人胚胸腺组织培养及其移植恒河猴的实验研究

应用组织培养，发现人胚胸腺组织贴块法培养呈典型的３个过程。培养１周后胸腺基质细胞（ＴＳＣ）大量生长，其胞浆ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ呈弱阳性表达，电镜观察ＴＳＣ细胞胞浆含有典型的张力微丝束，ＴＳＣ细胞培养上清液能促进肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）的体外增殖和表型转化。胸腺块悬浮培养能使胸腺上皮成分集中，ＨＬＡ－ＤＲ阳性细胞比例下降。用１２号针头对恒河猴三角肌行移植实验，结果表明移植是安全的，且胸腺上皮组织能在肌组织中生长，但仅维持１周，２周后呈条索样萎缩。     

Two new human exocrine pancreatic adenocarcinoma cell lines in vitro and in vivo.

Two human pancreatic carcinoma cell lines, PC-1 and PC-2, were established from nude mice xenografts derived from metastatic pancreatic carcinomas of two patients. The two cell lines propagated continuously in vitro over 19 and 19.5 months. The cells grow in a monolayered sheet with doubling times of 47 hours for PC-1 and 58 hours for PC-2. The cells exhibited epithelial morphology and were confirmed to be malignant epithelial cell lines by morphological study, CEA and cytokeratin immunocytochemistry, flow cytometry and Con A test. The tumors caused by inoculation of cultured PC-1 and PC-2 into nude mice retained the histological and ultrastructural features of the original tumors. The findings proved that the two cell lines were human exocrine pancreatic adenocarcinoma cell lines. Chromosomal analysis together with flow cytometry data revealed that the two cell lines had the human aneuploid karyotypic features with model chromosome numbers of 48 and 66.

     

人卵巢上皮癌细胞原代培养及细胞系BUPH:OVSC-1的建立

目的:为人卵巢上皮癌的研究提供更多体外研究模型,确立卵巢上皮癌原代培养的条件,建立细胞系.方法: 将25例卵巢上皮癌手术切除的肿瘤组织或腹水标本进行体外培养,比较不同组织培养方法的效果.对所建卵巢癌细胞系的形态学、染色体核型、生长增殖及裸鼠种植情况进行观察.结果: 建立一套人卵巢上皮癌原代培养方法,使其体外培养传代数扩展至10～15代.经原代培养得到一株人卵巢癌细胞系BUPH:OVSC-1,其形态学、染色体核型分析、接种致瘤性的观察结果表明,该细胞系符合人体恶性细胞特征.裸鼠种植瘤病理切片该细胞呈肉瘤样细胞形态,电镜及角蛋白免疫组化证实其为上皮起源.结论:应用改良的卵巢上皮癌原代培养方法能改善细胞的体外生存期.BUPH:OVSC-1是一株特殊的人卵巢癌细胞系,符合人卵巢肉瘤样癌细胞系的特征,可作为卵巢肉瘤样癌研究的实验模型.     

INVESTIGATION OF SGC-7901 CELL LINE ESTABLISHED FROM HUMAN GASTRIC CARCINOMA CELLS

The SGC-7901 gastric adenocarcinoma cell line is established. It is cultured from material obtained from metastasized lymph nodes on the gastric lesser curvature in a female patient. The cell line re produces continuously every 7 days. Polygonal and epithelioid cells account for 95.2To of the cell popula tion. There is marked poikilocytosis. The chromo- some modal number is 67, constituting 42To of the karyotyped cells. Chromosome aberration is observed in 6'70 0f the cases. Percentage of secondary tumor growth is high by animal inoculation. Both the cul tured cells and those of the primary tumor were PAS positive and Accian blue negative. Transmission elec tron microscopy (TEM) revealed microvilli over the cell surface and intracellular secretory granules; mul tiple intercellular junctional and inlay structures were also demonstrated.     

骨髓活检在转移性癌病理诊断中的作用

目的探讨骨髓活检诊断转移性癌的价值。方法收集我院2002年~2005年21例骨髓活检诊断为转移性癌的病例,结合组织学和免疫组化检测的结果,分析骨转移性癌与临床的关系。结果21例骨转移性癌占同期骨髓活检总病例数的0.31%(21/7006)。临床表现为局部或全身性骨痛,三系下降。影像学检查所有病例均见局部或全身性骨病变。光镜下骨小梁间区基质不同程度纤维组织增生,异型上皮样细胞散在或片状分布,腺样、小梁状或实体巢状排列。最后病理诊断证实胃肠道癌5例、肺癌5例、乳腺癌5例和前列腺癌4例,肝癌和甲状腺癌各1例。其中免疫组化胃肠道癌CA19-9阳性,肺癌TTF-1阳性而TG阴性,甲状腺癌TTF-1和TG均阳性,乳腺癌E-Cadherin阳性,前列腺癌PSA阳性,肝癌HepPar1阳性。结论对于临床不明原因的骨痛或贫血患者,影象学又表现局部或全身性骨病变时,建议进行骨髓活检,当病理学见骨髓内异型上皮样细胞浸润,纤维组织增生时提示骨髓转移性癌,免疫组化进一步明确原发肿瘤。     

免疫组化方法检测胃癌组织中组织蛋白酶B的表达

目的 研究胃癌组织中组织蛋白酶B的表达及探讨组织蛋白酶B表达与胃癌预后指标（肿瘤组织学类型,TNM分期）的关系。方法 应用免疫组织化学方法研究54例胃腺癌标本中组织蛋白酶B的表达。结果 周围正常胃粘膜上皮组织蛋白酶B阳性率为5．6％（3／54）,胃癌组织中的阳性率为61．1％（33／54）,较周围正常胃粘膜上皮明显升高（P＜0．01）。组织蛋白酶B的表达与胃癌预后指标（肿瘤组织学类型,TNM分期）无明显相关性。结论 人胃癌组织中组织蛋白酶B的表达明显升高。     

胃粘液腺癌分泌细胞器电镜酶细胞化学研究

利用酶细胞化学方法对胃粘液腺癌细胞葡萄糖-6-磷酸酶(G6-Pase)焦磷酸硫胺素酶(TPPase)和酸性磷酸酶(AcP)进行了光、电镜 水平的定位观察。作者发现胃粘液腺癌G6Pase、TPPase反应较弱,AcP反应多明显增强;电镜下呈弱G6Pase反应的内质网常被挤至细胞周边部或夹于粘液颗粒之间,呈“点彩”状;TPPase反应除见于高尔基体扁平膜囊外,还见于一些未成熟分泌颗粒内,提示分泌颗粒的加工和分泌加速;癌细胞溶酶体数量增加,泌噬作用活跃,AcP反应明显.作者认为胃粘液腺癌分泌功能异常活跃与其畸形分化过程有关;溶酶体的大量增加为其易于转移提供了必要的形态学基础。     

模拟缺血/再灌注诱导人离体胃黏膜上皮细胞的凋亡

目的模拟缺血/再灌注诱导人离体的胃黏膜上皮细胞损伤模型,观察再灌注不同时间点胃黏膜上皮细胞凋亡情况并分析其规律。方法采用人胃黏膜上皮细胞株进行体外培养并传代,细胞以缺氧（5%CO2、1%O2、94%N2）＋无糖KR液模拟缺血、缺氧,复氧、复糖模拟再灌注诱导胃黏膜上皮细胞凋亡,用流式细胞仪、Ho-echst33258染色法观察正常对照组及模拟损伤组于模拟缺血1 h,再灌注3、6、12 h细胞凋亡的情况及变化规律。结果①胃黏膜上皮细胞12～24 h贴壁,24 h后有少量上皮样细胞从周边爬出,48 h后细胞呈指数样生长,72 h后细胞已基本能达到融合。②模拟胃缺血/再灌注后细胞凋亡率于缺血1 h、再灌注6 h时出现高峰,且与正常对照组相比差异有统计学意义（P〈0.01）。经Hoechst33258染色,荧光显微镜下观察可见细胞于缺血1 h、再灌注6h时产生典型的凋亡形态学变化如核浓染、核碎裂、边集等。结论成功模拟了缺血/再灌注诱导人离体的胃黏膜上皮细胞损伤模型;该损伤模型可引起胃黏膜上皮细胞的凋亡,且在缺血1 h、再灌注6 h时为高峰。     

人卵巢上皮癌的体外培养及耐药株的诱导

目的研究人卵巢上皮癌体外培养的方法及其耐药株的诱导方法。方法取卵巢上皮癌患者的卵巢癌实体瘤、囊内液及腹水,分别用直接培养法,胰酶消化培养法和胶原酶消化培养法体外培养。检测细胞对顺铂和环磷酰胺的药物敏感性,选择适当的药物和浓度诱导卵巢上皮癌耐药株。并比较耐药株与诱导前的母株间克隆形成率和耐药蛋白表达的差异。结果腹水和囊内液直接培养较实体瘤培养易成功。实体瘤培养以胶原酶消化培养法获得细胞数最多,混杂细胞最少。取腹水来源的稳定传至30代的卵巢癌细胞用环磷酰胺诱导耐药株成功。检测其克隆形成率和耐药蛋白表达均高于诱导前。结论本实验探讨了人卵巢上皮癌体外培养的多种方法,成功培养一株卵巢黏液性囊腺癌细胞,达建系要求,并成功诱导其耐药株。可用于卵巢上皮癌发生及复发机制和治疗及预防方面的研究。     

组织块法培养人胃成纤维细胞及其结缔组织生长因子的表达

[目的]探索人胃成纤维细胞体外培养的技术方法及其结缔组织生长因子表达情况。[方法]采用组织块贴壁培养法进行人胃成纤维细胞体外培养并传代,倒置相差显微镜下观察成纤维细胞形态,并用免疫细胞化学法检测培养细胞的波形蛋白与角蛋白表达。用RT-PCR法检测人胃成纤维细胞结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达,免疫细胞荧光染色法检测人胃成纤维细胞CTGF蛋白表达情况。[结果]人胃成纤维细胞培养成功传代,表现为长梭形或星形细胞,免疫细胞化学鉴定细胞波形蛋白阳性,角蛋白阴性。RT-PCR法与免疫细胞荧光染色法证实体外培养的人胃纤维细胞表达CTGF。[结论]组织块法培养的人胃成纤维细胞可在体外稳定培养、传代,人胃成纤维细胞能合成CTGF。     

大鼠自发性乳腺癌瘤株的建立和病理学研究

[目的]评价重组人干扰素α2b鼻腔喷雾剂对预防治疗SARS-CoV病毒感染恒河猴的作用。[方法]10只恒河猴随机分为2组,每组5只。分别为试验组(重组人干扰素α2b鼻腔喷雾剂)和对照组(空白干扰素)。分别在攻毒前19h和1h,攻毒后7h、23h、31h、47h、55h、71h、95h和119h不同时间经鼻吸入受试物,0.4ml/只。按计划定时取咽拭子做real-timePCR检测和病毒分离;取静脉血做病毒分离检测、中和抗体、IgG、血常规、血生化和血凝指标。[结果]1.SARS感染对照组:全部动物咽拭子标本经real-timePCR均检出SARS-CoV病毒,持续时间从攻毒后2天至8天。攻毒后2天3只、5天1只、7天2只,其咽拭子标本中病毒分离阳性,进一步证实病毒在体内的复制。攻毒后,诱导产生高滴度的抗体和中和抗体,证实病毒感染。大体解剖全部动物肺脏为灰白色,有大面积出血,其中2只动物肺脏与胸壁有粘连,组织病理称典型SARS肺炎性病变。2.干扰素试验组:和对照组相同时间取的咽拭子等标本中,real-timePCR检测和病毒分离均未检出病毒。攻毒后病毒导致机体产生的中和抗体和IgG抗体的反应很弱。血常规、血生化和血凝指标结果表明干扰素试验组动物攻毒后各项指标较试验前比较没有显著性改变;大体解剖动物肺脏为灰粉色,4只动物肺脏有少量出血,其中1只动物肺脏与胸壁有粘连,组织病理未见典型SARS肺炎性病变。因而认为,重组人干扰素α2b鼻腔喷雾剂可以有效阻断SARS-CoV病毒对恒河猴的感染;;为预防人类感染SARS提供参考。     

人晶状体上皮细胞体外培养方法的改良

目的改良现有人晶体上皮细胞的培养方法,建立稳定的体外培养模型。方法用改良培养法对人胚胎眼晶体前囊膜进行培养,并利用形态学检查方法进行检测和鉴定。结果组织块法在加入培养基24 h内即可见细胞生长,且保持上皮细胞形态,1wk左右细胞融合。在体外可传5代以后细胞衰老,存活者呈成纤维细胞状。消化法中2 d后见细胞壁生长,1周左右细胞融合。结论成功地改进了建立晶状体上皮细胞体外培养模型的方法,为研究后囊膜混浊发病机制提供了方法学基础。     

大肠癌相关抗体Fab段噬菌体呈现库的表达和活性鉴定

OBJECTIVE: To express the original human Fab antibody phage display library with positive recombined bacterium XL1-blue-Pcomb3 and identify its specific binding activity with colorectal cancer cells in vitro after screening with human colorectal cancer-related antigens. METHOD: The recombination rate of Fd fragment of the heavy chain and insertion of kappa chain of the antibodies was determined with PCR, and the original Fab library was expressed. The antigens were extracted from 3 sensitized colorectal cancer tissues previously used for construction of the original Fab library and from 13 non-sensitized colorectal cancer tissues, along with the antigens from LoVo, HT-29 and LS-174T cells cultured in vitro. The original Fab antibody library was screened with the 3 groups of mixed antigens derived in preceding procedure and 3 tertiary Fab antibody libraries were obtained, which were then mixed in equal volume for subsequent tests of binding activity with human colorectal cancer tissues and cells in vitro using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and immunohistochemical staining. Specimens of gastric and esophageal carcinomas and normal intestinal mucosa, together with liver cancer cells and gastric cancer cells were utilized as control. RESULT: The recombination rate of Fd and kappa chain were 40 % and 70 % respectively, and the rate of their simultaneous insertion into Pcomb3 vector was 28%. The capacity of library for Fab fragment genes was 2.1x10(6), and the original antibody libraries screened with the 3 groups of mixed antigens were enriched to varied degrees, which all displayed relatively specific binding activity with human colorectal cancer tissue and cells in vitro. CONCLUSION: Colorectal cancer-related antibody Fab fragments are obtained through screening phage display library, which show relatively specific binding activity with human colorectal cancer tissues and cells.     

溶菌酶在胃癌中的表达及超微结构定位

应用免疫组织化学ＡＢＣ法观察溶菌酶（Ｌｙｓｏｚｙｍｅ，ＬＺＭ）在各型胃癌及其转移淋巴结、十二指肠溃疡切端胃粘膜的表达，结果显示该酶在粘液细胞型胃癌的阳性率最高，在转移淋巴结癌细胞中的表达有增强趋势，十二指肠溃疡切端的胃粘膜中主要存在于胃固有腺体的颈粘液细胞、胃小凹底部的柱状细胞及十二指肠腺细胞。蛋白Ａ胶体金免疫电镜证实ＬＺＭ主要贮存于胃癌细胞的分泌颗粒，其中以中等电子密度分泌颗粒较多。     

胃腺鳞癌5例的临床病理和超微结构观察

本文报道5例罕见的胃腺鳞癌的临床病理和其中3例的超微结构改变。概述了肿瘤的形态、大小、侵犯胃壁深度和局部淋巴结转移情况,并着重对其中腺癌和鳞癌两种成分的分化、分布和组成关系作了详细描述。3例作透射电镜检查,发现鳞癌细胞中均有明显张力原纤维,腺癌细胞中则有分泌颗粒或分泌小管,部分瘤细胞中可以同时见到上述两种结构。对胃腺鳞癌的命名,鉴别诊断和组织来源等也作了讨论。     

体外培养人胚晶状体上皮细胞生长特性的研究

目的观察体外培养人胚晶状体上皮细胞的生物学特性。方法组织块贴壁法培养人胚晶状体上皮细胞,通过倒置相差显微镜、透射电子显微镜,采用免疫细胞化学法分析人胚晶状体上皮细胞的生长特性。结果体外培养的原代人胚晶状体上皮细胞在组织块贴壁48～72 h后从组织块边缘长出,具有上皮细胞的形态特点,第10天达到融合。第二代人胚晶状体上皮生长曲线近＂S＂形,经过1～2 d的潜伏期后进入对数生长期,需10 d左右达到融合,细胞形态呈六角形或椭圆形、超微结构保持正常,免疫细胞化学SABC法染色结果显示细胞浆内α-晶状体蛋白染色阳性。结论人胚晶状体上皮细胞具有增殖能力,第二代人胚晶状体上皮细胞是进行白内障相关研究的合适实验对象。     

血管内皮生长因子-C在胃癌中的表达及其反义基因转染对人胃癌细胞SGC-7901的影响

目的:探讨胃癌组织中血管内皮生长因子-C(VEGF-C)的表达与肿瘤新生淋巴管形成的关系。观察以pCI-neo为载体的反义血管内皮生长因子-C(Anti-VEGF-C)转染的人胃癌细胞SGC-7901中VEGF-C蛋白的表达,及其对人胃癌细胞生长的抑制作用。方法:取72例胃癌标本的癌旁组织,通过RT-PCR检测VEGF-C的mRNA表达;免疫组化检测VEGFR-3,计算出微淋巴管的密度并行相关统计分析。以脂质体转染法转染既往试验合成的重组质粒pCI-neo-anti VEGF-C到体外培养的人胃癌细胞株,以未转染组为对照,用免疫组化和Western blot分析VEGF-C基因及蛋白的表达,最后用MTT法及流式细胞仪分析其对细胞生长的抑制作用。结果:淋巴结转移阳性组中VEGF-C mRNA阳性表达85.7%,高于阴性组的20.0%(P<0.05);VEGF-C mRNA表达阳性组淋巴管密度6.36±1.66,阴性组3.95±1.52(P<0.05);淋巴结转移阳性组淋巴管密度6.65±1.57,阴性组3.75±1.47(P<0.05)。重组质粒pCI-neo-anti VEGF-C转染体外培养的人胃癌细胞株后,免疫组化和Western blot均显示pCI-neo-anti VEGF-C转染组无VEGF-C mRNA及其蛋白的表达,MTT检测表明pCI-neo-anti VEGF-C转染组活细胞数较其它各组均低(P<0.05)。结论:VEGF-C能促进癌旁微淋巴管增生、提高胃癌侵袭力;反义VEGF-C转染可封闭人胃癌细胞SGC-7901VEGF-C mRNA,减少其VEGF-C蛋白的表达,抑制其体外生长。     

桦褐孔菌提取物对人胃癌BGC-823细胞株的抑制增殖及诱导凋亡作用

[目的]观察桦褐孔菌提取物对人胃癌BGC-823细胞株的抑制增殖及诱导凋亡作用.[方法]选用人胃癌细胞株BGC-823进行体外培养,用MTT法测定桦褐孔菌提取物对BGC-823细胞株的增殖抑制率,应用倒置显微镜、HE染色光学显微镜、AO/EB双染色荧光显微镜及透射电子显微镜等仪器观察桦褐孔菌提取物对肿瘤细胞形态结构的影响.[结果]10,20,40,80 mg/L桦褐孔菌提取物对胃癌BGC-823细胞株有抑制增殖作用,且表现出浓度依赖关系.HE染色在光学显微镜下可见桦褐孔菌组肿瘤细胞体积变小、变圆,核染色质浓缩或形成块,部分细胞膜形成凋亡小体;在倒置显微镜下可见桦褐孔菌组肿瘤细胞体积变小、变圆,核染色质凝集,细胞间连接疏松,贴壁能力明显减弱;在AO/EB双染色荧光显微镜下可见桦褐孔菌组肿瘤细胞胞核染色质呈橘红色,胞质内的橘红色或橘黄色荧光消失,细胞周围有呈亮绿色的荧光凋亡小体;在透射电子显微镜下可见80 mg/L桦褐孔菌提取物组肿瘤细胞核染色质固缩边集,胞质内可见有空泡,凋亡小体凸出于细胞表面.[结论]桦褐孔菌提取物可抑制人胃癌BGC-823细胞株的增殖,诱导肿瘤细胞凋亡.     

转录因子Ets-1在胃癌组织中的表达及意义

目的研究转录因子Ets-1在人胃癌组织中的表达,探讨其与胃癌浸润转移的关系.方法运用免疫组化S-P法检测86例胃癌及癌旁组织中Ets-1的表达.结果 Ets-1在胃癌组织中的阳性表达率为74.4%,显著高于癌旁组织(40.7%,<0.05);Ets-1阳性表达率在乳头状腺癌、管状腺癌及低分化腺癌与印戒细胞癌/黏液腺癌之间差异有显著性(P<0.01);Ets-1的表达与胃癌浸润深度、淋巴结转移及临床分期有关,与性别、年龄、肿瘤大小、远处转移均无关.结论 Ets-1在胃癌组织中具有高表达率,其阳性表达与肿瘤的浸润、转移密切相关.     

EB病毒对体外培养的人鼻咽上皮细胞感染途经的研究

用异硫氰酸荧光素(FITC)标记EB病毒(EBV)感染体外培养的人胚鼻咽上皮和鼻咽癌细胞株(CNE-1和CNE-2),对照为EBV受体阳性的Raji和Ramos细胞。在荧光显微镜下发现FITC-EBV 可与Raji和Ramos细胞结合,如事先经未标记的EBV处理则与 FITC-EBV 结合的阳性细胞数明显下降。贴壁生长的鼻咽上皮细胞不能与FITC-EBV 结合,而刮落的鼻咽上皮细胞则能与FITC-EBV 结合,结果提示鼻咽上皮细胞质膜微细损伤可能成为EBV 直接进入细胞的门户,受损的鼻咽癌细胞更易为EBV 侵入。