RNA干扰类药物开发策略及临床研究进展

RNA干扰(RNAi)是由双链RNA介导的特异性基因表达沉默.利用RNAi技术可使某些与疾病发生有关的基因沉默或表达水平降低,从而有效治疗疾病.目前RNAi类药物的研究已在多种疾病治疗领域取得了较好进展.本文综述RNAi类药物的开发策略及其临床研究进展.     

小分子干扰RNA非病毒纳米载体的设计进展

小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)进入临床应用最关键的环节是如何有效通过药物递送系统将siRNA递送到特异性靶细胞或靶组织。非病毒纳米载体递送系统具有低的免疫原性、良好的靶向性和生物相容性,是近年来国内外药剂工作者研究的热点。其相应的研究也必将大大增加siRNA有效递送,使其有进一步成为治疗药物的可能性。本文根据国内外的文献报道,将siRNA非病毒纳米载体的设计进展进行了综述。     

RNA干扰技术应用新进展

RNA干扰(RNAi)是由小分子双链RNA引发的转录后基因沉默现象。作为一种具有革命性的基因转录后调控新技术,正在被广泛应用于功能基因组研究的多种领域。它不仅是基因功能研究的有力工具,而且为特异性基因治疗提供了新的技术手段和应用前景,因而RNAi技术正日益成为后基因组时代基因功能和调控分析的有力工具。     

用于肿瘤治疗的小分子干扰RNA非病毒载体研究进展

近年来,小分子干扰RNA(siRNA)作为RNA干扰 (RNAi) 技术的效应分子,已被广泛用于恶性肿瘤的基因治疗领域。欲获得理想的治疗效果,其关键因素是寻找一种安全、高效、稳定、可控的基因载体。非病毒载体具有低毒、低免疫原性、制备简单、目的基因容量大、外源基因随机整合率低且携带基因大小类型不受限制等突出优势,已经成为目前siRNA载体的研究热点。在以往学者的研究基础上,从药剂学的角度,笔者对这些载体在siRNA传递系统中的研究现况做回顾性总结。     

全身RNA干扰的重大突破

RNA干扰已经成为一种强有力的研究工具，然而这项技术在临床治疗应用方面的进展最近才开始起步。这个领域最主要的进展是Zimmermann等在Nature上首先报道的在灵长类动物中全身递送小分子干扰RNA（siRNA）后的基因沉默效应。     

RNA干扰与恶性肿瘤治疗

RNA干扰（RNA interference,RNAi）是指在进化中高度保守的、由双链RNA（double-stranded RNA,dsRNA）诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。它已在许多不同种属的生物体中被发现,并在生物体细胞之间进行传递,具有抵抗病毒入侵和维持基因组稳定的作用。由于使用RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因表达．     

c-Myc靶向小分子干扰RNA抑制人直肠癌Colo320细胞增殖的实验研究

目的：利用小分子干扰RNA（siRNA）技术抑制人直肠癌Colo320细胞c-Myc基因的表达。为研究c-Myc基因在人直肠癌Colo320细胞中的作用提供一个新的方法。方法：设计人直肠癌Colo320细胞基因特异性小分子干扰RNA，用体外转录方法合成人直肠癌Colo320细胞基因的小分子干扰RNA并转染人直肠癌Colo320细胞，培养48—96h后，收集细胞RNA应用实时荧光定量RT—PCR方法检测转染细胞中c-Myc基因mRNA水平变化，骶temblot检测C—MYC蛋白的表达，四甲基偶氮唑蓝（MTT法）和集落形成实验检测细胞增殖活性。结果：转染siRNA后，与对照组相比，实验组pGensil—c—Myc-14的c-Myc基因mRNA水平明显降低，MTT法和集落形成实验表明实验组的增殖速率明显低于对照组的增殖速率。结论：在人直肠癌Colo320细胞中存在RNA干扰的机制，特异性siRNA能够有效的抑制c-Myc基因的表达，为研究c-Myc基因在肿瘤细胞中的调节途径提供了一个新的方法。     

RNA干扰与药物的研究进展

RNA干扰是由双链RNA诱导的序列特异性的基因沉默，目前被广泛用于药物研究，特别是针对肿瘤、病毒感染性疾病、血液病及神经退行性疾病等的治疗药物。随着核酸药物在体内靶向转运技术的不断发展，RNA干扰有可能成为一种新型的治疗途径。     

以RNA为靶标的小分子药物的研究进展

目前临床上所使用的小分子药物大部分以蛋白为靶标,小分子药物通过与靶标蛋白上的特定位点结合而发挥药效。然而可成药的蛋白在总蛋白数中占据较少部分。“不可成药”蛋白占人体总蛋白的80%。因为大部分的蛋白并没有合适的药物结合位点。在中心法则中, RNA处于蛋白质的上游,控制着蛋白质的翻译,靶向RNA的小分子药物研究在一定程度上可以解决蛋白“不可成药”的难题。本综述文章总结了近年来靶向RNA小分子药物研究领域的代表性研究成果,以及靶向RNA小分子药物的筛选方法,并着重分析了靶向新冠病毒RNA的小分子药物的最新进展。     

反义寡核苷酸和小分子干扰RNA作为端粒酶抑制剂的研究进展

端粒酶是真核生物染色体末端的核蛋白结构,能够指导合成重复的端粒序列TTAGGG,而细胞的复制与端粒长度的维持有关。已有大量关于端粒酶的研究,很多临床前试验已将抑制端粒酶活性作为治疗恶性肿瘤的一个新的治疗方案。本文综述了反义寡核苷酸(ASODN)和小分子干扰RNA(siRNA)作为端粒酶抑制剂的研究进展,并进一步讨论了携载ASODN及siRNA基因载体的应用及其优缺点。     

小分子RNA干扰TLR4基因表达对宫颈癌细胞体外增殖的影响

目的 RNA干扰技术靶向敲除TLR4基因对子宫颈癌Siha细胞生物学行为影响.方法 试验分为重组载体组、空载体组与空白组3组,利用RT-PCR技术对3组细胞中的TLR4 mRNA表达情况进行检测,分别在MMT实验以及细胞划痕实验中对细胞的增殖情况进行观察并绘制其增长曲线.结果 (1)重组载体组细胞中TLR4mRNA转染...     

bFGF小分子干扰RNA诱导胶质瘤U251细胞凋亡作用的研究

目的:初步探讨以小分子干扰RNA沉默碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导胶质瘤细胞系U251凋亡的机制.方法:将U251细胞分为正常对照组、空载体组和实验组,按4×105个细胞每孔接种于6孔细胞培养板,培养24h后,空载体组和实验组按MOI=50分别进行空载体腺病毒(rAd5-null)和含有bFGF小分子干扰RNA(siRNA)的重组腺病毒(rAd5-bFGF)转染,转染72h后检测各组细胞的凋亡及细胞周期变化情况及其相关蛋白的表达.结果:与正常对照组、空载体组比较,实验组U251细胞经转染bFGF-siRNA后出现了明显的细胞凋亡(P<0.05),但细胞周期未见变化(P>0.05);Western blot结果显示,实验组U251胶质瘤细胞经转染bFGF-siRNA 72 h后,bFGF蛋白表达明显降低,同时STAT3及Bcl-2蛋白表达降低,Bax及Caspase-3蛋白表达增强.结论:bFGF小分子干扰RNA能够诱导U251细胞凋亡,其作用可能是通过调节STAT3信号转导通路实现的.     

RNA干扰抗HBV的研究进展

RNA干扰是由长的双链RNA（double—stranded RNA．dsRNAl引发的降解与之同源的信使RNA（messager RNA，mRNA）的过程，dsRNA进入真核细胞．在胞浆内经限制性核酸内切酶Dicer作用，被切割成21—23bp的大小的小分子干扰RNA片段（small interfering RNAs,siRNhs），siRNAs与核酶复合物结合从而形成所谓的RNA诱导沉默复合物（RNA—induced silencing complex。RISC）。激活的RISC可以精确降解与siRNAs序列同源的mRNA．完全抑制了该基因在细胞内的翻译和表达。RNAi可以用来降低或清除内源性异常基因如癌基因表达和抵抗外源性入侵遗传学分子如转座子、转基因、病毒等．被认为是一种古老的保护体免受病毒入侵的机制．因此对传染性疾病的治疗可以说是RNAi最具前景的应用。     

小分子干扰RNA干扰蛋白激酶Cα相互作用蛋白1基因对结肠腺癌HT-29细胞增殖凋亡及侵袭的影响

目的研究小分子干扰RNA(siRNA)干扰蛋白激酶Cα相互作用蛋白(PICK)1基因对人结肠腺癌HT-29细胞增殖、凋亡及侵袭的影响。方法设计合成针对PICK1基因的siRNA序列,分为实验组(PICK1-siRNA)、阴性对照组(Negative-siRNA)及对照组。阳离子脂质体(Lipofectamine~(TM) 2000)介导转染至HT-29细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测HT-29细胞增殖活性的改变;蛋白印迹法检测转染前后PICK1蛋白的表达;流式细胞术检测细胞凋亡的变化;细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化。结果转染24 h后,PICK1-siRNA组PICK1蛋白的相对表达量低于Negative-siRNA组和对照组(P<0.05)。MTT结果显示,PICK1-siRNA组HT-29细胞的增殖活性受到明显的抑制作用,差异具有统计学意义(P<0.05)。与Negative-siRNA组和对照组相比,PICK1-siRNA组HT-29细胞凋亡比例显著增高,侵袭能力显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论干扰PICK1基因表达可有效抑制HT-29细胞增殖,诱导凋亡,降低侵袭相关蛋白的表达,可作为结肠癌治疗的潜在靶点。     

RNA干扰在心血管疾病研究中的现状和展望

RNA干扰可特异性使目的基因沉默,具有高效、特异和低毒的特点,正逐渐成为研究心血管疾病发病机制和防治措施的重要工具。本文就RAN干扰的研究简史、作用机制、在心血管疾病细胞水平和整体动物水平的研究、RNA干扰的局限性及改善策略和在心血管疾病研究中的展望作一综述,为心血管疾病的防治提供新思路。     

基因沉默的维持——长效RNA干扰

自揭示了哺乳动物细胞中的RNA干扰（RNAi）现象以来,对其进行了大量的研究与资金投入,期望将其发展成一种切实可行的治疗手段。毫无疑问,RNAi是最具发展潜力的基因治疗策略。由于许多采用RNAi治疗的疾病需要长期用药,因此,有关RNAi类药物长期应用的安全性问题成为关注重点。     

RNA干扰技术在药物研究中的应用

RNA干扰是由双链RNA引发的转录后基因沉默。双链RNA经Dicer酶降解成21 23nt的小干扰RNA,并以其为模板,特定位点、特定间隔降解与之序列相应的mRNA。随着RNA干扰机制的深入研究与广泛应用,RNAi已用在药物研究中的各个领域,尤其在药物开发上,能够解决临床前药物开发的一些瓶颈问题,如药靶鉴定,优化药靶,从而节省时间和资金,并提高成功率,加速药物的临床研究。同时RNA在药物研究的其他领域都也显示了卓越的作用,为药物研究提供了强大的工具。