大豆磷脂对体外培养乳鼠神经细胞损伤保护作用的研究

目的:观察大豆磷脂脂质体(SPL)对谷氨酸所致培养乳鼠神经细胞损伤的保护作用。方法:取新生大鼠(0~1d)大脑皮层神经细胞进行原代培养,8~10d后加入谷氨酸(Glu),造成神经细胞的损伤,SPL保护组在Glu损伤处理的同时加入不同浓度的大豆磷脂脂质体,测定乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)的含量,观察谷氨酸对神经细胞的兴奋毒性及大豆磷脂脂质体的保护作用。结果:加入谷氨酸后,神经细胞出现明显损伤性变化,培养上清液中LDH含量增加,细胞匀浆中MDA生成增加,SOD含量明显减少。大豆磷脂脂质体在0.2mg/ml~1.6mg/ml浓度时能显著减轻上述损伤性变化。结论:大豆磷脂脂质体对谷氨酸所致培养乳鼠神经细胞兴奋毒性损伤具有显著的保护作用,其机制可能与大豆磷脂脂质体抗脂质过氧化作用有关。     

低分子肝素对原代培养神经细胞缺血性损伤的保护作用

目的观察低分子肝素(LMWH)对原代培养低糖和谷氨酸损伤大鼠大脑皮层神经细胞的作用。方法将血清药理学方法与神经细胞体外培养技术结合在一起,制备低糖和谷氨酸损伤模型,以细胞形态学、培养液吸光度(A)值以及乳酸脱氢酶(LDH)活性作为观察指标,研究LMWH所产生的保护作用。结果LMWH可改善损伤神经细胞的形态、升高培养液A值、降低培养液中LDH活性。结论LMWH可提高低糖和谷氨酸损伤状态下神经细胞的活性,对损伤神经细胞有保护作用。     

二甲氨基乙氧基银杏内酯B甲磺酸盐对鼠脑微血管内皮细胞损伤的保护作用

目的:研究二甲氨基乙氧基银杏内酯B甲磺酸盐(RNGB)对谷氨酸致原代培养的大鼠脑微血管内皮细胞(RBMEC)损伤的保护作用.方法: 通过测定MTT、乳酸脱氢酶(LDH)的释放、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,研究RNGB对谷氨酸(Glu)造成RBMEC损伤的保护作用.结果: 1 mmol·L-1的谷氨酸对原代培养的RBMEC产生明显的损伤.RNGB高浓度组(10 μmol·L-1)和中浓度组(3 μmol·L-1)明显对抗谷氨酸对RBMEC的损伤作用,抑制LDH的释放,增加SOD活力,降低MDA含量.结论: RNGB对谷氨酸所致原代培养的RBMEC损伤具有明显的保护作用.     

低分子肝素超氧化物歧化酶结合物抗氧化损伤及对神经细胞的保护作用

目的研究低分子肝素超氧化物歧化酶结合物(LWMHSOD)对低糖低氧损伤的神经细胞的保护作用。方法采用体外培养的大鼠大脑皮层神经元,造成低糖低氧损伤模型,观察LMWHSOD抗氧化损伤及对神经细胞的保护作用。结果LMWHSOD能够减少低糖低氧造成的细胞死亡,降低损伤后细胞外液LDH、MDA、NO的含量,改善细胞膜的流动性。结论LMWHSOD对神经细胞具有保护作用。     

咖啡酸对大鼠海马神经元铝盐损伤的保护作用

目的建立氯化铝致原代培养大鼠海马神经元损伤模型,观察咖啡酸对神经元铝盐损伤的保护作用。方法新生24h内SD大鼠海马神经元原代培养,7d后用免疫组化鉴定纯度;并分成空白对照组(NaCl200μmol.L-1)、铝负荷模型组(AlCl3200μmol.L-1)、铝和不同浓度的5-LO抑制剂咖啡酸(10-6、10-7、10-8mol.L-1)混合处理组。以HE染色,MTT测定,LDH漏出率,SOD活性和MDA含量为观测指标。结果神经元纯度超过95%。铝负荷致神经细胞数目明显减少,神经元突起减少变短,原代培养海马神经元活力降低,LDH漏出明显增多,SOD活性降低,MDA含量升高。咖啡酸能剂量依赖性地减轻铝盐所致的原代培养的海马神经元损伤,提高神经细胞的活力,减少LDH漏出,明显阻遏铝负荷所致的神经元SOD活性的降低和MDA含量的升高。结论咖啡酸对铝负荷所致的原代培养大鼠海马神经元损伤有一定的保护作用,其机制可能与其抑制5-LO活性,进而抑制炎症反应和氧化应激有关。     

BONF对大鼠脑神经细胞损伤的保护作用

目的：建立体外培养大鼠脑神经细胞损伤模型,测定损伤前后不同时间LDH的水平,研究DBNF对脑皮质神经元的保护作用机制。方法：原代培养新生Witer大鼠的脑皮质神经细胞,建立体外脑神经损伤模型,通过测定神经细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量变化观察模型对神经细胞的损伤作用。结果：损伤组与对照组神经细胞损伤后LDH值比较差异有显著性(P＜0．05)证明损伤模型确实有效;本实验表明治疗组神经元LDH水平与损伤组比较有差异(P＜0．05),证明BDNF能够起神经元保护作用。结论：本实验表明BDNF对神经元起保护作用。     

阿米替林对谷氨酸损伤中枢神经细胞的保护作用

目的：研究阿米替林（Ami)对谷氨酸损伤培养大鼠皮层神经细胞的保护作用。方法：分离培养15－18d胎龄的大鼠神经细胞，加入谷氨酸（Glu)，造成神经细胞的损伤，测定乳酸脱氢酶，一氧化氮，丙二醛及超氧化物歧化酶的含量，观察谷氨酸对神经细胞的损伤作用及阿米替林的保护作用。结果：加入谷氨酸后，神经细胞出现明显损伤性变化，死亡率升高，培养上清液中乳酸脱氢酶（LDH），一氧化氮（NO）含量增加，细胞匀浆中丙二醛（MDA）生成增加，超氧化物歧化酶（SOD）含量明显减少，Ami10^-8-10^-6mol/L^-1能不同程度地减轻上述损伤性变化。结论：Ami对谷氨酸所致的神经细胞损伤具有保护作用。其作用机制可能与抗脂质过氧化作用有关。     

牛磺酸对顺铂引起的原代培养兔肾小管上皮细胞膜流动性的影响

目的 :研究顺铂对培养的兔原代肾小管上皮细胞膜流动性的改变以及牛磺酸对肾小管上皮细胞膜的保护作用。方法 :采用体外培养兔肾小管上皮细胞 ,顺铂损伤组用不同浓度的顺铂与肾小管上皮细胞共同孵育24h ,牛磺酸保护组用不同浓度牛磺酸预先与肾小管上皮细胞孵育24h ,然后再加入顺铂 (26μmol/L)共同孵育24h ,用DPH荧光探剂法测定细胞膜流动性。结果 :顺铂13、26、52μmol/L能导致肾小管上皮细胞荧光偏振度 (P) ,各向异性 (γ)和微粘度 (η)显著下降 (P<0.01) ,牛磺酸在10g/L时可逆转顺铂导致的P、γ和 η 的下降 (P<0.05)。结论 :顺铂可引起体外培养的兔肾小管上皮细胞膜流动性增加 ,牛磺酸可降低膜流动性 ,具有膜稳定性。     

苯环壬酯对N-甲基-D-天冬氨酸诱导的原代培养的大鼠海马神经细胞损伤的保护作用

目的　观察苯环壬酯对N 甲基 D 天冬氨酸(NMDA)诱导的原代培养大鼠海马神经细胞损伤的保护作用。方法　建立NMDA诱导的原代培养大鼠海马神经细胞损伤模型 ,采用乳酸脱氢酶 (LDH )法及噻唑蓝 (MTT)比色法 ,以特异性NMDA受体拮抗剂MK 80 1作为阳性对照药 ,观察抗胆碱药苯环壬酯、东莨菪碱对NMDA诱导的原代培养大鼠海马神经细胞损伤的保护作用。结果　NMDA (4 0 0μmol·L- 1)可明显降低海马神经细胞的存活率 ,表现为细胞LDH释放量明显增高 ,MTT比色后的吸光值明显降低。苯环壬酯 (1,2 .5 ,10 ,2 0和 5 0 μmol·L- 1)对NMDA所致的LDH升高有明显对抗作用 ,MTT比色后的吸光值明显增高 (P <0 .0 1) ,其作用类似于MK 80 1(1,10 μmol·L- 1) ;而另外一种抗胆碱药东莨菪碱 (1,10 ,10 0 0 μmol·L- 1)对损伤细胞的LDH释放及MTT比色后的吸光值无明显影响。结论　苯环壬酯对NMDA诱导的大鼠海马神经细胞损伤有明显保护作用 ,其作用机制可能与其对NMDA受体的拮抗作用有关     

(-)-S·R-蝙蝠葛苏林碱对谷氨酸引起的大鼠大脑皮质神经元损伤的保护作用

用细胞培养方法,在原代培养的大鼠皮质神经细胞上,观察了(-)-S·R-蝙蝠葛苏林碱对谷氨酸引起的神经元损伤的保护作用。以Fura-2/AM为Ca²⁺的荧光指示剂,用AR-CM-MIC阳离子测定系统观察(-)-S·R-蝙蝠葛苏林碱对谷氨酸诱发大鼠脑皮质神经细胞内Ca²⁺升高的影响。结果表明(-)-S·R-蝙蝠葛苏林碱能剂量依赖性地抑制谷氨酸的神经毒作用,对谷氨酸诱发的神经细胞内游离Ca²⁺升高有明显的抑制作用。提示蝙蝠葛苏林碱对缺血性脑损伤有保护作用。     

The Neuroprotective Potential of Cyanidin-3-glucoside Fraction Extracted from Mulberry Following Oxygen-glucose Deprivation

In this study, cyanidin-3-glucoside (C3G) fraction extracted from the mulberry fruit (Morus alba L.) was investigated for its neuroprotective effects against oxygen-glucose deprivation (OGD) and glutamate-induced cell death in rat primary cortical neurons. Cell membrane damage and mitochondrial function were assessed by LDH release and MTT reduction assays, respectively. A time-course study of OGD-induced cell death of primary cortical neurons at 7 days in vitro (DIV) indicated that neuronal death was OGD duration-dependent. It was also demonstrated that OGD for 3.5 h resulted in approximately 50% cell death, as determined by the LDH release assay. Treatments with mulberry C3G fraction prevented membrane damage and preserved the mitochondrial function of the primary cortical neurons exposed to OGD for 3.5 h in a concentration-dependent manner. Glutamate-induced cell death was more pronounced in DIV-9 and DIV-11 cells than that in DIV-7 neurons, and an application of 50μM glutamate was shown to induce approximately 40% cell death in DIV-9 neurons. Interestingly, treatment with mulberry C3G fraction did not provide a protective effect against glutamate-induced cell death in primary cortical neurons. On the other hand, treatment with mulberry C3G fraction maintained the mitochondrial membrane potential (MMP) in primary cortical neurons exposed to OGD as assessed by the intensity of rhodamine-123 fluorescence. These results therefore suggest that the neuroprotective effects of mulberry C3G fraction are mediated by the maintenance of the MMP and mitochondrial function but not by attenuating glutamate-induced excitotoxicity in rat primary cortical neurons.     

复方沙棘颗粒对大鼠皮层神经细胞缺血性损伤的保护作用

目的 :研究复方沙棘颗粒对体外培养的大鼠大脑皮层神经细胞谷氨酸 (Glu)损伤的保护作用及机理。方法 :分离培养新生 (1d)大鼠大脑皮层神经细胞 ,加入Glu模拟兴奋性损伤 ,MTT法测定细胞存活率 ,比色法测定上清中乳酸脱氢酶 (LDH)含量 ,细胞中超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胱甘肽 (GSH Px)活性、丙二醛 (MDA)含量。结果 :细胞经Glu损伤后 ,上清LDH含量、细胞中MDA含量显著增加 ,SOD和GSH Px活力明显下降。复方沙棘处理组可有效防止上述改变。结论 :复方沙棘颗粒可有效保护由Glu引起的大鼠大脑皮层神经细胞的损伤。其机理可能与抗脂质过氧化、清除自由基有关     

黄芪提取物对缺氧/复氧诱导神经元损伤的保护作用

目的探讨黄芪提取物在缺氧/复氧所致神经元损伤中的保护作用。方法原代培养大鼠海马神经元细胞,建立缺氧/复氧损伤的海马神经元凋亡模型。采用四唑盐(MTT)法和LDH释放法检测细胞活力;Hoechst染色、Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测AKT和磷酸化AKT蛋白的表达。结果经缺氧/复氧后细胞活力明显下降,出现凋亡典型的形态学特征,磷酸化AKT蛋白表达下降;黄芪提取物能明显提高损伤海马神经元细胞活力,降低细胞凋亡率,促进磷酸化AKT蛋白的表达。结论黄芪提取物对缺氧/复氧神经元具有保护作用,其机制可能与激活PI3K/AKT细胞信号通路有关。     

PGE_1对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的　研究PGE1对纯化培养心肌细胞缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法　采用纯化培养的心肌细胞建立缺氧 /复氧损伤模型 ,实验分 5组 :正常细胞培养组、缺氧 /复氧损伤模型组、缺氧 /复氧损伤 +PGE1(5、15、4 5 μg·L-1)组。分别用黄嘌呤氧化酶法测定SOD活力 ,硫代巴比妥酸显色法测定MDA含量 ,MTT染色法测定线粒体脱氢酶活性改变并测定LDH含量变化。结果　PGE1可明显提高SOD、LDH活性 ,降低MDA含量并可提高线粒体脱氢酶活性。结论　PGE1具有明显的抗缺氧复氧损伤、保护心肌作用     

醒脑静与川芎嗪联用对原代培养的大鼠皮层神经细胞的保护作用

目的 :研究醒脑静 (XNJ)与川芎嗪 (Lig)联用对原代培养的大鼠神经细胞的保护作用。方法 :利用原代培养的大鼠大脑皮层神经细胞 ,观察XNJ与Lig 对谷氨酸 (Glu)介导的神经细胞兴奋性毒性作用的影响。结果 :XNJ与Lig 均能减少Glu所造成的细胞内乳酸脱氢酶的漏出 ,减轻细胞的形态学改变。结论 :XNJ与Lig对原代培养的大鼠皮层神经细胞具有保护作用 ,两者联用能够更有效地对抗Glu介导的兴奋性毒性作用。     

促红细胞生成素对大鼠视网膜神经元谷氨酸损伤的保护作用

目的探讨促红细胞生成素对大鼠视网膜神经元谷氨酸损伤的保护作用。方法原代培养大鼠视网膜神经元,透射电镜和LDH释放率检测评价不同浓度谷氨酸对神经元的影响,并选择损伤明显的浓度作为损伤剂量。然后细胞分组为N组(正常对照)、G组(谷氨酸损伤)、EG组(EPO+谷氨酸)、AG组(AG490+谷氨酸)、AEG组(AG490+EPO+谷氨酸)、MTT比色法比较5组神经元活力的改变。Western blot检测各组细胞Bax蛋白表达的情况。结果透射电镜显示在50μmol·L-1组出现了染色质和线粒体的改变。100μmol·L-1组改变更加明显。LDH释放率结果显示在20μmol出现了明显的细胞损害。MTT结果示EG组细胞活力高于G、AG和AEG组,G组高于AG和AEG组(P<0.01)。Western blot检测结果示,AG、AEG组Bax表达高于G组,G组高于EG组。结论 EPO对视网膜神经元谷氨酸损伤有保护作用,保护机制可能通过Jak2通路下调神经元谷氨酸损伤后Bax蛋白的表达,减少细胞凋亡从而达到视网膜神经元保护作用。     

Protective effects of puerarin on alcohol-induced oxidative injury in PC12 cells

OBJECTIVE The aim of this study was to investigate the protective effect of puerarin on alcoholtoxicity in rat pheochromocytoma cell line(PC12). METHODS The PC12 cells were incubated with different concentrations of puerarin in advance. The protective effects of the puerarin on alcohol induced PC12 cel impairment were evaluated according to the fol owing approach: the viability of PC12 cel was determined by MTT assay and the impairment level was evaluated by analysis the leakage content of the lactate dehydrogenase(LDH). The cel apoptosis degree and the pro-apoptotic p53 protein expression were measured by flow cytometry. RESULTS Alcohol significantly impaired PC12 cel viability(P<0.05),and increased LDH leakage(P<0.05),induced cell apoptosis and upregulated expression of p53(P<0.05).While Puerarin significantly reversed these changes(P<0.05). CONCLUSION Puerarin might exert protection effect against ethanol-induced neurotoxicity via inhibition the expression of p53 protein.     

乙酰胆碱介导的内皮超极化因子对海马神经元缺氧/再给氧损伤的保护作用

目的研究乙酰胆碱(acetylcholine,ACh)介导的大鼠大脑中动脉内皮释放的内皮超极化因子(endothelium-de-pendent hyperpolarizing factor,EDHF)对海马神经元缺氧/再给氧损伤的保护作用。方法用原代培养的大鼠海马神经元细胞建立缺氧/再给氧损伤模型,取大鼠大脑中动脉(mid-dle cerebral artery,MCA)血管段,PGI2和NO的阻断剂NG-ni-tro-L-argininemethyl ester(L-NAME)和indomethacin(Indo)预处理后,用ACh刺激血管内皮释放EDHF,用四甲基偶氮唑盐(MTT)染色吸光度和乳酸脱氢酶(LDH)活性作为细胞损伤指标,用激光共聚焦显微镜检测细胞内游离Ca2+浓度。结果与正常对照组相比,缺氧/再给氧损伤组细胞MTT染色吸光度明显降低,上清液中LDH活性和细胞内Ca2+浓度则明显升高。1μmol.L-1ACh合用含血管内皮的MCA血管段(MCA/Endo)或ACh+MCA/Endo+L-NAME+Indo均可抑制缺氧/再给氧致海马细胞MTT染色吸光度降低、培养上清液中LDH活性及细胞内Ca2+浓度的升高,但单用1μmol.L-1ACh或MCA/Endo却无上述抑制作用,合用1μmol.L-1ACh和去内皮MCA血管段(MCA/-Endo)也无明显抑制作用。K+在25~35μmol.L-1范围内,可明显减弱ACh+MCA/Endo+L-NAME+Indo对缺氧再给氧致海马神经细胞MTT染色吸光度降低、上清液LDH活性及细胞内Ca2+浓度升高的抑制作用,但Ba2+没有明显影响。结论假定的EDHF对原代培养的海马神经元缺氧/再给氧损伤具有保护作用,其机制可能与抑制缺氧/再给氧引起的钙超载有关。     

Protective effect of ginsenoside-Re against cerebral ischemia/reperfusion damage in rats

To investigate the protective effect of ginsenoside Re (Re) against cerebral ischemia-reperfusion injury, adult male Wistar rats weighing 250-300 g were subjected to either sham surgery or middle cerebral artery occlusion (MCAO) for 2 h of brain ischemia and 2 h reperfusion. A fluorescence polarization assay was carried out for membrane fluidity of brain mitochondria. Lipid peroxidation [malondiadehyde (MDA) formation], superoxide dismutase (SOD) and glutathion peroxidase (GSH-Px) of rat brain were estimated by fluorometric methods. It was observed that Re (5, 10, 20 mg kg-1 p.o. pretreatment for 7 d, once a day) significantly improved the fluidity of mitochondrial membranes as demonstrated by a reduction of average microviscosity, ameliorated lipid peroxidation by raising the activities of SOD and GSH-Px, and reduced the content of MDA in rat brain. This study demonstrated a direct protective effect of Re against cerebral ischemia-reperfusion injury.