补阳还五汤对全脑缺血再灌注不同时点大鼠皮质神经细胞谷氨酸受体2表达的影响

目的 研究补阳还五汤抗全脑缺血后再灌注损伤的分子机制.方法 将SD大鼠随机分为3组,即正常组、模型组和药物组(补阳还五汤预干预),模型组和药物组再分别设置2、12、24、48、72 h五个观察时间点.连续给药5 d后,采用改良的Pulsinelli四血管闭塞法复制全脑缺血大鼠模型,再灌注后2、12、24、48、72 h分别检测各组大鼠皮质神经细胞谷氨酸受体2(glutamate receptor 2,GluR2)的表达水平.结果 与正常组比较,再灌注各时点模型组大鼠大脑皮质神经细胞GluR2表达水平显著降低(P<0.01);与模型组比较,再灌注各时点药物组GluR2表达水平显著升高(P<0.01);与再灌注2 h比较,再灌注12、24、48、72 h药物组GluR2表达水平显著升高(P<0.01).结论 补阳还五汤可预防大鼠脑缺血再灌注引起的GluR2表达减少,且在再灌注2 h后这种抑制作用更强.     

补阳还五汤对全脑缺血模型大鼠再灌注不同时点皮质神经细胞钙超载的影响

目的:采用膜片钳技术和离子图像分析技术,同步观察补阳还五汤预干预对全脑缺血大鼠皮质神经细胞L型Ca2 通道及细胞内Ca2 浓度的影响,探讨Ca2 信号异常参与缺血性神经细胞损伤的机制及补阳还五汤抗脑缺血的分子机制,为临床应用本方防治缺血性脑病提供理论基础,并为中药复方研究探索新的思路和方法.方法:参照改良的Pulsinelli四血管闭塞法复制全脑缺血大鼠模型,缺血后大鼠分别在存活2,2,4,8及72 h后进行皮质神经细胞急性分离,负载荧光指示剂Fura-2/AM,用钙离子成像系统检测单个神经细胞内Ca2 浓度.单通道电流经EPC-9膜片钳放大器放大,用Pulsefit Pulse采集至计算机.用分析软件TAC进行测量.结果:补阳还五汤预干预除再灌注12 h外,可显著降低其他各时点大脑皮质神经细胞内Ca2 浓度,对缺血再灌后两次Ca2 堆积均表现明显的抑制作用.补阳还五汤再灌注72 h,皮质神经细胞L型Ca2 通道平均开放时间显著降低,再灌注2 h,皮质神经细胞L型Ca2 通道开放概率显著降低.结论:降低缺血再灌注不同时点皮质神经细胞内Ca2 浓度及在缺血再灌注不同时点分别降低L型Ca2 通道开放概率和开放时间是补阳还五汤抗脑缺血的重要机制.补阳还五汤预干预对缺血性神经细胞损伤的预防和治疗有非常积极的意义.     

补阳还五汤对脑缺血再灌注大鼠皮质神经细胞凋亡的影响

目的研究补阳还五汤对脑缺血再灌注大鼠皮质神经细胞凋亡的影响。方法36只SD大鼠随机分为3组，每组12只：①假手术组；②模型对照组；③补阳还五汤组。线栓法制作大鼠脑缺血再灌注模型，脑缺血-再灌注48h后TIC染色计算脑梗塞体积，TUNEL染色检测神经细胞凋亡，免疫组化方法检测缺血侧皮质Bcl-2／Bax的表达，电镜观察线粒体的变化。结果脑缺血再灌注后缺血侧皮质神经细胞凋亡增多，同时Bcl-2表达减少，Bax表达增多，Bcl-2／Bax比值下降，线粒体肿胀且大多破裂。补阳还五汤干预后，细胞凋亡减少，脑梗塞体积减小，Bcl-2／Bax比值上升，线粒体肿胀减轻。结论补阳还五汤可能通过抑制神经细胞凋亡而减小脑梗塞体积，其机制可能是通过上调Bcl-2／Bax比值，保护线粒体，防止发生线粒体通透性转变。     

补阳还五汤对全脑缺血再灌大鼠皮层神经元NR1的影响

目的：研究补阳还五汤抗全脑缺血后再灌注损伤的分子机制。方法：将66只SD大鼠随机分为3组,即正常组、模型组和药物组（补阳还五汤顸干预）,模型组和药物组再分别设置2、24h2个观察时间点。连续给药5d后．采用改良的Pulsinelli四血管闭塞法复制全脑缺血大鼠模型,再灌后2、24h采用免疫组化法检测各组大鼠皮质神经细胞NMDA受体（N—methyl—D—aspartic acid receptor）亚单位NR1的表达水平。结果：与正常组比较,模型组2、24h2个不同时间点,NR1的表达水平显著升高（P〈0．05）;与模型组比较,药物组再灌注后2、24h2个不同时间点,NR1表达水平显著降低（P〈0．01）。结论：补阳还五汤预干预对全脑缺血再灌注模型大鼠大脑皮层神经元NR1表达水平的增高有调低作用。     

补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织ET-1基因表达的影响

目的 :观察补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织 ET- 1基因表达的影响 ,探讨其对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 :采用线栓法制成大鼠 MCAO再灌注模型 ,并用地高辛精标记 ET- 1基因进行原位杂交。结果 :补阳还五汤治疗组缺血再灌注侧皮层及尾状核 ET- 1基因表达显著低于生理盐水对照组 (P<0 .0 5 ) ,两组大鼠缺血再灌注侧皮层和尾状核 ET- 1基因表达均显著高于健侧相应脑区 (P<0 .0 5 ,P<0 .0 1)。结论 :脑缺血再灌注可以诱导脑组织 ET- 1基因的异常表达 ,从而进一步加重脑损伤 ,补阳还五汤可在一定程度上下调脑缺血诱导的ET- 1基因的表达 ,可能是其防治缺血性脑血管病的主要作用机制之一。     

补阳还五汤对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡和Caspase-3基因表达的影响

目的:研究补阳还五汤对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡和Caspase-3基因表达的影响。方法:成年健康雌性Wistar大鼠40只,随机选取10只作为假手术组,其余应用线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞-再灌注模型,将造模成功的20只大鼠随机分为阴性对照组,补阳还五汤治疗组(补阳还五汤组),每组10只。补阳还五汤组经腹腔注射补阳还五汤(用量为每公斤体重16 g)治疗,阴性对照组和假手术组给予等量的0.1mol/L PBS缓冲液腹腔注射。原位末端标记(TUNEL)技术检测神经细胞凋亡,免疫组化技术和酶联免疫(ELISA)技术检测Caspase-3的表达。结果:假手术组大鼠皮质、纹状体、海马区脑组织凋亡细胞数量较少,呈散在分布,而Caspase-3表达微弱。阴性对照组大鼠脑组织各区凋亡细胞数量较假手术组显著增多(P0.05),Caspase-3表达增强,显著高于假手术组(P0.05)。补阳还五汤组各区脑组织TUNEL阳性细胞数量及Caspase-3表达均明显低于阴性对照组(P0.05)。结论:补阳还五汤可下调Caspase-3表达而抑制大鼠脑缺血再灌注损伤诱导的细胞凋亡。     

补阳还五汤对脑缺血再灌注大鼠脑组织AKT蛋白表达的影响研究

目的:探讨补阳还五汤对脑缺血再灌注大鼠脑组织AKT蛋白表达的影响。方法:选取SPF级SD雄性大鼠90只,将大鼠随机分为五组,假手术组10只,模型组、阳性组、高剂量补阳还五汤组、低剂量补阳还五汤组各20只。以阳性组为标准对照,模型组为空白对照。假手术组、模型组分别给10 mg/kg蒸馏水,阳性组给予6.8 mg/kg硫酸氢氯吡格雷,低剂量、高剂量组大鼠每天给予13 g/kg、26 g/kg补阳还五汤溶液,持续2周。取大脑中海马体部分固定、包埋后,行石蜡切片及HE染色。光镜下观察海马体组织病理组织学变化。制备蛋白样品、电泳、转膜、发生免疫反应,凝胶成像分析软件检测目标蛋白荧光强度,测定AKT、p-AKT蛋白表达。结果:模型组海马组织细胞排列紊乱,数量减少,细胞核固缩深染,染色质凝聚,空泡样变性坏死数量增加。假手术组海马体区不产生缺血性表现,细胞形态、结构正常。给药组多数神经细胞结构、形态改变相对较轻,核固缩少,且高剂量组对脑损伤的改善程度大于低剂量组。模型组p-AKT阳性细胞率显著高于假手术组(P<0.01);阳性组、补阳还五汤高剂量组p-AKT阳性细胞率显著高于模型组(P<0.01)。模型组p-AKT蛋白表达水平显著低于假手术组(P<0.01);阳性组、补阳还五汤高剂量组p-AKT蛋白表达水平显著高于模型组(P<0.01);各组间AKT蛋白表达无统计学差异(P>0.05)。结论:补阳还五汤可激活PI3K/AKT信号通路,信号通路中AKT、p-AKT蛋白表达升高,促进AKT磷酸化。补阳还五汤还可保护神经血管结构和功能,改善脑缺血再灌注组织病理损伤,发挥保护脑作用。     

补阳还五汤对脑缺血再灌注大鼠血浆TXB2、6-keto-PGF1a含量的影响

目的揭示补阳还五汤及拆方抗脑缺血再灌注损伤的作用机理.方法通过四血管结扎法制作SD大鼠脑缺血再灌注模型,观察总方组与拆方黄芪组、活血组药物对模型血浆血栓素B2(TXB2)、6-酮-前列腺素F1a(6-Keto-PGF1a)含量的影响.结果模型组大鼠血浆TXB2含量明显增高,6-Keto-PGF1a含量明显降低;总方组与拆方黄芪组、活血组均能降低TXB2含量,升高6-Keto-PGF1a含量,总方组作用最强.结论补阳还五汤及拆方具有通过影响花生四烯酸的代谢产物血栓素B26-Keto-PGF1a含量,从而达到抗脑缺血再灌注损伤的作用.总方组的疗效明显优于拆方组.     

大秦艽汤、镇肝熄风汤及补阳还五汤对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨大秦艽汤、镇肝熄风汤和补阳还五汤对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响。方法 将大鼠随机分为生理盐水组、大秦艽汤组、镇肝熄风汤组和补阳还五汤组。线栓法复制局灶性脑缺血再灌注模型，观察术后3、24、72h神经学分级评定、脑含水量、钙离子含量、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的改变。结果 大秦艽汤及镇肝熄风汤对脑缺血再灌注损伤无保护作用，补阳还五汤有明显保护作用。结论 补阳还五汤对缺血性中风具有较好的治疗作用。     

补阳还五汤联合依达拉奉对脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡的影响

目的研究补阳还五汤联合依达拉奉对小鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的影响。方法将50只小鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组、依达拉奉组和两药联用组,每组10只,其中缺血再灌注后1d和7d各5只。首先制备小鼠大脑中动脉缺血模型,TUNEL法观察神经细胞凋亡指数（AI）,免疫组化法观察小鼠大脑皮质神经元Bcl、Bax-2和Caspase-3表达阳性细胞数。结果与模型组比较,补阳还五汤组、依达拉奉组、两药联用组小鼠脑神经细胞AI值均明显降低（P＜0.05）,Bcl-2/Bax比值明显升高（P＜0.05）,Caspase-3表达阳性细胞数明显减少（P＜0.05）,其中又以两药联用组更为明显（P＜0.05）。结论两药联用能降低脑缺血再灌注损伤后神经细胞的凋亡,降低促凋亡基因Caspase-3的表达,协同发挥脑保护作用。     

补阳还五汤对脑缺血后大鼠脑内GLT-1表达的影响

目的 :观察脑缺血后补阳还五汤对大鼠脑内海马CA1区GLT-1(glutamate transporter-1)表达的影响。方法 :大脑中动脉栓塞法制备缺血性脑损伤大鼠模型,术后补阳还五汤灌胃,灌胃1、3、5、7 d后灌注取材。采用免疫组织化学染色法观察海马CA1区的GLT-1表达,采用免疫荧光双染确定GLT-1的细胞定位。结果 :同模型组相比,补阳还五汤在1 d和3 d后可显著增加海马CA1区GLT-1的表达,随后GLT-1的表达逐步下降,而且两组之间没有明显差异(5 d和7 d)。另外免疫荧光双染表明GS主要表达于星形胶质细胞。结论 :补阳还五汤可通过提高脑缺血后CA1区GLT-1的表达减少谷氨酸的浓度发挥保护作用。     

补阳还五汤对急性脑梗死患者侧支循环的影响

【目的】通过经颅多普勒超声(TCD)观察补阳还五汤对急性脑梗死患者侧支循环的影响。【方法】将符合纳入标准的80例急性脑梗死患者随机分为治疗组及对照组各40例,2组中途各脱落2例,最终各有38例纳入研究。对照组采用西医标准化治疗方案治疗,治疗组在对照组西医标准化治疗方案治疗基础上加服补阳还五汤,2组疗程均为7 d,于治疗3 d及治疗7 d后采用经颅多普勒超声观察2组责任血管血流速度及侧支循环代偿的改善情况,并于治疗7 d后行神经功能缺损评分(NIHSS)。【结果】(1)治疗组治疗3 d后出现侧支循环改善12例(占31.58%),治疗7 d后增加至16例(占42.11%);对照组治疗3 d与治疗7 d后出现侧支循环代偿改善分别为3例(占7.89%)和4例(占10.53%);治疗组在改善侧支循环代偿方面作用优于对照组(均P0.01)。(2)治疗组治疗3 d后出现责任血管的平均血流速度(Vm)增快者9例,治疗7 d后增加至11例;对照组治疗3 d后与治疗7 d后出现责任血管的Vm增快者各只有1例;治疗组在改善责任血管的血流速度方面作用优于对照组(P0.05)。(3)治疗7 d后,2组NIHSS评分均显著降低(P0.05或P0.01),且治疗组在改善NIHSS评分方面作用优于对照组(P0.01)。(4)治疗组与对照组在治疗过程中均无不良事件发生。【结论】补阳还五汤能够持续促进责任血管血流速度的改善及促进侧支代偿血管的建立,挽救缺血半暗带,更好地促进患者的神经功能缺损的恢复。     

补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:观察补阳还五汤对大鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用.方法:SD大鼠56只随机分假手术组、模型对照组、补阳还五汤1组和补阳还五汤2组,每组14只.线栓法制作大鼠脑缺血-再灌注模型.再灌注48小时后观察大鼠神经功能缺损评分情况,TTC染色测量脑梗死体积,干湿重法测量缺血侧脑含水量,常规HE染色观察病理变化.结果:脑缺血-再灌注48小时,补阳还五汤1、2组大鼠神经功能缺损评分明显高于对照组(P<0.05),脑梗死体积及脑水肿也明显减轻(P均<0.05),脑组织病理学显著改善.补阳还五汤1、2两组比较,2组疗效稍好于1组,但无统计学意义(P>0.05).结论:补阳还五汤对大鼠脑缺血-再灌注损伤具有保护作用.     

补阳还五汤调控小胶质细胞/巨噬细胞极化抑制大鼠脑缺血后炎症反应研究

[目的]研究补阳还五汤(Buyang Huanwu Decoction, BYHWD)对大鼠脑缺血后小胶质细胞/巨噬细胞M1/M2极化及神经炎症的影响。[方法]采用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)模型,缺血90 min后再灌注。将大鼠随机分为假手术组、模型组和BYHWD组,BYHWD组缺血后24h开始予BYHWD(13g·kg-1)灌胃,连续给药14d。缺血后第14天处死大鼠,分别采用Iba1/CD16/32、Iba1/CD206免疫荧光双标染色检测缺血区M1型和M2型小胶质细胞/巨噬细胞表型,qRT-PCR检测M1型小胶质细胞/巨噬细胞表面标记物CD86、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)及促炎因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的m RNA表达;M2型小胶质细胞/巨噬细胞表面标记物CD206、精氨酸酶-1(arginase-1,Arg-1)及抗炎因子白细胞介素-10(interleukin-10, IL-10)、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)的mRNA表达。[结果]免疫荧光双标染色结果表明,与模型组比较,BYHWD显著减少缺血区M1型小胶质细胞/巨噬细胞(CD16/32+)数量(P0.01),增加M2型小胶质细胞(CD206+)数量(P0.05)。qRT-PCR结果表明,与模型组比较,BYHWD显著下调M1型小胶质细胞/巨噬细胞表面标记物CD86、iNOS和促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达(P0.01),上调M2型小胶质细胞/巨噬细胞表面标记物CD206、Arg-1和抗炎因子IL-10、TGF-βmRNA表达(P0.01)。[结论] BYHWD可能通过促进激活的小胶质细胞/巨噬细胞从M1型向M2型转换,从而抑制大鼠脑缺血后炎症反应。     

补阳还五汤治疗急性脑梗死ET、CGRP检测的指导意义

用补阳还五汤治疗急性（发病２ｄ以内）脑梗死患者３５例,观察治疗前后血浆内皮素（ＥＴ）、降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）水平,并与正常对照组进行对比。治疗前血浆ＥＴ、ＣＧＲＰ水平与正常人相比有显著差异（Ｐ＜０．０１）,治疗后则显著改善（Ｐ＜０．０１）,且在基本治愈组、有效组、无效组中亦有显著差异（Ｐ＜０．０５,Ｐ＜０．０１）,改善程度基本治愈组＞有效组＞无效组。ＥＴ、ＣＧＲＰ值又可作为评估疗效的有价值指标。     

补阳还五汤对Cav-1敲除小鼠脑缺血后mTOR通路的影响

目的探讨小窝蛋白(caveolin-1,Cav-1)对脑缺血后哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路的影响及补阳还五汤抗脑缺血的可能作用机制。方法将Cav-1基因敲除(knock out,KO)与野生型(wild type,WT)小鼠随机分为KO假手术组、KO模型组、KO补阳还五汤组(补阳组)、WT假手术组、WT模型组及WT补阳组。采用大脑中动脉栓塞法建立脑缺血模型,干预14 d后观察小鼠神经功能评分;免疫组化检测大脑mTOR、磷酸化核糖体S6蛋白激酶(phospho-ribosomal S6 kinase,p-S6K1)、磷酸化真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白-1(phospho-eukaryotic initiation factor 4E-binding protein 1,p-4EBP1)的蛋白表达;qRT-PCR检测大脑mTOR的mRNA水平。结果与同类假手术组比较,其他4组神经功能评分、mTOR、p-S6K1、p-4E-BP1蛋白表达及mTOR mRNA表达明显上升(P<0.01);与同类模型组比较,KO补阳组、WT补阳组神经功能评分明显下降(P<0.01),各蛋白表达与mRNA表达明显上升(P<0.01);与WT模型组比较,KO模型组神经功能评分上升(P<0.05),各蛋白与m RNA表达明显下降(P<0.01);与WT补阳组比较,KO补阳组神经功能评分明显上升(P<0.01),各蛋白及m RNA明显下降(P<0.01)。结论Cav-1基因的缺失会导致mTOR通路活性降低并加重脑缺血后神经功能损伤;补阳还五汤可能通过Cav-1调控mTOR信号通路的活性,发挥抗脑缺血损伤的作用。     

小结补阳还五汤治疗中风后遗症

随着社会人口的老龄化,社会竞争力的不断增强,中风的发病率越来越高,中风后遗症也成为一种常见病,并以老年人居多。对于中风后遗症的治疗,后人多以著名医家王清任所创方剂补阳还五汤为底方治疗,从临床疗效来看,具有不可替代的作用。现代医学对其治疗机．制的研究逐年深入,为更有效地治疗中风后遗症奠定了基础。综合治疗也越来越被人们所推崇,通过资料查询,补阳还五汤联合针灸以及西医疗法为多见。该文将对其进行一一阐述。