质谱快速鉴定血培养阳性标本的方法研究

目的 建立快速、精准的细菌质谱鉴定方法,以缩短血培养阳性的实验周转时间。方法 共收 集血培养阳性瓶91 个（活性炭吸附瓶）,采集培养液分别转种肉汤和血平板增菌培养4 h 后,用基质辅助激光 解吸/ 电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）进行菌种鉴定。以血平板培养24 h 的质谱鉴定结果为对照, 比较2 种方法细菌质谱鉴定符合率。结果 91 株细菌包括51 株革兰阴性菌和40 株革兰阳性菌。4 h 肉汤增 菌法和4 h 血平板培养法鉴定到种的符合率分别为46.15% 和89.01%,无鉴定结果率分别为47.25% 和3.30%, 错误鉴定率分别为3.30% 和4.40%。2 种方法鉴定到种的符合率比较,差异有统计学意义（P <0.05）,4 h 血平 板培养法鉴定到种的符合率高于4 h 肉汤增菌法。2 种方法对革兰阴性菌鉴定到种的符合率分别为58.82% 和 94.12%,差异有统计学意义（P <0.05）,4 h 血平板培养法高于4 h 肉汤增菌法。2 种方法对革兰阳性菌鉴定到 种的符合率分别为30.00% 和82.50%,差异有统计学意义（P <0.05）,4 h 血平板培养法高于4 h 肉汤增菌法。 结论 4 h 血平板培养质谱鉴定法可快速鉴定血培养阳性标本中的病原菌。     

旋转法细菌培养及快速检测的方法探讨

目的探讨旋转恒温箱进行细菌培养的实用性及直接利用阳性培养瓶内细菌进行鉴定和快速药敏试验。方法比较旋转培养箱和BACTEC9120全自动血培养仪进行细菌培养显示阳性所需时间，并从阳性培养瓶中提取菌体后，直接进行细菌鉴定和显色快速药敏试验，同时转种哥伦比亚血平板进行分纯，再进行常规（标准）的细菌鉴定和K-B法药敏试验，比较符合率。结果利用旋转培养箱和BACTEC9120同时平行培养了105份模拟标本和52份临床标本的细菌，阳性显示时间没有显著差异；直接鉴定细菌与常规法对照，肠杆菌科细菌符合率97．83％，非发酵菌的符合率为72．41％，葡萄球菌符合率90．00％，链球菌符合率68．18％。快速药敏法与K-B法对照符合率为96．82％。结论利用旋转培养箱进行细菌培养可以代替BACTECX3120全自动血培养仪来缩短血液细菌培养时间；直接法鉴定肠杆菌科细菌和葡萄球菌，结果可靠，可养菌不理想；直接显色快速药敏法结果既快速又可靠。     

BACTEC 9050血培养仪的临床应用与评价

目的评价BACTEC9050全自动血培养仪的临床应用情况。方法比较使用BACTEC9050全自动血培养仪对536份血培养结果与传统硫酸镁肉汤培养法对466份血培养结果,对两种方法在培养阳性率、阳性报告时间、培养出的病原菌种类等方面的结果进行对比分析。结果使用血培养仪培养的阳性率为15.1%,90%的阳性标本在48h内报警提示,最早阳性报警时间为3h,共培养出细菌81株27种。传统硫酸镁肉汤培养法培养的阳性率为10.3%,最早出现阳性反应时间为18h,共培养出细菌48株21种。结论BACTEC9050全自动血培养仪与传统硫酸镁肉汤培养法相比,培养阳性率高、阳性报告时间短、培养出的病原菌种类较多,对临床的早期诊断和治疗具有重要的价值。     

BACTEC9050血培养仪的临床应用与评价

目的：评价BACTEC9050全自动血培养仪的临床应用情况。方法：比较使用BACTEC9050全自动血培养仪对536份血培养结果与传统硫酸镁肉汤培养法对466份血培养结果，对两种方法在培养阳性率、阳性报告时间、培养出的病原菌种类等方面的结果进行对比分析。结果：使用血培养仪培养的阳性率为15．1％，90％的阳性标本在48h内报警提示，最早阳性报警时间为3h，共培养出细菌81株27种。传统硫酸镁肉汤培养法培养的阳性率为10．3％，最早出现阳性反应时间为18h，共培养出细菌48株21种。结论：BACTEC9050全自动血培养仪与传统硫酸镁肉汤培养法相比，培养阳性率高、阳性报告时间短、培养出的病原菌种类较多，对临床的早期诊断和治疗具有重要的价值。     

泉州市6例布鲁菌病的微生物生化鉴定及分子生物学确认

目的 验证布鲁菌的微生物鉴定和PCR检测结果的一致性. 方法 利用全自动细菌鉴定仪对血（骨髓）培养阳性的标本进行微生物鉴定,提取细菌DNA,应用布鲁菌通用引物BCSP31进行PCR扩增,产物进行测序. 结果 6例培养阳性的病原菌经鉴定为布鲁菌.经荧光PCR检测、测序结果在线blast分析确认为布鲁菌. 结论 细菌的分离培养结合PCR方法可以提高布鲁菌的检测.     

肝病患者Bactec 9120全自动血培养仪培养标本分析

目的 分析肝病患者Baetee 9120全自动血培养仪培养标本分离菌及阳性报警时间分布情况.方法 培养3471瓶肝病患者标本,使用Phoenix100自动细菌鉴定仪进行细菌生化鉴定和药物敏感性分析.结果共分离出356株,42种病原菌,革兰阴性杆菌197株(55.3%,197/356),阳性球菌132株(37.1%,132/356),念珠菌 24株(7.6%,24/356).总阳性率10.3%,其中血培养阳性率11.2%,腹水培养阳性率4.3%,胆汁培养阳性率92.9%.分离率居前三位的病原菌依次为大肠埃希菌(20.2%),凝固酶阴性葡萄球菌(17.1%),肺炎及产酸克雷伯氏菌(12.9%).在全部356例阳性瓶中,8h阳性报告率为17.1%,8h～24h阳性报告率为62.5%,24h～48h及72小时阳性率分别为14.0%、4.0%,>72h为2.4%.结论肝病患者的培养标本分离菌以革兰氏阴性杆菌为主,其中大肠埃希菌占首位,其次为凝固酶阴性葡萄球菌、肺炎及产酸克雷伯氏菌.培养标本在8h～24h阳性报告率最高.     

不同种类微生物血培养阳性报警时间的临床分析

目的:分析不同种类微生物血培养阳性报警时间对于临床的意义。方法:使用梅里埃VITEK2全自动细菌鉴定药敏仪对7 600份血标本进行培养检测,观察分析细菌阳性检出率和报警时间。结果:7 600份血标本中培养检测细菌阳性率2.61%(198/7600),其中大肠杆菌60株,葡萄球菌34株,肺炎克雷伯杆菌33株,肠球菌27株,链球菌25株,真菌2株,其他17株。24 h内检出142株,24~48 h内检出45株,48~72 h内检出7株,72~96 h内检出2株,96~120 h内检出2株。大肠杆菌、葡萄球菌、肺炎克雷伯杆菌、肠球菌、链球菌及真菌等各有不同的阳性报警时间,大肠杆菌阳性报警时间最早,且与其他微生物相比有统计学差异(P<0.01)。结论:通过分析不同种类微生物血培养阳性报警时间的特点,有助于初步判断微生物的类型,可为临床医师合理选择抗生素类药物提供一定的参考。     

荧光原位杂交法对血培养常见菌的快速鉴定

目的 建立快速鉴定阳性血培养的荧光原位杂交法。方法 针对血培养中的常见病原菌，以细菌16S rRNA和真菌18S rRNA为靶序列，设计种属特异性的寡核苷酸探针。BacT／ALERT仪器报警后，取阳性血培养液15μl于玻片上，50℃杂交1h，然后50℃下洗涤缓冲液洗涤10min，荧光显微镜下检测鉴定结果。同时对临床标本进行常规培养鉴定。结果 118份阳性血培养标本中，116份标本杂交法检测为阳性，敏感率为98．3％。除少数阴性杆菌，阳性杆菌不能鉴定至种属的水平外，92．5％的病原体可于2h内鉴定至种或属的水平。结论 荧光原位杂交法可快速鉴定血培养中的常见菌，为临床细菌和真菌感染的早期用药提供可靠的科学依据。     

血培养阳性病原菌种类及仪器报警时间分析

目的分析血培养阳性病原菌种类及仪器报警时间。方法回顾性收集BacT／Alert3D全自动血培养仪对3035份血液培养的结果,分析血标本在需氧瓶和厌氧瓶中生长细菌的种类及仪器报警时间。结果3035例血培养标本中596份阳性,分离到608株细菌,55株念珠菌,其中革兰阳性细菌占59．1％,革兰阴性细菌占32．6％,念珠菌占8．3％。单纯需氧瓶培养的阳性率为16．2％,单纯厌氧瓶培养的阳性率为4．3％,同时进行需氧瓶及厌氧瓶培养的总阳性率为23．3％。对引起血液感染细菌,仪器在24h、48h和72h内阳性报警率分别为54．6％、84．5％和95．2％。结论同时进行需氧瓶及厌氧瓶培养能提高血培养阳性率。常见引起血液感染的细菌和念珠菌能在5d内得到仪器的阳性报警。     

minivital全自动荧光血培养仪检测1680例标本分析

目的　评价minivital全自动荧光血培养仪临床应用的优越性。方法　回顾性分析minivital全自动荧光血培养仪检测的 1 680例血培养结果的阳性率 ,阳性最早出现时间及检出细菌的种类 ,假阳性率和假阴性率。结果　 1 680例血培养分离到 1 76株细菌 ,阳性率为 1 0 .5 %。细菌最早检出时间为 2h5min ,2 4h内检出细菌的阳性率为 64 .8% ,48h内为 89.2 %。分离出的 1 76株细菌分布于 2 4个种菌属。假阳性率 2 .8% ,假阴性率为 0。结论　minivital全自动荧光血培养仪的应用 ,提高了血培养的阳性率 ,缩短了细菌的检出时间 ,检出的细菌种类较多 ,检验结果快速、准确     

全自动血液细菌培养1147份结果分析

目的　探讨提高血培养阳性率的途径和方法。方法　使用BACTEC 90 50全自动血培养仪 ,对 1147份血培养标本进行需氧培养 ,分析阳性率、检出菌的种类、阳性检出时间、假阳性和假阴性。结果　 1147份血培养标本 ,有 148份阳性 ,共分离出细菌 133株 ,真菌 17株 ,阳性率为 12 .9% ,假阳性率为 0 .3% ;2 4h内阳性占 6 0 .2 % ,4 8h阳性占 85.2 % ,72h为 96 .3% ;阴性报告为 5d。结论　使用BACTEC 90 50全自动血培养仪可提高血培养阳性率 ,缩短检测时间 ,具有操作简便、自动化、污染减少等优点     

VITEK-MS 质谱仪直接检测BacT/ALERT 3D仪阳性血培养瓶微生物的实验研究

目的评估基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（VITEK-MS）仪直接检测BacT/ALERT 3D仪阳性培养瓶微生物方法的可行性与准确性。方法选取2016 年9 月-2016 年11 月安徽医科大学第一附属医院微生物室BacT/ALERT 3D全自动培养仪当天报告阳性的血培养瓶,差速离心法处理后直接用VITEK-MS 进行检测,并与常规鉴定法进行比较。结果150 例阳性培养瓶中,除13 例培养瓶中无细菌生长外,VITEK-MS 直接鉴定法正确检测出97 例（70.8%）菌株,错误检测出10 例（7.3%）菌株,30 例（21.9%）鉴定无结果。其中,革兰阴性杆菌正确鉴定出61 例（88.4%）菌株,鉴定无结果8 例（11.6%）;革兰阳性球菌正确鉴定出36 例（52.9%）菌株, 鉴定错误10 例（14.7%）,鉴定无结果22 例（32.4%）。结论利用VITEK-MS 直接鉴定阳性血培养瓶的方法准确性高、特异性强,革兰阴性杆菌鉴定准确率远高于革兰阳性球菌,且鉴定时间短（只需2 h）。该方法可以作为快速诊断阳性血培养瓶的新方法。     

MALDI-TOF MS直接鉴定腹水培养阳性样本的研究

目的 探讨用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)直接鉴定腹水培养阳性病原菌的方法.方法 收集2016年9～11月培养阳性的腹水标本202瓶,差速离心法富集菌体,利用MALDI-TOF MS对菌液进行直接鉴定.结果 202瓶样本中,196瓶为单菌株感染,6瓶为混合菌感染.单菌株感染中,菌株的种、属鉴定符合率分别为77.6％和93.4％.其中革兰阴性菌的种、属鉴定符合率为75.9％和91.1％;革兰阳性菌的种、属鉴定符合率为80.2％和95.3％;真菌的菌种、属鉴定符合率为12.5％和50.0％.6瓶混合菌感染样本,均鉴定出其中一种菌.结论 利用MALDI-TOF MS直接鉴定腹水培养阳性样本中的病原菌,鉴定准确率高,检测时间短,为腹腔感染的快速诊断提供了有力的检测手段.     

Mini VITAL-100全自动血培养仪的临床应用

目的：评价Mini VITAL-l00全自动血培养仪的临床应用。方法：回顾性分析Mini VITAL-l00全自动血培养仪检测998份血培养，分析其阳性率、细菌种类、检出时间及假阳性和假阴性。结果：在76份阳性标本中共分离出79株细菌(阳性率7．6％)，最短报警时间1h30min，最长报警时间219h45min，24h内检出细菌53．2％，48h内检出74．7％。血培养以革兰阴性杆菌为主(占49．3％)，其次为革兰阳性球菌(29．1％)。有4份假阳性，1份假阴性。结论：Mini VITAL-l00全自动血培养仪快速、准确，操作简便，为及时准确诊断医院感染血培养病原学提供有利条件。     

全自动血培养仪阳性病原菌种类及报警时间分析

目的：分析血培养阳性病原菌种类及仪器报警时间。方法：用BDBACTEC9120全自动血培养仪检测笔者所在医院2010年4月-2012年4月共计2180份血标本,分析血标本在需氧瓶和厌氧瓶中生长细菌的种类及仪器报警时间。结果：2180例血培养标本中报警阳性282例,其中真阳性263例,阳性率为12．1％。分离出细菌269株,其中革兰阳性球菌占40．1％,革兰阴性杆菌占57．2％,真菌占2．6％。其中仅需氧瓶报阳的阳性率为6．3％,仅厌氧瓶报阳的阳性率为2．8％,需氧瓶及厌氧瓶均报阳的阳性率为2．9％;最快阳性检出时间为5．02h,24h内检出的阳性数占69．1％,48h检出的阳性数占92．5％,72h检出的阳性数占97．O％;假阳性率为0．87％,假阴性率为O．09％。结论：应用BDBACTEC9120全自动血培养仪同时进行需氧瓶及厌氧瓶培养能提高血培养阳性率,缩短了阳性检出时间。     

453株血培养分离菌株的分布和耐药性分析

目的:分析医院血流感染的主要病原菌的分布和耐药性,对血流感染进行及时治疗和有效的预防.方法:对我院2010年1月～12月收集3980份血培养标本培养采用BacT/Alert3D全自动血培养仪,分离菌株鉴定和药敏试验采用VITEK-2全自动细菌鉴定药敏仪,应用改良Hodge试验和EDTA协同试验进行碳青霉烯酶检测.结果:从3980份血培养标本分离出致病菌453株(11.4％),革兰阴性菌占50.4％(228/453),其中大肠埃希菌占57.0％( 130/228)、肺炎克雷伯菌占11.4％ (26/228)、鲍曼不动杆菌占6.6％( 15/228),发现2株碳青霉烯类耐药的肺炎克雷伯菌,鲍曼不动杆菌对碳青霉烯耐药为71.6％;革兰阳性菌占42.3％( 192/453),其中葡萄球菌中耐苯唑西林葡萄球菌占85.1％;真菌占5.1％( 23/453),厌氧菌占2.2％(10/453).结论:引起医院患者血流感染的主要病原菌以革兰阴性细菌为主,多重耐药菌株分离率增高,特别是出现碳青霉烯类耐药的肺炎克雷伯菌.     

聚合酶链反应检测血液中的沙门菌

目的:探讨快速检测血液中沙门菌方法。方法:采用聚合酶链反应检测粒细胞、血浆及接种2h后的血培养液。结果:34例血培养阳性标本中粒细胞及2h后的血培养液DNA均为阳性(有457bp的特异产物),而血浆标本DNA阳性仅为24例;在16例血培养阴性而临床疑似患者粒细胞中DNA为阳性,培养2h后的血培养液有8例为阳性,血浆均为阴性,2周后肥达试验均为阳性;40例发热待查患者三者均为阴性。结论:同时检测粒细胞和接种2h后的血培养液中沙门菌DNA是一种简便、快速、灵敏和特异的诊断沙门菌的新技术,可提供早期、快速的实验室诊断。     

伤寒杆菌聚合酶链反应检测方法

目的 探讨聚合酶链反应快速检出血培养物中的伤寒杆菌。用于伤寒杆菌菌血症的诊断．方法 根据伤寒杆菌鞭毛抗原基因ＤＮＡ核苷序列设计特异性革酸引物,应用聚合酶链反应技术快速检出血培养物中的伤寒杆菌。结果 对伤寒杆菌和７株非伤寒要直菌,同时进行ＰＣＲ增,结果只有伤寒杆菌出现４５８ｂｐ的牧场划性扩增区带,其他７株非伤寒 杆菌均未出现４５８ｂｐ的扩增菌悬液进行扩增,结果表明,在１００个菌细胞时即可扩增出明显的     

门诊患者血培养病原菌分布及耐药性分析

目的：了解本院门诊患者血培养阳性标本的病原菌分布及耐药情况,为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法：采用BacT/Alert 3D全自动血培养仪进行血培养,VITEK 2 COMPACT全自动微生物分析系统进行菌株的鉴定和药敏试验,使用Whonet 5.6软件进行耐药率分析。结果：从7 774瓶门诊血培养送检标本中共分离出病原菌1 221株,培养阳性率为15.7%,剔除重复株后阳性菌株为569株。其中革兰阴性菌325株（占57.1%）,包括大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌,分别占25.0%、12.8%和3.3%,并检出沙门菌12株、创伤弧菌5株和布鲁氏菌3株;革兰阳性菌237株（占41.7%）,包括表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌和人葡萄球菌等,分别占10.5%、6.2%和5.1%;真菌7株（占1.2%）。病原菌的耐药率相对来说较低,肺炎克雷伯菌的产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）阳性率为11.1%,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分离率为28.6%,肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药率小于1.0%,未发现耐万古霉素葡萄球菌。结论：门诊患者血培养的主要病原菌为大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和金黄色葡萄球菌,并且这些细菌对临床常用抗菌药物有较好的敏感性。