口服胰岛素抑制胰岛β细胞凋亡预防NOD鼠糖尿病

目的: 观察口服胰岛素免疫干预对非肥胖糖尿病(non-obese diabetic, NOD)鼠胰岛炎、β细胞凋亡和糖尿病的影响,并探讨其诱导免疫耐受的机制.方法: 86只NOD雌鼠随机分为胰岛素处理组(n=43)和磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline, PBS)对照组(n=43),从4周龄始每周灌胃人普通胰岛素1mg(70μL)2次,12周后改为每周灌胃1次至30周,对照组予等体积的PBS;于12周龄观察胰岛炎和胰岛β细胞凋亡;检测胰岛Fas和FasL的表达;测定血清IL-4和IFN-γ浓度,以及胰岛内I-Aβg7,IL-1β,IFN-γ,Fas,IL-4,TGF-β mRNA和小肠PP(Peyer's Patch)淋巴结IL-4,IFN-γ,TGF-β mRNA的表达水平.结果: NOD鼠口服胰岛素组30周龄和52周龄时发病率为55.6%和70.4%,分别比PBS对照组(85.7%和96.4%)低(P＜0.05).胰岛素组胰岛炎积分比对照组低,但差异无统计学意义(P＞0.05).胰岛素组胰岛Fas抗原表达和β细胞凋亡率均比PBS对照组低(均P＜0.05).胰岛素组胰岛内I-Aβg7,IFN-γ,IL-1β,Fas mRNA和PP淋巴结IFN-γ mRNA表达均较PBS对照组低(均P＜0.05),而IL-4,TGF-β mRNA表达较对照组高(均P＜0.05);胰岛素组血清IL-4比PBS组高,IFN-γ比PBS组低(均P＜0.05).结论:口服胰岛素能诱导NOD鼠的免疫耐受而预防糖尿病的发生,但不能阻断胰岛炎的进展.口服胰岛素能诱导调节性T细胞产生,使全身和胰岛局部T细胞由Th1向Th2转型,从而抑制Fas介导的β细胞凋亡而预防糖尿病.     

吡格列酮对炎性因子所致胰岛细胞凋亡的保护作用

目的：探讨Ppar-γ激动剂吡格列酮（PGZ）对炎性因子所诱导的胰岛细胞凋亡的保护作用，初步研究其作用机制。方法：Western—blotting检测NIT-1细胞的Ppar-γ受体蛋白表达；联合IL-1β及IFN-γ作用于体外培养的胰岛细胞株NIT-1，建立胰岛细胞炎症模型，观察（IL-1β＋IFN-γ）与PGZ预孵育NIT-1细胞的凋亡；MTT法、流式细胞术检测细胞生长抑制率及凋亡率，比色法检测凋亡细胞caspase-3比活性。结果：NIT-1细胞表达Ppat-γ蛋白；（IL—1β＋IFN-γ）组作用24h对NIT-1细胞生长抑制率、凋亡率、caspase-3比活性分别为49．8％、28．0％、3．5，对照组3项指标分别为0％、4．3％、1，两组比较均有十分显著差异（P〈0．01）；PGZ组3项指标分别为2．7％、7．1％、1.3，与对照组比较，均无明显差异（P〉0．05）；（PGZ＋IL-1β＋IFN-γ）组的3项指标分别为18．6％、14．8％、1．5，与（IL-1β＋IFN-γ）组比较均有差异（P〈0．05），与对照组比较分别为P〉0．05，P〈0．05，P〈0．05。结论：NIT-1细胞表达Ppar-γ受体蛋白；联合IL—1β及IFN-γ明显诱导NIT-1细胞凋亡，PGZ显著抑制IL-1β及IFN-γ诱导的NIT-1细胞凋亡，其机制与降低caspase-3活性有关。     

y-氨基丁酸对炎性因子致胰岛细胞凋亡的保护作用

【目的】探讨1-氨基丁酸（gamma-aminobutyricacid,GABA）对炎性因子所诱导的胰岛细胞凋亡的保护作用,初步研究其作用机制。【方法】将胶原酶v：通过总胆管灌注到大鼠内,分离纯化大鼠胰岛细胞,并通过DTZ染色鉴定胰岛纯度。将新鲜分离的胰岛分为3组：正常对照组、通过白介素-1B（IL-1B）-y干扰素（IFN-7）建立胰岛细胞炎症模型（IL-1β＋IFN-1诱导组）、GABA干预组（GABA＋IL-1β＋IFN-1）。观察（IL-1β＋IFN-1）与GABA预孵育胰岛细胞的凋亡;二醋酸酯荧光素,碘化丙啶染色、流式细胞术及糖刺激实验检测胰岛细胞活性。凋亡率和功能,免疫荧光检测凋亡细胞Caspase-3蛋白表达。【结果】（IL-18＋IFN-7）组作用24h对胰岛细胞活性、凋亡率和糖刺激指数分别为20％、（32．7±5.3）％和（1．62±0．13）,对照组3项指标分别为90％、（5．5±2．8）％和（2．37±0．11）,两组比较差异显著（P〈0．01）;（GABA＋IL-1β＋IFN-y）组3项指标分别为70％、（18．0±6．3）％和（1．97±0．12）,与（IL-1β＋IFN-1）组比较,均有明显差异（P〈0．01）。（IL-1β＋IFN-1）组胰岛的Caspase-3蛋白表达明显增加,而（GABA＋IL-1β＋IFN-1）组胰岛的Caspase-3蛋白表达明显受到抑制。【结论】联合IL-1β及IFN-y明显诱导胰岛细胞凋亡,GABA显著抑制IL-1β及IFN-1诱导的胰岛细胞凋亡,其机制可能与降低Caspase-3蛋白的表达有关。     

NOD鼠胰岛细胞FasL/Fas凋亡通路的动态变化

目的:观察雌性NOD鼠在不同病程时,胰腺细胞因子mRNA和凋亡因子mRNA的表达,及胰岛内细胞因子和凋亡因子蛋白的表达.方法:54只雌性NOD鼠随要分为C1、C2、C3三组各18只,分别于4周龄,15周龄和30周龄(或发病时)处死,摘取胰腺.RT-PCR法检测胰腺IFN-γ、IL-10、Fas,FasL和CPP32mRNA的表达水平.HE染色观察胰岛炎程度.SP免疫组化染色观察胰岛内胰岛细胞及炎症细胞Fas,FasL及CPP32蛋白表达水平.结果:随病程的进展胰腺Fas、IFN-γ mR-NA的表达水平增加(P＜0.05),IL-10mRNA三组间无显著性差异.C2和C3组胰腺FasL、CPP32mRNA水平较C1组明显增强(FasL、P＜0.05;CPP32,P＜0.01),C2与C3组比较无显著差异.胰腺Fas、CPP32mRNA与IFN-γmRNA的表达水平呈正相关(相关系数γ=0.677,0.530),与IL-10mRNA的表达不相关(γ=-0.427,-0.464).免疫组化染色显示:C1、C2、C3组胰岛细胞FasL均高表达,三组间无显著差异(P＞0.05),Fas、CPP32的表达在C1组组弱表达,C2、C3组表达增强.C2、C3与C1组之间均有统计学差异(P＜0.05),C2与C3组比较无显著差异.C1组几无炎症细胞浸润,C2与C3组之间比较炎症细胞Fas、FasL、CPP32的表达无显著性差异.结论:在NOD鼠糖尿病发病中Th1细胞因子起主导作用;FasL/Fas凋亡通路参与NOD鼠胰岛β细胞的破坏;Th1细胞因子IFN-γ能上调胰腺FasL/Fas凋亡通路.     

氨基胍对胰岛β细胞保护作用的机理研究

目的探讨氨基胍（AG）对胰岛β细胞的保护作用及机理,为胰岛β细胞的保护治疗提供实验依据。方法培养胰岛β细胞株NIT细胞,分别与以下4组作用：①（IL-1β＋IFN-γ）组、②（IL-1β＋IFN-γ＋AG）组、③AG组、④对照组（DMEM）。硝酸还原酶法检测上清一氧化氮（NO）水平,比色法检测上清诱导型一氧化氮合酶（iNOS）水平,化学发光法检测上清胰岛素（Ins）水平。结果①AG＋IL-1β＋IFN-γ刺激的NIT-1细胞与IL-1β＋IFN-γ刺激组相比,分泌NO、iNOS水平下降（P〈0.05）。②AG＋IL-1β＋IFN-γ刺激的NIT-1细胞与IL-1β＋IFN-γ刺激组相比,Ins分泌增加（P〈0.05）。结论氨基胍可减轻IL-1β联合IFN-γ对NIT细胞的损伤作用,保护NIT细胞的胰岛素分泌功能。     

阿奇霉素对支气管哮喘患儿外周血辅助性T淋巴细胞功能的影响

目的探讨阿奇霉素对支气管哮喘患儿的疗效及其对外周血辅助性T淋巴细胞功能的影响。方法86例支气管哮喘患儿随机分为观察组和对照组各43例,比较两组的疗效及临床症状、体征消失时间以及血清IFN-γ、IL-4和IFN-γ／IL-4比值的变化情况。结果观察组的疗效明显优于对照组1,且观察组的临床症状改善程度较对照组1更明显（P〈0．05）。观察组和对照组1治疗后的IFN-1均较治疗前明显升高,IL-4较治疗前明显降低（P〈0．05）,IFN-γ／IL-4比值较治疗前明显升高（P〈0．05）,且观察组较对照组1改善更明显（P〈0．05）,更接近健康对照组。结论阿奇霉素治疗支气管哮喘患儿疗效确切,明显改善患儿的临床症状、体征,考虑是其通过上调IFN—γ的表达,抑制炎症因子IL-4的表达,从而调节Th1/Th2细胞失衡而发挥抗炎及免疫调节作用。     

毛细支气管炎患儿外周血T细胞亚群Th1/Th2及相关细胞因子的变化

目的探讨毛细支气管炎患儿外周血T细胞亚群与Th1／Th2免疫变化。方法流式细胞仪检测32例毛细支气管炎患儿、16例支气管哮喘患儿及20例健康儿童外周血T细胞亚群;ELISA法检测以上儿童血清IFN-γ（ng／L）、IL-4（ng／L）。结果毛细支气管炎组CD4^＋百分率略高于对照组,CD8^＋百分率略低于对照组,但两组间均无显著差异（P〉0．05）。而CD4^＋／CD8^＋比值则明显高于对照组（P〈0．05）。哮喘组CD4^＋百分率高于对照组,CD8^＋百分率低于对照组,两组间有显著差异（P〈0．05）,且CD4^＋／CD8^＋比值明显高于对照组（P〈0．05）。毛细支气管炎组、哮喘组与对照组IFN-γ、IL-4、IFN-γ／IL-4水平变化差异显著（P〈0．05）。哮喘组IL-4水平略高于毛细支气管炎组（P〉0．05）。毛细支气管炎组IFN-γ水平低于哮喘组,有显著差异（P〈0．05）。结论毛细支气管炎和哮喘患儿均存在细胞免疫失调,以Th2型细胞占优势。     

IGF-I对NOD鼠胰岛Fas/FasL表达的影响

目的　观察腹腔注射胰岛素样生长因子 Ⅰ (IGF Ⅰ )对NOD鼠胰岛炎和糖尿病的发生情况以及其对胰岛Fas FasL表达的影响。方法　 2 0只 4周龄NOD雌鼠随机分为 2组 ,每组 10只 ,实验组每周 2次腹腔注射 1mlIGF Ⅰ(40ng ml) ,对照组注射 1ml生理盐水 ,共 8周。实验动物在发生糖尿病 7天后或至 2 0周龄处死 ,观察血清胰岛素及C肽浓度、胰岛HE染色、免疫组织化学染色 检测胰岛Fas FasL的表达。结果　IGF Ⅰ可明显减少NOD鼠胰岛炎和糖尿病的发生 (P <0 .0 1) ;IGF Ⅰ组胰岛Fas的表达少于对照组 (P <0 .0 1) ;FasL的表达多于对照组 (P <0 .0 1)。结论　早期应用IGF Ⅰ腹腔注射可以减少NOD鼠的胰岛炎症和糖尿病发生 ,其机制与Fas FasL介导的胰岛B细胞凋亡有关。     

IFN-γ与HIV-1gp120融合蛋白的表达及其免疫调节作用

目的：研究gamma干扰素（IFN-γ）对人类免疫缺陷病毒（HIV-1）gp120蛋白免疫小鼠后效果的调节作用。方法：利用分子生物学技术，构建表达中国流行株HIV-1gp120N端片段基因的原核质粒pet44b-gp120，及共表达HIV-1gp120N端片段基因与IFN-γ基因的原核质粒pet44b-gp120／IFN-γ，在E．coli BL21（DE3）细胞中进行低温诱导蛋白表达，然后经纯化后免疫BALB／c小鼠。实验设皮下注射gp120／IFN-γ组、gp120组和PBS三组，以检测HIV-1gp120诱导的T细胞增殖能力，CTL杀伤作用以及Th1型细胞因子（IL-2，IFN-γ）和Th2型细胞因子（IL-4，IL-10）的表达情况。结果：通过PAGE和Western blot检测，证实上述两种蛋白在DE3细胞中得到表达。免疫学实验表明，针对HIV-1gp120的特异性T淋巴细胞增殖作用、特异性CTL杀伤作用，以及Th1型细胞因子IL-2和IFN-γ表达在三组之间均有显著性差异（P〈0．05），gp120／IFN-γ组高于gp120组，gp120组高于PBS组（P〈0．05）。反映体液免疫反应的Th2型细胞因子IL-4和IL-10的表达在三组之间没有显著性差异（P〉0．05）。结论：协同应用IFN-γ基因可明显加强HIV-1gp120基因的细胞免疫反应。     

干预协同刺激信号对反复自然流产患者Th1/Th2转换影响的体外研究

目的 探讨干预协同刺激信号对反复自然流产患者Th1／Th2转换的影响。方法 用人绒毛膜癌细胞株JEG-3制备滋养细胞抗原;用该抗原刺激反复自然流产患者外周血单个核细胞,并分为两组：实验组加入细胞毒性T细胞相关抗导4（CTLA4Ig,10μg／mL组和1μg／mL组）,对照组加IgG（10μg／mL组和1μg／mL组）,培养72h,分别取24h和72h上清液,采用酶联免疫吸附法（ELISA）测上清液中白介素2（IL-2）、干扰素γ（IFN-γ）和白介索4（IL-4）的水平。结果 与同质量浓度的对照组相比,CTLA4Ig组产生的IL-4水平明显高于对照组（P〈0．05）,而产生的IL-2水平明显低于对照组（P〈0．05）,IFN-γ水平两组间差异无统计学意义（P〉0．05）。与CTLA4Ig1μg／mL组相比,CTLA4Ig10μg／mL组产生的IL-4水平明显升高（P〈0．05）,IL-2水平明显降低（P〈0．05）,IFN-γ水平两组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 CTLA4Ig能通过阻断CD80／CD86共刺激信号,使反复自然流产患者Th1／Th2细胞因子向Th2型细胞因子偏移。     

人谷氨酸脱羧酶65 DNA疫苗预防非肥胖糖尿病小鼠糖尿病的机制探讨

目的　探讨人谷氨酸脱羧酶 6 5 (GAD6 5 )DNA疫苗预防非肥胖糖尿病 (NOD)小鼠糖尿病的作用机制。方法　 (1) 6 2只 4周龄NOD雌鼠分为PBS(2 1只 )、PcDNA(2 0只 )、GAD6 5 (2 1只 ) 3组 ,由胫前肌分别注射PBS、质粒PcDNA3 1、人GAD6 5DNA疫苗 5 0 μg ,1周后重复 1次。观察 30周龄的累积糖尿病发病率。 (2 )各组取 12周龄未发病NOD鼠 (n =10 )胰腺HE染色观察胰岛炎 ;并用末端脱氧核糖核酸缺口标记法 (TUNEL)加SABC法检测胰岛 β细胞凋亡 ;ELISA法测定血清、脾细胞培养上清干扰素γ(IFN γ)和白细胞介素 4 (IL 4 )水平 ;RT PCR半定量检测脾脏IL 4、IFN γ和核因子NF ATc、NF ATpmRNA表达水平。结果　 (1) 30周龄时 ,PBS、PcDNA、GAD6 5组发病率分别为 95 2 %、80 0 %、6 1 9%。GAD6 5组发病率低于PBS组 (P =0 0 0 8)。 (2 ) 12周龄时GAD6 5组胰岛炎积分 (0 99± 0 71)和胰岛 β细胞凋亡率 (0 75 % )均低于PBS组 (2 16± 0 78,P =0 0 0 1;8 97% ,P=0 0 14 )和PcDNA组 (1 72± 0 5 9,P =0 0 2 7;2 6 5 % ,P =0 0 2 3)。GAD6 5组脾脏NF ATc、IL 4mRNA相对吸光度值及血清IL 4水平分别为 1 93± 0 34、0 70± 0 16、36 pg/ml± 8pg/ml,显著高于PBS组 (0 79± 0 15、0 4 9± 0 11、19pg/ml     

Oral administration of insulin to female nonobese diabetic mice inhibited diabetes and induced Fas ligand expression on islets of Langerhans

Objective To detect oral administration of recombinant human insulin to nonobese diabetic (NOD) mice for preventing them from diabetes and insulitis and to detect the effects of oral administration of insulin on Fas and Fas ligand expression on islet of Langerhans. Methods Sixty-four female NOD mice were divided into two groups.One group (34) was orally administered recombination human insulin 1 mg in 500 μl PBS and the other (30) 500 μl PBS only at age of 5 weeks old, twice a week for the first week, then weekly until 30 weeks of age. Results Oral administration of insulin to female NOD mice can significantly suppress diabetes and insulitis.The insulitis was less severe in the group fed with insulin than that in the control group (score of insulitis: 1.25±0.45 vs 3.0±0.76 at 16 weeks of age, P&lt;0.01).We examined Fas ligand and Fas expression on islets of Langerhans in both groups of NOD mice by using immunohistochemical techniques.We find that Fas only expressed on islets when the mice suffered the diabetes, whereas Fas ligand expressed on islets of the mice fed with insulin at 16 and 20 week of ages.We did not find Fas ligand positive staining on the islet feeding with PBS. Conclusion We speculated that oral insulin may induce Fas ligand expression on the islets and plays a role in protecting the pancreatic β-cell from autoimmune destruction.These results show that oral insulin affected autoimmune diabetes and insulitis in NOD mice.The immune mechanism of oral tolerance is closely related to the change of Fas ligand and Fas system.     

完全弗氏佐剂抑制NOD鼠胰岛β细胞凋亡及其机制

目的:探讨完全弗氏佐剂( complete Freund’s adjuvant, CFA)对非肥胖糖尿病( nonobese dia-betic, NOD)鼠胰岛β细胞凋亡及凋亡相关基因Fas,FasL和Bcl-x表达的影响。方法:将4周龄NOD雌鼠随机分为CFA组(n=5)和生理盐水( NS)对照组(n=5 ) ,给CFA组鼠后脚板注射50μLCFA,对照者鼠后脚板注射等量NS。监测血糖,若血糖连续2 d≥11.1 mmol /L即诊断为糖尿病。当NOD鼠发生糖尿病或至30周龄时,处死动物,取胰腺组织制成薄切片,HE染色观察胰岛炎,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记( TUNEL)及ABC免疫组织化学双标记染色观察并计数凋亡的胰岛β细胞,ABC免疫组织化学法染色观察并记数Fas,FasL和Bcl-x表达阳性细胞。结果:至NOD鼠30周龄时,CFA处理组鼠无1只发生糖尿病,对照组鼠有3只发生糖尿病;CFA处理组的胰岛炎积分低于NS对照组(1.820±0.962 vs. 3.020±1.040,P<0.05 ) ;CFA处理组胰岛β细胞凋亡率、Fas阳性细胞率、FasL阳性细胞率均低于NS对照组[ (10.2±2.8) % vs. (15.9±6.5) %,(54.9±14.5)% vs.(75.7±12.9) %,(20.3±10.4) % vs. (27.9±12.0) %,P<0.05] ,Bcl-x阳性细胞率高于NS对照组[ (74.9±10.7) % vs. (66.0±18.3) %,P<0.05]。结论:CFA能够减轻NOD鼠胰岛β细胞凋亡,其机制与减少促凋亡基因Fas和FasL表达及增加抑制凋亡基因Bcl-x表达有关。     

胰岛素早期强化治疗对发病NOD小鼠胰岛炎及bax、bcl-2表达的影响

目的探讨胰岛素早期强化治疗对发病非肥胖糖尿病(NOD)小鼠胰岛炎及对胰岛细胞凋亡与再生的影响。方法选取近期发病NOD小鼠12只,随机平均分为A、B两组,A组给予胰岛素早期强化治疗,B组为发病未治疗组。同时选取同周龄未发病小鼠6只为C组。B和C组分别于分组当日即开始予PBS缓冲液对照治疗。B组于20 d处死,A和C组于60 d处死。HE染色观察各组小鼠胰岛炎性积分,免疫组化观察小鼠胰岛bax、bcl-2蛋白的表达。结果 A组小鼠糖尿病症状得到明显控制,其胰岛炎性积分显著低于B组(P<0.05),与C组相比差异无统计学意义(P>0.05)。A组bax表达低于B组,但差异无统计学意义(P>0.05),与C组相比差异有统计学意义(P<0.05)。A组bcl-2表达显著高于B组和C组(P<0.05)。结论胰岛素早期强化治疗能够减轻胰岛炎症,减少细胞凋亡,促进胰岛细胞再生。     

Fas-FasL在NOD小鼠胰岛炎中的作用

目的分析Fas-FasL在NOD小鼠胰岛炎中的作用。方法取32只分属不同周龄的雌性NOD小鼠,观察其血糖、胰岛HE染色、免疫组织化学染色———检测胰岛素、CD8、Fas、FasL的表达。在分析NOD小鼠胰岛炎中以胰岛或相关细胞为研究单位,从而减少了混杂因素的影响。结果雌性NOD小鼠自6周龄起出现胰岛炎,其评分逐渐增加(P<0.0005),14周龄出现糖尿病。随着胰岛炎的加重:胰岛素阳性细胞减少(P<0.0005),与胰岛炎评分呈负相关(P<0.05);Fas 胰岛细胞增加(P<0.0005),与评分呈正相关(P<0.01);FasL 胰岛细胞出现并逐渐增加(P<0.0005),与评分呈正相关(P<0.01);浸润细胞表达FasL、CD8,均逐渐增加(P<0.0005)。胰岛细胞的Fas与胰岛素表达之间呈负相关、胰岛素与FasL呈负相关、Fas与FasL呈正相关,浸润细胞的CD8与FasL表达呈正相关,P值均小于0.01。结论在NOD小鼠胰岛炎中,Fas-FasL可能参与β细胞损伤及自身免疫负调节。     

脂质体与完全费氏佐剂预防NOD鼠胰岛炎探讨

OBJECTIVE: To explore the effects of complete Freund's adjuvant (CFA), incomplete Freund's adjuvant(IFA), large multilamellar liposome (LML) and small cationic liposome (DOTAP) on insulitis and diabetes. METHODS: 1. 3-week-old non-obese diabetic(NOD) female mice were randomly divided into 3 groups: CFA group (injected subcutaneously in the hind footpad, n = 16), IFA group (injected intraperitoneally, n = 16) and PBS group (injected subcutaneously in the hind footpad, n = 16). Three mice from each group (9 in total) were killed at the age of 12 weeks for the analysis of pancreatic pathology, and the others were not killed until they were 30 weeks old for diabetes incidence. 2. 3-week-old NOD female mice were randomly divided into 3 groups and injected intraperitoneally with LML (n = 13), DOTAP (n = 13) and PBS (n = 13), respectively. The insulitis score and diabetes incidence were estimated in the same way. RESULTS: 1. CFA injected subcutaneously in the hind footpad could significantly reduce the insulitis score and decrease diabetes incidence in NOD mice. At the age of 30 weeks, the incidence of diabetes in the CFA group was lower than that in the PBS group (injected subcutaneously in the hind footpad) (9.2% vs 81.8%, P = 0.001). At the age of 12 weeks, the insulitis score in the CFA group was lower than that in the control group [(0.05 +/- 0.02) vs (0.54 +/- 0.11), P < 0.001]. 2. LML injected intraperitoneally could significantly reduce the insulitis score in NOD mice. At the age of 12 weeks, the insulitis score in the LML group was lower than that in the PBS control group (injected intraperitoneally) [(0.16 +/- 0.02) vs (0.58 +/- 0.06), P < 0.001]. At the age of 30 weeks, there were no significant differences in the diabetes incidence between the LML group and the PBS group (60% vs 90%). 3. The protective effect of CFA was better than that of LML in NOD mice. CONCLUSION: CFA injected subcutaneously in the hind footpad may prevent NOD mice from developing diabetes and reduce the insulitis severity. Although the protective effect of CFA is better than that of LML, LML can lessen the insulitis severity and may become a new preventive strategy in NOD mice.     

人GLP-1(7-36)酰胺对非肥胖型糖尿病小鼠胰岛炎的影响

目的通过观察人胰高糖素样肽1（GLP-1）刺激后非肥胖型糖尿病（NOD）小鼠胰岛组织形态学的变化,研究GLP-1对NOD 1型糖尿病小鼠胰岛炎的影响。方法 GLP-1治疗组小鼠用微型渗透泵皮下持续泵入人GLP-1,对照组小鼠泵入生理盐水,4周后将其胰腺组织做HE染色、5-溴脱氧尿嘧啶核苷（Br-dU）/胰岛素双重免疫染色及导管细胞角蛋白（DCK）/胰岛素双重免疫荧光染色,观察小鼠胰岛炎的变化及胰岛β细胞的复制和胰腺导管上皮β细胞的新生。结果与对照组相比,GLP-1治疗组NOD小鼠胰岛单核细胞浸润明显减轻,胰岛炎评分明显下降（P〈0.001）。GLP-1治疗组胰岛可见较多BrdU阳性的β细胞和胰岛素阳性的导管上皮细胞,而在对照组几乎看不到。结论人GLP-1持续刺激NOD小鼠后,可使1型糖尿病小鼠胰岛炎减轻并促进β细胞再生。     

脂质体与完全弗氏佐剂预防NOD鼠胰岛炎探讨

目的 :探讨完全弗氏佐剂 (CFA)、不完全弗氏佐剂 (IFA)、大复层脂质体 (LML)、小单层阳离子脂质体(DOTAP)对NOD鼠胰岛炎和糖尿病发病的影响。方法 :①将 3周龄的NOD雌鼠随机分为 3组 ,分别给予CFA后脚板注射 (n =16 ) ,IFA和PBS乳化后腹腔注射 (n =16 ) ,单独PBS后脚板注射 (n =16 )。观察 12周龄胰岛病理及 30周龄糖尿病发病情况。②将 3周龄的NOD雌鼠随机分为 3组 ,分别给予大复层脂质体 (LML) (n =13) ,小单层阳离子脂质体 (DOTAP) (n =13) ,单独PBS腹腔注射 (n =13) ,同上观察胰岛病理及糖尿病发病情况。结果 :①CFA后脚板注射能明显降低胰岛炎计分 ,减少糖尿病的发生。 30周龄时 ,CFA组的发病率明显低于PBS后脚板注射对照组 (分别为9 2 %和 81 8% ,P =0 .0 0 1)。 12周龄时 ,CFA组胰岛炎计分明显低于对照组 [分别为 (0 0 5± 0 0 2 )和 (0 5 4± 0 11) ,P<0 .0 0 1]。②LML腹腔注射能明显降低胰岛炎计分。 12周龄时 ,LML组胰岛炎计分明显低于PBS腹腔注射对照组 [分别为 (0 16± 0 0 2 )和 (0 5 8± 0 0 6 ) ,P <0 .0 0 1]。 30周龄时 ,LML组糖尿病发生率为 6 0 % ,对照组为 90 % ,两组间无统计学差异。③在预防胰岛炎的作用上 ,CFA优于LML。结论 :CFA后脚板注射可预防NOD鼠发生糖尿病并减     

人GLP-1(7-36)酰胺对非肥胖型糖尿病小鼠胰岛β细胞凋亡的影响

目的探讨人胰高糖素样肽1(GLP-1)对非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠胰岛β细胞凋亡的影响。方法 GLP-1治疗组小鼠用微型渗透泵皮下持续泵入人GLP-1,对照组小鼠泵入生理盐水,4周后将其胰腺组织做HE染色、TUNEL/胰岛素双重免疫荧光染色,显微镜下观察小鼠胰岛炎的变化及胰岛β细胞的凋亡情况。结果与对照组相比,GLP-1治疗组小鼠胰岛单核细胞浸润明显减轻,胰岛炎评分明显下降(P<0.001)。在对照组小鼠胰腺组织切片中观察到较多凋亡β细胞,而在GLP-1治疗组却很少见到。GLP-1治疗组小鼠胰岛β细胞凋亡率与对照组小鼠相比明显下降(0.07±0.01%vs0.26±0.02%,P<0.001)。结论人GLP-1持续刺激NOD小鼠后,可使1型糖尿病小鼠胰岛炎减轻并抑制β细胞凋亡。