这些蛋白主要定位在细胞膜上，能够发挥细胞调节功能等分子功能，参与细胞粘附、Th1/Th2细胞分化、Th17细胞分化和细胞衰老通路等生物学进程相关。结论 通过蛋白质组学研究提示，XLJDD可能通过调节免疫细胞功能，发挥干预小鼠结直肠癌湿热瘀毒证的作用。     

寒凝证类痛经大鼠模型建立的探讨

目的：探讨寒凝证类痛经大鼠模型的建立。方法：将处于动情问期的3月龄SD雌性大鼠60只,按照随机数字法分为6组,每组10只,分别为：空白对照组、盐水对照组、类痛经模型组、冷冻5d组、冷冻5d＋给药组、冷冻10d＋给药组。空白大鼠同步抓取不做任何处理,类痛经模型组、冷冻5d组、冷冻5d＋给药组、冷冻10d＋给药组均每日给予大鼠皮下注射苯甲酸雌二醇注射液,连续10d,第1d及第10d日注射0．5mg/只,第2～9d每日0．2nag／只。末次给药1h后,类痛经模型组、冷冻5d＋给药组、冷冻10d＋给药组腹腔注射缩宫素2U／只。盐水组每日给予同等剂量的生理盐水。每天在注射以后,冷冻5d组、冷冻5d＋给药组、冷冻10d＋给药组放入超低温冰柜冷冻4h,在2h时打开冰柜换气5s,冰柜温度维持在～25℃。观察每分钟扭体评分、寒证表征评分、全血还原黏度、红细胞聚集指数以及红细胞刚性指数。结果：与空白对照组比较,冷冻5d组、冷冻5d＋给药组、冷冻10d＋给药组寒证表征评分明显升高（P〈0．01）;类痛经模型组、冷冻5d组和冷冻5d＋给药组的全血还原黏度高切均明显升高（P〈0．05）,冷冻5d＋给药组的红细胞刚性指数明显升高（P〈0．05）：与盐水组比较,类痛经模型组、冷冻5d＋给药组、冷冻10d＋给药组的每分钟扭体评分明显升高（P〈0．05）。结论：全身冷冻法可造成大鼠寒凝证;通过寒凝证模型结合类痛经模型的制备方法,成功建立了寒凝证类痛经大鼠模型,该模型符合中医证候模型的造模思路及特点。     

慢性乙型肝炎肝郁脾虚证和脾胃湿热证患者的差异表达基因研究初探

目的 探讨慢性乙型肝炎(慢乙肝)肝郁脾虚证与脾胃湿热证患者的差异表达基因。方法 采集正常健康者（26名）及肝郁脾虚证（35例）、脾胃湿热证（34例）患者空腹肘静脉血,按Trizol法提取总RNA。采用Aglient表达谱芯片进行基因芯片检测,利用随机方差模型筛选差异基因,通过GO、Pathway、Genbank、NCBI、Geneontology等数据库对差异基因进行分析。结果 两证型间获得差异基因125个（其中66个为上调基因,59个为下调基因）,主要表现的功能为跨膜运输、硒反应离子、钙离子依赖的胞吐作用等。参与的通路中较为重要的包括影响细胞黏附分子、钙离子信号通路、白细胞穿上皮迁移等。通过动态网络构建,寻找出共表达能力差异最显著的9个基因（即LOC340508、HIST2H2BE、MPL、FLJ22536、TUBA8、NT5M、EGFL7、PTPRF、TSPAN33）,其主要涉及免疫反应、细胞生长、DNA损伤、信号转导、炎症反应等生命过程。结论慢乙肝肝郁脾虚证和脾胃湿热证两个证型间存在差异表达基因,提示中医证候分类学具有基因表达谱依据,基因组学研究方法有望为中医辨证提供客观依据。