转化生长因子—α表皮生长因子受体反义寡聚核苷酸抑制人大肠癌细胞增殖的

目的 探讨转化生长因子－α（ＴＧＦ－α）、表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）反义寡脱氧核苷酸（ＡＳＯＤＮ）对人大肠癌细胞株ＨＲ８３４８的作用。方法 将ＴＧＦ－α、ＥＧＦＲ反义寡核苷酸经脂质体包裹后转染人大肠癌细胞（浓度均为１０ｕｍｏｌ／Ｌ）。采用四唑蓝比色法（ＭＴＴ法）、细胞周期分析、裸鼠体内接种等方法测定瘤细胞体内外增殖的变化。结果 ＴＧＦ－α反义ＯＤＮ、ＥＧＦＲ反义ＯＤＮ均可明显抑制ＨＲ８３４８的增殖（抑制率分别为８０．０％、８２．５％），并使裸鼠体内成瘤率下降（均为２０．０％；对照组为１００．０％）。Ｇ０／Ｇ１期细胞数明显增多（分别为６３．９％、６７．１％；对照组为３１．１％），Ｓ期细胞数相应减少（分别为３５．６％、３２．６％；对照组为５３．９％）。结论 ＴＧＦ－α反义ＯＤＮ、ＥＧＦＲ反义ＯＤＮ均能有效抑制大肠     

表皮生长因子受体和转化生长因子-α在前列腺癌表达中的临床意义

目的 :探讨表皮生长因子受体 (EGFR)和转化生长因子 -α(TGFα)在前列腺癌 (PCa)中表达的临床意义。方法 :采用免疫组化法检测 43例 PCa组织和 5例正常前列腺组织中 EGFR和 TGFα的表达。结果 :正常前列腺组织中 EGFR和 TGFα分别表达在上皮细胞和基质中。 EGFR和 TGFα在 PCa细胞上的共同表达率为5 5 .8% ,二者密切相关 (r =0 .5 19) ,并与 PCa分期有关 (P <0 .0 1) ;此类患者的生存时间明显短于 EGFR和TGFα阴性表达的患者 (P <0 .0 1)。结论 :EGFR和 TGFα形成的自分泌环可能与 PCa恶化和内分泌治疗失败有关 ,同时检测它们可作为判断 PCa临床分期、预后的一个重要指标。     

转化生长因子和表皮生长因子受体在人膀胱癌中的表达

通过分子杂交方法，对膀胱癌产体肿瘤（人）进行ＴＧＦα，ＴＧＦβ和ＥＧＦＲ ｍＲＮＡ表达的研究。结果显示：９例膀胱癌均有ＴＧＦαｍＲＮＡ不同程度的表达，１例癌０旁正常对照未见表达。５对样品（肿瘤和癌旁正常组织自身对照）ＴＧＦββｍＲＮＡ均有表达，其中４例肿瘤样品比自身癌旁正常组织对照量更高。９例肿瘤样品中４例ＥＧＦＲ高表达，均为恶性程度高的肿瘤。由此推测：ＴＧＦαｍＲＮＡ高表达是肿瘤发生发展的早期表     

表皮生长因子受体和转化生长因子—α在前列腺癌表达中的临？…

目的：探讨表皮生长因子本（ＥＧＦＲ）和转化生长因子－α（ＴＧＦα）在前列腺癌（ＰＣａ）中表达的临床意义。方法；采用免疫组化法检测４３例ＰＣａ组织和５例正常前列组织中ＥＧＦＲ和ＴＧＦα的表达。结果：正常前列腺组织中ＥＧＦＲ和ＴＧＦα和ＴＧＦα分别表达在上皮细胞和基质中，ＥＧＦＲ和ＴＧＦα在ＰＣａ细胞上的共同表达率为５５．８％，二者密切相关，并与ＰＣａ分期有关；此类患者的生存时间明显短于ＥＧＦＲ和ＴＧ     

反义寡聚核苷酸抑制人膀胱癌T24细胞系端粒酶活性的研究

目的研究反义寡聚核苷酸(asONs)能否抑制人膀胱肿瘤T24细胞系端粒酶活性和增殖活性。方法设计并合成2条针对端粒酶RNA模板区的asONs片段,在其作用于T24细胞第5天时,用7复孔法用聚合酶链反应-酶标法(PCR-ELISA)检测其对端粒酶活性的影响;分别在实验的第1、3、5、7天,用7复孔四唑盐比色试验(MTT)法检测其对细胞增殖活性的影响。结果经不同浓度(0、5、10μmol/L)处理5d后T24细胞端粒酶活性受到抑制,吸光度(A)值分别为0.79±0.10、0.24±0.14;经10μmol/L处理1、3、5、7d,T24细胞的增殖活性逐渐下降,A值分别为0.59±0.11、0.39±0.09、0.21±0.02、0.19±0.07,各组分别比较差异有非常显著性(P＜0.001)。结论asONs能够同时抑制人膀胱肿瘤T24细胞系端粒酶及细胞增殖活性,提示asONs可能通过抑制端粒酶活性达到抑制人膀胱肿瘤T24细胞系的增殖。     

转化生长因子调控表皮生长因子受体在雄激素非依赖型前列腺癌细胞中表达的意义

目的 :探讨转化生长因子 (TGF)α对前列腺癌雄激素非依赖型细胞系中表皮生长因子受体 (EGFR)表达的调控。　方法 :采用逆转录 多聚酶链式反应和Western印迹法对TGFα刺激前列腺癌雄激素非依赖型细胞系PC3、ARCaP后EGFRmRNA表达及其蛋白水平进行定量分析。　结果 :TGFα引起PC3、ARCaP的EGFRmRNA表达升高 ,分别为 5 .0 1± 0 .4 5和 9.0 5± 0 .6 3,明显高于对照组 (P <0 .0 5 )。PC3细胞系TGFα治疗后EGFR蛋白水平为 2 .2 8±0 .5 3,明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ;而ARCaP细胞系TGFα治疗后EGFR仅为 1 .2 4± 0 .2 2 ,和对照组比较无差别 (P >0 .0 5 )。　结论 :TGFα可以明显提高前列腺癌细胞的EGFR表达量 ;TGFα EGFR自分泌环参与雄激素非依赖型前列腺癌的形成     

DNA聚合酶α反义寡聚脱氧核苷酸抑制人胃癌细胞生长的研究

反义药物的研究为肿瘤的特异性治疗开拓了广阔的前景。DNA聚合酶α是真核细胞DNA合成的关键酶,与肿瘤的发生及发展密切相关。我们用DNA聚合酶α(DNA pol-α)mRNA作靶核酸,合成反义聚脱氧核苷酸(ASODN),作用于胃癌细胞系SGC-7901和MGC-803,结果发现互补于pol-α mRNA翻译起始区的ASODN可特异地抑制二株人胃癌细胞系的生长,而对正常人脐静脉内皮细胞则不起作用。流式细胞仪分析癌细胞G0/1期比率升高,S期及G2M期比率降低,说明ASODN通过抑制DNA pol-α表达而抑制了细胞DNA合成。     

RNA干扰靶向抑制表皮生长因子受体表达对大肠癌细胞增殖的影响

目的观察RNA干扰（RN加）技术能否有效抑制大肠癌LoVo细胞株表皮生长因子受体（EGFR）的表达以及对细胞增殖的影响。方法构建质粒表达载体pU6-EGFR-shRNA-1和pU6-EGFR-shRNA-2；脂质体瞬时转染后24、48、72、96、144h实时荧光定量PCR（Real Time PCR）和Western blot检测EGFR表达，流式细胞仪检测细胞周期和凋亡，并绘制细胞生长曲线；分5组：A组：Lov0细胞组；B组：Lipofectamine2000组；C组：对照载体HK组；D组：pU6-EGFR-shRNA-1组；E组：pU6-EGFR-shRNA-2组。结果D组E组细胞转染shRNA后mRNA和蛋白表达降低，G0～G1期细胞增加，S期细胞减少，细胞凋亡率增加，对数生长期延迟，以48h效果最显著，和A组B组C组比较差异有统计学意义（P〈0．05）；但随着时间的推移其干扰作用降低。结论两条EGFR-shRNA均可有效抑制大肠癌LoVo细胞EGFR表达，阻滞更多的细胞位于Go～G1期，促进细胞凋亡而抑制细胞增殖。     

反义寡脱氧核苷酸逆转人肝癌多药耐药性的实验研究

目的：探讨坂义寡脱氧核苷酸（ASPODNs)对人肝癌多药耐药基因（MDR）的逆转作用,方法：ASPONs作用于肝癌MDR细胞模型后,用MTT法检测其逆转作用,用逆转录PCR和流式细胞术检测其对4种MDR基因表达的影响,结果：ASPODNs抑制DR基因的表达存在时间－效应和剂量－效应关系,对单基因MDR细胞药性的逆转率为90．26％－100％,对多重MDR细胞耐药性逆转率70．09％－100％,结论：多种ASPODNs联合逆转多重MDR具有可行性并取得明显效果。     

分化抑制因子2和表皮生长因子受体及人类表皮生长因子受体2在结直肠癌组织中的表达及其意义

目的 研究分化抑制因子2(Id2)、表皮生长因子受体(EGFR)及人类表皮生长因子受体2(Her-2)在结直肠癌中的表达以及与患者预后的关系.方法 采用PV6000二步法检测359例结直肠癌及35例癌旁正常组织中Id2、EGFR及Her-2的表达.结果 (1)结直肠癌组织中Id2的阳性率为68.0%,EGFR的阳性率为64.9%,二者在结直肠癌组织中的表达均显著高于癌旁正常组织中的表达(P值均＜0.05).Her-2在结直肠癌组织中的阳性率为1.7%,与癌旁正常组织中的阳性率相比差异无统计学意义(P=0.441).(2)Id2的阳性表达与患者的TNM分期、组织学分级、肿瘤组织的肠壁浸润深度、淋巴结转移情况以及腹腔和远处转移情况等相关(P值均＜0.05).(3)Id2阳性表达组的无瘤生存时间较阴性表达组短(P=0.002),阳性表达组的5年生存率低于阴性组(P=0.001).结论 Id2可能在结直肠癌的发生、发展及转移中发挥重要作用,可以作为评价结直肠肿瘤生物学行为及判断预后的指标之一.     

转化生长因子α、表皮生长因子受体和p21蛋白在胰腺癌中的表达及其意义

目的　研究在胰腺癌不同临床分期和癌前病变中转化生长因子α (TGFα)、表皮生长因子受体 (EGFR)的表达情况及其与p2 1蛋白表达的关系。方法　应用免疫组织化学LSAB法检测 6 7例胰腺导管癌和 12例伴不典型增生的慢性胰腺炎组织中TGFα、EGFR和p2 1蛋白的表达。结果　TGFα和EGFR在不典型增生的慢性胰腺炎组织中表达阳性率分别为 83% (10 / 12例 )、75 % (9/ 12例 ) ,其共表达率为 75 % (9/ 12 ) ,显著高于正常胰腺组织 (P <0 0 1) ,与胰腺癌组织中的表达阳性率相比差异无显著意义 (P >0 0 5 )。早期胰腺癌中TGFα和EGFR的表达阳性率分别为 79%和 76 % ,高于晚期胰腺癌的 39%和 5 5 % (P <0 0 1)。TGFα与EGFR共同表达组细胞核增殖抗原计数值为 6 7± 8,显著高于非共同表达组的 39± 7(P <0 0 1)。TGFα表达与p2 1蛋白表达有明显的相关性 (P <0 0 5 )。结论　TGFα和EGFR的过量表达发生于胰腺癌的早期 ,与胰腺癌的起源有关。TGFα与p2 1蛋白的表达在胰腺癌的发生过程中起协同作用。     

反义寡核苷酸抑制早期生长反应基因1表达对移植静脉内膜增生的影响

目的 研究反义寡脱氧核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides,ASODN)抑制早期生长反应基因1(early growth response gene-1,Egr-1)表达对移植静脉血管平滑肌细胞增殖和内膜增生的影响.方法构建Egr-1 ASODN,建立自体静脉移植模型,Egr-1 ASODN转染移植静脉,术后随机分为1、2、6、24 h,3、7、14、28、42 d组,以未应用Egr-1 ASODN的大鼠为对照组.荧光显微镜检测Egr-1 ASODN转染移植静脉情况;应用原位杂交和RT-PCR方法检测Egr-1 mRNA的表达;联合应用免疫组织化学方法和Western blot检测Egr-1蛋白表达情况.结果 实验组移植1 h,Egr-1 ASODN主要位于移植静脉的外膜、中膜和部分内皮细胞(荧光灰度值为67±11),移植2 h至24 h,Egr-1 ASODN则主要位于移植静脉的中膜,移植7 d,Egr-1 ASODN主要位于移植静脉的内膜.移植后期未检测到Egr-1 ASODN的表达.Egr-1 mRNA的表达只呈现一个高峰(基因表达值1.8±0.5).移植早期Egr-1蛋白表达主要位于中膜的VSMC、部分单核细胞和内皮细胞,而移植后期在中膜和新生内膜的VSMC都未检测到Egr-1蛋白的表达.与对照组相比VSMC的增殖程度和内膜厚度均明显减轻(P＜0.01).结论 Egr-1 ASODN可显著抑制移植静脉的内膜增生,其作用可能是通过抑制Egr-1基因及其蛋白产物表达,从而抑制VSMC增殖、促进其凋亡而实现的.     

转化因子-α及表皮生长因子受体在胃肠道间质瘤中的表达

目的　研究表皮生长因子受体 (EGFR)及转化因子 (TGF α)与胃肠道间质瘤 (GIST)的发生发展关系。方法　采用免疫组织化学方法观察 3 1例GIST(其中 9例恶性间质瘤 ,8例良性间质瘤 ,14例潜在恶性间质瘤 )的EGFR、TGF α的表达情况。结果　EGFR在恶性间质瘤、潜在恶性间质瘤、良性间质瘤 3组中的免疫组织化学方法检出率分别为 88.89%、64 .2 8%、3 7.5 0 % ,后两组与恶性间质瘤组相比差异有显著性 (P <0 .0 5 )。 80 .65 %胃肠道间质瘤表达TGF α ,良性、潜在恶性、恶性的TGF α表达差异无显著性 (P >0 .0 5 )。所有EGFR阳性的GIST均TGF α表达阳性。结论　EGFR在恶性间质瘤中有较高水平的表达 ,在潜在恶性间质瘤中亦呈较高表达 ,表明EGFR在恶性GIST的发生发展中起着重要的作用。GIST存在生长因子自泌循环 ,可能是癌细胞失控生长的主要原因之一     

端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人肝癌细胞生长抑制的研究

本实验旨在探讨端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸 (ＡＳＯＤＮ ｔ)抑制端粒酶活性[1] ,诱导肝癌细胞凋亡 ,从而抑制肝癌细胞生长的作用[2 ] ,为肝癌基因治疗提供依据 ,现将结果报道如下。一、材料和方法1.ＡＳＯＤＮ ｔ对细胞抑制作用的观察 :取 2× 10 7个 /Ｌ对数生长期肝癌细胞 (肝癌细胞株ＳＭＭＣ 772 1引自中国科学院上海细胞生物研究所细胞库 )接种于 96孔的细胞培养板中 ,每孔 10 0 μｌ,设3个复孔。分别加入ＡＳＯＤＮ ｔ(上海生工生物工程公司合成 ,序列为 5’ ＣＴＣＡＧＴ ＴＡＧＧＧＴＴＡＧＡＣＡ 3’ ,调节其终浓度分别为 1、2、3…     

转化生长因子α及表皮生长因子受体与Ki-67在肾母细胞瘤组织中的表达及意义

目的 探讨转化生长因子-α（TGF-α）、表皮生长因子受体（EGFR）和增殖相关抗原Ki-67在肾母细胞瘤组织中的表达及意义。方法 应用免疫组化方法检测8例正常肾组织、35例肾母细胞瘤组织和14例瘤旁组织中TGF-α、EGFR和Ki-67的表达，比较其在3种组织中及不同病理学特征的肾母细胞瘤组织中的表达差异。结果 肾母细胞瘤组织中TGF-α、EGFR和Ki-67阳性表达率分别为51．4％（18／35）、62．9％（22／35）和68．6％（24／35），显著高于瘤旁组织（14．3％、28．6％、7．1％）和正常肾组织（P〈0.05）。TGF-α、EGFR和Ki-67表达与肾母细胞瘤患儿性别、年龄、病理学分型、肿瘤大小和部位无关（P〉0．05），与临床分期明显相关（P〈0．05）。Speαrman相关分析提示TGF-α、EGFR和Ki-67间呈正相关关系。结论 TGF-α／EGFR自分泌环路在肾母细胞瘤发生发展中起重要作用，并与肿瘤细胞增殖密切相关。     

转化生长因子βⅡ型受体在病理性瘢痕表皮组织中的基因表达研究

目的 了解病理性瘢痕表皮组织中TGF-βⅡ型受体(TβRⅡ)的基因表达.方法 20份病理性瘢痕标本收集于2007 -2009年济南军区总医院收治的20例烧伤或外伤瘢痕患者,于每份瘢痕标本中央和边缘部位分别切取1块表皮组织.每例患者留取1块距离病变部位10 cm以上的正常皮肤组织标本作为自身对照1.抽取每例患者1 ～2 mL全血并分离提取血清,作为自身对照2.另取8例无病理性瘢痕病史患者术中弃用的8份正常皮肤组织标本作为正常对照.生物素-链霉亲和素-过氧化物酶染色法检测3种组织标本中TβRⅡ的阳性表达.经PCR-单链构象多态性分析、基因测序,对比观察各标本中TβRⅡ的基因表达.对数据行Fisher确切概率法检验.结果 免疫组织化学染色结果显示,病理性瘢痕表皮组织标本中TβRⅡ阳性表达明显低于自身对照1和正常对照组织标本,主要位于表皮的基底层,而棘层、颗粒层和角质层中TβRⅡ阳性表达很少或缺失.在自身对照1、自身对照2和正常对照标本中未见TβRⅡ基因异常表达;在8份病理性瘢痕表皮组织标本中,TβRⅡ多聚A位点的片段出现条带泳动异常,基因测序显示DNA片段缺失1个A(P=0.044).结论 病理性瘢痕表皮组织中可能存在TβRⅡ基因的异常表达.瘢痕表皮回植可能会增加病理性瘢痕复发的风险,而切取瘢痕患者正常皮肤植皮修复创面可能不会增加瘢痕复发的风险.     

反义转化生长因子-β1基因逆转骨肉瘤细胞恶性表型的研究

目的　观察反义转化生长因子 (TGF) β1基因对骨肉瘤细胞恶性表型的逆转作用。方法　将反义TGF β1基因转染骨肉瘤细胞MG 63后 ,以G418(4 0 0mg/L)筛选 14d ,获得转染细胞系。分别检测细胞周期、细胞凋亡和明胶酶A(MMP 2 )表达 ,并观察转染细胞软琼脂克隆形成数和裸鼠体内致瘤能力。结果　与MG 63和空载体转染细胞MG pcDNA3相比 ,反义基因转染细胞MG TGF β1(-)的G0 /G1期细胞从 5 6.2 %和 60 .1%增至 71.6% ,S期细胞从 19.1%和 17.8%降至 12 .9% ,MMP 2mRNA表达明显减少。MG TGF β1( )的软琼脂克隆形成数从 48.6± 8.1和45 .2± 4.7减至 2 8.2± 5 .6,裸鼠体内形成肿瘤的体积 (83 .4± 2 7.4)mm3 也明显小于MG 63组(191.3± 2 1.5 )mm3 和MG pcDNA3组 (2 0 4.2± 3 0 .7)mm3 。结论　反义TGF β1基因转染骨肉瘤细胞可以逆转肿瘤细胞的恶性表型 ,抑制肿瘤的侵袭和转移。     

反义寡聚脱氧核糖核苷酸对猪促卵泡刺激素受体表达的影响

目的 :本研究旨在评价反义寡聚脱氧核糖核苷酸 (ODN)对促卵泡刺激素受体 (FSHR)mRNA表达的调节作用。　方法 :转染FSHR的CHO细胞系的mRNA水平用反转录 竞争性PCR方法进行定量测定。　结果 :结果显示用 10 μmol/L反义ODN可导致mRNA表达显著上升 ,2 4h后mRNA水平从 0 89± 0 0 6pg/ μg总RNA升至 1 6 4±0 0 8pg/ μg总RNA(P <0 0 5 )。用 0 33μmol/L反义ODN进行脂转染也得到相同结果 ,mRNA水平从 0 95± 0 0 8pg/ μg总RNA升高至 1 5 3± 0 0 7pg/ μg总RNA。这可能是由于FSHR蛋白翻译被抑制后上行调节mRNA合成所致 ,无义ODN对FSHRmRNA的表达没有任何作用。　结论 :本文结果提示针对猪FSHR翻译起始位点的反义ODN能上行调节猪FSHRmRNA的表达水平。