胶质瘤TJ905细胞及其干细胞抗凋亡与MRP基因的关系

目的 从人脑胶质瘤细胞TJ905中分离、培养肿瘤干细胞,并探讨其生物学特性及其抗凋亡和耐药基因的表达差异.方法 TJ905细胞经免疫磁珠分离获取CD133+细胞,用无血清培养方法获得肿瘤干细胞球,用含有10%的胎牛血清培养基诱导分化,分化前后分别做兔抗人巢蛋白抗体(nestin)、鼠抗人微小管相关蛋白β(tubulin-β)、兔抗人胶质纤维酸性蛋白质(GFAP)、免疫细胞化学荧光染色,WST-8检测干细胞增殖活性,应用实时荧光定量RT-PCR技术检测Livin、Livinα、Livinβ、生存素和MRP1、MRF3的表达,并观察肿瘤干细胞形态学改变.结果 TJ905细胞中含有少量CD133+细胞,约为0.21%,这些细胞具有典型的干细胞特性,nestin染色为阳性;在无血清培养基中呈悬浮球样生长,能够自我更新和增殖,在有血清培养基中能够分化,tubulin-β、GFAP染色为阳性.TJ905干细胞球Livin、Livinα、Livinβ、生存素和MRP-1、MRP-3 mRNA表达量较TJ905单层培养细胞表达量都有不同程度的降低.结论 TJ905细胞中含有少量肿瘤干细胞,TJ905干细胞球抗凋亡和MRP基因表达量较TJ905单层培养细胞表达量都有不同程度的降低,提示肿瘤干细胞在肿瘤耐药机制中发挥的作用不尽相同,也不总是造成肿瘤耐药的惟一因素.     

华蟾素诱导人胶质瘤细胞U251凋亡的作用机制研究

目的研究观察华蟾素(Cinobufacini)对体外培养人胶质瘤细胞U251增殖抑制作用,并初步探讨其诱导U251细胞凋亡的分子机制。方法平皿克隆形成法测定不同浓度华蟾素对U251细胞锚定依赖性生长能力的影响;使用Wester Blot法观察不同浓度华蟾素处理人胶质瘤细胞48小时后,Bcl-2、Bax蛋白表达变化情况。结果平皿克隆法显示:华蟾素抑制人胶质瘤细胞U251生长,呈剂量依赖性;Wester Blot显示随着药物浓度升高,华蟾素可以逐渐抑制Bcl-2的蛋白表达,活Bax蛋白表达。结论华蟾素有诱导人胶质瘤细胞U251细胞凋亡的作用,其机制可能Bcl-2/Bax比值的下调,促进细胞凋亡有关。     

胶质瘤细胞BT325和U251凋亡相关因子的表达差异

目的比较BT325和U2512种胶质瘤细胞中凋亡相关因子的表达差异及其在凋亡中的作用。方法应用Western blot方法检测细胞中Fas、Caspase-3、Caspase-7、Survivin和Livin的表达情况。结果U251与BT325均有Fas、Caspase-3和Livin蛋白表达,BT325的Caspase-3含量高于U251,U251的Livin含量高于BT325;Survivin仅表达于U251;Caspase-7仅表达于BT325。结论BT325胶质瘤细胞中凋亡效应因子呈高表达,U251胶质瘤细胞中凋亡抑制因子呈高表达。     

银杏叶提取物对U251胶质瘤细胞的促凋亡作用

目的研究银杏叶提取物对U251胶质瘤细胞的促凋亡作用。方法银杏叶提取物干预U251胶质瘤细胞后,CCK-8观察60、100、150和200、250mg/L不同浓度银杏叶提取物作用下U251细胞的增殖状况,流式细胞仪分析用AnnexinV-FITC和PI双染检测不同浓度银杏叶提取物对U251胶质瘤细胞凋亡的影响。结果银杏叶提取物可抑制U251胶质瘤细胞的增殖,呈浓度和时间依赖性反应;银杏叶提取物150mg/L、200mg/L干预U251胶质瘤细胞后,流式细胞仪检测显示细胞凋亡率(8.13±1.02、12.37±1.06)明显升高。结论银杏叶提取物可诱导U251胶质瘤细胞凋亡。     

胶质瘤U251细胞中CD133表达及干细胞特性分析

目的： 探讨CD133⁺细胞的生物学特性,分析CD133作为胶质瘤干细胞标记的可行性。方法： 利用免疫荧光染色检测U251细胞中CD133、巢蛋白（nestin）、神经元特异性烯醇化酶( NSE )、神经胶质细胞纤维酸性蛋白(GFAP)等蛋白表达,分析CD133⁺细胞与CD133^－细胞中巢蛋白、NSE、GFAP阳性细胞存在的差异。结果： U251中CD133⁺细胞比例为0.060±0.003,在CD133⁺细胞中,巢蛋白阳性细胞,NSE和GFAP阴性细胞比CD133^－中明显增多;在CD133^－细胞中,也存在巢蛋白阳性细胞,数目较CD133⁺中明显减少,相反巢蛋白阴性细胞,NSE和GFAP阳性细胞明显增多。结论： 胶质瘤U251细胞存在CD133⁺细胞,在CD133阳性和阴性细胞中,均存在干细胞样细胞,但是在CD133⁺细胞中此类细胞更多。     

胶质瘤细胞系U251中Nanog基因的研究

目的 Nanog作为全能性或多能性干细胞标志物,在胶质瘤细胞系中的研究甚少。本研究通过免疫组织化学来探讨Nanog基因在U251胶质瘤细胞系中的表达情况,以及全反式维甲酸(ATRA)对胶质瘤细胞系U251的诱导分化情况。方法采用免疫组织化学染色法从蛋白质水平检测U251胶质瘤细胞系Nanog的表达情况,以及应用化疗药物全反式维甲酸(ATRA)作用前以及作用后1、2、3d Nanog蛋白的表达情况。结果 ATRA作用前免疫组化结果显示大量细胞表达Nanog蛋白,主要位于胞浆内,胞核内有少量表达,少数细胞完全不表达;ATRA作用1、2、3d后的的细胞爬片结果显示有些许细胞变圆,少量的细胞漂浮于培养基内,Nanog蛋白的表达情况同ATRA作用前相比有了减少,并且随着作用时间的延长表达愈来越少。结论 Nanog基因在胶质瘤细胞系U251中表达,诱导分化剂ATRA能够降低Nanog的表达,并且随着作用时间的延长表达越来越少。     

沙培林对U251胶质瘤细胞凋亡及相关基因表达的研究

目的研究沙培林对脑胶质瘤细胞凋亡及相关基因表达的影响。方法20只BALB／C裸小鼠皮下接种U251脑胶质瘤成功后随机分成4组,分别瘤周注射生理盐水0．2ml,沙培林0．2KE、0．4KE、0．8KE,共8次,解瘤实验。用免疫组化法检测Bcl-2、p53（突变型）、Bax、Fas及Bcl—xs基因的表达。结果由对照组至治疗组,且随用药剂量增加,Bcl-2及p53（突变型）表达的阳性率逐渐下降,而Bax、Fas及Bcl—xs表达的阳性率则逐渐增加。结论沙培林局部应用治疗脑胶质瘤,通过对多种基因的调控,促进瘤细胞的凋亡、抑制肿瘤的生长。     

肿瘤坏死因子相关凋亡配体转染骨髓干细胞后对U251胶质瘤细胞的体外靶向抗瘤作用

目的 探究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）体外转染骨髓干细胞（BMSCs）后对U251脑胶质瘤细胞生长及凋亡的作用。方法 利用Transwells小室研究骨髓干细胞的肿瘤迁徙性。将携带TRAIL的质粒体外转染人骨髓干细胞,采用PCR及Western blot检测转染后BMSCs中目的基因的表达强度。将转染的BMSCs与U251细胞体外共培养,采用流式细胞仪检测转染后的BMSCs诱导U251细胞的凋亡情况。结果 BMSCs具备向肿瘤细胞的迁徙性。转染后的骨髓干细胞表达、分泌TRAIL,且干细胞凋亡情况无变化。将转染后的BMSCs与U251细胞共同培养,可明显提高U251细胞的凋亡率,BMSCs TRAIL+U251组U251细胞凋亡率明显高于对照组（P <0.05）。结论 在体外实验中,利用BMSCs肿瘤迁徙的特异性,将BMSCs作为基因载体,可提高TRAIL对U251胶质瘤细胞的靶向抑癌作用。     

CAPE对人神经胶质瘤细胞株U251凋亡作用研究

目的探讨咖啡酸苯乙酯（caffeic acid phenethyl ester,CAPE）在人神经胶质瘤凋亡中的作用。方法建立人神经胶质瘤细胞株模型,观察CAPE在体外神经胶质瘤凋亡的影响。运用流式细胞术检测CAPE对胶质瘤细胞株U251的作用。结果通过对细胞株模型的观察,发现CAPE可以促进神经胶质瘤细胞株的凋亡。结论 CAPE可以促进神经胶质瘤细胞株U251的凋亡,可能对神经胶质瘤的生长有抑制作用。     

番茄红素抑制人脑胶质瘤U251细胞生长的实验研究

目的探讨番茄红素对体外培养的人脑胶质瘤U251细胞增殖及诱导凋亡的作用。方法用CCK-8法检测不同浓度番茄红素作用于U251细胞24h、48h及72h后细胞的存活率;应用流式细胞术（FCM）检测细胞周期。结果番茄红素能抑制人脑胶质瘤U251细胞的生长,呈量-效及时-效关系（P〈0．01）;FCM检测表明,细胞主要被阻滞在G0／G1期;番茄红素诱导细胞凋亡率较对照组明显增加（P〈0．01）,具有浓度依赖性。结论番茄红素能抑制U251细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

Lentiviral-mediated siRNA against osteopotin in U251 glioma cell line

Background. It has been reported that the expression of SPP1, the mRNA for osteopontin （OPN）, is increased in anumber of transformed cell lines and some tumors. Increased serum and plasma OPN levels were associated with advanced-stage carcinomas of the lung, breast, colon and prostate. The extent of OPN expression may be correlated with the malignancy degree of gliomas, but the specific role of OPN in the malignancy of gliomas remains to be cla.rified, Methods： In this study, we used a lentiviral system, which could induce a long-lasting down-regulation of gene exprossion, to knock down the OPN gene in human glioma cell line U251. And then we observed the proliferation and apoptosis of glioma cells. Results： OPN mRNA and protein were successfully knocked down in U251 cells, and the expression of caspase-3 and caspase-9 were increased about by 2 folds in OPN down-regulated U251 cells. 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium （MTT） assay showed that OPN down-regulation did not affect the proliferation of U251 cells. Conclusion： Our findings indicate that OPN might play a role in apoptosis, but not in cell proliferation in U251 glioma cells.     

重组人ndrg2腺病毒对胶质瘤细胞U251抑制作用的研究

目的:研究抑癌候选基因NDRG2在体外对人脑胶质瘤细胞系U251增殖和凋亡的影响。方法:将人脑胶质瘤细胞系U251细胞分成空白对照组,重组人ndrg2腺病毒组和今又生(重组人P53腺病毒)组,重组人ndrg2腺病毒组和今又生组下设1.68×1011、8.4×1010、4.2×1010、2.1×1010、1.05×1010、5.25×109、5.25×108、5.25×107 v.p/ml组,各组分别作用96h后观察细胞形态学改变,甲基噻唑基四唑法(MTT法)绘制细胞生长抑制曲线。结果:重组人ndrg2腺病毒和今又生转染人胶质瘤细胞系U251后,细胞生长受到明显抑制,呈现明显的剂量-效应依赖曲线;重组人ndrg2腺病毒组对U251细胞的抑制率优于今又生组。结论:过表达NDRG2可明显抑制人胶质瘤细胞U251的增殖并导致细胞凋亡。     

HMGA1在由胶质母细胞瘤细胞株U251分得的胶质瘤干细胞中的表达

目的分析人类胶质母细胞瘤(glioblastoma multiforme,GBM)细胞株U251和由此分离的胶质瘤干细胞中HMGA1的差异性表达。方法用MACS柱从U251中分离出表达表面标志物CD133的胶质瘤干细胞(glioblas-toma stem cells,GSCs),并用免疫荧光技术和流式细胞分析法对其进行分析。用实时反转录酶-聚合酶链反应技术(real-time PCR,RT-PCR)和蛋白质印迹技术分别探测到两类细胞的HMGA1基因在转录和翻译水平上表达的不同。结果从U251中分离出GSCs,U251中的GSCs约为0.32%。在GSCs中,HMGA1在转录和翻译水平上分别为U251蛋白的(6.13±0.25)倍和(2.75±0.99)倍。结论相比于U251,HMGA1在GSCs是过度表达的。HMGA1的过度表达可能与体内肿瘤干细胞的恶性扩增、侵袭和分化密切相关。HMGA1基因可望成为胶质母细胞瘤的一种生物标记物和治疗的靶向目标。     

PTEN基因重组腺病毒载体对脑胶质瘤U251生长和凋亡的影响

目的探讨PTEN基因对人脑胶质瘤细胞株U251生长及凋亡的影响。方法携带PTEN基因的重组腺病毒载体转染U251细胞株,采用RT-PCR技术和Western blot方法检测Ad-PTEN-GFP组及Ad-GFP及Control组中PTEN mRNA及蛋白水平表达,用MTT及流式细胞仪检测各组细胞生长、周期及凋亡率等变化,Western blot检测细胞蛋白水平表达的变化。结果 Ad-PTEN-GFP转染U251细胞后,经荧光显微镜、PCR和Western blot证实转染成功。Ad-PTEN-GFP转染U251细胞后,细胞生长明显受抑制（P〈0.05）。Ad-PTEN-GFP转染组中p-Akt及P65蛋白水平下降,与Control组相比差异有统计学意义。结论 PTEN基因转染后能抑制人脑胶质瘤U251的生长,调控细胞周期,可能通过PTEN-Akt-NF-кB促进细胞凋亡。     

TJ905胶质瘤细胞系中脑肿瘤干细胞的培养、分离与鉴定

目的培养恶性胶质瘤TJ905细胞,并从中分离、培养和鉴定肿瘤干细胞,观察干细胞生长特征,为脑肿瘤干细胞的进一步研究奠定基础。方法将TJ905细胞置于含血清培养基中培养;将TJ905细胞置于含生长因子的无血清培养基中培养,待其形成悬浮生长的细胞球后用免疫磁珠分离获取CD133+细胞。用细胞免疫荧光染色对肿瘤干细胞及其分化细胞进行鉴定。结果在恶性胶质瘤细胞系TJ905中成功分离出肿瘤干细胞,培养于无血清培养液中,细胞呈球形、悬浮生长,具有很强的繁殖与自我更新能力;将该细胞置于含血清的培基中可分化;免疫荧光染色显示脑肿瘤干细胞中神经上皮干细胞蛋白(Nestin)表达阳性。结论培养的恶性胶质瘤细胞系TJ905中有脑肿瘤干细胞的存在,并且能在体外将其培养、分离及诱导分化,可为肿瘤干细胞的研究提供便利条件。     

福莫司汀对人脑胶质瘤细胞株U251细胞周期的影响

目的:观察福莫司汀(Fotemustine)对人脑胶质瘤细胞株U251细胞增殖的影响。方法:通过体外培养的人脑胶质瘤细胞株U251,用流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测福莫司汀诱导胶质瘤细胞凋亡及其增殖周期的分布;与对照组比较,并进行统计学处理。结果:Fotemustine诱导后,细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.05);诱导后细胞,G1期数量减少,而S期和G2期数量增多,与对照组比较差异有显著性(P<0.05)。结论:Fotemustine可诱导人脑胶质瘤细胞株U251的凋亡;诱导细胞增殖周期分布的变化,有助于S期、G2期的化疗药物作用的发挥。     

钩吻素子对神经胶质瘤细胞U251生长抑制及诱导凋亡作用

目的：探讨钩吻素子体外对神经胶质瘤细胞U251的生长抑制作用及诱导凋亡的作用.方法：利用MTT法和台盼蓝拒染法观察钩吻素子对神经胶质瘤细胞U251生长抑制作用.应用激光共聚焦、流式细胞仪、电子显微镜检测钩吻素子诱导U251细胞的凋亡作用.结果：MTT结果显示钩吻素子在（5-50mg/L）的浓度范围内对人神经胶质瘤U251细胞具有显著的抑制作用.生长曲线结果显示药物的各个浓度对U251的抑制作用呈时间依赖性.流式细胞仪可以观察到明显的＂亚G1期＂峰（凋亡峰）,且凋亡率达到22.4%.激光共聚焦显微镜可以观察到典型的凋亡核形,如核固缩和核碎裂等.透射电子显微镜下见到典型的早期凋亡形态学表现.结论：在一定的浓度范围内,钩吻素子可以抑制U251细胞的生长,并呈剂量和时间依赖效应.其抗肿瘤的特性与引起肿瘤细胞的凋亡有关.     

肺腺癌及肺鳞癌MRP-mRNA的表达及临床意义

目的：观察３０例肺癌组织及癌旁肺组织ＭＲＰ的表达。方法：ＲＴ－ＰＣＲ方法。结果：４３．３３％的肺癌组织表达ＭＲＰ,且ＭＲＰ的表达与细胞分化程度有关,低分化者ＭＲＰ的表达明显高于中高分化者（Ｐ〈０．０５）。腺癌的表达（６２．５％）高于鳞癌（２１．４３％,Ｐ＝０．０５８）,ＭＲＰ的表达与临床分期无关（Ｐ＝０．５１１）。结论：４３．３３％的肺癌组织表达ＭＲＰ,ＭＲＰ的表达可能与肺癌的耐药有关。