硼替佐米联合5-杂氮胞苷抑制JAK/STAT信号通路对T细胞淋巴瘤细胞增殖和凋亡的影响北大核心CSCD

目的研究硼替佐米联合5-杂氮胞苷对T细胞淋巴瘤细胞增殖、凋亡及机制。方法对照组Jurkat细胞以3μmol·L^(-1)5-杂氮胞苷处理,低、中、高剂量实验组以10,30,50 nmol·L-1的硼替佐米+3μmol·L^(-1)5-杂氮胞苷处理,空白组加等量生理盐水。用噻唑蓝(MTT)法及流式细胞术检测细胞增殖、凋亡,用蛋白免疫印迹法检测细胞JAK/STAT信号通路蛋白表达。结果干预72h后,对照组和低、中、高剂量实验组细胞增殖抑制率分别为(39.05±2.63)%,(31.26±2.43)%,(60.12±3.05)%,(72.16±3.64)%。干预24,48,72 h后,中、高剂量实验组细胞增殖抑制率均高于对照组,且随硼替佐米浓度增大及作用时间延长逐渐升高(P<0.05)。干预48 h后,对照组和低、中、高剂量实验组细胞凋亡率均显著高于空白组。对照组和低、中、高剂量实验组细胞增殖指数低于空白组,凋亡率高于空白组(均P<0.05);且实验组增殖指数均低于对照组,细胞凋亡率均高于对照组(均P<0.05)。空白组、对照组和低、中、高剂量实验组Janus激酶1(JAK1)蛋白相对表达量为2.68±0.22,2.15±0.31,1.82±0.25,1.53±0.15,0.89±0.14,TYK2蛋白相对表达量为3.84±0.56,2.25±0.46,2.37±0.39,2.26±0.33,1.28±0.26;对照组和低、中、高剂量实验组Janus激酶1(JAK1)、TYK2蛋白相对表达量均低于空白组(均P<0.05),低、中、高剂量实验组JAK1蛋白及高剂量实验组TYK2蛋白相对表达量低于对照组(均P<0.05)。结论硼替佐米可协同增强5-杂氮胞苷抑制T细胞淋巴瘤细胞的增殖,并促其凋亡,其作用机制与显著抑制JAK/STAT信号通路中蛋白表达有关。     

Apelin-13对高糖诱导的脐静脉内皮细胞凋亡的保护作用北大核心CSCD

目的探讨Apelin-13对高糖环境下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护机制是否与沉默信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)相关。方法实验分组分为4部分。实验Ⅰ,将HUVECs分为6组,分别为空白组(5.5 mmol·L^(-1)糖)、模型组(33 mmol·L^(-1)高糖)、各实验组(分别用1×10^(-9),1×10^(-8),1×10^(-7)和1×10^(-6)mol·L^(-1)Apelin预处理+33 mmol·L^(-1)高糖)。实验Ⅱ,将HUVECs分为4组,分别为空白组(5.5 mmol·L^(-1)糖)、模型组(33 mmol·L^(-1)高糖)、对照组(1×10^(-8)mol·L^(-1)Apelin)、实验组(用1×10^(-8)mol·L^(-1)Apelin预处理+33 mmol·L^(-1)糖)。实验Ⅲ,将HUVECs分为2组,分别为空载质粒组(1×10^(-8)mol·L^(-1)Apelin预处理+33 mmol·L^(-1)高糖)和APJ低表达组(1×10^(-8)mol·L^(-1)Apelin预处理+33 mmol·L^(-1)高糖)。以上3个实验均用Western blot法检测高糖环境下SIRT1蛋白的表达水平。实验Ⅳ,将HUVECs分为5组,分别为空白组(5.5 mmol·L^(-1))、模型组(33 mmol·L^(-1)高糖)、实验组(用1×10^(-8)mol·L^(-1)Apelin预处理+33 mmol·L^(-1)高糖)、抑制剂组(33 mmol·L^(-1)高糖+1×10^(-5)mol·L^(-1)EX527)、干预组(用1×10^(-8)mol·L^(-1)Apelin预处理+33 mmol·L^(-1)高糖+1×10^(-5)mol·L^(-1)EX527)。用流式细胞术检测HUVECs的凋亡率。结果实验Ⅰ,空白组、模型组和1×10^(-9),1×10^(-8),1×10^(-7)和1×10^(-6)mol·L^(-1)Apelin实验组的SIRT1蛋白相对表达量分别为0.51±0.06,0.30±0.05,1.02±0.07,1.12±0.10,1.14±0.10和1.05±0.10,模型组的SIRT1蛋白相对表达量与4个实验组和空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。实验Ⅱ,空白组、模型组、对照组和实验组的SIRT1蛋白相对表达量分别为0.82±0.09,0.59±0.05,0.77±0.05和0.72±0.06;模型组的SIRT1蛋白相对表达量与实验组和空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。实验Ⅲ,空载质粒组和APJ低表达组的SIRT1蛋白表达水平分别为0.94±0.13和0.71±0.17,差异有统计学意义(P<0.05)。实验Ⅳ,空白组、模型组、实验组、抑制剂组和干预组的细胞凋亡率分别为(13.60±0.92)%,(24.63±1.25)%,(12.73±1.00)%,(25.68±1.42)%和(10.25±2.30)%。模型组的细胞凋亡率与空白组和实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);抑制剂组的细胞凋亡率与干预组相比,差异有统计学意义(P<0.05);干预组的细胞凋亡率与实验组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论Apelin-13减轻高糖诱导的脐静脉内皮细胞凋亡的机制与SIRT1信号通路无关。     

防己诺林碱对宫颈癌HeLa细胞的作用及其机制研究北大核心CSCD

目的探索防己诺林碱(FAN)对宫颈癌He La细胞的作用及分子机制。方法人宫颈癌He La细胞随机分为空白组(0μmol·L^(-1)FAN)和低、高剂量实验组(7.5,15μmol·L^(-1)FAN)。通过CCK-8法、细胞划痕和Transwell检测FAN对宫颈癌He La细胞增殖、迁移和侵袭的影响,采用流式细胞术检测FAN对细胞周期和凋亡的作用。用Western Blot法检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1),P27,P53,B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl2),细胞外调节蛋白激酶(ERK)和磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)的表达。结果FAN对宫颈癌He La细胞有明显抑制作用,呈现浓度和时间依赖关系(P<0.05)。给药48 h后,空白组、低、高剂量实验组划痕愈合率分别为(48.10±5.19)%,(22.68±3.36)%,(12.31±2.79)%;侵袭细胞数量分别为(248.60±33.34),(186.60±24.58),(53.00±13.04)个。给药24 h后,空白组、低、高剂量实验组G0/G1期细胞比例分别为(68.67±2.32)%,(77.43±3.51)%,(85.90±1.31)%;细胞凋亡率分别为(4.07±0.40)%,(5.48±1.36)%,(10.25±1.88)%;Cyclin D1蛋白相对表达量分别为0.75±0.07,0.45±0.07,0.20±0.03;P27蛋白相对表达量分别为0.01±0.00,0.17±0.02,0.55±0.04;P53蛋白相对表达量分别为0.08±0.01,0.12±0.03,0.34±0.08;Bcl-2蛋白相对表达量分别为0.40±0.03,0.17±0.02,0.06±0.01;p-ERK蛋白相对表达量分别为0.61±0.03,0.34±0.03,0.15±0.04;低、高剂量实验组的上述指标与空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论FAN能抑制宫颈癌He La细胞的增殖、迁移及侵袭能力,同时阻滞细胞周期并促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制ERK信号通路有关。     

阿托伐他汀对氧化型低密度脂蛋白诱导内皮细胞损伤的保护作用北大核心CSCD

目的基于Ras同源基因家族蛋白A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)信号通路研究阿托伐他汀对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导内皮细胞损伤的保护作用。方法用ox-LDL构建HUVEC细胞损伤模型,并将模型细胞分为模型组、对照组和实验组,另取正常细胞作为空白组。空白组和模型组均在培养基中加入等量的0.9%NaCl进行培养;对照组在培养基中加入10μmol·L^(-1) Y-27632 5μL进行培养;实验组在培养基中加入10μmol·L^(-1)阿托伐他汀5μL进行培养。用噻唑蓝法检测细胞活力的变化,用流式细胞术检测细胞凋亡的变化,用蛋白质印迹法检测磷酸化RhoA(p-RhoA)、ROCK1和ROCK2蛋白的表达水平。结果实验组、对照组、模型组和空白组的细胞相对活力分别为0.78±0.08,0.75±0.11,0.43±0.06和1.01±0.02,细胞凋亡率分别为(38.78±0.76)%,(38.56±0.95)%,(69.55±0.36)%和(9.85±0.26)%,p-RhoA相对表达量分别为2.13±0.05,2.15±0.03,4.32±0.05和0.99±0.01,ROCK1相对表达量分别为2.88±0.02,2.86±0.04,4.71±0.06和0.97±0.04,ROCK2相对表达量分别为2.25±0.03,2.21±0.07,4.46±0.02和1.01±0.02。模型组的上述指标与实验组、对照组和空白组比较,差异均有统计意义(均P<0.05)。结论阿托伐他汀对ox-LDL诱导内皮细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与抑制RhoA/Rho信号通路有关。     

鸦胆子苦醇通过Toll样受体4介导对尖锐湿疣角质形成细胞免疫调节的研究北大核心CSCD

目的探究鸦胆子苦醇(BRU)对尖锐湿疣(CA)角质形成细胞免疫调节的机制。方法收集本院尖锐湿疣组织,并分离CA角质形成细胞。用0、5.0、10.0和20.0 nmol·L^(-1)的BRU处理CA角质形成细胞,分别标记为空白组和低、中、高剂量实验组。将本院分离的CA角质形成细胞分为对照组(正常培养的CA角质形成细胞)、高剂量实验组(用20.0 nmol·L^(-1)的BRU处理细胞)、BRU+pcDNA-NC组(转染pcDNA-NC+20.0 nmol·L^(-1)的BRU)、BRU+pcDNA-TLR4组(转染pcDNA-TLR4+20.0 nmol·L^(-1)的BRU)。用CCK-8法和EdU法检测细胞的增殖情况,用实时荧光定量聚合酶链反应法检测Toll样受体4(TLR4)mRNA表达量,用蛋白质印迹法检测各组细胞TLR4和细胞核相关抗原Ki67(Ki67)的表达水平,用酶联免疫吸附试验法检测各组细胞γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-8(IL-8)含量。结果高剂量实验组和空白组的TLR4 mRNA表达量分别为0.32±0.03和1.00±0.08,TLR4蛋白相对表达水平分别为0.36±0.04和1.07±0.11,差异均有统计学意义(均P<0.05)。对照组、高剂量实验组、BRU+pcDNA-NC组和BRU+pcDNA-TLR4组的EdU阳性细胞率分别为(42.36±3.92)%、(21.70±2.42)%、(20.89±1.85)%和(40.43±4.07)%,TLR4蛋白相对表达水平分别为1.02±0.09、0.34±0.03、0.38±0.04和0.79±0.09,Ki67蛋白相对表达水平分别为0.99±0.11、0.44±0.05、0.46±0.04和0.88±0.06,IFN-γ分别为(98.79±7.68)、(165.53±11.57)、(168.01±12.73)和(119.93±8.03)pg·mL^(-1),IL-8分别为(116.41±11.89)、(243.72±19.60)、(248.42±28.17)和(128.11±13.19)pg·mL^(-1)。对照组的上述指标与高剂量实验组比较,BRU+pcDNA-NC组的上述指标与BRU+pcDNA-TLR4组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论BRU可通过调控TLR4的表达,进而抑制CA角质形成细胞增殖,从而参与调控CA的进展。     

他莫昔芬对三阴乳腺癌细胞饥饿耐受的影响及其机制研究北大核心CSCD

目的探讨他莫昔芬(TAM)对三阴乳腺癌(TNBC)MDA-MB-468细胞耐受饥饿的影响,研究G蛋白偶联雌激素受体-自噬相关蛋白Beclin-1(GPER-Beclin-1)通路在其中的作用。方法用血清饥饿方法建立模型细胞,并分为对照组和实验组。另取常规培养的MDA-MB-468细胞作为空白组。对照组和实验组分别以1‰二甲基亚砜和5μmol·L^(-1)TAM处理48 h,空白组常规培养48 h。用siRNA转染技术沉默模型细胞中GPER表达,并分为GPER-NC组(空载转染)和GPER-si组(转染GPER)。GPER-NC组和GPER-si组均以5μmol·L^(-1)TAM处理8 h。用结晶紫染色法检测细胞贴壁存活率,用蛋白印迹法检测LC3B和Beclin-1蛋白表达,并评估自噬能力。结果血清饥饿48 h,实验组、对照组和空白组细胞的贴壁存活率分别为(128.77±6.66)%,(101.00±3.26)%和(177.25±4.45)%,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ相对蛋白表达量分别为(142.15±5.25)%,(100.33±4.55)%和(65.34±8.78)%,Beclin-1相对蛋白表达量分别为(156.22±7.88)%,(101.25±3.80)%和(97.97±8.90)%,实验组和对照组的上述指标比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。血清饥饿48h,GPER-NC组和GPER-si组细胞的贴壁存活率分别为(103.55±6.68)%和(49.74±5.15)%,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ相对蛋白表达量分别为(98.36±6.68)%和(64.54±5.25)%,Beclin-1相对蛋白表达量分别为(105.39±6.68)%和(31.03±8.76)%,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 TAM能增强TNBC MDA-MB-468饥饿耐受能力,该效应可能与GPER-Beclin-1通路激活自噬有关。     

鸦胆子油乳对肺癌细胞A549的抑制作用及其机制

目的研究鸦胆子油乳对肺癌细胞A549的抑制作用,并初步探讨其相关作用机制。方法以不同终质量浓度的鸦胆子油乳(0.50,1.25,2.50 g·L^-1)作用于肺癌细胞A549,并将其作为低、中、高3个质量浓度实验组,同时设置对照组(给予等量0.9%NaCl)。用4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色法检测各组肺癌细胞A549凋亡的形态学变化,用噻唑蓝(MTT)法和免疫印迹法检测各组肺癌细胞A549增殖抑制情况及凋亡抑制蛋白Survivin表达情况。结果干预24 h后,对照组及低、中、高3个质量实验组肺癌细胞A549增殖抑制率分别为(0.31±0.19)%,(37.24±6.21)%,(49.33±5.96)%,(61.25±6.23)%,干预48 h后,增殖抑制率分别为(0.32±0.21)%,(58.14±6.33)%,(65.28±5.79)%,(73.46±5.37)%,干预72 h后,增殖抑制率分别为(0.38±0.23)%,(68.58±5.87)%,(76.35±6.02)%,(83.97±5.64)%。与对照组比较,实验组肺癌细胞A549增殖抑制率显著升高(P<0.01),且随着鸦胆子油乳质量浓度增大和作用时间延长,肺癌细胞A549增殖抑制率呈逐渐升高趋势(P<0.05或P<0.01)。对照组和低、中、高3个质量浓度实验组Survivin蛋白灰度值分别为0.95±0.07,0.83±0.10,0.66±0.12,0.51±0.09;对照组和实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01),且随鸦胆子油乳质量浓度增加,Survivin蛋白表达量呈逐渐降低趋势(P<0.01)。结论鸦胆子油乳可显著抑制肺癌细胞A549增殖,并诱导其凋亡,相关作用机制可能是其可有效抑制肺癌细胞A549中凋亡抑制蛋白Survivin的表达。     

JQ-1联合小豆蔻明对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响北大核心CSCD

目的探讨JQ-1与小豆蔻明(CAR)联用对乳腺癌细胞MCF-7增殖和细胞凋亡的影响。方法将MCF-7细胞实验分为空白组(不给药)、对照组(10.00μmol·L^(-1)CAR)、实验组(25.00μmol·L^(-1)JQ-1)及联合组(10.00μmol·L^(-1)CAR+25.00μmol·L^(-1)JQ-1)。4组细胞均培养48 h。用CCK-8法检测细胞的增殖能力,用Annexin-V FITC/PI双染法检测细胞的凋亡情况,用蛋白质印迹法检测磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)和活化后胱天蛋白酶7(Cleaved Caspase7)的表达水平。结果联合组、实验组、对照组和空白组的增殖率分别为(47.79±11.27)%、(66.75±26.56)%、(74.57±13.59)%和(100.00±0)%,细胞晚期凋亡率分别为(24.17±1.27)%、(7.07±0.80)%、(14.70±3.12)%和(4.98±2.98)%,p-PI3K蛋白相对表达水平分别为0.87±0.02、1.11±0.06、1.09±0.03和1.00±0.00,p-AKT蛋白相对表达水平分别为0.31±0.05、0.96±0.06、0.96±0.16和1.00±0.00,Cleaved Caspase7蛋白相对表达水平分别为2.70±0.04、1.51±0.03、1.28±0.01和1.00±0.00。联合组的上述指标与空白组、对照组、实验组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论JQ-1与CAR联用对乳腺癌细胞MCF-7具有增强抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的作用,其作用机制可能与调控PI3K/AKT通路相关。     

柚皮素对Aβ25-35损伤PC12细胞丝裂原激活蛋白激酶/细胞外信号调节蛋白激酶通路的调控效应研究

目的探讨柚皮素对体外培养的Aβ_25-35损伤PC12细胞的保护作用及相关信号通路的调控机制。方法将生长至对数期的PC12细胞接种于培养瓶培养24 h,弃掉旧培养液后,随机分为空白组(培养液)、模型组(150μmol·L-1 Aβ_25-35)、实验组-1(4×10-1 μmol·L-1柚皮素+150μmol·L-1 Aβ_25-35)和实验组-2(10μmol·L-1 U0126+4×10-1 μmol·L-1柚皮素+150μmol·L-1 Aβ_25-35),使每组细胞浓度为20μmol·L-1(除空白组),给药24 h后,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法检测各组细胞B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸-3(Caspase-3)和磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶(p-ERK1/2)的蛋白表达量。结果空白组、模型组、实验组-1、实验组-2的细胞总凋亡率分别为(4.13±0.55)%,(34.70±1.66)%,(11.26±0.77)%,(23.52±0.80)%;Bax蛋白表达量分别是0.24±0.06,0.76±0.03,0.21±0.02,0.68±0.04;Bcl-2蛋白表达量0.61±0.04,0.20±0.04,0.55±0.03,0.34±0.02;Caspase-3蛋白表达量0.13±0.03,0.40±0.03,0.21±0.04,0.31±0.02;p-ERK1/2蛋白表达量0.86±0.03,0.48±0.06,0.78±0.04,0.50±0.07。模型组与空白组、实验组与模型组和实验组-2与实验组-1比较,上述指标差异均有统计学意义(P<0.01)。结论柚皮素可通过丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)/细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular-signal regulated protein kinase, ERK)信号通路改变Bax、Caspase-3、Bcl-2和p-ERK1/2蛋白表达量,抑制细胞凋亡,对Aβ_25-35损伤的PC12细胞有保护作用。     

POLD1基因反义RNA对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用北大核心CSCD

目的研究DNA聚合酶δ催化亚基基因1(POLD1)反义RNA对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用及相应机制。方法将SMMC-7721细胞分为3组:实验组、阴性对照组、空白组。实验组及阴性对照组分别将POLD1基因反义RNA表达质粒及空质粒分别转染至SMMC-7721细胞,未经处理的SMMC-7721细胞为空白组。用聚合酶链反应法检测各组细胞POLD1基因表达情况;用细胞计数-8(CCK-8)法检测细胞增殖情况;用流式细胞术分析细胞凋亡率;用蛋白质印迹(Western blot)法检测p53、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)等凋亡相关蛋白表达量。结果实验组、阴性对照组和空白组肝癌细胞POLD1基因相对表达量分别为0.18±0.03,1.03±0.18和1.00±0.00;转染72 h增殖情况(OD_(450)值)分别为0.57±0.06,0.73±0.09和0.77±0.12;凋亡率分别为(23.43±4.12)%,(9.12±1.03)%,(1.24±0.14)%,实验组的上述指标与阴性对照组和空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论POLD1基因反义RNA可显著抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖,且能诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡。     

葡萄籽原花青素联合吉西他滨对胰腺癌细胞增殖与凋亡的研究北大核心CSCD

目的观察葡萄籽原花青素(GSPE)联合吉西他滨对胰腺癌PANC-1细胞增殖与凋亡的影响及机制。方法将PANC-1细胞分为对照组-1(20μg·m L-1吉西他滨)、对照组-2(75μg·m L-1GSPE)、实验组(20μg·m L-1吉西他滨+75μg·m L-1GSPE)和模型组(无任何处理)。药物干预24 h后,用溴化四唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测microRNA-27a(miR-27a)相对表达水平。结果干预24 h后,模型组、对照组-1、对照组-2和实验组细胞存活率分别为(98.67±0.12)%,(48.67±9.45)%,(43.52±6.44)%,(13.05±4.25)%,与模型组比较,对照组-1、对照组-2及实验组细胞存活率均降低(均P<0.05),且实验组细胞存活率低于阳性对照组(P<0.05)。干预48 h后,对照组-1、对照组-2及实验组细胞增殖指数均低于模型组,凋亡率高于模型组(均P<0.05);且实验组增殖指数低于对照组-1、对照组-2,细胞凋亡率高于对照组-1、对照组-2(均P<0.05)。干预48 h后,模型组、对照组-1、对照组-2及实验组miR-27a相对表达量分别为1.00±0.00,0.69±0.19,0.56±0.14,0.38±0.15,对照组-1、对照组-2及实验组miR-27a相对表达量均低于模型组(均P<0.05),实验组miR-27a相对表达量低于对照组(P<0.05)。结论 GSPE联合吉西他滨可抑制胰腺癌PANC-1细胞增殖,并促其凋亡,其机制可能与下调miR-27a表达有关。     

核因子E2相关因子2/抗氧化反应元件信号通路在H_(2)O_(2)致MC3T3-E1细胞成骨分化损伤中的研究北大核心CSCD

目的研究核因子E2相关因子2(NRF2)/抗氧化应答元件(ARE)信号通路在过氧化氢(H_(2)O_(2))致小鼠胚胎成骨前体细胞(MC3T3-E1)成骨分化损伤中的变化及作用。方法(1)将细胞随机分为对照组和低、高剂量实验组(0、200和400μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)处理细胞24 h)。用蛋白质印迹法检测1型胶原(COL1)、Runt相关转录因子2(RUNX2)、NRF2和血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白的表达水平。①将细胞随机分为对照组(0μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)处理细胞24 h)、高剂量实验组(400μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)处理细胞24 h)、抑制剂组(5μmol·L^(-1)ML385预处理细胞12 h)和联合组(5μmol·L^(-1)ML385预处理细胞12 h后,用400μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)处理24 h)。同法检测蛋白的表达水平,用流式细胞术检测细胞活性氧(ROS)水平。结果(1)低、高剂量实验组和对照组的COL1蛋白相对表达水平分别为0.79±0.09、0.52±0.10和1.32±0.07,RUNX2蛋白相对表达水平分别为0.69±0.04、0.46±0.11和1.16±0.10,核NRF2蛋白相对表达水平分别为1.12±0.14、1.48±0.07和0.65±0.10,HO-1蛋白相对表达水平分别为0.59±0.03、0.77±0.08和0.40±0.07。低、高剂量实验组的上述指标与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。②联合组、高剂量实验组、抑制剂组和对照组的核NRF2蛋白相对表达水平分别为0.97±0.06、1.46±0.09、0.73±0.08和0.71±0.06,HO-1蛋白相对表达水平分别为0.34±0.04、0.83±0.10、0.48±0.06和0.46±0.04,COL1蛋白相对表达水平分别为0.24±0.04、0.57±0.08、1.35±0.08和1.33±0.10,RUNX2蛋白相对表达水平分别为0.25±0.05、0.48±0.09、1.17±0.23和1.12±0.16,ROS平均荧光强度分别为641.00±12.00、402.00±13.00、290.00±28.00和281.00±18.00。联合组的上述指标与高剂量实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论NRF2-ARE信号通路在H_(2)O_(2)致成骨细胞分化损伤时激活,其可能通过抑制ROS水平升高在氧化应激致成骨分化损伤中发挥一定程度的代偿性保护作用。     

柴胡皂苷D通过NOB1影响血管瘤内皮细胞凋亡北大核心CSCD

目的研究柴胡皂苷D对血管瘤内皮细胞凋亡的影响和机制。方法将人血管瘤内皮细胞分成对照组、实验组、pcDNA-NC组、pcDNA-NOB1组、实验组+pcDNA-NC组、实验组+pcDNA-NOB1组。对照组细胞正常培养;实验组在0 h时给予80μmol·L^(-1)的柴胡皂苷D处理;pcDNA-NC组、pcDNA-NOB1组在实验前24 h分别转染pcDNA-NC、pcDNA-NOB1;实验组+pcDNA-NC组、实验组+pcDNA-NOB1组转染后在0 h时用80μmol·L^(-1)的柴胡皂苷D处理。以MTT实验检测细胞增殖,以流式细胞术检测凋亡,以蛋白质印迹法(Western blot)检测NOB1、细胞色素C(Cyt C)蛋白表达。结果对照组、实验组血管瘤内皮细胞中NOB1蛋白表达量分别为0.78±0.10和0.40±0.05,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组、实验组、实验组+pcDNA-NC组、实验组+pcDNA-NOB1组血管瘤内皮细胞增殖活力(OD值)分别为0.53±0.06,0.26±0.04,0.27±0.03和0.34±0.02;这4组的凋亡率为(6.35±0.58)%,(20.34±2.62)%,(19.87±1.94)%和(8.61±1.05)%;这4组的胞浆中Cyt C蛋白表达量分别为0.22±0.03,0.45±0.05,0.42±0.05和0.30±0.03。上述指标,实验组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);实验组+pcDNA-NOB1组与实验组+pcDNA-NC组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论柴胡皂苷D通过下调NOB1激活线粒体凋亡途径诱导血管瘤内皮细胞凋亡。     

三七皂苷R1对CD34^+人急性髓系白血病细胞的增殖抑制作用及对线粒体相关通路的影响北大核心CSCD

目的研究三七皂苷R1对CD34^+人急性髓系白血病(AML)细胞的增殖抑制作用及对线粒体相关通路的影响。方法将CD34^+AML细胞Kasu-mi-1分为对照组和低、中、高剂量实验组。低、中、高剂量实验组分别用10,20,40μmol·L^(-1)三七皂苷R1处理,对照组加等量生理盐水处理。分别用溴化四唑蓝(MTT)法、JC-1染色法检测细胞增殖及细胞线粒体膜电位,用蛋白免疫印迹法测定细胞中线粒体通路相关蛋白表达。结果培养12,24,36,48 h后,实验组细胞存活率明显低于对照组(P<0.05),且随三七皂苷R1浓度的升高细胞存活率逐渐降低(P<0.05)。低、中、高剂量实验组细胞线粒体膜电位较对照组降低(均P<0.05);中、高剂量实验组细胞线粒体膜电位较低剂量实验组降低(均P<0.05)。对照组和低、中、高剂量实验组Bcl-2蛋白相对表达量分别为0.96±0.15,0.67±0.22,0.41±0.12,0.22±0.09,Bcl-2相关X蛋白(Bax)相对表达量分别为0.72±0.26,1.33±0.35,1.71±0.39,2.09±0.53,低、中、高剂量实验组细胞Bcl-2蛋白相对表达量低于对照组,Bax蛋白相对表达量均高于对照组(均P<0.05),实验组随三七皂苷R1浓度的升高Bcl-2蛋白相对表达量逐渐降低,Bax蛋白相对表达量逐渐升高(P<0.05)。结论三七皂苷R1可抑制CD34^+人AML细胞增殖,可能是通过激活线粒体通路促进细胞凋亡而发挥作用的。     

艾塞那肽通过抑制内质网应激减少脂肪酸诱导肝细胞凋亡的作用北大核心CSCD

目的研究艾塞那肽(EXE)是否通过抑制内质网应激来减少棕榈酸诱导的肝细胞凋亡。方法将人肝细胞株L-02分为对照组、模型组(棕榈酸500μmol·L^(-1)处理24 h)、3个剂量实验组(以棕榈酸500μmol·L^(-1)和EXE 25,50,100 nmol·L^(-1)分别处理24 h)和联合组(以棕榈酸500μmol·L^(-1)、EXE 100nmol·L^(-1)和衣霉素2μg·L^(-1)处理24 h)。用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测细胞活力;以脱氧核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)染色及半胱天冬酶(Caspase)-3活性检测观察细胞凋亡;以实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测内质网应激标志物C/EBP同源蛋白(CHOP)表达及Caspase-12活性以观察细胞内质网应激水平。结果与模型组比较,EXE能剂量依赖性增加棕榈酸处理后L-02细胞的活力,减少凋亡细胞数,降低Caspase-3和Caspase-12活性,并下调CHOP表达(均P<0.05)。与高剂量实验组比较,联合组的CHOP表达、细胞凋亡数及Caspase-12活性均显著升高,细胞活力显著下降[(78.58±1.78)%vs(87.78±3.66)%](均P<0.05)。结论 EXE可能通过抑制内质网应激减少脂肪酸诱导肝细胞凋亡。     

红景天苷对过氧化氢诱导SHSY-5Y细胞氧化应激损伤的影响北大核心CSCD

目的探究红景天苷通过沉默信息调节因子2相关酶1(sirtuin 1,Sirt1)抑制过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的神经母细胞瘤细胞SHSY-5Y氧化应激损伤的机制。方法将对数生长期的人神经母细胞瘤细胞SHSY-5Y随机分为空白组、模型组和低、中、高剂量实验组。空白组给予生理盐水处理,模型组给予100μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)处理,低、中、高剂量实验组先分别用1,10,100μmol·L^(-1)红景天苷处理后,再用100μmol·L^(-1)过氧化氢处理。用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,以流式细胞术检测细胞凋亡率,以酶联免疫吸附(ELISA)法检测一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平,以实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)、免疫荧光技术及蛋白质印迹(Western blot)法检测Sirt1 mRNA和蛋白的表达水平。结果空白组、模型组和低、中、高剂量实验组的细胞活力分别为(100.00±5.99)%,(22.89±4.17)%,(30.75±6.01)%,(60.69±9.37)%,(80.81±4.38)%;凋亡率分别为(6.77±0.72)%,(68.53±11.07)%,(57.01±6.33)%,(46.41±8.54)%,(20.12±3.60)%;NOS水平分别为(0.41±0.08),(4.99±0.32),(4.24±0.24),(2.95±0.19),(2.33±0.25)ng·mL^(-1);SOD水平分别为(24.15±1.92),(10.65±0.78),(13.62±1.52),(17.01±1.63),(21.38±0.54)U·mg^(-1);MDA水平分别为(6.31±0.89),(15.40±1.03),(11.77±0.90),(9.95±1.01),(7.51±1.13)ng·mL^(-1);8-OHdG水平分别为(3.67±0.30),(10.99±1.04),(9.72±1.35),(6.89±0.33),(4.62±0.66)μmol·mg^(-1);模型组和空白组的上述指标比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);低、中、高剂量实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论红景天苷对过氧化氢诱导SHSY-5Y细胞氧化应激损伤具有保护作用,其机制可能与Sirt1蛋白激活相关。     

西罗莫司对肺癌细胞增殖及哺乳动物西罗莫司靶蛋白信号通路相关蛋白表达的影响北大核心CSCD

目的研究西罗莫司对肺癌细胞增殖及哺乳动物西罗莫司靶蛋白(mTOR)信号通路相关蛋白表达的影响。方法分别用0.1,1.0,10.0,100.0nmol·L^(-1)西罗莫司处理肺癌细胞株A549及H1299,作为实验组,对照组细胞以等量生理盐水处理。以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测处理72 h后肺癌细胞株增殖抑制情况,判定西罗莫司的敏感株;用蛋白免疫印迹法检测西罗莫司处理前后敏感株mTOR信号通路磷酸化核糖蛋白S6激酶1(p-S6K1)表达情况。结果对照组及0.1,1.0,10.0,100.0 nmol·L^(-1)实验组肺癌细胞A549增殖抑制率分别为(11.03±1.01)%,(30.15±0.98)%,(53.68±0.99)%,(56.62±1.21)%;肺癌细胞H1299增殖抑制率分别为(3.39±1.03)%,(4.24±1.02)%,(5.08±0.98)%,(7.62±0.96)%。随着西罗莫司作用浓度增大,肺癌细胞A549增殖抑制率逐渐升高(P<0.01),而肺癌细胞H1299增殖抑制率差异无统计学意义(P>0.05),肺癌细胞A549为西罗莫司敏感株,而肺癌细胞H1299对西罗莫司不敏感。蛋白免疫印迹法检测显示,mTOR信号通路上游蛋白AKT及下游核糖蛋白S6激酶1(S6K1)、4E-BP1和e IF4E在肺癌细胞A549及H1299中均阳性表达,而p-S6K1仅在肺癌细胞A549中表达,且随着西罗莫司干预时间的延长肺癌细胞A549中p-S6K1表达量逐渐降低,且在干预6 h时基本呈阴性表达。结论西罗莫司可有效抑制敏感肺癌细胞株增殖,其作用机制可能与下调mTOR信号通路p-S6K1蛋白表达相关。     

地黄中松果菊苷对皮质酮诱导PC-12细胞凋亡的抑制作用及机制研究北大核心CSCD

目的观察松果菊苷对于皮质酮诱导的PC-12细胞损伤的保护作用及机制。方法将PC-12细胞分为6组:正常组,模型组(皮质酮500μmol·L^(-1)),阳性对照组(氟西汀0.3μmol·L^(-1))和低、中、高3个剂量实验组(松果菊苷:5,10,20μmol·L^(-1))。24 h后,用噻唑蓝法检测细胞存活率,用流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位水平,用蛋白质印迹法检测细胞内胱天蛋白酶3(Caspase-3)、剪切的胱天蛋白酶3(Cleaved Caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和B细胞淋巴瘤-2蛋白相关X蛋白(Bax)的蛋白表达水平。结果正常组、模型组、阳性对照组和低、中、高3个剂量实验组的细胞存活率分别为(100.0±3.1)%,(88.7±1.9)%,(94.3±3.4)%,(101.3±3.1)%,(102.1±1.9)%和(104.3±1.6)%。选择松果菊苷中剂量进行后续实验研究。正常组、模型组、阳性对照组和中剂量实验组的凋亡水平分别为(10.7±0.9)%,(25.5±1.3)%,(17.7±1.7)%和(19.7±0.8)%;这4组的JC-1单体比例分别为(18.7±0.6)%,(52.1±1.4)%,(25.6±0.9)%和(22.6±1.0)%;这4组的Cleaved caspase 3/Caspase 3比值分别为1.01±0.17,1.98±0.29,1.43±0.29和1.34±0.12;这4组的Bax/Bcl-2比值分别为1.23±0.21,3.01±0.81,1.64±0.39和0.91±0.29。上述指标:模型组与正常组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);阳性对照组和中剂量实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论松果菊苷可能是通过抑制线粒体凋亡信号通路降低凋亡水平来改善皮质酮诱导的PC-12细胞损伤。松果菊苷可能是地黄发挥抗抑郁作用的物质基础之一。     

番茄碱通过AMPK/COX-2通路调控食管癌细胞凋亡的机制研究北大核心CSCD

目的探究番茄碱通过单磷酸腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/环氧合酶-2(COX-2)通路抑制食管癌凋亡的机制研究。方法将人食管癌EC9706细胞随机分为对照组、低剂量实验组、中剂量实验组、高剂量实验组、高剂量+抑制药组;对照组细胞不做处理,低、中、高剂量实验组细胞分别给予1.0、2.0和4.0μmol·L^(-1)的番茄碱处理细胞48 h,高剂量+抑制药组使用4.0μmol·L^(-1)番茄碱和10μmol·L^(-1)AMPK抑制药Dorsomorphin共同处理细胞48 h。用细胞计数试剂盒8(CCK8)法检测细胞存活率;用流式细胞术和TUNEL法检测细胞凋亡情况;用蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞相关蛋白表达情况。结果对照组,低、中、高剂量实验组及高剂量+抑制药组细胞TUNEL阳性细胞率分别为(3.73±0.60)%、(12.48±1.05)%、(17.03±1.29)%、(33.04±2.25)%和(13.99±1.12)%,Ki67蛋白表达水平分别为0.98±0.09、0.79±0.07、0.59±0.09、0.33±0.03和0.71±0.07,胱天蛋白酶(Cl-caspase-3)蛋白表达水平分别为0.30±0.04、0.59±0.05、0.75±0.07、1.00±0.06和0.54±0.05,p-AMPK蛋白表达水平分别为0.28±0.05、0.56±0.06、0.73±0.04、1.09±0.10和0.69±0.04;COX-2蛋白表达水平分别为1.13±0.08、0.74±0.07、0.57±0.07、0.39±0.04和0.72±0.07。低、中、高剂量实验组上述指标与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);高剂量+抑制药组上述指标与高剂量实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论番茄碱可通过激活AMPK/COX-2信号通路抑制食管癌细胞增殖、诱导凋亡。