接触性生物物证法医DNA检验的影响因素分析

本文首先对法医DNA检验现状进行详细分析,其次阐述接触性生物物证DNA检验常见方法,最后通过对接触性生物物证法医DNA检验影响因素的探讨,意在表述接触性DNA检验的价值。     

DNA分子标记技术及其在法医学中的应用

自20世纪80年代DNA分子标记技术诞生以来,DNA作为物证材料在案件侦破、司法鉴定等方面发挥了重要的作用.随着DNA检测技术、PCR技术的发展,检验标记的增多,理论的不断完善,法医DNA检验技术向着准确、灵敏、自动化的方向发展,使得法医DNA技术能够越来越好地满足刑事侦查和司法审判的需要.     

多聚酶链反应(PCR)在法医生物学检材鉴定中应用及前景

目的：把多聚酶链反应(PCR)应用在法医生物学检材中进行遗传标志的分型检测。方法：运用体外DNA扩增技术，选择不同的耐热DNA聚合酶，改进缓冲液成分及循环条件等。结果：已达到接近个体绝对认定。结论：如果找到一种能停留在模板DNA链上相对更长时间、合成速度更快的DNA聚合酶，将进一步推动(PCR)的发展。     

山西省高平地区汉族人群19个短串联重复系列基因座遗传多态性调查

目的:调查19个短串联重复系列(STR)基因座在山西省高平市汉族人群中的遗传多态性,并对其法医学应用进行评价。方法:采用Goldeneye20A STR荧光标记复合扩增试剂盒,对山西省高平市汉族210份无关个体进行扩增,利用3130XL遗传分析仪对扩增产物进行电泳分型,统计D19S433等19个STR基因座的等位基因频率和法医遗传学数据。结果:获得19个STR基因座的等位基因频率分布,分别检出10,9,15,13,13,6,8,7,7,7,10,8,9,5,17,6,11,13,17个等位基因,并分别获得19个STR基因座的杂合度观察值(Ho)、杂合度期望值(He)、个人设别能力(DP)、偶合率(PM)、非父排除率(PE)及多态信息总量(PIC)等法医遗传学参数,累积个人识别率和累积非父排除率分别为1~1.49×10-22和0.999 999 993。结论:Goldeneye20A STR荧光标记复合扩增体系的19个STR基因座在山西省高平市汉族人群中具有较高的个体识别能力和遗传多态性,对于法医学个体识别和亲子鉴定具有重要的应用价值。     

Chelex-100法提取DNA用于差异甲基化基因座检测的研究

目的通过对Chelex一100提取法提取的DNA用于酶切的研究,为差异甲基化在法医实际工作中的应用性研究提供一种快速提取酶切底物的方法。方法HhaI酶切基因组DNA,PCR扩增,2％琼脂糖凝胶电泳检测,254nm紫外灯下观察。结果Chelex一100提取法提取的杂合子样本DNA加酶组只观察到来自父源的等位基因片段,而未加酶组能够观察到来自父源和母源的等位基因片段。结论Chelex一100提取法提取的DNA能够作为酶切底物应用于差异甲基化基因座的研究。     

使用碱裂解法快速提取药材DNA方法的研究

目的:建立药材DNA快速提取方法。方法:使用碱裂解缓冲液提取药材DNA,考察提取液配方组成和中和剂种类对药材DNA纯度、浓度的影响。利用优化提取液提取了144个中药材DNA,动物药使用COⅠ、植物药使用psbA-trnH通用引物进行PCR扩增。结果:0.5 mol.L-1氢氧化钠、1%PVP和1%Triton×100具有最佳的DNA提取效果。对144个中药材进行PCR扩增,利用琼脂糖凝胶电泳可检测到123个中药材DNA的PCR产物。碱裂解法可用于快速提取蛇类药材DNA,并成功用于乌梢蛇、金钱白花蛇的分子鉴定。结论:优化的碱裂解法可用于提取中药材基因组DNA,其提取时间可控制在10 min左右,且避免了酚、三氯甲烷等对人体有毒试剂的使用,对药材快速分子鉴定体系的建立将发挥重要作用。     

反义抑制PCR检测乙肝病毒G1896A变异株方法的研究

目的:研究和评估反义抑制PCR检测乙型肝炎病毒(HBV)基因前C区1896位点变异株的方法。方法:根据HBV DNA前C区1896位点碱基的突变,设计一系列引物,其中之一是针对该HBV DNA1896位点野生型碱基的反义引物,PCR扩增时,通过对1896位点野生型碱基序列的竞争性抑制,而阻滞野生株DNA的扩增,从而仅对HBV DN A1896位变异的碱基序列扩增,特异性检测变异株。为了评估该方法的特异性,使用限制性内切酶方法对检测结果进行对比。结果:该方法检测HBV G1896A变异株具有特异性,而且检测的最低值可达5×104IU/ml。对慢性乙肝病例82份,检出突变型样本21例,阳性率25.61%,与限制性内切酶方法检测比较,经统计学处理,χ2检验评价两者无显著意义。结论:该法在对HBV临床标本1896位点变异株检测中特异和灵敏,是一种有效的检测方法。     

8种不同检材提取DNA的结果分析

在对不同检材提取、扩增、检测DNA中，如何对样本快速、正确、高效地提取出高质量的DNA图谱结果是影响DNA检验质量和效率的关键。目前DNA提取的方法有多种，其中磁珠法与ehelex-100提取法在各实验室的DNA提取检测方法比较常见。通过反复比较各种检材DNA提取方法的易操作性和结果的稳定性，确立了以磁珠法提取DNA的方法为主，ehelex-100法为辅的一系列提取方法。通过对不同检材样本的分析，选择用不同方法提取DNA。针对样本的质地、质量、数量等原因的不同，选择不同方法提取DNA，对检验结果有实际指导意义，在最后分析阶段也有不同的效果。     

POR-RFLP分析16s～23s rDNA间区序列鉴定分枝杆菌菌种

目的 探讨16s～23s rDNA间区序列DNA PCR扩增和限制性酶切分析在分枝杆菌分类鉴定中的价值.方法 对19种分枝杆菌标准株的16s～23s rDNA间区序列DNA进行PCR扩增并对扩增产物进行限制性内切酶Hae Ⅲ、MSP1消化反应,分析不同菌种扩增片段及其限制性片段长度多态性的差异.结果 PCR扩增结果显示:分枝杆菌一般扩增出1～2条带,缓慢生长分枝杆菌扩增片段在340～480bP,快速生长分枝杆菌扩增片段集中在470～575 bP,单从扩增产物的琼脂糖凝胶电泳只能鉴定33.3%的受试菌种,酶切结果显示:分枝杆菌的酶切图谱彼此不同.结论 16s～23s rDNA间区序列DNA PCR扩增和RFLP分析是分枝杆菌分类鉴定的一种快速、有效的方法.     

应用线粒体12srRNA和COX-1基因进行种属鉴定

目的以线粒体DNA为目标序列,探讨生物检材的种属来源问题。方法收集人和7种动物的血液或肌肉组织样本,提取DNA定量后,复合扩增线粒体12srRNA和COX-1基因片段,2%琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物谱带。结果人类DNA扩增产物分别为436 bp、277 bp两条谱带,而鼠、鸡、猪、兔、猫、狗、羊的扩增产物仅有一条谱带,430～450 bp,即动物基于COX-1基因片段无扩增产物。结论复合扩增线粒体12srRNA和COX-1两基因片段进行种属鉴定,方法简单,灵敏度较高,可应用于法医学实践。     

RT-PCR法检测SARS的临床诊断意义

目的 探讨早期、快速诊断严重急性呼吸综合症(SARS)的实验室诊断方法。方法 在己经确诊为SARS的100例患者中随机抽取40例作为实验组;随机抽取40例正常人作为对照组:从标本中提取RNA,经反转录和巢式PCR扩增出相应大小的DNA片段。对这些片段克隆后进行DNA序列分析,并将序列与SARS冠状病毒和其他己知冠状病毒进行同源性分析。结果 对照组的阳性率为1%,病人组的阳性率为80%,经卡方检验X2=5.1,P<0.05有显著性差异。结论 该方法对临床早期诊断有一定的意义。     

联合应用逆转录-聚合酶链反应检测丙型肝炎病毒RNA

RNA聚合酶链反应(PCR)通常需要逆转录(RT)和DNA扩增两个独立反应系统,作者报道联合应用RT-PCR检测丙型肝炎病毒(HCV)RNA的方法,利用嗜热细菌(Thermusthermophilus)的耐热DNA聚合酶在锰存在情况下同时具有逆转录酶的活性,在同一反应系统不同温度下进行反转录和DNA扩增。为评估该方法的敏感性和扩增效率,作     

DTT在chelex-100提取法提取人精液DNA中的实验研究

目的:研究DTT(二硫苏糖醇)在提取人类精液DNA过程中对DNA图谱均衡性影响.方法:利用chelex-100提取法分别提取,应用PCR技术扩增同源基因,并采用五色荧光素标记技术,对其Amelogemin和15个STR座基因进行检测.结果:DTT在检验精液DNA过程中发挥了重要作用,峰值在2000左右,均衡性很好,无杂峰.结论:DTT在提取精液DNA过程中可作为还原剂使其二硫基断裂,还原成-SH,为五色荧光素标记技术提供模版支持,DTT的加入大大提高检测结果的准确性.     

从极少量人血凝块中快速提取基因组DNA的方法

目的建立从极少量血凝块中快速提取基因组DNA的方法,并对其应用价值进行评价。方法分别对TIANamp基因组DNA提取试剂盒和TaKaRa全能基因组DNA提取试剂盒进行方法改良,并提取DNA,比较2种方法提取DNA的含量和纯度;并用人P450酶系的CYP3A4＊4引物对提取的DNA进行PER扩增,检测生物活性。结果用TaKaRa全能基因组DNA提取试剂盒提取的DNA在含量、纯度和生物活性上均优于用TIANamp基因组DNA提取试剂盒提取的DNA。结论应用TaKaRa全能基因组DNA提取试剂盒可以对极少量的血凝块进行基因组DNA提取,方法简便快速,在分子生物学研究中有重要的实际意义和推广价值。     

浅谈聚合酶链反应在输血医学中的应用

聚合酶链反应简称——PCR技术.是近年来发展的一种体外高效扩增特异DNA或RNA序列的新技术.1985年由美国cetus公司创建以来,很快就成为分子生物学发展史上的又一里程碑.目前,我国仅有部分大、中型医院在开展此项工作.但由于技术操作工程较复杂,成本也较高.无法用于输血工作中对献血员的筛选.现就PCR技术在现代输血中的主要作用进行以下几方面的简述.1 聚合酶链反应技术1.1一般程序PCR技术与常规的分子生物技术在扩增靶DNA方面的比较,前者在方法上简便而快速.其一般程序包括:①模板DNA的提取.②引物的设计.③靶DNA的扩增.④扩增产物的分析判断.目前已有许多检测方法可用PCR扩增产物和测定.这些方法在灵敏度、特异型以及具体应用还是比较好     

适用于不同产地半夏药材的特异性引物PCR鉴定分析方法

目的:通过特异性引物PCR技术,建立不同产地半夏药材通用的聚合酶链式反应(PCR)鉴别法。方法:提取不同产地半夏药材的基因组DNA,利用特异性引物对基因组DNA进行扩增,通过琼脂糖凝胶电泳对扩增结果进行分析。结果:所设计的引物能够特异性地扩增出半夏的目的DNA,并适用于全国9个主要不同产地半夏药材的检测。结论:该方法具有较强的特异性和普适性,适用于半夏药材的真伪性鉴别。     

虚拟解剖技术在解决法医尸检结论准确性和伦理学矛盾中的作用

目的通过对部分省市地区的法医尸检资料统计分析,认为研制应用适合法医尸检应用的虚拟解剖技术设备在解决法医尸检结论准确性和伦理学矛盾中非常必要。方法收集并回顾分析了山东和陕西部分省、市2004年至2008年的尸检档案资料。结果尸检总例数843,其中尸表检验例数691;解剖例数152;完整解剖例数109;解剖但未开颅(因不需要)例数26;解剖但未开胸腔(因不需要)例数17;解剖但未开腹腔(因不需要)例数17;尸表检验时使用过虚拟解剖设备(如CT、磁共振等)例数0;解剖检验时使用过虚拟解剖设备(如CT、磁共振等)例数0;非完整解剖(因不需要)中是因考虑到尸体的完整性例数35;仅做尸表检验而未做解剖是因宗教、风俗、家属不同意的例数428。结论统计的资料说明法医尸检结论准确性和伦理学的矛盾非常严重,而且矛盾在法医实践中经常不能很好的解决,在解决法医尸检结论准确性和伦理学的矛盾中,虚拟解剖技术有望起到重要作用。法医病理司法鉴定人在未来可考虑研制应用适合法医尸检应用的虚拟解剖技术设备。     

LAMP联合基因芯片技术在肺炎衣原体检测中的应用

目的 开发一种可以快速、准确检测肺炎衣原体的检测方法.方法 采用环介导等温核酸扩增技术(LAMP)对肺炎衣原体的特异性DNA保守片段进行扩增,将扩增的DNA与基因芯片进行杂交,观察是否可在芯片相应的区域出现杂交信号.结果 只有肺炎衣原体DNA经LAMP反应后出现特异性的扩增条带,经LAMP扩增后的产物与基因芯片杂交,仅肺炎衣原体区域出现杂交信号.结论 LAMP技术联合基因芯片技术具有高度敏感性、高度特异性的特点,可快速准确地检测肺炎衣原体.     

近红外光谱建立头孢克洛分散片一致性模型的研究

目的:应用近红外漫反射技术建立头孢克洛分散片一致性检验模型。方法:收集头孢克洛分散片的近红外漫反射光谱,运用OPUS软件建立一致性检验模型,并用头孢克洛分散片伪品进行验证。结果:利用该一致性检验模型能快速、准确地判断头孢克洛分散片的真伪。结论:该方法建立的模型操作简单、快速有效,能作为头孢克洛分散片真伪鉴别的快速筛选方法。     

CAT基因突变热点区域的PCR扩增方法

目的探讨过氧化氢酶基因突变热点区域PCR扩增方法,提高PCR反应的特异性和灵敏度,有助于快速检测CAT基因相关疾病。方法从人静脉血液标本提取人血液基因组DNA,设计引物扩增特定的CAT基因片段,联合应用热启动PCR和降落PCR技术。结果建立了重复性好,分辨率高的PCR反应体系。结论建立了适用于CAT基因突变热点区域的PCR反应体系,有助于快速检测CAT基因相关疾病。