抗坏血酸拮抗TNF-α对成骨细胞的作用

目的 通过观察不同浓度的抗坏血酸对TNF-α诱导的成骨细胞凋亡的影响.方法 用TNF-α培养液诱导体外培养成骨细胞凋亡后,分别加人不同浓度的抗坏血酸,用流式细胞仪检测其对成骨细胞的凋亡率.结果 相对于模型组,加入抗坏血酸的各组凋亡率显著降低,尤以10 ng/mL组最为明显.结论 抗坏血酸能抑制TNF-α诱导的成骨细胞凋亡,以浓度10 ng/mL抑制作用最明显.     

肿瘤坏死因子-α通过骨形态发生蛋白-2信号通路抑制成骨细胞分化的实验研究

目的 通过观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)体外诱导鼠肌源细胞C2C12向成骨细胞分化过程中的影响,探讨TNF-α通过骨形态发生蛋白-2(BMP-2)信号通路对成骨细胞分化的调控及其规律.方法 应用BMP-2体外诱导鼠肌源细胞C2C12 向成骨细胞分化模型,实验分4组:对照组不做任何处理,BMP-2组放入100 ng/mL BMP-2,TNF-α组放入5 ng/mLTNF-α,BMP-2+TNF-α组放入100ng/mLBMP-2和5 ng/mL TNF-α.当BMP-2浓度保持100ng/mL时,添加TNF-α浓度为0、2、5、10 ng/mL;当TNF-α保持在5 ng/mL时,添加BMP-2浓度为100、200、300 ng/mL,分别进行培养7 d后,茜素红染色观察细胞矿化,4-硝基苯基磷酸二钠盐偶氮法定量分析成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)活性.结果 TNF-α组、BMP-2组和BMP-2+TNF-α组的成骨活性分别为0.260±0.245、7.311±0.772、1.344±0.133,组间两两比较差异均行统计学意义(P＜0.05).当BMP-2浓度保持100 ng/mL,TNF-α浓度为0、2、5、10 ng/mL时,ALP 活性分别为10.207±0.459、6.183±0.374、1.873±0.388、0.096±0.023,组间两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05).当TNF-α保持在5 ng/mL,B MP-2浓度为100、200、300 ng/mL时,ALP活性分别为1.859±0.220、3.779±0.216、4.716±0.304,组间两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 TNF-α能够抑制BMP-2诱导的成骨分化,并具有剂量-效应依赖相关性;且足量的BMP-2可以抵抗TNF-α对成骨细胞的抑制作用.     

重组人胰岛素样生长因子I对大鼠成骨细胞增殖、凋亡及I型胶原蛋白合成的影响

目的观察胰岛素样生长因子I(IGF-I)对体外培养的大鼠成骨细胞的增殖、凋亡及I型胶原蛋白合成的影响,探讨IGF-I对骨代谢影响的可能机制。方法不同浓度rhIGF-I刺激体外培养的大鼠成骨细胞,采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖能力;肿瘤坏死因子α(TNF-α)单独或与rhIGF-I共同刺激成骨细胞,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率;rhIGF-I刺激成骨细胞,免疫细胞化学结合计算机图像分析系统检测I型胶原蛋白的表达。结果一定浓度IGF-I能明显增加成骨细胞数量(P<0·05),在0·1~100ng/ml这种作用与IGF-I的浓度呈正相关;TNF-α在0·1~100ng/ml浓度范围内呈剂量依赖性地促进成骨细胞凋亡(P<0·05),并使S期细胞减少(P<0·05),而IGF-I能抑制TNF-α对成骨细胞的促凋亡作用(P<0·05);经IGF-I的刺激,成骨细胞I型胶原蛋白的表达明显高于对照组(P<0·05)。结论IGF-I对大鼠成骨细胞有明显的促增殖作用,在0·1~100ng/ml之间呈浓度依赖性,IGF-I能抑制TNF-α诱导的大鼠成骨细胞凋亡,IGF-I能促进大鼠成骨细胞I型胶原蛋白的合成。     

Bcl-2过表达对TNF-α诱导大鼠成骨细胞凋亡的影响

目的 探讨凋亡相关基因Bcl-2过表达对TNF-α诱导大鼠成骨细胞凋亡的影响及相关机制。方法将含有Bcl-2cDNA的逆转录病毒表达载体pDOR-SB质粒转染原代培养的大鼠成骨细胞并且进行阳性克隆筛选。用30 ng/ml TNF-α刺激转染组和对照组细胞24 h,流式细胞术、透射电镜检测细胞凋亡,应用免疫组化结合计算机图像分析技术检测转染组和对照组细胞Bcl-2蛋白及TNF-α刺激前后Caspase-3蛋白表达。结果 Bcl-2蛋白表达在转染加压筛选组显著高于对照组(P<0.05)。TNF-α刺激后转染组细胞亚二倍体凋亡峰比例为6.6％,对照组为16.1％。TNF-α刺激后转染组细胞.超微结构大多正常,对照组细胞出现明显凋亡征象。TNF-α刺激后两组细胞 Ciaspase-3蛋白表达均升高;TNF-α刺激前Caspase-3蛋白表达转染组与对照组比较差异无显著性(P>0.05),TNF-α刺激后Cas-pase-3表达对照组较转染组显著高(P<0.05)。结论 Bcl-2过表达对TNF-α诱导的成骨细胞凋亡有抵抗作用,Bcl-2过表达的抗凋亡作用可能部分通过抑制TNF-α刺激引起的Caspase-3蛋白表达升高实现,有望作为抑制成骨细胞凋亡的侯选基因。     

血管内皮生长因子C对大鼠近端肾小管上皮细胞凋亡的保护作用

目的 探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）对肾小管上皮细胞生成血管内皮生长因子C（ VEGF-C）的影响,及VEGF-C对TNF-α诱导的肾小管上皮细胞凋亡的作用.方法 体外培养大鼠近端肾小管上皮细胞（NRK52E）,加入不同浓度的TNF-α作用不同时间,用实时定量PCR和Western blot方法检测VEGF-C mRNA和蛋白的表达.用不同浓度TNF-α与放线菌素D（ActD）刺激细胞24 h,流式细胞学方法检测细胞凋亡.再加入不同浓度的VEGF-C,观察其对凋亡的抑制情况.结果 TNF-α促进NRK52E细胞VEGF-C的表达,呈剂量和时间依赖性.TNF-α（加入ActD 30ng/ml）促进细胞凋亡,凋亡率随TNF-α浓度增高而增加.VEGF-C能够抑制凋亡,50 ng/ml时对细胞凋亡有抑制作用,100 ng/ml时抑制作用最强.结论 VEGF-C对大鼠近端肾小管上皮细胞的凋亡具有保护作用.     

复方仙贞汤抑制成骨细胞凋亡的实验研究

目的 观察不同浓度的复方仙贞汤对TNF-α诱导的成骨细胞凋亡的影响。方法 TNF-α培养液诱导体外培养成骨细胞凋亡后，分别加入不同浓度的复方仙贞汤，用流式细胞仪检测其对成骨细胞的凋亡率。结果 复方仙贞汤1μg／ml组和500μg/ml组细胞凋亡率明显降低，与模型组和空白对照组相比，差异非常显著，其中1μg/ml组作用更强。500μg／ml可能是通过影响成骨细胞周期中的G0-G1和S期而达到抑制凋亡作用的，而1μg／ml组还能增加G2-M期成骨细胞。结论 复方仙贞汤能抑制TNF—α诱导的成骨细胞凋亡，以低浓度(1μg／ml)抑制作用较好。     

重组人胰岛素样生长因子Ⅰ对大鼠成骨细胞增殖、凋亡及Ⅰ型胶原蛋白合成的影响

目的 观察胰岛素样生长因子Ⅰ（IGF-Ⅰ）对体外培养的大鼠成骨细胞的增殖、凋亡及Ⅰ型胶原蛋白合成的影响，探讨IGF-Ⅰ对骨代谢影响的可能机制。方法 不同浓度rhIGF-Ⅰ刺激体外培养的大鼠成骨细胞，采用噻唑蓝（MTT）法测定细胞增殖能力；肿瘤坏死因子α（TNF-α单独或与rhIGF-Ⅰ共同刺激成骨细胞，流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率；rhIGF-Ⅰ刺激成骨细胞，免疫细胞化学结合计算机图像分析系统检测Ⅰ型胶原蛋白的表达。结果 一定浓度IGF-Ⅰ能明显增加成骨细胞数量（P〈0．05），在0．1～100ng／ml这种作用与IGF-Ⅰ的浓度呈正相关；TNF-α在0．1～100ng/ml浓度范围内呈剂量依赖性地促进成骨细胞凋亡（P〈0．05），并使S期细胞减少（P〈0．05），而IGF-Ⅰ能抑制，TNF-α对成骨细胞的促凋亡作用（P〈0．05）；经IGF-Ⅰ的刺激，成骨细胞Ⅰ型胶原蛋白的表达明显高于对照组（P〈0．05）。结论 IGF-Ⅰ对大鼠成骨细胞有明显的促增殖作用，在0．1～100ng/ml之间呈浓度依赖性，IGF-Ⅰ能抑制，TNF-α诱导的大鼠成骨细胞凋亡，IGF-Ⅰ能促进大鼠成骨细胞Ⅰ型胶原蛋白的合成。     

黄精多糖对TNF-α作用的大鼠成骨细胞增殖、凋亡影响及其机制研究

目的探讨黄精多糖(polygonatum sibiricum polysaccharide,PSP)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)作用的大鼠成骨细胞增殖、凋亡影响及其可能作用的机制。方法采用MTT法检测不同浓度的PSP对TNF-α诱导的成骨细胞增殖能力的影响,筛选出PSP的适宜浓度;通过流式细胞术检测PSP对TNF-α诱导的成骨细胞凋亡能力的影响。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测PSP对TNF-α作用的成骨细胞中miR-212表达的影响;运用蛋白印迹法(Western blot)检测成骨细胞中Cyclin D1、Bc L-2、Bax、P21的蛋白表达水平。结果 TNF-α可抑制成骨细胞增殖,促进P21蛋白表达,而抑制Cyclin D1蛋白表达。PSP不同剂量组可明显促进成骨细胞增殖,令Cyclin D1蛋白表达上调,而P21蛋白表达下调; TNF-α可促进成骨细胞凋亡,上调Bax表达,而降低Bc L-2、miR-212表达,PSP可提高miR-212的表达水平,上调miR-212表达可显著逆转TNF-α对成骨细胞的作用;抑制miR-212表达可明显逆转PSP对TNF-α诱导的成骨细胞增殖及凋亡的作用。结论黄精多糖可通过上调miR-212表达,进而促进成骨细胞增殖及抑制细胞凋亡。     

TNF-α联合奥沙利铂对胃癌细胞SGC-7901抑制作用的研究

目的:探讨TNF-α联合奥沙利铂对人胃癌细胞株SGC-7901生长抑制、凋亡的影响及其作用机制。方法:应用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度的TNF-α、奥沙利铂及两者联合应用对SGC-7901细胞抑制率;采用Hoechst检测SGC-7901细胞凋亡情况。结果:浓度为20、40、80和160μg/mL的奥沙利铂对SGC-7901的细胞生长抑制率为(29.11±0.63)%、(41.05±0.97)%、(47.69±1.03)%和(56.26±0.93)%,均可抑制细胞增殖(P<0.01);浓度为25 mg/L的TNF-α对SGC-7901细胞的生长抑制率为(2.39±0.65)%,抑制作用不明显,浓度为50、100、150 mg/L的TNF-α对SGC-7901细胞的生长抑制率为(4.51±0.86)%、(4.63±0.53)%和(4.75±1.05)%,可抑制细胞增殖(P<0.05);奥沙利铂(20μg/mL)与25、50、100和150 mg/L的TNF-α联合应用时对SGC-7901的细胞生长抑制率为(36.34±0.76)%、(45.51±0.83)%、(51.47±0.67)%和(58.78±0.97)%,与单用TNF-α(100mg/L)或奥沙利铂(20μg/mL)比较,细胞生长抑制率增加(P<0.01);Hoechst检测结果显示,单独应用100 mg/L TNF-α、单独应用20μg/mL奥沙利铂及两者联合应用均有细胞凋亡现象,且联合用药组细胞凋亡率增高(P<0.01)。结论:TNF-α可增强奥沙利铂对人SGC-7901细胞的促凋亡作用,其机制可能为TNF-α、奥沙利铂分别激活不同的Caspase,并级联和放大有关凋亡信号,因而对细胞凋亡产生了协同作用。     

血红素氧合酶1对TNF-α诱导的人退变椎间盘髓核细胞凋亡的作用研究

目的探讨血红素氧合酶1(heme oxygenase 1,HO-1)对TNF-α诱导的人退变椎间盘髓核细胞凋亡的作用及其可能的分子机制。方法取腰椎间盘突出症患者自愿捐赠的椎间盘组织,体外培养人退变髓核细胞并传代,取第3代细胞进行实验。采用细胞计数试剂盒8测定不同浓度(10、20、50、100和200 ng/mL)TNF-α对髓核细胞活性的影响,筛选最佳刺激浓度进行下一步实验。将髓核细胞分成4组,分别采用单纯基础培养液(对照组)、TNF-α刺激(TNF-α组)、TNF-α和CoPP 10μmol/L刺激(CoPP组)、TNF-α和ZnPP 15μmol/L刺激(ZnPP组)培养,24 h后采用Hoechst染色以及流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白活化型Caspase-3(cleaved Caspase-3)、上皮膜蛋白1(epithelial membrane protein 1,EMP-1)以及HO-1、p-P65的表达。为进一步探讨HO-1对髓核细胞凋亡的潜在分子机制,取髓核细胞分别采用TNF-α刺激(TNF-α刺激组)以及TNF-α和吡咯烷二硫基甲酸(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)5μmol/L刺激(TNF-α+PDTC刺激组)培养24 h,采用流式细胞仪检测髓核细胞凋亡率。结果经检测确定TNF-α最佳抑制浓度为100 ng/mL。Hoechst染色示,对照组和CoPP组凋亡细胞较少;TNF-α组和ZnPP组可见凋亡样改变细胞核,其中ZnPP组最显著。流式细胞仪检测示,与对照组相比,TNF-α组、CoPP组及ZnPP组细胞凋亡率均显著提高(P0.05);与TNF-α组相比,CoPP组细胞凋亡率显著降低(P0.05),而ZnPP组显著提高(P0.05)。Western blot检测示,与对照组相比,TNF-α组HO-1蛋白表达降低,cleaved Caspase-3、EMP-1及p-P65蛋白表达升高(P0.05)。与TNF-α组相比,CoPP组HO-1蛋白表达明显升高,cleaved Caspase-3、EMP-1、p-P65蛋白表达明显降低(P0.05);而ZnPP组HO-1蛋白表达明显降低(P0.05),cleaved Caspase-3、EMP-1蛋白表达增高(P0.05),p-P65蛋白表达无明显变化(P0.05)。与TNF-α刺激组相比,TNF-α+PDTC刺激组细胞凋亡率明显降低(t=3.076,P=0.031)。结论 HO-1能够抑制TNF-α诱导的人椎间盘髓核细胞凋亡,其机制可能是通过调控NF-кB通路得以实现。     

膝关节后交叉韧带断裂治疗临床分析

目的 对35例膝关节后交叉韧带断裂治疗进行临床分析,重点探讨了有关交叉韧带断裂的治疗问题。方法 经明确诊断后,分析采用胫骨附着处撕脱骨折复位固定手术治疗26例、早期髌韧带中1／3移植重建3例、单纯长腿石膏固定6例。结果 本组病例全部进行随访,随访时间13个月－5年,胫骨附着处撕脱骨折复位固定及髋韧带中1／3移植重建29例为优良、单纯长腿石膏固定6例为差。结论 后交叉韧带断裂后应该及时给予手术修复;膝后外侧手术入路,操作简单,暴露充分;少于3个月的陈旧性病例仍适应手术治疗。     

不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效分析

目的：探讨不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效。方法：2008年3月-2013年2月收治指尖离断患者80例,38例吻合指侧方静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1或1：2或2：2,平均1：2;22例吻合指腹静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1;20例未吻合静脉,术中仅吻合1条动脉,行侧切口或甲床放血。观察各组治疗效果。结果：吻合指侧方静脉组手指全部成活,无一例发生回流障碍;吻合指腹静脉组19例发生静脉危象,其中4例手指坏死;未吻合静脉组20例均发生回流障碍,其中6例手指坏死。58例获随访,随访时间6~28个月。吻合指侧方静脉组32例,指尖外形佳、指腹饱满;吻合指腹静脉组14例,指体轻度萎缩,指甲生长不平整;未吻合静脉组12例,指体萎缩明显。吻合指侧方静脉组指甲生长近平整,长度长于其他两组[（14.4±3.2）mm比（12.5±2.3）mm和（12.2±2.2）mm],远侧指间关节活动度大于其他两组[（63±5）°比（48±3）°和（45±7）°],两点分辨觉小于其他两组[（4.6±0.4）mm比（7.1±1.2）mm和（7.3±0.6）mm],感觉级别高于其他两组[S（3.45±0.39）级比S（2.57±0.42）级和S（2.55±0.49）级],差异均具有显著性（P〈0.05）。吻合指腹静脉组和未吻合静脉组在指甲长度、运动和感觉方面差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：吻合指侧方静脉能有效解决指尖再植静脉回流问题,可避免回流障碍,成活率高,促进指甲生长,可恢复 DIPJ 活动度及感觉。     

胫骨干骨折的手术治疗对策

目的：明确不同固定器械在胫骨干不同骨折类型固定中的特点，以指导临床应用。方法：68例胫骨干骨折，行加压钢板螺钉、交锁髓内钉、单侧外固定架固定后，作临床疗效分析。结果：加压钢板固定组42例，感染5例，骨不连1例，平均愈合时间3．8个月；交锁髓内钉固定组13例，无感染及骨不连，平均愈合时间5．4个月；单侧外固定架组13例，骨不连1例，踝关节背伸受限3例，平均愈合时间4．5个月。结论：胫骨骨折交锁髓内钉固定并发症少，功能恢复好，适用范围广，但要注意及时进行动力加压。加压钢板及外固定架固定应选择各自的最佳适应证，以达到理想的疗效。