抗CD3与抗CD28单克隆抗体共刺激对淋巴细胞免疫活化基因m …

目的 观察ＣＤ２８共刺激信号对淋巴细胞免疫活化基因表达的影响及环孢素Ａ（ＣｓＡ）对它们的抑制作用。方法 分离健康人外周血单个核细胞,分别给予抗ＣＤ３单克隆抗体（抗ＣＤ３ｍＡｂ）单刺激或抗ＣＤ３ｍＡｂ＋抗ＣＤＷ２８单克隆抗体（抗ＣＤ２８ｍＡｂ）共刺激培养;加或不加入ＣｓＡ。于培养后６ｈ和２４ｈ收集细胞。以逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测β－Ａｃｔｉｎ、ＣＤ４０Ｌ、ｂｃｌ－ｘＬ、ＴＧＦ－β１、Ｆ     

鼠抗人CD3、CD4单克隆抗体治疗肾移植后急性排斥反应的疗效观察

目的　探讨鼠抗人单克隆抗体预防及治疗尸肾移植后排斥反应的效果。方法　总结和分析了６２ 例肾移植后应用鼠抗人单克隆抗体ＷｕＴ３ 、ＷｕＴ４ 预防及治疗排斥反应的效果、单克隆抗体治疗期间血清游离单克隆抗体水平与受者抗鼠抗体的产生等情况。结果　该抗体对急性排斥反应的总体治愈率为７６ ．１ ％ , 对耐激素的难治性排斥反应的逆转率达６０ ．７ ％ ; ＣＤ３ 和ＣＤ４ 的抑制效应与血清游离单克隆抗体浓度密切相关; 首次应用单克隆抗体治疗时, 抗体的产生与否及量的多少并不影响疗效; 在单克隆抗体治疗的过程中, ＣＤ４／ＣＤ８ 下降明显者, 排斥逆转的可能性大; 停止治疗后Ｔ 淋巴细胞亚群未恢复正常水平者, 感染率明显上升。结论　ＷｕＴ３ 、ＷｕＴ４ 对肾移植后急性排斥反应, 包括耐激素急性排斥反应具有较为满意的治疗效果。     

CsA、MPA和RPM对CD28通路共刺激后淋巴细胞IL-4 mRNA表达的影响

目的　观察环孢素A(CsA)、霉酚酸(MPA)和雷帕霉素(RPM)对CD     

肿瘤浸润性淋巴细胞结合偶联半乳糖抗CD3单克隆抗体的肝脏靶向性研究

目的　探讨结合偶联半乳糖（ Ｇａｌａｃｔｏｓｅ , Ｇａｌ） 抗 Ｃ Ｄ３ 单克隆抗体（ Ａｎｔｉ Ｃ Ｄ３ Ｍｃ Ａｂ） 肿瘤浸润性淋巴细胞（ Ｔｕｍｏｒｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ , Ｔ Ｉ Ｌ） 肝脏靶向性。 方法　本组把大鼠抗小鼠 Ｃ Ｄ 单克隆抗体和半乳糖偶联在一起,与３ Ｈ Ｔｄ Ｒ 标记 Ｔ Ｉ Ｌ结合后,从鼠尾静脉注入小鼠体内,在注射不同时间眼眶取血０５ ｍｌ,然后处死,切除肝、脾、肺,分别称重后进行放射性强度测定。 结果　结果显示：注射 Ｇａｌａｎｔｉ Ｃ Ｄ３ Ｍｃ Ａｂ Ｔ Ｉ Ｌ小鼠肝脏比注射单纯 Ｔ Ｉ Ｌ 的小鼠肝脏具有较高的放射性（ Ｐ＜ ００１） ,且该放射性持续较长一段时间,而脾、肺、血液内放射性强度差异无显著意义（ Ｐ＞ ００５ , Ｐ＞ ００５ , Ｐ＞ ００５） 。结论　该结果提示： Ｇａｌａｎｔｉ Ｃ Ｄ３ Ｍｃ Ａｂ Ｔ Ｉ Ｌ较单纯 Ｔ Ｉ Ｌ具有更好的肝脏靶向性。     

CsA,MPA和RPM对CD28通路共刺激后淋巴细胞IL—4mRNA表达？…

目的 观察环孢素Ａ（ＣｓＡ）霉酚酸（ＭＰＡ）和雷帕霉素（ＲＰＭ）对ＣＤ２８通路共刺激后淋巴细胞ＩＬ－４ｍＲＮＡ表达的影响。方法 以ＰＣＲ扩增方法获得了ＩＬ－４特异的ｃＤＮＡ片段，并将其克隆至ＰＧＥＭ－３Ｚ载体中，以此作为探针对ＲＴ－ＰＣＲ产物进行杂交定量，比较三种免疫抑制剂对ＣＤ２８通路共刺激后淋巴细胞ＩＬ－４ｍＲＮＡ表达的影响。结果 以抗ＣＤ３ｍＡｂ＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ共刺激后，发现淋巴细胞稳定地     

抗人膀胱癌单克隆抗体重,轻链可变区基因体外扩增,克隆及序列分析

应用人工合成的两套引物，从分泌抗人膀胱癌特异性单抗的杂交瘤细胞ＢＤＩ－１中提取总ＤＮＡ。以之作模板，经ＰＣＲ法扩增出重、轻链可变区基因片段。将扩增产物分别插入ＰＵＣ１９质粒，筛选出阳性克隆，用链终止法进行ＤＮＡ序列测定。结果表明：重链可变区基因全长３６６ｂｐ，编码１２２个氨基酸，属于小鼠重链可变区的ＳｕｂｇｒｏｕｐＩＩ，由种系基因中的ＶＨ与Ｄ基因的Ｄｓｐ２．２及ＪＨ４基因重排而成；轻链可变区基因全长３２４ｂｐ，编码１０８个氨基酸，属于小鼠轻链可变区的ＳｕｂｇｒｏｕｐＩＶ，由种系基因中的Ｖκ与Ｊκ４基因重排而成。与已发表的抗体可变区基因序列比较，证明它们是功能性的可变区基因     

抗CD8单抗与抗CD40L单抗联合应用对小鼠心脏移植后慢性排斥反应的影响

目的 探讨干预慢性迟发性超敏反应（DTH）与CD8^＋T淋巴细胞的细胞毒等效应机制对同种小鼠心脏移植后慢性排斥反应的影响。方法 建立小鼠颈部异位心脏移植模型，实验组以BALB／c小鼠为供者，C57BL／6小鼠为受者，术后0、2、6及14d腹腔注射抗CD8单克隆抗体（抗CD8单抗）200μg／d，术后0、2及4d腹腔注射抗CD40L单克隆抗体（抗CD40L单抗）250μg／d；同系移植对照组供、受者均为BALB／C小鼠，术后同期腹腔注射等量生理盐水；同种移植对照组以BALWc小鼠为供者，C57BL／6小鼠为受者，术后不使用上述单抗。观察各组移植心的存活时间及移植心组织病理学变化。结果同种移植对照组移植心的平均存活时间为7．3d；实验组与同系移植对照组移植心的存活时间均超过60d。同种移植对照组移植心呈典型急性排斥反应病理学改变；同系移植对照组移植心组织未见明显病理变化；实验组移植心呈现血管周围炎、间质纤维化和血管内膜增生等慢性排斥反应组织病理改变。结论 清除CD8^＋T淋巴细胞和阻断CD40／CD40L通路的处理方案虽可预防急性排斥反应，显著延长移植心的存活时间，但并不能阻止慢性排斥反应的发生。     

PGGT、PGGT单克隆抗体和GGT mRNA表达在胰头癌诊断中的价值

目的: 探讨PGGT、PGGT单克隆抗体和GGT mRNA表达在胰头癌诊断中的价值. 方法: 采用改良DEAE Sephadex A50离子交换柱层析法、PGGT单抗Elisa间接混合夹心法、RT-PCR等方法对142例黄疸患者血清PGGT、TGGT及组织中GGT mRNA的表达进行研究. 结果: 以血清PGGT>4 U/L、PGGT/TGGT>0.1作为诊断胰头癌的指标,其阳性率为62.5%.PGGT单克隆抗体检测血清中PGGT恶性阻塞性黄疸及胰头癌阳性率分别为59.0%及100%.通过RT-PCR法检测GGT mRNA的相对表达量,胰头癌组(占62.5%)>胆管癌组(占35.8%)>正常组(占29.4%). 结论: PGGT、PGGT/TGGT、PGGT单克隆抗体及GGT mRNA表达在梗阻性黄疸鉴别诊断中有其重要意义,有望成为诊断胰头癌的方法.     

肠内免疫营养对烫伤大鼠血清内毒素/脂多糖肿瘤坏死因子α及其mRNA和肝脏CD14 mRNA表达的影响

疾病条件下，特殊营养物质能防治营养缺乏，刺激免疫细胞增强应答功能，维护肠黏膜屏障功能等。本研究观察肠内免疫营养剂Stresson对烫伤大鼠血清内毒素/脂多糖（LPS），肿瘤坏死因子（TNF）α及其mRNA，肝组织CD14 mRNA表达的影响，并探讨其作用机制。     

淋巴细胞CD28通路活化后Th1/Th2细胞因子mRNA表达及CsA的抑制作用

采用ＲＴＰＣＲ方法，观察ＣＤ２８通路活化后淋巴细胞Ｔｈ１／Ｔｈ２细胞因子ｍＲＮＡ表达水平及ＣｓＡ的抑制作用。取正常人外周血淋巴细胞，培养过程中分别给予抗ＣＤ３ｍＡｂ单独刺激或抗ＣＤ３ｍＡｂ＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ共同刺激。提取细胞总ＲＮＡ并逆转录成ｃＤＮＡ，对Ｔｈ１细胞因子（ＩＦＮγ、ＩＬ２）和Ｔｈ２细胞因子（ＩＬ４、ＩＬ１０）ｃＤＮＡ进行扩增。结果显示：共刺激信号可使Ｔｈ１细胞因子基因ｍＲＮＡ转录增加，且对ＣｓＡ的抑制作用产生抵抗；而对Ｔｈ２细胞因子则不产生明显影响。研究表明：ＣＤ２８共刺激信号主要增强淋巴细胞Ｔｈ１细胞因子基因ｍＲＮＡ表达，并可能参与其分化调节；这一活化通路不被ＣｓＡ阻断。     

RNA干扰抑制大鼠T淋巴细胞CD28基因表达的实验研究

目的：探讨RNA干扰（RNAi）后对大鼠T淋巴细胞共刺激分子CD28基因的表达及其对细胞功能的影响。方法：设计针对目标基因的小干扰RNA（siRNA）,转染大鼠T淋巴细胞。以FCAS检测CD28水平,MTT检测转染后T淋巴细胞对异体淋巴细胞增殖能力的影响。Reahime-PCR及ELISA法检测细胞因子水平。结果：siRNA转染大鼠T淋巴细胞后可抑制CD28的表达,T细胞增殖能力、IL-2、IFN-γ平明显低于空白对照组（P〈O．05）。结论：siRNA可特异性抑制大鼠T淋巴细胞共刺激分子CD28的表达,降低大鼠T细胞的增殖能力,抑制IL-2、IFN-γ细胞因子的基因水平表达和分泌水平．从而产生免疫耐受效应,为器官移植免疫研究提供实验依据。     

阻断共刺激通路诱导产生免疫无能状态

目的 探讨同时阻断CD40／CDl54和B7／CD28共刺激通路能否诱导产生免疫无能状态以及无能状态的逆转条件。方法 以C3H小鼠脾细胞为刺激细胞，BALB／c小鼠脾细胞为反应细胞，C57BL／6J小鼠脾细胞为第三方细胞，在体外双向混合淋巴细胞培养中加入不同浓度的抗CDl54和抗CD80单克隆抗体，诱导产生无能细胞。在无能细胞中分别加入经7射线照射后的C3H小鼠或C57BL／6J小鼠脾细胞，或者直接加入不同浓度重组小鼠白细胞介素2(nmIL-2)，或者同时加入经7射线照射后的C3H小鼠细胞和不同浓度的mnIL-2刺激，观察无能状态的逆转情况。结果 联合应用抗CDl54和抗CD80单克隆抗体能显著抑制体外双向混合淋巴细胞培养反应的细胞增殖；第三方刺激细胞能够逆转无能细胞的无能状态；单纯加入nmIL-2或C3H小鼠细胞再次刺激不能逆转无能状态，而只有同时加入C3H小鼠细胞和nmIL-2刺激才能逆转无能细胞的无能状态。结论 同时阻断CD40／CDl54和B7／CD28通路能诱导产生抗原特异性的免疫无能状态，而且只有同时给予抗原和外源性IL-2再次刺激才能逆转这种无能状态。     

内毒素活化和耐受的巨噬细胞差异表达基因分析

目的　分析内毒素活化的和内毒素耐受的巨噬细胞差异表达基因 ,以探讨内毒素耐受的分子机制。方法　分离小鼠腹腔巨噬细胞 ,活化组直接以 1mg/L脂多糖处理 2h ,耐受组先以脂多糖预处理 2 0h ,再以脂多糖处理 2h。利用含 1176个基因的小鼠cDNA表达芯片进行基因表达谱分析。结果　活化组与耐受组间的 3倍差异表达基因为 3 1个 ,其中耐受组有 8个基因的表达水平明显高于活化组 ,包括细胞表面抗原FcgammaRIIb、间隙连接蛋白 43、凋亡相关蛋白NIP3、iN OS、骨髓间充质细胞抗原 (BST) 1以及激活素和卵泡抑素等 ,有 2 3个基因的表达水平明显低于活化组 ,包括转录因子EPAS1、EGR2、IRF1,细胞周期素依赖性蛋白激酶 p2 1和p5 7,骨桥蛋白 ,尿激酶型纤溶酶原激活物及其受体 ,以及多种生长因子受体和细胞因子。结论　这些差异表达基因多数未曾报道与内毒素耐受相关 ,可能在内毒素的发生中具有重要作用 ,并成为内毒素耐受的新的标志分子 ,对其进行干预有可能模拟内毒素耐受的保护效应。     

凋亡相关基因Survivin mRNA在骨肉瘤中表达的测定及其意义

目的探讨凋亡相关基因SurvivinmRNA在骨肉瘤的表达及其与骨肉瘤发生发展的关系。方法应用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测27例骨肉瘤组织中SurvivinmRNA的表达情况,结合临床资料进行分析。结果SurvivinmRNA在10例骨软骨瘤和10例正常肌肉组织中均未检出,27例骨肉瘤组织中19例表达阳性;SurvivinmRNA的表达与Enneking分期有关(P<0.05),而与患者的性别、年龄肿瘤部位、Price分级和Dahlin分型无关(P>0.05)。结论SurvivinmRNA在骨肉瘤组织中特异性表达,可能在骨肉瘤的发生发展中起重要作用。阻断SurvivinmRNA的表达可为骨肉瘤的治疗提供新的途径。     

Toll样受体4信号对结肠癌细胞免疫抑制性细胞因子的调控

目的探讨Toll样受体（TLRs）对原位结肠癌细胞免疫抑制性细胞因子的调控作用及其机制。方法分别采用RT—PCR和蛋白印迹法对HT-29细胞中TLRs mRNA及蛋白质的表达进行检测。ELISA法检测经LPS刺激后及NF—κKB被抑制后,HT-29细胞所分泌的免疫抑制性细胞因子的改变。结果HT-29细胞可表达不同TLRs,以TLR4的表达为最高。经LPS刺激后,HT-29细胞中TLR4的mRNA和蛋白质水平,以及所分泌的转化生长因子（TGF）-β、VEGF、IL-8、CCL20和IL-6均显著升高（P〈0．01）。TGF—β、VEGF、IL-8和CCL20的上调表达不能被NF—κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）所抑制,但IL-6的上调表达则依赖于NF—κB的活性。结论结肠癌细胞TLRs通过识别病原体相关模式分子．启动免疫抑制性细胞因子的表达．使肿瘤细胞逃避免疫监视。     

细胞因子基因多态性与肾移植急性排斥反应的关系

目的　探讨肾移植患者外周血中细胞因子基因多态性与急性排斥反应的关系。方法　应用聚合酶链反应测定 89例肾移植患者外周血中肿瘤坏死因子 (TNF α)、转化生长因子 (TGF β)、白细胞介素 6(IL 6)及干扰素 (IFN γ)的基因型 ,并结合HLA配型情况 ,比较各基因型别的急性排斥反应发生率。结果　在HLA DR错配的情况下 ,TNF α和IFN γ等位基因为高分泌型者 ,其术后急性排斥反应发生率较低分泌型者高 (P <0 .0 5) ;未能显示TGF β及IL 6基因表达与急性排斥反应的相关性。结论　术前检测肾移植患者细胞因子基因型 ,有助于发现可能发生急性排斥反应的高危人群 ,据此可制定合理的个体化免疫抑制治疗方案     

前列腺癌CD44及nm23-H1基因表达

目的　探讨在前列腺癌中CD44和nm2 3 H1基因表达的意义。　方法　应用免疫组织化学、银染单链长度构相多态性半定量逆转录聚合酶链式反应及免疫印迹杂交法分别检测 32例前列腺癌石蜡标本及 15例新鲜标本中CD44、nm2 3 H1基因的突变、表达情况。　结果　前列腺癌组织中nm2 3 H1蛋白及mRNA高水平表达 ,转移组nm2 3 H1蛋白表达强度高于非转移组。前列腺癌组织中存在nm2 3 H1基因突变 ,突变检出率为 13 3% (2 / 15 )。前列腺癌转移组中 ,CD44s蛋白表达水平下降。CD44smRNA在癌及非癌对照组织中全部表达 ,但 86 7% (13/ 15 )的癌组织中同时表达CD44v。　结论　nm2 3 H1基因的高表达和CD44v/CD44s基因的表达失衡可能在前列腺癌的恶性进展中共同发挥作用。     

坐骨神经切断后GDNF mRNA在两侧断端的表达变化

目的探讨大鼠坐骨神经切断后,GDNFmRNA在两侧断端的表达变化及其意义。方法切断SD大鼠左侧坐骨神经,在不同时间、应用半定量RT-PCR方法观察两侧断端GDNFmRNA的表达变化。结果坐骨神经切断前,GDNFmRNA在两侧坐骨神经微量表达,坐骨神经切断后远断端表达逐渐增加(1、7、14、28d分别增加20%、60%、85%、90%),近断端表达逐渐减少(1、7、14、28d分别减少10%、38%、45%、52%)。结论坐骨神经切断后断端GDNFmRNA表达变化是由于“胞体-轴突-靶器官”轴中断造成的。此结论为应用外源性GDNF治疗脊髓损伤提供了理论依据。     

骨形态发生蛋白-2对椎间盘细胞软骨特异性基因 mRNA的调节作用

目的探讨骨形态发生蛋白(BMP)-2对椎间盘细胞软骨特异性基因Sox9、Ⅱ型胶原和蛋白聚糖基因的调控作用.方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测BMP-2对培养的人椎间盘细胞中Sox9、Ⅱ型胶原和蛋白聚糖基因 mRNA表达的调控作用.结果在BMP-2浓度为100 μg/L(0.149±0.006,P<0.05)和1 000 μg/L(0.163±0.006,P<0.01)时,其对椎间盘细胞中Sox9基因 mRNA可起到显著的正向调控作用;在此浓度下,它也可以对Ⅱ型胶原和蛋白聚糖基因mRNA起到正向调控作用.结论 BMP-2可以按照剂量依赖方式正向调控椎间盘细胞中Sox9、Ⅱ型胶原和蛋白聚糖基因的表达.