猪囊尾蚴一种蛋白抗原的cDNA分子克隆

目的从猪囊尾蚴cDNA文库中克隆某种编码蛋白抗原的基因.方法用脑囊尾蚴病人血清筛选猪囊尾蚴cDNA文库,获得阳性克隆后,经PCR技术扩增噬菌体载体中插入的cDNA片段,并将其亚克隆入pUC18质粒载体中,用双脱氧核苷酸末端终止法测定插入片段的核苷酸序列.测序后与GenBank中的核苷酸序列进行同源性分析.结果经3次筛选,从cDNA文库中克隆出一个阳性克隆,测序后其长度为546 bp,含有一个开放读码框,编码158个氨基酸.同源序列分析结果表明此基因片段与编码猪囊尾蚴的一种免疫原性蛋白基因(NC-9)同源性高达99%.结论本研究克隆出一种编码猪囊尾蚴蛋白抗原的基因.     

猪囊虫体表抗原用于 ELISA 诊断囊虫病的研究

应用猪囊尾蚴体表抗原对66例临床确诊的囊虫病人用 ELISA 进行检测,同时以囊液粗抗原作比较观察。阳性率分别为95.5%和68.2%,两者差异非常显著(P<0.005)。两种抗原对同批血清的反应强度也呈现明显差异(P<0.05)。用囊虫体表抗原和囊液粗抗原同时检测50名健康人血清,假阳性率分别为2%与12%;两种抗原与10例包虫病人血清分别有8例和4例出现交叉反应。     

囊虫病免疫研究进展

囊虫病是由猪带绦虫的幼虫———囊尾幼寄生在人和家畜体内引起的人畜共患病。其成虫寄生在人体内,幼虫寄生在猪、野猪、人、骆驼、猫等体内。此病在亚、非、拉一些国家流行,尤以中非、南非、中南美一些地区为严重。在我国,该病流行区分布广泛,但以华北、东北、西北、西南一些地区感染率为高,其它地区散在分布。关于囊虫病的免疫,国内外学者已做过大量的研究,本文从囊尾蚴抗原、免疫机理、囊尾蚴疫苗三个方面对做过的工作作一综述。１　囊尾蚴抗原囊尾蚴抗原功能的筛选是该病免疫的重点和难点,因为其抗原成分十分复杂,与多种寄生虫…     

一种新的猪囊尾蚴蛋白的cDNA分子筛选、序列分析和克隆

目的免疫学筛选猪囊尾蚴cDNA文库,为猪囊尾蚴病临床免疫学诊断提供新的候选抗原分子。方法利用脑囊尾蚴病人血清免疫学筛选猪囊尾蚴cDNA文库,获得阳性克隆,经PCR技术扩增噬菌体载体中插入的cDNA片段,测序后与生物信息网站进行分析,并将一个类似血吸虫核糖体蛋白的基因克隆入PMD-18T载体。结果从cDNA文库中筛选出1个编号为5H的基因,长度是528bp;对其编码的氨基酸序列的分析显示其与日本血吸虫的L18a核糖体蛋白具有高度同源性。结论克隆了猪囊尾蚴的未知核糖体蛋白基因。     

应用抑制ELISA和阻滞IHA检测囊虫病患者血清囊虫游离…

本文应用抑制ＥＬＩＳＡ和阻滞ＩＨＡ检测囊虫病患者血甭游离循环抗原和总循环抗原。共检测治疗前患者、吡喹酮治疗１，４，７个疗程患者血甭１２０份、３８份、３２份和２３份。抑制ＥＬＩＳＡ检测ＦＣＡｇ的阳性率和定量结果分别为７７．５％，８１．５％，５１．３％，和８．７％；阻滞ＩＨＡ检测ＦＣＡｇ的阳性率和定量结果分别为７５％，７６．３％和８．７％。     

Dot-ELISA的囊虫病免疫诊断价值

本文用纯化糖蛋白抗原对１１６ 例囊虫病人血清进行Ｄｏｔ－ ＥＬＩＳＡ检测,阳性率为９６．８％ （１１２／１１６）,３６ 例健康人血清皆为阴性,２７ 例肝吸虫病与包虫病人血清除２例外均为阴性,并以ＩＨＡ和ＥＬＩＳＡ作对照,结果表明Ｄｏｔ－ ＥＬＩＳＡ 在３种方法中敏感性和特异性较高     

ELISA检测脑囊虫病患者脑脊液中囊尾蚴抗原

应用酶联免疫吸附实验(ELISA),以38例脑囊虫病人脑脊液(CSF)和26例脑部其它疾患的CSF为对照,用兔抗囊尾蚴抗血清进行了囊尾蚴抗原检测,28例呈阳性反应,阳性率73.68％;对照组26例全部为阴性。本方法特异性强,重复性和敏感性较好,简单迅速,有希望用于脑囊虫病的临床诊断。     

循环抗体和循环抗原检测诊断囊虫病的价值

本文对81例囊虫病人血清同时用 ELISA 和 Dot—ELISA 检测循环抗体和单抗抑制性 ELISA检测循环抗原,并评价了三法诊断该病的价值。前两法的阳性率均为96.3%,但特异性都较差,特别是与包虫病具有明显的交叉反应。81例中血清循环抗原的阳性率为69.1%。血或脑脊液的循环抗原有一项阳性的阳性率为91.1%。此法特异性高,75例正常人、30例包虫病、79例其他寄生虫病患者、5例非寄生虫病患者血清和10例非寄生虫病患者的脑脊液中循环抗原的测定均为阴性。对19例经肠虫清治疗半年到1年的患者(均为随机到本院复诊的患者)的血清检测,前二法的阳性率仍高达84.2%,而循环抗原的值除1例为0.64μg/ml 外,其余病例均为阴性。     

46例横纹肌内猪囊尾蚴病的病理观察

对４６例横纹肌内猪囊尾蚴病进行了病理学观察。病理检查发现，２４例以囊性结节就诊者，囊虫存活并见头节；另２２例中３例见完整死虫，１例见虫体残骸，１８例仅为肉芽肿而无虫体。对本病的病理变化与虫体存活、死虫及无虫体的关系作了简要讨论。     

猪囊尾蚴cDNA文库的构建

从猪囊尾蚴内提取 m RNA经反转录合成 c DNA,应用定向克隆的方法 ,将合成的 c DNA片段重组到噬菌体载体 Uni- ZAP XR的 Eco R 和 Xho 双酶切位点之间。5 μg poly(A) RNA所构建的表达文库容量为 0 .98×10 6重组子。经含有 IPTG和 X- gal的颜色选择平皿测定 ,提示重组率达 86 %。随机取 6个噬菌斑做 PCR,检查插入片断的长度在 10 0～ 2 0 2 0 bp之间     

应用特异单克隆抗体测定猪囊尾蚴病人血清和脑脊液中的循环抗原

我们应用特异的抗猪囊尾蚴抗原的单克隆抗体(CCy1),建立了单克隆抗体抑制性ELISA方法以测定囊尾蚴病患者的循环抗原(CAg)。测定灵敏度为ng水平。83例囊尾蚴病患者血清的CAg阳性率为71.1％。其范围为0.16-128μg/ml。对41例囊尾蚴病患者,同时测定了血清和脑脊液中的CAg。单项或两项阳性的总阳性率为90.2％。114例正常人血清、107例其它寄生虫病患者(包括30例包虫病患者)的血清及10例非寄生虫病患者的脑脊液的CAg量均为零。有23例囊尾蚴病患者治疗半年到1年后,有21例抗原浓度为零。另2例分别为0.64μg/ml和1.6μg/ml。表明测定CAg不仅可以确定活动性囊尾蚴感染,而且可考核疗效。     

杜氏利什曼原虫cDNA文库的构建

目的 :建立杜氏利什曼原虫 cDNA文库 ,以获取个体基因表达产物和研究基因结构。方法 :以杜氏利什曼原虫四川人分离株 m RNA为模板 ,体外合成 cDNA,以噬菌体λgt11DNA为载体构建文库。结果 :共获 2× 10 6重组子 ,插入比例为 4 8%。文库经抗杜氏利什曼原虫前鞭毛体全虫兔抗血清筛选 ,共筛 2× 10 4重组子 ,获 3个阳性表达克隆 ,表达产物的分子量分别为 :136k Da、160 k Da和 148k Da。结论 :已构建成的表达型杜氏利什曼原虫 cDNA文库 ,其插入比例和表达效率均较高。     

恶性疟原虫FCC1/HN株EBA-175基因克隆及序列分析

目的　将恶性疟原虫 FCC1/ HN株 175 ku的红细胞结合抗原 (EBA- 175 )基因克隆入测序载体 ,测定其序列 ,为以后研究其结构与功能奠定基础。　方法　利用 PCR扩增技术 ,分两个片段从恶性疟原虫 FCC1/ HN株基因组 DNA中 ,特异扩增 EBA- 175全基因编码序列。扩增产物经纯化回收后 ,T- A克隆入测序载体 p MD18- T,转化大肠杆菌 (E.coli) DH5 α,筛选阳性克隆 ,并进行双酶切及 PCR扩增鉴定 ,获得含有编码 EBA- 175基因的重组质粒 p MD18- T- EBA。用Sanger双脱氧链终止法进行 DNA序列测定。　结果　FCC1/ HN株 EBA- 175基因序列与 Camp株基本一致 ,全长 430 8bp,编码 1435个氨基酸 ,含有与 Camp株相似的 C片段。利用计算机软件对其 RII区的 F2亚区以及 4肽进行抗原表位分析 ,结果显示这些区域可能含有抗原表位。　结论　EBA- 175全基因编码序列的测定 ,为以后其结构与功能的研究奠定基础     

猪囊尾蚴抗原-B基因cDNA编码区的克隆

[目的 ]扩增和克隆猪带绦虫囊尾蚴 Ag B基因的 c DNA编码区。 [方法 ]提取猪囊尾蚴总 RNA中 ,利用 RT- PCR技术扩增出 Ag B基因 c DNA编码区 ,然后将其克隆到载体 p UC118中进行序列分析。 [结果 ]PCR反应产物为单一条带 ,大小为 2 .6 kb。测序结果与澳大利亚株猪囊尾蚴 Ag B序列有 99.8%的同源性 ,二者的氨基酸序列有 99.3%的同源性。 [结论 ]成功地克隆了猪囊尾蚴 Ag B基因 c DNA编码区。     

恙虫病立克次体Karp株Sta56部分基因片段的扩增、克隆及鉴定

目的为了进一步完善恙虫病立克次体的株型鉴定技术,并且为临床提供诊断试剂。方法本文采用ＮＰＣＲ技术,参考并自行设计两对寡核苷酸引物（Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４）,从恙虫病立克次体Ｋａｒｐ株基因组ＤＮＡ中特异扩增出编码Ｓｔａ５６抗原的部分基因片段,经纯化后用ＢａｍＨⅠ和ＨｉｎｄⅢ双酶切后,克隆到质粒ＰＵＣ１８中,转化大肠杆菌ＴＧ１,经ＰＣＲ和双酶切鉴定。结果与结论构建了重组质粒ＰＵＣ１８－ＲＫ,从而为该基因片段的表达奠定了基础。     

日本血吸虫副肌球蛋白全基因克隆、测序及体内表达

目的： 将日本血吸虫大陆株副肌球蛋白（ Ｓｊｃ９７） 编码区全基因克隆及测序, 并研究 Ｓｊｃ９７ 全基因核酸疫苗在小鼠体内的表达。方法： 抽提日本血吸虫成虫总 Ｒ Ｎ Ａ, 逆转录 聚合酶链反应 （ Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ） 扩增编码 Ｓｊｃ９７的全基因ｃ Ｄ Ｎ Ａ, 双脱氧链末端终止法测 Ｄ Ｎ Ａ 序列。构建含 Ｓｊｃ９７ 全基因的质粒表达载体 （ｐ Ｃ Ｍ Ｖ Ｓｊｃ９７） , 并用免疫荧光染色法研究ｐ Ｃ Ｍ Ｖ Ｓｊｃ９７ 在小鼠体内的表达特性。结果与结论： 用 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 扩增获得了 Ｓｊｃ９７ 的编码区全基因ｃ Ｄ Ｎ Ａ, 并测定了该基因编码区的全序列。与日本血吸虫菲律宾株、日本株及曼氏血吸虫副肌球蛋白编码区全基因比较, 核苷酸序列同源性分别为： ９９４ ％ 、９９２ ％ 和９１０ ％ ; 推导的氨基酸序列同源性分别为：９９７ ％ 、９９８ ％ 和９６０ ％ 。ｐ Ｃ Ｍ Ｖ Ｓｊｃ９７ 核酸疫苗能在注射的小鼠局部肌肉组织表达 Ｓｊｃ９７ 。