单细胞凝胶电泳检测非小细胞肺癌患者淋巴细胞DNA损伤

摘要：目的：探讨单细胞凝胶电泳（SCGE）检测淋巴细胞DNA双链断裂（DSBs）水平在非小细胞肺癌（NSCLC）诊疗中的应用价值。 方法：收集132例NSCLC患者、39例肺部良性疾病以及42例体检健康者血液标本,分离外周血淋巴细胞,用SCGE检测DNA DSBs情况,并分析尾部DNA百分含量（%Tail DNA）及Olive尾距（OTM）与NSCLC患者病理类型、临床分期和疗效间的关系。 结果：SCGE结果表明,NSCLC患者%Tail DNA和OTM均高于肺部良性病变组（t=2.637、2.460,P<0.05）及健康对照组（t=8.832、9.682, P<0.05）;NSCLC组%Tail DNA和OTM与患者病理类型及临床分期之间无关（P均>0.05）;NSCLC治疗有效患者治疗后淋巴细胞DSBs水平显著低于治疗前（P<0.05）。 结论：SCGE分析淋巴细胞DNA DSBs可能成为NSCLC辅助诊断和疗效评价的新指标。     

单细胞凝胶电泳法检测单细胞DNA损伤

单细胞凝胶电泳技术已广泛应用于单细胞ＤＮＡ损伤的检测。其实验原理在于损伤的ＤＮＡ在电场中从核内溢出，形成与细胞核“头部”相区别的“尾部”目前主要用形状指标、距离指标、强度指标、“矩”类指标等国类指标分析实验结果。     

单细胞凝胶电泳在DNA损伤与修复检测中的应用

ＤＮＡ损伤的程度与修复可能性在一定程度上决定细胞生死,其检测方法一直是人们关注的问题之一。虽然这方面的技术有多种,但简便、快速、经济且敏感的方法应首推单细胞凝胶电泳(ＳＣＧＥ),或称彗星(ｃｏｍｅｔ)实验。ＳＣＧＥ是第一个能有效检测单个细胞ＤＮＡ损伤的技术[1],现已广泛应用于离子射线损伤、自由基损伤、癌症放化疗、生物监测等领域。一、检测机理ＳＣＧＥ是一种在实践中发现的方法,其确切机理目前尚不清楚。一般认为,在通常情况下,ＤＮＡ双链以组蛋白为核心形成核小体,在核小体中ＤＮＡ为负超螺旋结构。如果有去污剂进入细胞,…     

单细胞电泳法检测肿瘤患者化疗后淋巴细胞DNA损伤

应用单细胞电泳 (SCGE)检测肿瘤患者环磷酰胺化疗后外周血T淋巴细胞DNA损伤。在标准SCGE条件下应用彗星图象分析系统定量分析人T淋巴细胞DNA的损伤程度。彗星图象分析研究结果显示 ,肿瘤患者外周血T淋巴细胞DNA损伤明显强于正常对照组 ,肿瘤患者外周血T淋巴细胞拖尾动量为 10 42± 1 98,正常人群为 1 2 6± 0 77;两者差异极显著 (P <0 .0 1)。肿瘤患者化疗后T淋巴细胞的拖尾长度为 3 3 69± 7 56μm ,DNA损伤的百分比为 3 1 5± 5 46% ;正常人群T淋巴细胞的拖尾长度和DNA损伤的百分比分别为 16 2± 1 5μm和7 46± 1 15% ;两组数据相比差异极显著 (P <0 .0 1)。结论 :单细胞电泳可快速灵敏地检测细胞DNA损伤 ,能用于肿瘤化疗患者的流行病学观察。对于指导临床用药和预后也有指导意义     

单细胞凝胶电泳法检测单细胞DNA损伤

单细胞凝胶电泳技术已广泛应用于单细胞DNA损伤的检测。其实验原理在于损伤的DNA在电场中从核内溢出，形成与细胞核“头部”相区别的“尾部”。目前主要用形状指标、距离指标、强度指标、“矩”类指标等四类指标分析实验结果。     

单细胞凝胶电泳技术的研究进展及其应用

单细胞凝胶电泳技术是一种快速、敏感、简便、廉价的在单细胞水平上检测真核细胞DNA损伤与修复的方法。本文总结了该实验技术的发展、基本原理、检测分析方法、优点及其应用前景。     

单细胞凝胶电泳技术的研究进展及其应用

单细胞凝胶电泳技术是一种快速、敏感、简便、廉价的在单细胞水平上检测真核细胞DNA损伤与修复的方法。本文总结了该实验技术的发展、基本原理、检测分析方法、优点及其应用前景。     

单细胞凝胶电泳技术在肿瘤学中的应用

单细胞凝胶电泳是近年来发展起来的检测有核细胞DNA损伤与修复的新技术，因其快速、灵敏、简便、廉价而受到广泛的应用。本文在该实验技术的发展、基本原理、检测分析方法、及在肿瘤学中的应用等方面进行综述。     

吡哆胺修复糖基化终产物诱导的脾淋巴细胞DNA损伤的实验研究

目的　观察吡哆胺 (PM)对糖基化终产物 (AGEs)诱导的脾淋巴细胞DNA损伤的修复情况。方法　采用单细胞凝胶电泳 (SCGE)技术 ,根据AGEs BSA浓度的不同所致离体小鼠脾淋巴细胞的DNA损伤进行研究 ,并对PM修复AGEs BSA诱导的DNA损伤不同时点的修复能力作了分析。结果　① 5 0、10 0 μg/mLAGEs BSA组脾淋巴细胞DNA迁移率与阴性对照组比较无显著性差异 (P >0 0 5 )。 2 0 0、4 0 0、80 0 μg/mLAGEs BSA组脾淋巴细胞DNA迁移率明显高于阴性对照组 (P <0 0 1) ,且两者呈正相关 (r=0 95 6 3)。②以能引起明显DNA断裂剂量 (2 0 0、4 0 0、80 0 μg/mL)的AGEs BSA作用小鼠脾淋巴细胞 ,PM最佳修复时点为 2h。结论　AGEs可引起离体脾淋巴细胞DNA链损伤 ,并存在一定的剂量 反应关系 ;PM对此有修复作用     

牛磺酸对经单细胞凝胶电泳技术检测人视网膜色素上皮氧化损伤的保护特征

目的：观察过氧化氢对人视网膜色素上皮细胞的氧化作用，以及牛磺酸对人视网膜色素上皮细胞的抗氧化作用。 方法：实验于2005—01／09在哈尔滨医科大学公共卫生学院中心实验室完成。①人眼视网膜色素上皮细胞来源：实验眼来自20—35岁男性意外死亡后12h内捐给黑龙江省眼库作为角膜移植的供体眼5眼，家属签署知情同意书。取8-10代人眼视网膜色素上皮细胞用于实验. ②过氧化氢损伤实验：将培养的细胞按随机数字表法分为5组：过氧化氢各浓度组分别加入终浓度为10，25，50，100μmol／L的过氧化氢，阴性对照组只加入等量的磷酸盐缓冲液。③牛磺酸实验：将培养的细胞按随机数字表法分为5组：阴性对照组用不含血清的DMEM-F12培养液培养，牛磺酸各浓度组分别用含有终浓度为300和600μmol／L的牛磺酸培养液进行培养。将上述每个浓度组的细胞悬液分成2份，向其中1份加入终浓度为25μmol几的过氧化氢，另一份加入等量的磷酸盐缓冲液。④指标检测：15min后，用单细胞凝胶电泳法检测人视网膜色素上皮细胞的DNA损伤的程度，以拖尾率（彗星细胞数／总细胞数）和拖尾细胞DNA迁移距离[400倍显微镜下测量25个拖尾细胞的DNA迁移长度，整个核DNA直径和迁移DNA（即彗星尾）长度，其差值为DNA迁移距离]的变化表示。⑤统计学分析：用四格表x^2检验（确切概论法）比较组间彗星细胞拖尾率；用t检验进行组间DNA迁移距离比较。 结果：①过氧化氢损伤实验结果：阴性对照组DNA荧光图像为红色圆球形，过氧化氢各组出现彗星样，随着过氧化氢浓度（10，25，50，100μmol／L）的增加，人视网膜色素上皮细胞拖尾率和DNA迁移距离均明显高于或长于阴性对照组[拖尾率：4．6％，26．0％，43．3％，86．6％，96．0％；DNA迁移距离：（4．13&;#177;0．52），（10．54&;#177;2．03），（20．59&;#177;4．42），（39．56&;#177;10．28），（51．54&;#177;15．93）μm，P〈0．01]。②牛磺酸实验结果：300和600μmol／L牛磺酸组视网膜色素上皮细胞拖尾率和拖尾细胞DNA迁移距离与阴性对照组相近（P〉0．05）。300和600μmol／L牛磺酸＋25μmol／L的过氧化氢组均明显低于或短于25μmol／L过氧化氢组[拖尾率：22．6％，20．0％，43．3％；DNA迁移距离：（17．46&;#177;7．13），（13．56&;#177;2．52），（20．59&;#177;4．42）μm，P〈0．05]，且牛磺酸浓度越高，差异越大。 结论：10μmol／L过氧化氢就能对人视网膜色素上皮细胞直接造成DNA断裂损伤，该作用呈剂量依赖性。适量的牛磺酸（300和600μmol／L）对人视网膜色素上皮细胞DNA的氧化断裂损伤起保护作用，该作用也呈剂量依赖性     

牛磺酸对经单细胞凝胶电泳技术检测人视网膜色素上皮氧化损伤的保护特征

目的:观察过氧化氢对人视网膜色素上皮细胞的氧化作用,以及牛磺酸对人视网膜色素上皮细胞的抗氧化作用。方法:实验于2005-01/09在哈尔滨医科大学公共卫生学院中心实验室完成。①人眼视网膜色素上皮细胞来源:实验眼来自20～35岁男性意外死亡后12h内捐给黑龙江省眼库作为角膜移植的供体眼5眼,家属签署知情同意书。取8～10代人眼视网膜色素上皮细胞用于实验。②过氧化氢损伤实验:将培养的细胞按随机数字表法分为5组:过氧化氢各浓度组分别加入终浓度为10,25,50,100μmol/L的过氧化氢,阴性对照组只加入等量的磷酸盐缓冲液。③牛磺酸实验:将培养的细胞按随机数字表法分为5组:阴性对照组用不含血清的DMEM-F12培养液培养,牛磺酸各浓度组分别用含有终浓度为300和600μmol/L的牛磺酸培养液进行培养。将上述每个浓度组的细胞悬液分成2份,向其中1份加入终浓度为25μmol/L的过氧化氢,另一份加入等量的磷酸盐缓冲液。④指标检测:15min后,用单细胞凝胶电泳法检测人视网膜色素上皮细胞的DNA损伤的程度,以拖尾率(彗星细胞数/总细胞数)和拖尾细胞DNA迁移距离[400倍显微镜下测量25个拖尾细胞的DNA迁移长度,整个核DNA直径和迁移DNA(即彗星尾)长度,其差值为DNA迁移距离]的变化表示。⑤统计学分析:用四格表χ2检验(确切概论法)比较组间彗星细胞拖尾率;用t检验进行组间DNA迁移距离比较。结果:①过氧化氢损伤实验结果:阴性对照组DNA荧光图像为红色圆球形,过氧化氢各组出现彗星样,随着过氧化氢浓度(10,25,50,100μmol/L)的增加,人视网膜色素上皮细胞拖尾率和DNA迁移距离均明显高于或长于阴性对照组[拖尾率:4.6%,26.0%,43.3%,86.6%,96.0%;DNA迁移距离:(4.13±0.52),(10.54±2.03),(20.59±4.42),(39.56±10.28),(51.54±15.93)μm,P<0.01]。②牛磺酸实验结果:300和600μmol/L牛磺酸组视网膜色素上皮细胞拖尾率和拖尾细胞DNA迁移距离与阴性对照组相近(P>0.05)。300和600μmol/L牛磺酸 25μmol/L的过氧化氢组均明显低于或短于25μmol/L过氧化氢组[拖尾率:22.6%,20.0%,43.3%;DNA迁移距离:(17.46±7.13),(13.56±2.52),(20.59±4.42)μm,P<0.05],且牛磺酸浓度越高,差异越大。结论:10μmol/L过氧化氢就能对人视网膜色素上皮细胞直接造成DNA断裂损伤,该作用呈剂量依赖性。适量的牛磺酸(300和600μmol/L)对人视网膜色素上皮细胞DNA的氧化断裂损伤起保护作用,该作用也呈剂量依赖性     

The electrophoretic mobility test with myelin basic protein,binding of125I-MBP to lymphocytes,and gel electrophoresis pattern of supernatant during incubation

Lymphocytes from seven patients with malignancies, from seven patients with non-malignancies, and from five healthy persons were incubated with 125I-labeled MBP. Binding of MBP of lymphocytes was monitored from 0.5 to 20h. The binding ranged from 4 to 7% of the total MBP present and remained fairly constant during the first 4h of incubation. It dropped considerably at 20h. Mean percentages of MBP binding were lower in cancer patients than in persons without malignancies. After incubation, the supernates were examined by gel electrophoresis. The electrophoretic pattern was similar in comparing groups with different diagnoses. A considerable loss of MBP in the terminal supernatant (20h) was found. When tested in the electrophoretic mobility test (EM test) with stabilized erythrocytes, supernatant derived from cancer patients produced a somewhat higher mean slowing effect than did superntes from other patients and controls.     

Characterization of serum alkaline phosphatase isoenzymes by affinity electrophoresis in agarose gel containing lectin combined with agar gel electrophoresis

The combined use of affinity electrophoresis in agarose gel containing lectin and of agar gel electrophoresis for the quantitation of liver, bone, biliary and intestinal alkaline phosphatase isoenzymes is described. Sera from patients with various diseases and from normal subjects (blood donors) have been analyzed. Data from normal subjects show that the bone isoenzyme is the predominant fraction (about 62%) in adults. The relative proportions of the alkaline phosphatase isoenzymes are similar in both sexes in adulthood (21-50 years). The higher alkaline phosphatase activity found in men than in women (ages 21-50 years) is due to higher values for both liver and bone isoenzymes. The difference between men and women tends to decrease after the age of 50 mainly due to an increase of the bone isoenzyme in women.     

Genomic DNA fingerprinting by pulsed-field gel electrophoresis for study of nosocomial infection caused by methicillin-resistant Staphylococcus aureus]

In this study, we have compared genomic DNA fingerprintings among isolates of methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) by using pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). Chromosomal fragments digested with Sma I were most suitable for the PFGE separation, giving 15-20 fragments of sizes ranging from about 30-1,500 kb. Thirty-one distinctive fragment patterns were identified in 111 isolates of MRSA. On the basis of the genomic typing by PFGE, we performed an epidemiological investigation of an outbreak of nosocomial MRSA infection among 18 inpatients in Nagoya University Hospital. Ten types of chromosomal digestion were identified in 21 isolates of MRSA. The clarity and polymorphism of the chromosomal digestion patterns enabled us to discriminate between isolates. Classification of the genomic DNA fingerprinting patterns by PFGE is therefore proposed as a useful method for investigating the source, transmission, and spread of nosocomial MRSA infections.