栀子苷对甲型H1N1流感病毒的抑制作用

为探讨栀子苷对甲型H1N1病毒的抑制效应,进行了相关体内外实验研究。体外实验中采用MTT法判定栀子苷对MDCK细胞的毒性作用。以帕拉米韦为阳性对照药,根据MTT比色值,观察栀子苷对甲型H1N1流感病毒感染的MDCK细胞的细胞病变效应(cytopathic effects,CPE),计算不同给药方式(预防给药、直接灭活及治疗给药)及不同药物剂量干预下,栀子苷对甲型H1N1流感病毒的抑制效率;体内实验以甲型H1N1流感病毒感染ICR小鼠,建立甲型H1N1流感病毒小鼠肺炎模型,比较栀子苷不同剂量干预下,小鼠肺指数、肺组织病理学检查及小鼠存活率。实验结果显示,栀子苷的细胞毒性小,其TD₅₀大于1 040 μmol/L;栀子苷在预防、直接灭活及治疗给药方式下,对甲型H1N1流感病毒感染的MDCK细胞抗病毒EC₅₀分别为91.90、96.25和87.68 μmol/L,对CPE有明显抑制作用;栀子苷可显著降低甲型H1N1流感病毒感染小鼠的肺指数、减轻肺组织炎症损伤、降低小鼠死亡率、延长生存时间。实验结果表明,栀子苷在体外能有效抑制甲型H1N1流感病毒对MDCK细胞的CPE,在体内能有效保护甲型H1N1流感病毒对小鼠肺部的攻击作用,可能为流感病毒的防治提供一个新的选择。     

小儿金宁口服液抗菌抗病毒实验研究

目的 观察小儿金宁口服液体内外抗菌和抗病毒作用。方法 采用试管法测定小儿金宁口服液在体外对12种临床常见致病菌的影响;采用金黄色葡萄球菌、肺炎双球菌致小鼠腹腔感染模型观察其体内抗菌作用;采用甲型、乙型流感病毒致细胞病变法观察其体外抗病毒作用;采用流感病毒、仙台病毒致小鼠呼吸道感染模型观察其体内抗病毒作用。结果 小儿金宁口服液对所试9种细菌、甲型、乙型流感病毒均有不同程度的抑制作用,其中对金黄色葡萄球菌、甲型流感病毒的抑制作用较强。小儿金宁口服液能不同程度地减少金黄色葡萄球菌、流感和仙台病毒感染小鼠的死亡率,延长其存活时间,降低病毒感染小鼠的肺指数,减轻肺病变程度。结论 小儿金宁口服液具有一定的抗菌抗病毒作用。     

金柴抗病毒胶囊防治甲型H1N1流感病毒PR8株感染小鼠肺炎的实验研究

目的观察金柴抗病毒胶囊对甲型H1N1流感病毒PR8株感染小鼠肺炎的防治作用,为进一步临床应用提供依据。方法采用滴鼻感染正常小鼠和免疫低下小鼠建立流感病毒感染肺炎模型,分别采用治疗和预防性给药,观察给药后各组对小鼠肺指数、死亡率、生存时间的影响。结果①金柴抗病毒胶囊所试3个剂量组均可明显降低正常小鼠感染后和免疫低下小鼠感染后肺指数、减少死亡率并延长生存时间。②金柴抗病毒胶囊所试3个剂量组在降低以上两种动物模型肺指数、降低免疫低下小鼠感染后死亡率的作用方面与达菲比较,差异无统计学意义。结论金柴抗病毒胶囊对流感病毒感染有较好的治疗和预防作用。     

板蓝根颗粒对甲型流感病毒小鼠的作用

目的测定板蓝根颗粒抗流感病毒的药效作用。方法 A/California/7/2009(CA7)病毒滴鼻感染BALB/c小鼠观察14d,观察板蓝根对甲型H1N1流感病毒感染小鼠的保护作用,计算小鼠存活率、存活天数以及延长生命率。感染的小鼠第5天每组小鼠处死一半,取肺组织,观察板蓝根对甲型H1N1流感病毒感染小鼠肺组织的保护作用。结果板蓝根可明显延长甲型H1N1流感病毒感染小鼠的存活天数并提高存活率,病理结果显示板蓝根对甲型H1N1流感病毒感染的小鼠的肺组织有一定程度的保护作用,与模型组比较差异显著(P0.05)。结论板蓝根颗粒对甲型H1N1流感病毒感染的小鼠有较好的保护作用。     

金欣口服液抗呼吸道病毒实验研究

目的:观察金欣口服液对小鼠流感病毒和副流感病毒性肺炎模型的影响及体外对腺病毒致细胞病变作用的影响.方法:小鼠经滴鼻感染流感病毒和仙台病毒造成肺炎模型,计算小鼠死亡保护率、肺指数和肺指数抑制率;体外抗病毒实验采用MTT法测病变抑制率.结果:金欣口服液对流感病毒和仙台病毒致小鼠肺部炎症有明显抑制作用,可明确降低流感病毒和仙台病毒感染后小鼠的死亡率;体外实验表明,金欣口服液对腺病毒引起的细胞病变有明显抑制作用.结论:金欣口服液对流感病毒、仙台病毒、腺病毒均有抑制作用.     

L-ficolin对A型H1N1流感病毒感染小鼠的保护作用

目的:探讨L-ficolin分子与A型H1N1流感病毒的相互作用机制。方法:将pcDNA3.1-L-ficolin真核表达质粒以及对照质粒分别肌注小鼠后感染A型H1N1流感病毒,观察感染小鼠的体重变化、肺内病毒血凝滴度,并通过肺指数以及肺组织HE染色判断感染小鼠的肺部病变情况,ELISA检测肺组织IFN-γ和IL-4的水平。结果:A型H1N1流感病毒感染后,与对照组相比,注射了pcDNA3.1-L-ficolin质粒的小鼠体重无明显下降,肺内病毒血凝滴度较低,肺组织病变较轻,并且肺内IFN-γ和IL-4的水平增高。结论:pcDNA3.1-L-ficolin对小鼠抵御A型H1N1流感病毒感染有一定的保护作用,该质粒可作为抗流感病毒的新型候选制剂。     

疏风解毒胶囊防治流感体内药效学研究

目的评价疏风解毒胶囊在体内对H1N1流感病毒感染的防治作用。方法研究采用甲型H1N1流感病毒FM1株和PR8株滴鼻感染免疫低下小鼠造成肺炎模型,分别进行治疗性和预防性给药,观察小鼠肺指数、病死率,并进一步进行分子机理研究。结果①致免疫低下小鼠肺炎模型实验中,治疗性给予疏风解毒胶囊4d后,三个剂量组肺指数、肺组织中的病毒载量均明显降低;FM1株三个剂量组动物的死亡数均显著降低,PR8株中剂量组动物的存活天数显著增加;②致正常小鼠肺炎模型实验中,治疗性给药可明显降低肺组织中的病毒载量;提高小鼠肺组织IFN-γ含量,增加血清中SOD活力;并降低血清中TNF-α的含量。结论疏风解毒胶囊可通过影响小鼠免疫功能,改善流感病毒引起的小鼠肺炎症状;降低H1N1感染小鼠的肺指数,对病毒性感冒有较好的治疗;并可明显降低感染动物的死亡率,延长存活天数。     

不同品系小鼠感染甲型流感病毒肺小血管内血栓形成

目的本实验旨在观察不同品系小鼠感染甲型流感病毒后肺组织内血栓形成的情况。方法使用H1N1病毒A/California/7/2009(CA7)株和H3N2病毒A/Brisbane/10/07株,对BALB/C小鼠、Scid小鼠、NOD/LTJ小鼠、BALB/C-nu小鼠、NOD-Scid小鼠和icosl-KO小鼠经乙醚麻醉后进行滴鼻攻毒。检测小鼠感染后肺组织病毒拷贝数并观察肺组织病理学改变。结果 H1N1和H3N2滴鼻攻毒的各组小鼠均染毒,病理表现为程度略有差异的间质性肺炎。13只H1N1病毒感染小鼠和6只H3N2感染小鼠在肺组织中观察到多个小血管内有血栓形成,血栓成分主要为纤维素和血小板。结论各品系小鼠感染H1N1和H3N2流感病毒后均可能出现肺组织内血栓形成。     

甲型H1N1流感病毒感染不同免疫缺陷小鼠的比较

目的宿主免疫系统的功能状态在病毒的感染中起着至关重要的作用,本实验观察了不同免疫缺陷小鼠感染甲型H1N1流感病毒的差异。方法使用六个品系的近交系小鼠,经乙醚麻醉后进行滴鼻攻毒,分析其在病毒感染后存活率、体重变化和肺组织病理改变的异同。结果感染H1N1病毒的6种小鼠在观察的14 d内,野生型的C57BL/6小鼠感染开始体重缓慢下降,感染后期有所回升,有半数存活;BALB/c小鼠和四种免疫缺陷品系小鼠感染病毒后体重随病情发展快速下降,死亡率均为100%。野生型C57BL/6小鼠感染初期为较弥漫的间质性肺炎,后期病变逐渐局限;BALB/c小鼠和四种免疫缺陷品系小鼠感染病毒后出现弥漫的中重度间质性肺炎,细支气管上皮有变性坏死,但炎症细胞明显少于C57BL/6小鼠。结论在甲型H1N1流感病毒的初次感染中固有免疫和特异性免疫分别在感染的初期和后期起主要作用,宿主免疫系统的功能状态影响着甲型H1N1病毒感染和预后。     

银芩抗感微丸对流感病毒PR8株感染小鼠的治疗作用

目的:研究银芩抗感微丸对甲型H1N1流感病毒PR8株感染小鼠的治疗作用。方法:在滴鼻感染正常小鼠建立流感病毒肺感染模型的基础上,检测小鼠的肺指数与肺病毒载量。结果:银芩抗感微丸各剂量组均可明显降低甲型H1N1流感病毒PR8株感染小鼠的肺指数与肺病毒载量。结论:银芩抗感微丸对甲型H1N1流感病毒PR8株感染小鼠具有一定的治疗和保护作用。     

菊黄上清含片抗流感病毒的研究

目的: 研究菊黄上清含片在小鼠体内的抗流感病毒作用.方法: 以流感病毒鼠肺适应株FM1滴鼻感染小鼠,用高、中、低浓度菊黄上清含片药液灌胃小鼠,观察小鼠的生存时间、死亡率、肺指数和肺组织病变程度.结果: 菊黄上清含片对流感病毒FM1致小鼠肺病变有明显抑制作用,对流感病毒FM1感染小鼠具有显著的保护作用,明显抑制小鼠体内流感病毒FM1的增殖.结论: 菊黄上清含具有明显的抗流感病毒作用.     

木芙蓉叶提取物抗病毒作用实验研究

目的:观察木芙蓉叶提取物体内、体外抗病毒的药理作用.方法:通过使用呼吸道合胞病毒(RSV)、甲型流感病毒(Flu A)和副流感病毒(HPIVs)致细胞病变的体外感染模型,以治疗指数(TI)为指标,观察木芙蓉叶提取物体外抗病毒作用;通过使用呼吸道合胞病毒(RSV)感染小鼠模型,以对小鼠病毒感染肺指数的抑制率为体内抗病毒活性指标,观察木芙蓉叶提取物体内抗病毒作用.结果:体外试验表明,木芙蓉叶提取物对呼吸道合胞病毒(RSV)、甲型流感病毒(Flu A)和副流感病毒(HPIVs)这3种病毒均有不同程度的抑制作用;体内试验表明,木芙蓉叶提取物表现出一定的体内抗病毒活性,在一定浓度范围内,抗病毒活性随剂量的增大而增强.结论:木芙蓉叶提取物具有显著的抗病毒药理活性.     

MEK1/2抑制剂U0126体内外抗流感病毒研究

目的观察丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的激酶MEK1/2抑制剂U0126对甲型H1N1流感病毒PR/8/34株感染正常小鼠肺炎模型和人肺泡上皮细胞(A549)感染模型的作用。方法采用PR/8/34株感染ICR小鼠模型,通过肺指数评价感染后第2天和第5天U0126的抗病毒作用,采用实时荧光定量PCR技术观察U0126对小鼠肺脏组织病毒载量的作用。采用PR/8/34株感染A549细胞模型,通过观察细胞病变(CPE)法研究U0126对细胞病变的作用。结果 PR/8/34株流感病毒感染小鼠第2天,U0126组与模型对照组比较肺指数和病毒载量均显著降低(P0.05);U0126对A549细胞病变作用具有明显的抑制作用。结论 U0126对体内外甲型流感病毒感染模型均具有抗病毒作用。结果提示,药物抗病毒作用可能通过抑制MAPK(Raf/MEK/ERK)信号反应途径实现的设想,为研究新的抗病毒药物提供新思路,为进一步揭示药物抗病毒机理提供药效学研究基础。     

人季节性H1N1流感病毒小鼠感染模型的建立

目的制备人季节性H1N1流感病毒的小鼠感染模型,为研究流感病毒致病性、研发抗病毒药物提供模型动物。方法将人季节性H1N1流感病毒在鸡胚尿囊腔扩增后,滴鼻接种小鼠,4 d后将小鼠处死,挑选感染体征严重者进行实时荧光PCR(FQ-PCR)检测肺中的流感病毒,将检测阳性的肺上清在鸡胚尿囊腔扩增,接种于下一代小鼠。比较各代小鼠对流感病毒的适应情况,直至小鼠出现明显的感染体征,取肺研磨制成匀浆,获得流感病毒鼠肺适应株并检测其半数致死量(LD50)。将10 LD50的病毒液接种于小鼠,建立人季节性H1N1流感病毒的小鼠感染模型,观察模型小鼠的一般活动状态、体质量变化、肺部病变,HE染色观察肺部病理切片,计算肺指数,FQ-PCR检测病毒RNA。结果人季节性流感病毒在小鼠体内传代4次后,鼠肺适应株制备完成,其经鼻的LD50为10-2.41/0.05 mL。人季节性流感病毒的小鼠感染模型,一般状态差,体质量明显减轻,肺指数增大,70%出现死亡。病理切片观察病变明显,FQ-PCR显示流感病毒阳性。结论成功建立了人季节性H1N1流感病毒的小鼠感染模型。     

甲型H1N1流感病毒致宿主细胞氧化与凋亡之间的关系研究

目的:观察甲型H1N1流感病毒诱导的犬肺(MDCK)细胞氧化与凋亡之间的关系.方法:MDCK细胞培养后,甲型H1N1流感病毒感染Oh、1h、3h、6h、12h、24h、48h,在各时间点进行检测:采用流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双染料法检测细胞的凋亡率;丙二醛(MDA)法观察膜的氧化损伤程度.结果:(1)甲型H1N1流感病毒感染后0、1、3、6h组细胞凋亡率与正常对照组无显著性差异(P>0.05),感染后12、24、48h组的凋亡率显著高于正常对照组(P<0.01);(2)实验各组MDA含量随着感染时间的延长呈下降趋势,0、1、3、6、 12h时MDA含量显著高于正常对照组(P<0.01),而24、48h时与正常对照组无显著性差异(P>0.05):(3)MDA含量与凋亡率呈高度的负相关,回归分析进一步证明二者间的相关关系.结论:甲型H1N1流感病毒感染对细胞造成的氧化损伤是极早期事件,可能是细胞凋亡的重要凶素.     

盐藻多糖抗病毒实验研究

目的通过体内外抗病毒实验观察盐藻多糖抗副流感病毒的作用。方法接种副流感病毒1型(HVJ)于狗肾细胞(MDCK),观察盐藻多糖对病毒致细胞病变效应的作用;体内实验以副流感病毒滴鼻感染小鼠,观察盐藻多糖对感染病毒小鼠的死亡率、生存时间、肺指数和肺病变程度的影响。结果盐藻多糖10、30、100μg/mL的浓度均有明显抑制病毒致细胞病变的作用;盐藻多糖30、100 mg/kg剂量组能显著降低病毒感染小鼠的死亡率,延长小鼠的生存时间,降低肺指数,减轻肺病变程度。结论盐藻多糖具有良好的抗副流感病毒的作用。      

甲型H1N1流感病毒感染小鼠的发病机制

目的 甲型H1N1 流感病毒A/California/7/2009感染BALB/c小鼠,研究甲型H1N1流感病毒病毒性肺炎发病机制.方法 4～6 周龄雌性BALB/c 小鼠60只,随机分为2组,实验组和对照组,每组30只.CA7 流感病毒滴鼻制备甲流病毒感染小鼠模型.攻毒后第5天解剖实验和对照组小鼠,取肺组织,测定肺组织中IL-2,IL-6,TNF-α含量.结果 结果实验组肺组织中IL-6,TNF-α,水平明显高于对照组,IL-2水平明显低于对照组,差异均有显著性(P<0.05).结论 IL-6、TNF-α、IL-2这3种细胞因子在感染甲流病毒后的显著性变化与病毒感染后的肺组织病理损伤有密切的关系.     

小儿清解防感颗粒防治甲流的作用机制研究

目的研究小儿清解防感颗粒抗流感病毒的作用机制。方法采用亚洲甲型鼠肺适应株（A／PR8／H1N1）滴鼻感染小鼠制作小鼠甲流模型,观察小儿清解防感颗粒延长病鼠生命的作用;光学显微镜下观察小鼠肺组织的病变程度并评分,同时计算小鼠肺指数,比较各组间肺指数的变化趋势及小鼠肺病变评分差异。采用环磷酰胺建立小鼠免疫抑制模型,观察各组小鼠的淋巴细胞转化情况。结果小儿清解防感颗粒可显著延长病鼠生命,降低死亡率和肺指数、肺病变评分,升高淋巴母细胞、过渡型细胞百分率及淋巴细胞转化率。结论小儿清解防感颗粒对感染流感病毒A／PR8／HIN1小鼠有一定的死亡保护及肺脏保护作用,并具有增强免疫低下小鼠淋巴细胞转化的作用。     

3种藏药提取物对腺病毒和甲型H1N1流感病毒的体外抑制作用

目的探讨3种藏药提取物体外抗腺病毒和甲型H1N1流感病毒的作用。方法采用细胞病变法检测3种药物对Hep-2细胞的毒性作用以及其抗腺病毒的活性作用;采用MTT法检测3种药物对MDCK细胞的毒性作用,并通过蚀斑法观察3种藏药提取物甲型H1N1流感病毒的抑制作用。以治疗指数(TI)值作为药物抗病毒效果的评价指标。结果 3种藏药提取物A、B、C对Hep-2细胞半数毒性浓度分别为0.872、0.872、0.438 g/L,抗腺病毒作用的半数有效浓度分别为0.244、0.288、0.250 g/L,治疗指数分别为3.574、2.819、1.752;3种药物对MDCK细胞半数毒性浓度分别为1.076、1.745、0.399 g/L,抗甲型H1N1流感病毒的半数有效浓度分别为0.240、1.663、0.891 g/L,治疗指数分别为4.491、1.050、0.447。结论 3种藏药提取物具有一定的抗腺病毒和抗甲型H1N1流感病毒的作用,具有较广的抗病毒谱,其抗病毒作用强弱程度依次为A、B、C,说明其具有潜在的临床应用前景,值得进一步深入研究。     

抗感颗粒抗甲型流感病毒的实验观察

目的 观察抗感颗粒在鸡胚和BALB/c小鼠体内抗甲型流感病毒的作用.方法 (1)鸡胚实验:将甲型流感病毒鼠肺适应株FM1接种9日龄鸡胚,再将不同剂量的抗感颗粒注入鸡胚,以血凝效价为指标,观察抗感颗粒对流感病毒的作用,设立流感病毒对照组和利巴韦林片对照组,每组6个鸡胚.(2)小鼠实验:将BALB/c小鼠随机分为病毒感染模型组、正常对照组、利巴韦林片组及抗感颗粒低、中、高剂量组,每组20只小鼠.用流感病毒感染小鼠后灌胃给药,以实验小鼠的生存情况、死亡保护率及延长生命率等指标观察抗感颗粒的抗流感病毒作用.结果 在鸡胚实验中,抗感颗粒高、中剂量组均能抑制流感病毒复制并达到显效结果,病毒血凝效价比流感病毒对照组分别低了5个、3个稀释度.在小鼠实验中,抗感颗粒各剂量组均能减轻感染小鼠的发病症状,减少小鼠死亡,死亡保护率为35.0%～55.0%;生存时间延长,延长生命率为73.0%～88.9%、最低有效剂量为3.00g/kg.结论 抗感颗粒对甲型H1N1流感病毒的增殖有抑制作用,对流感病毒感染引起的小鼠死亡有保护作用.