Ana-1巨噬细胞分泌exosomes的提取及免疫鉴定

目的:为了证实Ana-1巨噬细胞是否分泌exo-somes。方法:采用分级离心的方法,从Ana-1巨噬细胞培养的上清液提取exosomes。样品用醋酸双氧铀负染,在透射电镜下观察其形态、大小;并分别用Flotillin多克隆抗体、Tsg101单克隆抗体(mAb)、Hsp70mAb和calnexin多克隆抗体,通过免疫印迹法和免疫金标记法进行免疫鉴定。结果:电镜下可以观察到提取的exosomes平均大小为50～100nm。免疫印迹法分析结果显示,提取的exosomes表达Flotillin、Tsg101和Hsp70蛋白,相对分子质量(Mr)分别为45000、43000和70000,但不表达calnexin蛋白;免疫电镜分析显示ex-osomes膜表面和内部有明显的金颗粒。结论:Ana-1巨噬细胞分泌exosomes。     

ABC免疫印迹技术在分析抗肿瘤McAb识别抗原特性中的应用

利用ABC免疫印迹技术分析一组共16个抗大肠癌McABS识别抗原的特性,效果满意。该法不需分离纯化抗原和制备腹水,使用杂交瘤培养上清液即可得到清晰、准确的识别抗原区带,背景浅淡,用来分析识别抗原分子量及理化性质,特异性强、重复性好、敏感度高。可检测的最小肿瘤抗原蛋白量为1.25×10~(-6)mg,明显优于PAP免疫印迹和间接酶免疫印迹法。本文提示,ABC免疫印迹是分析复杂而微量的抗原的一种有效方法。     

一种新的超微量免疫分析技术—时间分辨荧光免疫分析

<正> 放射免疫分析(RIA)自它产生以来在生物、医学领域内获得了广泛应用。RIA虽然灵敏度高、精密度好,但它有两个主要缺点:操作带放射性和放置时间较短。近年来非同位素标记的免疫分析技术得到了迅速发展,其中酶免疫分析(EIA)已取得相当成功的应用。但EIA中的标记酶容易变化,甚至变     

同位素标记结合免疫印迹-化学发光法鉴定小鼠神经元磷酸化蛋白质组

创建一套简单、实用、灵敏、高效的分析鉴定磷酸化蛋白质组的优化方案。采用同位素标记、双向电泳、放射自显影等技术建立小鼠神经元磷酸化蛋白质组图谱,再用免疫印迹-持久性化学发光技术选择性地鉴定三种小鼠神经元磷酸化蛋白质——PI3Kr3、MEK1、PKCα。结果显示三种磷酸化蛋白质在双向电泳放射自显影图谱和双向电泳免疫印迹-化学发光图谱上的斑点基本匹配,提示本研究建立的以同位素标记和免疫印迹-化学发光法为核心的分析鉴定磷酸化蛋白质组的一整套优化方案灵敏度高、特异性强。     

碘标记肝癌单克隆抗体HAb18的探讨及免疫活性分数测定

抗人肝细胞癌单克隆抗体HAb18用氯胺T法在3种不同条件下碘标记,同时用溴代琥珀酰亚胺标记。用Lindmo的双倒数作图法体外测定标记抗体~(125)I-HAb18与肝癌细胞QGY-7703结合的免疫活性分数。对不同的标记方法和标记条件下的标记参数进行比较。结果,氯胺T法在3种条件下的标记率和免疫活性分数相差不显著,免疫活性分数为0.32+0.029～0.45±0.041。而溴代琥珀酰亚胺法标记率为94.5％±3.2,免疫     

用~(51)Cr标记T淋巴细胞研究针刺对免疫的作用

放射性同位素~(61)Cr能迅速渗入细胞膜内,可标记具有免疫活性的T和B淋巴细胞、巨噬细胞、NK细胞、肿瘤细胞等;用~(61)Cr释放试验可检测免疫功能。至于将~(61)Cr应用于研究针灸、经络与免疫作用的关系,国内外尚未见报道。本文报道用~(61)Cr标记T淋巴细胞的方法,观察针刺对机体免疫作用的影响的研究结果。     

老年多器官功能不全综合征患者免疫功能探讨

目的:检测老年多器官功能不全综合征(MODSE)患者的细胞免疫、体液免疫指标,了解其免疫水平及其与疾病的关系。方法:将老年患者根据诊断分为MODSE组(46例)和对照组(40例),用双/三色直接免疫荧光标记全血溶血法检测细胞免疫CD3~+、CD3~+CD4~+、CD3~+CD8~+、CD4~+/CD8~+、NK、CIK指标;用免疫比浊法检测体液免疫C3,C4,CH50,IgG,IgA,IgM指标。结果:两组患者CD3~+,NK,IgA差异有统计学意义(P<0.05)。两组免疫功能比较有明显差异:对照组CD3~+高,MODSE组NK、IgA高。结论:MODSE组患者存在免疫功能低下。     

用~3H-TdR标记的靶细胞检测细胞介导的细胞毒作用

测定淋巴细胞的细胞毒作用,是细胞免疫功能研究和抗肿瘤研究的一项重要指标。目前测定细胞毒作用已有多种方法,如~(51)Cr、~(125)I前标记法、~3H-TdR后标记法、比色法等。其中,比色法不适于测定细胞介导的细胞毒作用;应用~(51)Cr和~(125)I标记靶细胞,不仅受条件限制,而且均具有γ射线。~3H放射性防护的问题较~(51)Cr和~(125)I小得多;淋     

单克隆抗体的免疫活性测定

本文参照Lindmo T法,测定Ⅰ标记抗低分化鼻咽癌单抗BAC5的免疫活性分数,获得满意结果。 材料和方法 一、材料: (一)抗低分化鼻咽癌单抗BAC5:复苏抗低分化鼻咽癌杂交瘤细胞株BAC5,培养至对数生长期,以3.5×10~5细胞/0.5ml注入6～8周龄BALB/c经产母鼠腹腔,10～14天后取腹水。经硫酸铵粗提后,再用DEAE-Sepharose 6B层析纯化。所得BAC5纯度93％,属IgG2a亚类,亲和力常数(Ka)=8×10~9L·M~(-1),分子量149KD。 (二)无载体Na~(126)Ⅰ:由北京原子能研究院提供。用Iodogen法标记BAC5,标记率88.6％,标记BAC5放化纯度92.8％,比活度83MBq/mg,比浓度33.2MBq/ml。     

用Raji细胞酶联免疫吸附试验测定小鼠循环免疫复合物的探讨

循环免疫复合物(CIC)的检测,是免疫病理学与临床免疫学的重要指标之一。利用Raji细胞放射免疫法(Raji-RIA)检测CIC,具有灵敏度高、特异性强等优点,是世界卫生组织和国际免疫学联合会推荐的四种较好的检测CIC的方法之一。但该法需要制备热聚合的IgG,并保持其稳定性,要标记同位素并配备测量仪器,不仅价格昂贵,而且对人体有一定的危害。Rote等于1983年     

应用免疫印迹技术检测抗Scl-70和抗Jo-1抗体

本文通过对兔胸腺可抽提核抗原(ENA)制备方法的改良应用免疫印迹技术(IBT)检测抗Scl-70与抗 Jo-1抗体,对 157例各种风湿性疾病及 36名正常人的对照研究,表明 70 kD(Scl-70)多肽抗体是进行性系统性硬化症(PSS)伴弥漫性硬皮病(DS)的标记抗体,阳性率为45.5％,而55kD(Jo-1)多肽抗体是多发性肌炎(PM)的标记抗体,阳性率为25％。     

流式荧光免疫技术检测抗核抗体谱的性能与临床应用评价

目的 分析流式荧光免疫技术(FFIA)检测自身抗体谱的结果及评价其在系统性红斑狼疮(SLE)诊断中的应用价值。方法 用流式荧光免疫法和免疫印迹法同时检测219例自身免疫病患者(包括92例SLE患者和127例非SLE的其他自身免疫病患者)、231例其他疾病患者、50例健康体检者血清的特异性自身抗体(抗nRNP、Sm、SS-A、SS-B、Jo-1、Scl-70、rRNP、PCNA、Nucleosome、Histone、CenP-B、M2、dsDNA),计算两种方法的阴阳符合率,并采用Kappa检验评估结果一致性;采用受试者工作特征曲线(ROC)比较各抗体在系统性红斑狼疮诊断中的应用价值。结果 FFIA与免疫印迹法检测各项自身抗体总符合率在87%至98%之间,Kappa值在0.179至0.854之间,其中抗CenP-B抗体一致性最好(Kappa值=0.854),抗His抗体一致性最差(Kappa值=0.179)。在219例自身免疫病例组数据中,根据试剂盒给定的阳性结果判断标准得到的免疫印记法灵敏度(62.0%)高于流式荧光(44.6%),而特异性略低于后者,分别为89.8%和94.4%,但二...     

标记葡萄球菌A蛋白测定血中循环免疫复合物

<正> 已知循环免疫复合物(CIC)与一些疾病的发病机理有关,为此建立了各种CIC的检测方法。Lambert等对18种方法进行了比较评价,发现其间的可比性甚差。因此,建立简便、稳定的CIC检测技术,仍为有待解决的课题。我们利用碘标记葡萄球菌A蛋白(~(125)I-SPA)测定CIC含量,获得较满意的结     

免疫印迹法与免疫荧光法检测寻常型天疱疮自身抗体的比较

比较免疫印迹法与免疫荧光法对检测寻常型天疱疮抗体的临床应用价值。利用重组寻常型天疱疮抗原 (PVAEC1 2 )进行寻常型天疱疮 (PV )患者的免疫印迹法 (IBT )检测 ,并同时应用直接免疫荧光法 (DIF )和间接免疫荧光法 (IIF )检测 2 5例PV患者。IBT 2 1例阳性 (84 % ) ,DIF 2 0例阳性 (80 % ) ,IIF 18例阳性 (72 % )。正常对照 10例均为阴性。免疫荧光技术在PV的诊断与鉴别诊断中有其重要作用。利用重组PVAEC1 2行IBT以检测PV患者血清中抗PVA抗体 ,与免疫荧光法敏感性无统计学差异     

标记免疫分析技术进展

1959年Berson和Yalow报道放射免疫分析测定血浆胰岛素,由此开创了放射免疫分析(RIA)技术检测微量物质的新纪元,四十余年RIA已成为成熟的技术,在临床检测和科学研究中产生重要影响.我国自二十世纪六十年代起的三十余年,经历了几个发展阶段取得了瞩目的进展和广泛应用.近十余年,应用相关的放射免疫原理,以非同位素物质替代放射性核素标记抗原或抗体,相继出现了一些新的非同位素标记免疫分析技术如酶、化学发光、酶放大和荧光免疫分析等技术,与放射免疫分析技术一起统称为标记免疫分析技术.现就标记免疫分析技术的现状和发展作如下综述.     

荧光免疫层析定量检测髓过氧化物酶方法的建立

目的：通过荧光免疫层析技术初步建立MPO荧光免疫层析定量检测方法。方法：采用羧基荧光微球，利用EDC一步法偶联标记抗体，对过程中EDC量、标记蛋白量与标记时间、保护液进行研究，选出最佳条件，并对线性范围、灵敏度、精密性等进行性能评价。结果：确定偶联过程中EDC 160 μg，标记蛋白125 μg、标记1.5 h；线性范围3.125~600 ng/ml，最低检出限0.9 ng/ml；精密性质控品(高、中、低)批内、批间变异系数均小于10%；通过与国外试剂盒（ELISA法）检测比对45份临床血清，相关性良好，R2=0.979 5。结论：成功建立荧光免疫层析快速定量检测MPO的方法，为冠心病的辅助诊断提供一种技术手段。     

自身免疫性疾病与自身抗体的关系及评价

自身免疫性疾病患者的体内能产生多种针对正常细胞不同成分的自身抗体,已证实其中一些自身抗体与特定的疾病表现有相关性~[1]。应用免疫印迹法能同时检测血清中多种自身抗体,为进一步探讨自身免疫性疾病与抗-ENA抗体之间的关系,现将我院84例各种自身免疫病患者血清中抗-ENA抗体的阳性情况报告如下。1材料与方法1.1一般资料来源为本院1997-12～1999-06收治的自身免疫病患者,共84例。其中系统性红斑狼疮(SLE)43,皮肌炎21例,硬皮病11例,干燥综合征(SS)9例,所有患者均符合美国风湿病学会制定的诊断标准。1.2实验方法应用免疫印迹法检测患者…     

微波炉用于免疫组织化学技术的体会

我们对微波炉内的免疫组化标记与常温下的常规免疫组化标记进行观察比较,观察指标见附表。结果表明:利用微波处理标记比常规处理标记在阳性强度上有显著差别(x~2=9.416、P<0.01),而阳性分布与染色背景无明显差异。我们认为:利用微波技术不仅缩短了免疫标记的时间,而且提高了免疫标记的质量。     

免疫组织化学展望

尽管免疫组织化学技术发明于20世纪40年代,但用于甲醛固定石蜡包埋组织切片的历史仅有30余年.一系列的技术发明,包括在酶标记抗体的基础上开发各种高敏感性检测系统(如PAP,ABc等),单克隆抗体的问世以及蛋白酶消化修复部分抗原等,为免疫组织化学技术用于石蜡切片提供了有利条件.     

免疫组化方法简介(光镜与电镜结合的PAP法)

<正> 免疫组化技术是现代形态学科的重要研究工具之一。虽然40年代初出现了荧光抗体技术,但其标本不能用电镜观察。后来建立了酶标抗体法,特别是Sternberger(1979)的非酶标记抗体法(PAP),才使免疫电镜技术得到长足的发展。酶标抗体法是把酶(常用辣根过氧化物酶,简称HRP)标记在第一抗体(直接法)或第二抗体(间接法)上,