酶联免疫吸附试验技术的影响因素分析

酶联免疫吸附试验（ELISA）是20世纪70年代发展起来的一种检测技术,因其具有敏感性高、特异性强、操作简单等优点,被广泛应用于各种抗原和抗体的测定。为辅助临床诊断与牛物科研起到了积极的推动作用。笔者从事检验工作多年,深知ELISA测定中影响因素较多,     

酶联免疫吸附试验检测影响因素探讨

酶联免疫吸附试验（ELISA）是目前临床免疫学检验领域的主流检测技术之一,而且其反应中各组分的成本较为低廉,特别是对肝炎病毒的监测,最基层的医院也在开展。因其操作简单,灵敏度高,特异性好,达ng水平,经济安全,不需要特殊设备等特点而在临床上广泛应用。但是由于其操作步骤复杂,     

酶联免疫吸附试验检测体液中细胞因子的影响因素

健康人体液中细胞因子含量极低,若出现较高量时,常与机体细胞免疫失衡或患者病情及治疗等情况有关,现今医院检验科已开展这方面的工作,有的也列入常规项目.细胞因子测定的方法有好几种,其中酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)以其快速、特异性强、精确性高和不受体液中药物的干扰等优点而得到广泛的应用.为能给临床提供可靠的信息,在选用优质的试剂盒和严格遵守试验操作程序的基础上,强调重视影响试验本身的因素.许多因素赋予细胞因子定量检测的复杂性,而且每一具有普遍意义的规律,也都存在着例外.如多次发现试验结果例外或与临床明显不符,甚至反常时,深入分析和探讨这些例外现象,不仅加深对该试验的认识和体会,或许还可为不断改进这类试验的研究提供各种线索.现从5个方面绍介ELISA检测体液中细胞因子的影响因素.     

影响酶联免疫吸附试验测定的关键环节

临床酶联免疫吸附试验(ELISA)测定现通常采用微孔板为固相的测定模式,测定操作非常简单,一般涉及到标本的收集保存、试剂准备、加样、温育、洗板、显色、比色、结果判断和结果报告及解释等方面,其中任一步操作不当都会影响测定结果,现将测定过程中可能发生的主要问题分析如下.……     

酶联免疫吸附试验法检测乙型肝炎病毒表面抗原的影响因素分析

乙型肝炎（下称乙肝）病毒用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测具有操作简便、特异性强、敏感性高、试剂成本低、快速等优点,目前在困内被广泛使用,但在操作中影响检验结果的因素也很多。为提高乙肝病毒的检测质量,本文通过对乙肝病毒表面抗原（HBsAg）的测定探讨其重要影响因素及解决方法,现报道如下。     

影响酶联免疫吸附试验结果的常见因素分析

随着科学技术的不断发展,酶联免疫吸附试验（ELISA）一步法检测乙型肝炎（下称乙肝）病毒（HBV）两对半的试剂、方法已成熟,因其方法简便、灵敏度高、特异性强、实验条件要求不高而被各级、各类医疗机构广泛采用。尽管ELISA一步法在一定程度上解决了临床需求,但面对人们日益严格的要求仍存在一定的差距。除了其方法学上的缺陷之外,影响ELISA测定的因素还有很多。现就ELISA测定HBV两对半的常见影响因素分析讨论如下。     

论酶联免疫吸附试验中影响因素及解决方法

我科采用ELISA法检测筛查用于住院、门诊需要输血、手术前和胃肠镜等检查前必检测项目.但ELISA法影响因素较多,包括试剂和样本准备、加样、温育、洗板、显色和比色,每个环节不规范操作均会对测定结果产生影响[1],现将影响因素和解决办法小结如下.1试剂我科使用的ELISA试剂,选择灵敏度高,特异性强,精密度好,稳定性好,并使用两步法,避免一步法ELISA试剂盒所致的假阴性问题[2].选用与仪器配套的试剂,不要使用过期的试剂和混用不同批号的试剂.试剂使用前从冰箱取出需放置于室温平衡30 min.     

酶联免疫吸附试验测定操作的体会

酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定操作非常简便,一般涉及到标本的收集保存、试剂准备、加样、温育、洗板、显色、比色、结果判断和结果报告及解释等方面,其中任一步骤的不当都会影响测定结果,且尤以加样、温育和洗板等步骤为甚.     

双抗夹心法酶联免疫吸附试验影响因素探析

目的探析双抗夹心法酶联免疫吸附试验中牛血清清蛋白封闭,吐温20及浓度,样品与检测抗体的加样方式及孵育温度对酶联免疫吸附试验检测结果的影响。方法双抗夹心法酶联免疫吸附试验检测人白细胞介素(IL)-1Ra细胞因子作为模型,检测封闭条件,吐温20及其不同浓度,样品与检测抗体分开孵育及共同孵育,酶联孵育温度对标准品浓度与OD值关系的影响。结果酶联免疫吸附试验不封闭、洗液吐温浓度为0.05%且孵育温度为37℃的R~2=0.995 7;BSA封闭的R~2=0.981 1;洗液中吐温浓度0.005%时R~2=0.991 5,0.5%时R~2=0.9868;样品和检测抗体一同孵育1h或2h的R~2分别为0.964 5和0.874 2;孵育温度为25℃的R~2=0.996 1。结论BSA封闭步骤对低浓度的样品检测灵敏度不强;样品和检测抗体及酶稀释液中必须含有吐温20且浓度在0.05%条件下最合适;样品和检测抗体共同孵育会影响对高浓度样品的检测;37℃和25℃的孵育温度条件下的酶联免疫吸附试验检测灵敏度没有差异,但25℃孵育可以降低OD值背景。     

细胞酶联免疫吸附试验

免疫细胞表面表达有多种抗原或受体,如各种CD系列分子等,有的可作为临床实验室检定T、B细胞和CD细胞等参与免疫应答反应细胞的特异性标志,或用以研究细胞分子和粘附分子及其相应受体的变化,或用以探讨诸多表面分子参与免疫应答的机制,等等.     

酶联免疫吸附试验影响因素的分析

ELISA法以微孔板条为固相的测定模式,操作非常简单,其技术条件要点包括:试剂的制备,反应条件的选择和操作标准化.影响因素一般涉及到样本的收集保存、试剂准备、加样、温育、洗板、显色、比色、结果判断和结果报告及解释等方面,其中任一步骤的不当都会影响测定结果,现分述如下.     

酶联免疫吸附试验检测假阳性结果分析

ELISA法对IgG IgM都有很好的检测能力，因其灵敏度高、价格低廉、操作方便、结果客观，在国内广泛应用。但在工作中遇到的最大问题是出现假阳性的问题，而大多数是由弱阳性反应引起的，这给医疗工作带来麻烦，甚至引起医疗纠纷。为避免假阳性结果的出现现将产生假阳性的原因分析如下。     

影响酶联免疫吸附试验结果的常见因素及控制方法

酶联免疫吸附（ELISA）试验是免疫酶技术中固相酶免疫测定的一种技术。ELISA试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用,但是操作中的各个环节对试验的检测结果影响较大,如不注意排除干扰因素,有可能导致显色不全、花板等现象。现将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下．以期给同行带来一些启发．提高试验质量。     

酶联免疫吸附试验检测丙型肝炎病毒抗体影响因素分析

应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测丙型肝炎病毒抗体（抗HCV）目前已是血站、医院的常用检测方法,虽然该方法操作简单、灵敏度高,但在实际操作中,ELISA检测抗-HCV结果假阴性、假阳性问题还是比较常见,给临床诊断、治疗带来很大困难。影响ELISA检测抗-HCV的因素较多,现就比较常见的影响因素进行分析总结。     

温育时间对酶联免疫吸附试验结果的影响

目的 探讨温育时间对FAME全自动酶免分析系统(以下简称FAME)进行酶联免疫吸附试验(ELISA)结果的影响,从而提高ELISA法检测结果的准确性.方法 根据FAME孵育巢温度变化曲线,延长ELISA温育时间,选择不同实验参数条件进行对照实验,再根据实验结果选择合适的补偿时间进行实验,所得数据采用SPSS 13.0 for Windows进行双变量相关分析.结果 乙型肝炎表面抗原阳性标本、阳性对照、0.5 ng/ml质控对照和1 ng/ml质控对照的吸光度(OD)值与温育时间延长呈正相关,阴性标本和阴性对照的OD值与温育时间延长无统计学意义.结论 适当延长ELISA温育时间,可提高FAME结果的准确性.     

细胞-酶联免疫吸附试验及其应用

酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)问世数十年来,广泛应用于检测各种体液中的可溶性抗原或抗体.在传统的ELISA中,微孔板上包被的是可溶性的抗体或抗原,然而在免疫学研究和临床检测时,需要了解免疫活性细胞表面表达的特定分子以对细胞特性进行认定和分类,亦需测定抗某种细胞的抗体或评价某种细胞的功能,因而传统的ELISA中的包被物或受检物就要被替代,检测模式有所改变.1971年,Avrameas等[1]首次用酶标记抗体定量测定细胞表面的免疫球蛋白,又经数年的发展,形成了以细胞包被酶标板测定细胞表面特定分子的细胞-ELISA.近年来细胞-ELISA衍生出多种模式(方法),并筛选出适合细胞-ELISA的标记酶.目前已有多种成熟的细胞-ELISA的模式,并在检验医学中得到应用.     

细胞酶联免疫吸附试验

免疫细胞表面表达有多种抗原或受体 ,如各种ＣＤ系列分子等 ,有的可作为临床实验室检定Ｔ、Ｂ细胞和ＣＤ细胞等参与免疫应答反应细胞的特异性标志 ,或用以研究细胞分子和粘附分子及其相应受体的变化 ,或用以探讨诸多表面分子参与免疫应答的机制 ,等等。现有一些检测上述分子的方法 ,如免疫细胞化学法 ,荧光免疫染色法等。以流式细胞仪检测法 (ＦＡＣＳ)最为简便可靠 ,且能定量 ,缺点是需要贵重的仪器和成套的试剂 ,费用高。从方法学角度分析 ,还有几个问题限制了ＦＡＣＳ的广泛应用 ,如受检细胞为粘附性细胞时需要胰酶处理 ,因而可能破坏某…     

洗板对酶联免疫吸附试验检测结果的影响

目的 探讨酶标洗板机洗板程序对酶联免疫吸附试验(ELISA)检测结果 的影响.方法 将已知乙肝表面抗原(HBsAg)阴性者血清样本30份和HBsAg 0.5 ng阳性及2 ng阳性质控血清按酶标仪清洗方式分行洗、板洗2组,每种洗板方式依清洗次数分为5小组,采用ELISA法对样本进行HBsAg检测.结果 在相同工作条件下,洗板次数以8～9次为宜,本次试验采用行洗法洗板假阳性率略低于板洗法洗板,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 酶标洗板机的洗涤次数直接影响ELISA法检测结果 判定,不同洗板机依据性能需设定相应的洗板程序,并严格操作规程,以降低由洗板引发的假阳性、假阴性结果 .     

酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎病毒表面抗原的影响因素

酶联免疫吸附试验（ELISA）法在免疫学检测中应用最广、最普遍,因其灵敏度高,准确性好,操作简单,无需特殊仪器,试验时问短,深受广大医学检验者喜爱。乙型肝炎（下称乙肝）表面抗原（HBsAg）的检测对诊断、治疗、预防及流行病学调查均有重要意义。目前,国内实验室多采用ELISA法进行检测,为提高HBsAg的检测质量,本文就其重要影响因素及解决方法报道如下。     

酶联免疫吸附试验质量控制的探讨

酶联免疫吸附试验（ELISA）是将抗原、抗体反应的高度特异性与酶对底物催化作用的高效性相结合起来检测液体标本中微量的免疫物质的一种方法。自20世纪70年代问世以来,已成为临床实验室应用最广泛的免疫学技术之一。ELISA法所用的试剂,如抗原、抗体、酶标记物等均为生物制剂,相对来说生物制剂是不稳定的,不同批次的质量可能有差别,同批次不同保存时间、不同条件下质量也各异。