蚓激酶中纤溶酶谱鉴别方法的研究

摘 要 目的：建立蚓激酶的纤溶酶谱鉴别方法,同时考察5个企业产品及同一企业不同批次的一致性。方法: 纤溶酶谱法,纤维蛋白原终浓度为5×10^-4g·mL^-1,2.5%Triton-x-100溶液中复性30 min,在PBS缓冲液(pH=7.4)中37℃孵育30 min,供试品蛋白质浓度为5.0～37.5 μg。结果: 该方法灵敏度高,5家企业的活性蛋白条带均分布在15～40KD间,有6个相同特征活性蛋白条带;5个企业 产品之间酶谱图略有差异,同一企业不同批次产品批间无差异。结论:该方法专属性较强, 能够反映蚓激酶活性成分的分子量大小分布及种类,也能反映产品的批间一致性,生产工艺稳定性,且易于标准化,可作为蚓激酶的鉴别方法,同时为评价上市后产品质量一致性奠定了基础。     

蚓激酶胶囊治疗脑梗死患者的疗效和安全性

目的:评价蚓激酶胶囊治疗脑梗死的疗效和安全性.方法:采用多中心、随机双盲、安慰剂对照(2∶1)临床试验设计,73例发病3周后用药的脑梗死患者,分治疗组(n=50)和对照组(n=23),分别口服蚓激酶肠溶胶囊60万U和安慰剂2粒,tid,给药28d.统一实验室检测病例的凝血、纤溶、血液流变学指标,并评价患者的神经功能缺损和生活能力缺损程度.结果:治疗28d后,治疗组凝血酶原时间(PT)和部分凝血活酶时间(APTT)延长;纤维蛋白原(Fg)降低,D-二聚体含量增加;组织型纤溶酶原激活物(t-PA)含量提高,纤溶酶原激活物抑制物(PAI)含量降低;血浆黏度和全血黏度改善,且均具有显著性.安慰剂对照组则改变不明显.临床神经功能缺损评价,2组均有改善,但是治疗组恢复明显,治疗组有效率为88%,对照组47.8%.73例患者中,治疗组出现1例轻度上消化道出血(2%),无肝肾功能影响.结论:百奥蚓激酶胶囊治疗脑梗死安全有效,可作为治疗和预防缺血性脑血管病的有效药物.     

白塞氏病患者血清t—PA、PAI的变化及临床意义

目的：检测白塞氏病（BD）患者血清组织纤纤溶酶活剂（t-PA),组织纤溶酶原激活剂抑制物（PAI）水平的变化,并探讨与疾病的相关性,方法：应用发色底物法测定24例BD患者血清t-PA,PAI水平,并分疾病活动组,稳定组与正常对照相比较,结果：BD组t-PA水平较正常对照线显著降低（P＜0．05）,而AI水平则显著升高（P＜0．05）,BD活动组t-PA水平较稳定组非常显才降低（P＜0．01）,PAI水平则非常显著升高（P＜0．05）,结论：纤溶凝血系统可能在BD发病机制中起一定作用,并与疾病活动有密切相关性。     

蚓激酶的基础研究

蚯蚓作为药材在我国已有上千年的历史，1982年日本宫崎大学美源恒教授发现蚯蚓的消化道和体液中有类似尿激酶样溶解纤维蛋白的酶。1993年Mihara.H报道了从蚯蚓中提取并获得了高活性的纤溶酶，引起了国际上的广泛关注。     

卡托普利对大鼠t—PA和PAI—I活性的作用

目的：评价卡托普利对大鼠血浆t-PA和PAI－1活性水平的影响。方法：给大鼠应用三种剂量的卡托普利，观察其对大鼠血浆t-PA和PAI－1活性水平的作用。结果：卡托普利治疗后使大鼠血浆t-PA活性升高，PAI－1活性及PAI－1／t-PA活性比值显著降低，这种作用呈某种程度的剂量依赖性。结论：卡托普利能增强大鼠纤溶系统的活性。这种作用呈某种程度的剂量依赖性。     

蚓激酶最新临床应用进展

蚓激酶是从露天红赤子爱胜蚓中提取的一种具有纤溶活力的丝氨酸蛋白酶.它可直接溶解纤维蛋白,并具有纤溶酶原激活剂的作用,病人应用后可促进纤溶,改善凝血及血液流变学指标.广泛用于心、脑血管疾病、突发性耳聋、视网膜血管疾病、血管外科疾病等多种疾病的治疗、康复和预防.现将临床应用和不良反应作一介绍.     

血栓溶解药研究进展

本文介绍某些生物剂类血栓溶解药的结构功能特点,作用机理及其在临床应用上存在的问题,并概述了血检解药的研究方向。     

蚓激酶胶囊治疗急性脑梗死的临床研究

目的观察蚓激酶胶囊治疗急性脑梗死的疗效。方法选择入院的急性脑梗死患者83例,随机分为常规治疗组（对照组）和在常规治疗基础上加用蚓激酶胶囊（治疗组）。分别在治疗前、治疗3周测定凝血功能、血流变学及神经功能评分,并进行比较。结果治疗3周后,两组均有改善,但是治疗组恢复明显,治疗组有效率为88.89%,对照组71.05%（P〈0.05）。结论蚓激酶胶囊能有效降低纤维蛋白原及血浆黏度,改善神经功能缺损。     

蚓激酶胶囊对急性脑梗塞疗效的回顾性分析

目的回顾性分析本院蚓激酶胶囊(抗血栓药)对急性脑梗塞患者的疗效。方法把病人分为试验组(蚓激酶治疗组,121例)与对照组(常规治疗组,161例),蚓激酶治疗组按照血浆纤维蛋白原≥3.0 g.L-1为标准,分为2个亚组:高纤维蛋白原组(72例)和正常纤维蛋白原组(49例),分析比较3组患者的疗效和预后。结果蚓激酶治疗组预后优于常规治疗组(P<0.05);高纤维蛋白原组与正常纤维蛋白原组预后比较无明显差异(P>0.05)。结论蚓激酶能显著提高急性脑梗塞患者的疗效和预后,无论是否合并高纤维蛋白原血症均适用。     

宫腔粘连子宫内膜中tPA PAI-1变化的研究

目的 探讨组织型纤溶酶原激活剂(tPA)和纤溶酶原激活剂抑制因子-1(PAI-1)在宫腔粘连(IUA)发生发展中所起的作用.方法 前瞻性研究IUA患者35例(观察组)(其中轻-中度粘连22例、重度粘连13例),非IUA患者30例(对照组),采用免疫组化和图像分析技术,观察各组子宫内膜组织中tPA、PAI-1的表达情况.结果 观察组子宫内膜中tPA的表达低于对照组(P＜0.05),重度粘连组又低于轻-中度粘连组(P＜0.05),PAI-1的表达高于对照组(P＜0.05),轻-中度粘连组与重度粘连组间的表达无显著性差异(P＞0.05).结论 IUA患者子宫内膜中tPA的降低和PAI-1的升高表明纤溶系统失衡,可能和IUA的发生发展有关.     

冠心病病人血浆纤溶成分与血脂水平评价

探讨冠心病（ＣＨＤ）患者血浆组织型纤溶酶原激活剂（ｔ－ＰＡ）、纤溶酶原激活剂抑制剂（ＰＡＩ）、交联纤维蛋白二聚体（Ｄ－ｄｉｍｅｒ）及脂蛋白（ａ）［ Ｌｐ（ａ）］等血浆水平变化、临床应用价值以及其相互间的关系。方法： ｔ－ＰＡ、ＰＡＩ、ＬＰ［ａ］、Ｄ－ｄｉｍｅｒ采用ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法检测,胆固醇、甘油三酯采用酶法测定。结果：４７例ＣＨＤ ,患者血浆ｔ－ＰＡ－ＰＡＩ及Ｄ－ｄｉｍｅｒ测值为（９．７±５．７）、（８０．５±３０．０）、（２０９±１２５）ｎｇ ／ｍｌ,其中ｔ－ＰＡ,和Ｄ－ｄｉｍｅｒ值明显高于健康对照组（Ｐ＜０．００１）,ＰＡＩ含量两组水平差别不明显（Ｐ＞０．０５）．血浆ＬＰ（ａ）、ＴＧ及ＨＤＬ浓度两组间差别有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。用准确性评价各项指标临床应用价值,以Ｄ－ｄｉｍｅｒ为最佳,Ｌｐ（ａ）次之。血浆ｔ－ＰＡ与Ｌｐ（ａ）及ＴＧ含量呈正相关。ＰＡＩ与血浆ＴＧ呈正相关,和ＨＤＬ呈负相关。结论：ｔ－ＰＡ、Ｄ－ｄｉｍｅｒ、ＬＰ（ａ）与粥样斑块及血栓形成有密切关系。     

蚓激酶及其制剂活性测定的研究

本文用琼脂纤维蛋白平板法考核了４个厂家生产的蚓激酶及其制剂的效价。通过对方法的比较研究，认为ｔＰＡ法具有专属性     

Evaluation of a series of thiazole derivatives as inhibitors of plasminogen activator inhibitor-1

A series of substituted triazole derivatives is reported by 3-Dimensional Pharmaceuticals to possess inhibitory activity against plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1). PAI-1 is the endogenous inhibitor of tissue plasminogen activator (tPA) and thus an important target in cardiovascular disease. These compounds were prepared by an efficient synthesis and were assayed in vitro in a plasminogen activator-mediated chromogenic assay. The compounds reported showed activity in the 1 – 20 μM range. Three compounds had IC₅₀ values 1 – 2 μM. Thus, this series are interesting leads for the development of more active inhibitors. No mechanistic or in vivo data are presented.     

纤溶酶原激活物抑制物-1与不稳定心绞痛的关系

目的:探讨纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)血浆抗原水平及其基因启动子-844G→A多态性与不稳定心绞痛(UAP)的关系。方法:UAP患者121例(UAP组)和冠状动脉造影正常者108例(对照组),以ELISA法测定其血浆PAI-1抗原水平。PCR扩增特定DNA片段,XhoI酶切和琼脂糖电泳确定基因型。结果:UAP组血浆PAI-1抗原水平为(68.15±45.29)μg/L,显著高于对照组的(53.39±20.62)μg/L(P<0.01)。血浆PAI-1抗原水平与冠状动脉病变支数呈正相关(r=0.139熏P<0.05),与血糖(Glu)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)正相关,r分别为0.147,0.151,0.144(P<0.05)。AA、AG、GG3种基因型在2组间分布差别无统计学意义,但A等位基因与较高的血浆PAI-1抗原水平有关。UAP组AA及AG基因型者血浆PAI-1抗原水平显著高于对照组。结论:PAI-1基因启动子-844G→A基因多态性与UAP无关,但A等位基因携带者存在较高的PAI-1血浆抗原水平。     

卡托普利和氯沙坦对自发性高血压大鼠纤溶功能的影响

目的:观察卡托普利和氯沙坦对自发性高血压大鼠(SHR)纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)和组织型纤溶酶原激活物(t-PA)血浆活性及组织表达的影响。方法:SHR分为卡托普利组、氯沙坦组和对照组,用发色底物法测血浆PAI-1和t-PA活性,RT-PCR半定量法测组织表达。结果:SHR主动脉组织PAI-1表达增加,卡托普利(P<0.01)和氯沙坦(P<0.05)使PAI-1表达显著降低。结论:转换酶抑制剂卡托普利和血管紧张素II受体1拮抗剂氯沙坦可减少早期SHR主动脉PAI-1表达,改善局部的纤溶平衡和血管重构。     

纤溶酶原激活物在肺血栓栓塞症发病机制中的作用

目的:探讨纤溶酶原激活物(t鄄PA)在急性肺血栓栓塞症(PTE)发病机制中的作用。方法:应用酶联免疫吸附双抗体夹心法(ELISA法)定量测定了44例PTE患者和56例正常对照者血浆t鄄PA含量,并用发色底物法测定了血浆t鄄PA活性。结果:PTE组的t鄄PA含量和活性分别为33.88(20.91～48.74)μg/mL和(0.31±0.15)AU/mL,对照组分别为11.05(33.88～48.74)μg/mL和(0.40±0.21)AU/mL,差别均有统计学意义(P<0.05);吸烟、高血压和高甘油三酯PTE患者的t鄄PA活性显著减低。结论:多项临床、生化因素都可对t鄄PA活性产生重要影响;PTE患者的t鄄PA活性降低,含量升高。     

射频导管消融术对凝血激活程度的影响

目的观察射频导管消融术（RFCA）对患者血中凝血激活程度的影响,以及术后恢复时间。方法对56例接受RFCA术的患者,在RFCA术前,心内电生理检查后,成功消融后即刻、术后第2天和第7天,抽取静脉血,测定D-二聚体（D-Dimer）、血管内血友病因子（Vonwillebrandfactor,vWF）,血浆组织纤溶酶原（Tissue Plasminogen Activator,t-pa）和组织纤溶酶原抑制剂（Plas-minogen Activator Inhibitor,PAI-1）含量。结果与术前比较,血清D-二聚体、vWF浓度以及血浆PAI-1含量在心内电生理检查后、消融成功后即刻和术后第2天均显著上升（P〈0.01）,并于第7天降至术前水平,而t-PA含量在心内电生理检查后,消融成功后即刻和术后第2天显著下降（P〈0.01）,并于第7天降至术前水平。结论 RFCA术可引起血中凝血物质水平的显著增加。术后、术后对其监测有利于指导抗凝药物应用和预防血栓栓塞的发生。     

New in vivo model to assess venous endothelial cell functions. Effect of defibrotide

In the past few years there has been increasing interest in the role of the vascular endothelium as an active modulator of biological responses. Endothelial cells exert antithrombotic activity by the release of prostacyclin [23] and adenine nucleotides [16], the availability on the cell surface of heparin-like substances [3], and thrombomodulin-mediated activation of protein C [8]. In addition, endothelium is involved in the regulation of fibrinolysis by releasing soluble factors, such as tissue plasminogen activator (tPA; [10]) and plasminogen activator inhibitor (PAI; [22, 11]), as well as in the control of vascular responsiveness by the production of smooth muscle relaxing and contracting factors. Endothelial cells have also been shown to synthesize and to express procoagulant activities [18].Many data on endothelial cell functions has been obtained from two experimental models, namely endothelial cell cultures and perfused segments of animal and human vessels. Both are subject to methodological criticism since they only represent in part in vivo conditions, and the necessary experimental manipulations and laboratory procedures greatly modify the naturally occurring cellular functions.In order to overcome such difficulties as far as possible, a new in vivo model has been employed to provide easily assessable and reliable data on the properties of endothelial cells in man. A venous segment was isolated functionally by cannulating a dorsal vein in the hand and a cubital vein in the same arm. Changes observed ex vivo in blood from the cubital vein following infusion into the hand vein of an active drug, can mainly be attributed to its local effect on the venous wall. At the same time, a cubital vein in the other arm was cannulated in order to provide information to distinguish systemic from regional effects.     

蚓激酶口服固体制剂质量分析

摘 要 目的：评价蚓激酶口服肠溶制剂的质量现状及存在问题,为质量标准的提高和临床用药提供参考,同时促进厂家完善产品质量。方法: 按照国家评价性抽验的总体要求,在法定检验方法检验的基础上,开展以下探索性研究,测定样品的重金属残留、蚓激酶的酶学性质分析、蛋白质来源确证与成分分析、近红外光谱模型。统计分析蚓激酶口服肠溶制剂的质量现状并进行评价。结果: 按照法定标准检验,结果显示78批次蚓激酶口服肠溶制剂均符合规定,合格率为100%。探索性研究结果显示来源不同企业的蚓激酶原料中的5种重金属考察,铅、铜、砷、镉均有检出,平均检出量分别为0.4 mg·kg-1,8.4 mg·kg-1,4.4 mg·kg-1与3.4 mg·kg-1;证实蚓激酶具有纤维蛋白溶酶及纤维蛋白溶酶原激酶两种酶活性并建立测定方法;建立了纤维蛋白 聚丙烯酰胺电泳方法检测纤溶活性蛋白质;确证了蚓激酶的来源,并在各企业的样品中鉴定出8～9种溶纤活性相关的蛋白质组分。结论: 根据现行标准检验及探索性研究结果,蚓激酶口服肠溶制剂总体合格率较好,现行标准需提高,生产企业需规范蚯蚓养殖管理过程并建立统一的原材料蚯蚓的质量标准。     

三七皂苷Rg1对t-PA和PAI-1水平的影响

目的探讨三七皂苷Rg1对组织型纤溶酶原激活物(t-PA)和纤溶酶原激活物抑制物(PAI-1)水平的影响及其作用机制。方法运用发色底物法测定三七皂苷-Rg1在家兔体内、外对血浆纤溶酶原激活物(t-PA)和血浆或血小板释放的纤溶酶原激活物抑制物(PAI-1)水平的影响。结果三七皂苷-Rg1在体外能抑制血浆PAI-1活性,提高血浆t-PA活性,其作用强度呈现出剂量依赖性;静脉内给药显示:三七皂苷-Rg1 30、60、120和240 mg.kg-1组能降低血浆或血小板释放的纤溶酶原激活物抑制物(PAI-1)水平,增强血浆t-PA活性,而且本品还能降低激活的血小板所释放的PAI-1水平。结论三七皂苷Rg1能够有效对抗由于PAI-1活性增高和t-PA活性降低所引起的血栓,这可能是其具有抗血栓作用的有效机制之一。