槲皮素对热休克诱导人肝癌HepG2细胞HSP70和P-gp表达的影响

目的：研究热休克诱导人肝癌HepG22细胞热休克蛋白70（HSP70）和P－糖蛋白（P-gp)随时间的表达规律，并研究应用槲皮素（Qu)对二表达的抑制效应。方法：（1）使用恒温水浴法42℃热休克HepG2细胞90min；（2）采用免疫细胞化学法，流式细胞术检测热休克前，热休克后2，4，8，12，24h时HSP70和P－gp的表达规律，以及热休克前1h应用槲皮素在热后4h二的表达。结果：（1）42℃热休克诱导HepG2细胞，HSP70表达增多，“核内迁移”，阳性细胞数升高，4h达到最高（11．47％），较对照组（6．64％）升高近2倍（P＜0．005），24h后回落到低值，细胞核内表达减少；P－gp阳性细胞数随HSP70升高后升高，12h达到最高值（96．31％），较对照组（33．95）升高近3倍（P＜0．005），24h回落到低值，同时，细胞内低水平的HSP70表达在细胞质中，少部分在细胞核内。（2）热休克前应用槲皮素能有效抑制热2休克诱导HSP70和P-gp的过量表达，槲皮素并能有效抑制二内在表达，以100－200μmol/L Qu作用明显（P＜0．005），呈浓度剂量效应。结论：（1）热休克可能诱导HepG2细胞HSP70和P－gp的过量表达，P－gp与HSP70具有相关关系；（2）槲皮素可能在转录水平上抑制HepG2细胞HSP70和P－gp的合成。     

热诱导HeLa细胞中HSP70蛋白的动态变化

目的研究不同温度热诱导后HeLa细胞热休克蛋白(heat shock protein70,HSP70)蛋白动态表达.方法 HeLa细胞经过不同温热(41℃ 1h、42℃ 1h、43℃ 1h、45℃ 30min)的诱导,以SDS-PAGE及Western印迹方法检测细胞裂解液中HSP70蛋白表达.结果热诱导后HSP70蛋白表达的高峰出现时间随诱导温度的提高逐渐后移(如:41℃ 8h、43℃ 16h),且41℃、42℃热诱导后蛋白表达于诱导后8～16h期间有持续高水平表达,而45℃ 30min热诱导细胞大部分于诱导后即时死亡,且仅有低水平的HSP70表达;高表达后HSP70一般于诱导后24～32h始恢复至正常细胞表达水平.结论温热诱导(41℃ 1h)短时间内即可产生高表达量HSP70,而较激烈热诱导(43℃ 1h、45℃ 30min)仅产生少量延迟表达的HSP70蛋白,且导致大量HeLa细胞死亡,此为临床肿瘤温热治疗提供了理论依据.     

氧化应激对热休克蛋白70核仁分布的影响

目的：探讨氧化应激对热休克蛋白70（heat shock protein 70, HSP70）核仁分布的影响。方法：采用热休克反应（42℃ 1h，37℃恢复12h）诱导C2C12细胞中HSP70的高表达；构建HSP70与增强绿色荧光蛋白（EGFP）的重组质粒。将重组质粒瞬时转染C2C12肌原细胞后，用免疫印迹技术分别检测热休克反应及基因转染诱导的HSP70表达；在分离纯化核仁和胞质蛋白组分后，分别采用免疫细胞化学、荧光技术及免疫印迹检测氧化应激（0.5mmol/L H2O2）诱导的HSP70的分布改变。结果：免疫印迹显示，热休克反应和瞬时转染重组质粒，均能导致C2C12细胞中HSP70的高表达；荧光示踪显示，过氧化氢处理1h后，可见胞核有较强的荧光；免疫细胞化学及细胞组分蛋白质免疫印迹显示，热休克处理的细胞暴露于过氧化氢1h后，HSP70从细胞质向细胞核及核仁移位。结论： 氧化应激能导致HSP70从胞质向核仁移位。     

脱毛膏对家兔督脉及其两侧旁开皮肤组织热休克蛋白70合成影响的初步观察

目的探讨脱毛膏对后续皮肤相关应激实验的影响。方法免疫组织化学方法检测热休克蛋白70（HSP70），比较经脱毛膏脱毛处理后恢复期4h、16h皮肤HSP70表达的差异以及督脉线及其两侧旁开对照点HSP70表达的差异。结果脱毛后恢复期4h时皮肤高度表达HSP70．恢复期16h时HSP70袁达减少；督脉线与其两侧旁开非经对照点的HSP70表达在恢复期4h和16h时均未见明显差异。结论（1）脱毛膏会刺激皮肤应激合成HSP70．后续的其他实验宜在脱毛后16h进行。（2）脱毛膏脱毛法可用于针灸过程中经脉线上HSP70检测的皮肤处理。     

鼻咽癌细胞热疗后HSP70/HSP90的表达规律

目的探讨鼻咽癌细胞系HNE1热疗后HSP70/HSP90的表达规律。方法对体外培养的鼻咽癌细胞HNE1,恒温水浴42℃热休克2小时,采用western-blot检测HSP70/HSP90蛋白表达量的变化。结果 42℃热疗后鼻咽癌细胞HSP70/HSP90表达在蛋白水平上有明显升高,4h达到高峰,8h后开始回落,24小时接近正常。结论选择恒温水浴42℃热休克2小时,对鼻咽癌细胞具有热疗作用,HSP70/HSP90的表达规律为热疗后HSP70/HSP90的表达均明显升高,在4h达到高峰,8h开始下降,24h基本降至正常。     

HSP70/HSP90在鼻咽癌热疗后的表达变化及对热疗疗效影响的体外研究

目的 探讨体外鼻咽癌细胞系HNE1细胞热疗后热休克蛋白70/90(HSP70/HSP90)的表达变化及抑制HSP70/ HSP90表达对鼻咽癌热疗的影响,并初步探讨其机制.方法 对体外培养的鼻咽癌细胞HNE1,恒温水浴42 ℃热处理2 h,分别于2 h、4 h、6 h、8 h、12 h、24 h后荧光定量PCR检测HSP70/HSP90的基因表达变化,采用Western blot检测蛋白表达量的变化.流式细胞术检测细胞的凋亡,观察在热疗前应用槲皮素、格尔德霉素及联合应用对HSP70/HSP90表达抑制后,对HNE1细胞凋亡的影响.结果 42 ℃热疗后鼻咽癌细胞HSP70/HSP90表达在基因及蛋白水平上均有明显升高,4 h达到高峰,8 h后开始回落,24 h接近正常.槲皮素能抑制HSP70表达,但导致HSP90表达水平升高及下降延迟.热疗前使用槲皮素及格尔德霉素处理,凋亡细胞比例明显增加,联合处理组增加更为明显(P＜0.05).结论 HSP70/ HSP90在HNE1细胞内的表达均在热疗后迅速升高,在热疗前联合抑制HSP70/HSP90的活性,可以更有效增加热疗敏感性.     

温热对BGC—823细胞抑制作用及Hsp70、Bcl—2、Bax表达的影响

目的 观测温热对人胃癌细胞BGC－823的抑制作用及Hsp70、Bcl-2、Bax表达的影响。方法 通过MTT法，测定41℃100min、42℃100min对BGC－823细胞的抑制作用；运用免疫组化ABC法染色，观察42℃100min作用后0、8、16、32h，BGC－823细胞Hsp70、Bcl-2、Bax的表达。结果（1）BGC－823细胞在41℃及42℃温热作用后，均受到一定抑制；42℃温热比41℃对细胞的抑制作用较强且持久（P＜0．01）；（2）42℃温热作用后细胞Hsp70、Bcl－2表达均明显增加，16h表达达到高峰，且主要分布于核区；Bax表达也增加，但低于Bcl－2。结论 温热对BGC－823细胞有一定抑制作用，Hsp70、Bcl-2表达增加可能与细胞自身修复或自身保护有关，Bcl-2的胞核分布与温热对细胞的抑制有关。     

诱导型热休克蛋白在对小鼠缺血性急性肾衰的保护作用

目的：采用HSF1基因敲除小鼠模型探讨诱导型热休克蛋白（HSP）对小鼠缺血性急性肾衰的保护作用。方法：野生型及HSF1基因敲除小鼠经钳夹左右两肾肾蒂30min以阻断肾动脉血流，松开钳夹24h后聚血测定尿素氮（BUN）及血清肌酐浓度；部分动物于肾缺血－再灌注前24h进行热休克处理（肛温42℃，15min）以诱导各种HSP的表达。结果：肾缺血－再灌注导致BUN及血清肌酐浓度明显升高，HSF1基因敲除导致二者上升更加明显。热休克预处理使野生型及杂合子小鼠肾中HSP70，HSP90α及HSP25表达明显升高，并明显减轻了因－再灌注所致BUN及血清肌酐浓度的升高。HSF1基因敲除废除了热休克所致的HSP诱导表达及其对缺血性急性肾衰的保护作用。结论：诱导型HSP在保护缺血所致的小鼠急性肾衰中发挥重要作用。     

热应激对A549细胞HSP70、XPA修复酶表达的影响

目的研究热应激作用下A549细胞热休克蛋白70（HSP70）和XPA修复酶的表达规律及其可能的意义。方法利用免疫印迹方法（Western blot）检测A549细胞中HSP70、XPA修复酶的表达水平。结果A549细胞接受不同温度（39、41、42、43℃）处理2h后,HSP70表达水平随温度的增高而逐渐增加,并在42℃应激时表达最高,与对照组相比有统计学意义（P〈0.05）;细胞接受42℃应激1～4h,HSP70表达水平随应激时间的增加而递增,与对照组相比,细胞在42℃应激2～4h时HSP70表达显著上调（P〈0.05）。两处理组细胞XPA修复酶表达水平均无明显变化（P〉0.05）。结论高温能诱导HSP70的表达,并呈一定的温度-效应和时间-效应关系,而对XPA修复酶未见明显影响。     

肝脏缺血-再灌注后热休克蛋白70mRNA的表达

目的 :探讨缺血—再灌注后大鼠肝脏热休克蛋白 (HSP) 70mRNA的表达规律。方法 :通过已建立的大鼠肝脏缺血—再灌注模型 ,应用人HSP 70cDNA ,采用dotblot杂交 ,观察缺血—再灌注后大鼠肝脏HSP 70mRNA的表达。结果 :肝脏缺血 15min ,3 0min再灌注后没有HSP 70mRNA的表达 ,缺血 60min再灌注 2h伴有HSP 70mRNA的表达 ,高水平HSP 70mRNA的表达持续到再灌注 12h ,以再灌注 4h表达水平为最高。缺血 12 0min再灌注 2h ,HSP 70mRNA升高 ,高水平表达维持 4h ,再灌注 12hHSP 70mRNA消失。结论 :肝脏缺血—再灌注后可以诱导HSP 70mRNA的表达 ,必要的缺血时间所造成的肝脏损伤是HSP基因激活的基础 ,再灌注期间氧自由基的释放可能是其表达增加的原因。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

醋柳黄酮缓释片的药动学初步研究

目的:研究醋柳黄酮缓释片在家犬体内的药动学过程,测定其药动学参数,计算缓释片相对于普通片的生物利用度。方法:将实验动物分为两组,分别用醋柳黄酮缓释片和普通片进行口服给药,用高效液相色谱法测定血浆药物浓度,应用3P97软件求算药动学参数。结果:醋柳黄酮缓释片及普通片的tm ax分别为4.87 h和2.87 h,Cm ax分别为每小时0.46μg.L-1和每小时0.56μg.L-1,缓释片的相对生物利用度为111.7%。结论:醋柳黄酮缓释片与普通片均符合一室模型,缓释片与普通片具有生物等效性,且醋柳黄酮缓释片有明显的缓释效果。     

主动脉窦瘤破裂的外科治疗

报告２０例主动脉窦瘤破裂修复术的结果。１７例男性，３例女性。年龄７～５６岁。痊愈１９例，另一例因急性肾功能衰竭一周后死亡。作者就发病机理，诊断和合并畸形的处理进行了讨论。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

上颌骨牙源性囊肿刮除手术的疗效观察

目的探讨对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术的临床疗效。方法对我科在2010年1月～2017年9月收治的73例上颌骨牙源性囊肿患者行囊肿彻底刮除手术治疗,对患者术区肿胀消退、术后伤口感染、伤口愈合、牙龈再附着、术后复发、骨质改建、骨质修复等情况随访观察。结果 73例患者术后肿胀消退时间为1～4 d。73例患者术后均未发生伤口感染,伤口均一期愈合。所有患者牙龈再附着情况好,术后均未见复发。术后未见并发症。骨质改建效果好,骨质修复的效果因影像学资料过少,缺乏客观依据,暂不下有效结论。结论对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术,术后患者的恢复情况良好,值得在临床治疗上进行推广。     

阴道炎1236例病原检查分析

对１２３６例阴道炎患者的阴道分泌物作直接镜检和病原菌分离培养检查；结果，细菌感染９００例，念珠菌２３４例，滴虫１０２例。９００例细菌经鉴定；葡萄球菌３００例，阴道加特纳菌２７６例，淋病奈瑟菌１７０例，其它细菌１２４例。结果表明，葡萄球菌，阴道加特纳菌，淋病奈瑟菌是细菌性阴道炎最常见的致病菌。     

颅咽管瘤切除术后并发症的处理

目的　讨论颅咽管瘤切除术后并发症的处理原则。方法　分析 36例颅咽管瘤切除术后并发症的临床资料。结果　术后并发尿崩症者 14例、高热 11例、电解质紊乱 8例、消化道出血 3例、癫痫 5例 ,死亡2例。结论　颅咽管瘤术后并发症较多 ,加强早期监测和处理 ,可进一步提高该病的治愈率     

碱量法测定壳多糖脱乙酰度的方法探讨

目的：评价壳多糖脱乙酰度测定的减量法的影响因素。方法：通过实验评价碱量法的精准度及样本含潮量等因素对测定结果的影响,并对汪氏推荐计算公式和本文作者提出的改良公式作出评价。结果：碱量法测定壳多糖脱乙酰度受样本性状、含潮率、反应体系中酸量的影响。改良公式更能反映样本实际脱乙酰度。结论：碱量法简便易行,评价指标在可接受范围,可用于壳多糖研制中的质量评价。     

喉癌主癌灶手术切缘的临床特点分析

目的探讨研究喉癌主癌灶手术的安全切缘在临床上的特点。方法回顾性分析2007年6月—2011年3月已经确诊喉癌的患者100例,随机分成A、B两组,A组为观察组50例,主要采取手术切缘后,然后采取镜下观察分析;B组为观察组50例,主要采取手术切缘后,然后采取肉眼观察分析,将结果进行临床特点分析比较。结果早期的喉癌患者和晚期的喉癌患者的阳性切缘例数,差异无统计学意义（P〉0.05）;晚期的阳性切缘发生次数高于早期的阳性切缘发生次数,差异有统计学意义（P〈0.05）。声门上区[SG]2、3和5、10mm;跨声门型[TG]2、3mm和5、10mm的切缘对比,差异有统计学意义（P〈0.05）。SG、G、TG、IG的2mm和3mm,5mm和10mm对,差异无统计学意义（P〉0.05）。肉眼阳性切缘观察39个,镜下阳性切缘观察43,两者差异无统计学意义（P〉0.05）。结论依据原发不同部位、不同分期和不同范围选取适合的切线,就可以有效地减少阳性切缘的发生。