多种细胞自噬调节剂对自噬标记物LC3II及p62表达的影响

利用Western杂交检测自噬标记物LC3II和p62的表达是评价细胞自噬活性的常用方法。为了比较作用于不同靶点的细胞自噬调节剂对LC3II和p62表达的影响,分别利用以mTOR依赖或非依赖方式活化细胞自噬的雷帕霉素或海藻糖、抑制自噬起始的3-甲基腺嘌呤、抑制自噬小体与溶酶体融合的巴弗洛霉素A1以及抑制溶酶体酶活性的E64d和pepstatin A处理HEK293细胞,通过Western杂交检测LC3II和p62的表达。结果显示,雷帕霉素增强LC3I向LC3II转化,促进p62降解,而海藻糖仅引起LC3II表达的上调;阻断细胞自噬过程各个阶段均导致LC3II和p62堆积,并呈现出剂量和时间依赖性。这些结果提示尽管LC3II和p62均为自噬标记物,但不同的调节剂对其表达的调控存在差异。     

G9a在L-NAME诱导胎盘滋养细胞自噬中的作用

目的探讨组蛋白甲基转移酶G9a在胎盘滋养细胞自噬中的作用。方法体外培养人胎盘滋养细胞,加入100μmol/L N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)干预48 h后,Western blot检测自噬相关蛋白LC3II/I,p62以及G9a的蛋白表达,感染自噬流双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3双标腺病毒)观察自噬流的改变,了解L-NAME对滋养细胞自噬的影响及G9a的表达改变;在细胞中转染G9a过表达腺病毒及干扰质粒,Western blot和qRT-PCR对G9a自身表达进行验证,同时给予100μmol/L L-NAME后,Western blot检测自噬相关蛋白LC3II/I和p62的蛋白表达,阐明G9a在L-NAME介导的滋养细胞自噬中的作用。结果与对照组比较,L-NAME组LC3II/I增加1.4倍,p62表达降低40%,G9a表达降低38%,差异均有统计学意义(P0.05);且观察到滋养细胞内自噬体及自噬溶酶体均增多,自噬增强。过表达G9a后自噬相关蛋白LC3II/I表达降低降22%,p62表达升高2.12倍,差异有统计学意义(P0.05);干扰G9a后,p62表达降低62%,差异有统计学意义(P0.05)。结论 G9a可抑制L-NAME诱导的胎盘滋养细胞自噬的发生。     

溶酶体膜蛋白Sidt2缺失导致肝脏细胞自噬受损

目的 研究溶酶体膜蛋白Sidt2缺失后对肝脏自噬的影响。方法 利用Crispr-Cas9技术构建Sidt2敲除的人肝脏（HL7702）细胞模型,对自噬关键蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、P62及自噬相关蛋白Atg5、Atg7、Atg12进行蛋白水平检测,同时使用免疫荧光方法对LC3B及P62进行共定位,检测自噬小体对P62货物蛋白的识别与封存以及自噬溶酶体的降解。对LC3B及LAMP1进行免疫荧光共定位,检测自噬小体与溶酶体融合过程。使用LysoTracker对酸性溶酶体进行示踪。结果 成功构建HL7702细胞Sidt2+/+组 及Sidt2-/-组,HL7702细胞Sidt2-/-组较Sidt2+/+组相比,自噬关键蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ及P62表达均增多（P<0.01）,免疫荧光结果显示LC3B及P62亦明显增多（P<0.001）,同时自噬相关蛋白Atg5、Atg7、Atg12表达减少（P<0.05）。LC3B与P62共定位降低,LC3B 与LAMP1共定位降低,酸性溶酶体数量减少（P<0.05）。结论 Sidt2基因的缺失导致人肝脏细胞自噬小体对P62货物蛋白的识别和封存障碍,同时酸性溶酶体数量减少、自噬小体与溶酶体融合障碍导致自噬溶酶体途径受阻,最终导致LC3B与P62发生堆积,肝脏细胞自噬受损。     

慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织自噬相关蛋白的变化

目的研究在慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺)大鼠肺组织中自噬相关蛋白的变化。方法单纯烟熏法构建慢阻肺大鼠动物模型,采用Real time PCR,Western blot技术检测检测大鼠肺组织中PI3K、AKT、p-AKT、m TOR、p-m TOR及自噬相关基因LC3Ⅱ/Ⅰ、Atg5、Beclin1、P62、Atg7、Atg12的mRNA及蛋白表达,探讨在慢阻肺大鼠肺组织中自噬水平及自噬相关蛋白的变化。用LC3B免疫组化比较COPD组与正常大鼠间自噬水平的变化。结果 Real time PCR分析结果显示,与正常组相比,慢阻肺组大鼠肺组织中自噬相关基因Beclin1、Atg5、Atg12的mRNA表达显著增高(P0.05,其中Beclin1、Atg5两组比较P0.01)。Atg7的mRNA表达在慢阻肺组与正常组之间差异无统计学意义(P0.05)。Western blot分析结果显示,慢阻肺组大鼠肺组织中PI3K蛋白、p-AKT/AKT及p-m TOR/m TOR蛋白表达显著降低(P0.05)。自噬相关基因LC3Ⅱ/Ⅰ、Atg5、Beclin1蛋白表达增高(P0.05,其中LC3Ⅱ/Ⅰ、Atg5两组比较P0.01)。P62蛋白表达显著下降(P0.01)。LC3B免疫组化显示,慢阻肺组LC3B表达高于正常组。结论烟熏12周的慢阻肺大鼠与正常组相比,自噬通路上游蛋白PI3K、p-AKT/AKT、p-m TOR/m TOR的表达降低,自噬蛋白表达增加,自噬水平增加。     

miR-30a对脂多糖诱导人脐静脉血管内皮细胞自噬的影响

目的探究miR-30a对脂多糖（LPS）诱导人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）自噬的影响及其可能机制。方法以HUVEC为研究对象,分为空白对照组（Control组）、模型组（LPS组）、阴性对照组（转染miR-30a-NC,NC组）和过表达组（转染miR-30a-mimics,mimics组）,采用LPS诱导HUVEC建立炎症模型;采用CCK-8法检测细胞存活率;qRT-PCR法检测miR-30a相对表达量;Westernblot法检测自噬相关蛋白自噬相关基因（Atg3）、p62、自噬蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC3）-II和LC3-I表达水平;激光共聚焦显微镜法观察自噬小体形成变化。结果LPS组细胞存活率明显低于Control组,miR-30a相对表达量明显低于Control组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。与Control组比较,LPS组细胞p62蛋白表达水平降低,Atg3蛋白表达水平升高,LC3-II/LC3-I比值升高,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。转染miR-30a后,与LPS组比较,mimics组细胞存活率明显升高,miR-30a相对表达量明显上升,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。与LPS组比较,mimics组细胞p62表达水平升高,LC3-II/LC3-I比值和Atg3表达水平降低,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。与LPS组比较,mimics组细胞胞质内自噬小体显著减少。结论miR-30a能通过抑制自噬减轻LPS诱导HUVEC损伤。     

黄芩苷对脂多糖诱导的大鼠滑膜RSC-364细胞自噬的抑制作用

目的：探讨黄芩苷通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素（PI3k/Akt/mTOR）信号通路对脂多糖（LPS）诱导的大鼠滑膜RSC-364细胞自噬的影响,并阐明其作用机制。方法：将对数生长期大鼠滑膜RSC-364细胞分为对照组、模型组、地塞米松（DXMS）组、10 μmol·L^-1黄芩苷组、20 μmol·L^-1黄芩苷组和40 μmol·L^-1黄芩苷组。对照组RSC-364细胞只加入培养基,其他各组RSC-364细胞均采用1 mg·L^-1LPS体外刺激12 h制作炎症细胞模型。采用MTT法检测各组RSC-364细胞存活率,RT-PCR法检测各组RSC-364细胞中PI3k、Akt、mTOR、Beclin1和微管相关蛋白-轻链3-Ⅱ（LC3-Ⅱ） mRNA表达水平,Western blotting法检测各组RSC-364细胞中Beclin1、Atg5、Atg7、Atg12、LC3-Ⅱ和P62蛋白表达水平。结果：与对照组比较,模型组RSC-364细胞存活率明显升高（P<0.01）,模型组RSC-364细胞中PI3k、Akt、mTOR mRNA和P62蛋白表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）,Atg5、Atg7、Atg12、LC3-Ⅱ、Beclin1 mRNA及蛋白表达水平明显升高（P<0.01）;与模型组比较,不同浓度黄芩苷组RSC-364细胞存活率明显降低（P<0.05或P<0.01）,RSC-364细胞中PI3k、Akt、mTOR mRNA和P62蛋白表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）,Atg5、Atg7、Atg12、LC3-Ⅱ、Beclin1 mRNA和蛋白表达水平降低（P<0.05或P<0.01）。结论：黄芩苷可能通过激活PI3k/Akt/mTOR信号通路抑制LPS诱导的RSC-364细胞自噬。     

PI3K/AKT/mTOR信号通路异常激活导致强直性脊柱炎患者的间充质干细胞自噬减弱

目的 比较强直性脊柱炎患者间充质干细胞（ASMSCs）与健康人间充质干细胞（HDMSCs）自噬水平的差异及其机制。 方法 将ASMSCs和HDMSCs种于6孔板,细胞贴壁后,实验组加入25 ng/mL α-肿瘤坏死因子（TNF-α）及培养液,对照组单纯加入培养液,诱导6 h后进行后续实验。用GFP-LC3B免疫荧光染色检测自噬情况,并通过检测LC3 II/LC3 I及P62的蛋白表达进一步确认。通过qRT-PCR检测基因表达水平,通过Western blot检测蛋白表达水平。使用TG100713特异性阻断PI3K的磷酸化以明确PI3K/AKT/mTOR通路与ASMSCs自噬减弱的关系。 结果 ASMSCs的LC3 II/LC3 I表达水平和GFP-LC3B免疫荧光斑点明显弱于HDMSCs（P<0.05）,而P62表达水平明显高于HDMSCs（P<0.05）。在自噬过程中,ASMSCs中p-PI3K/PI3K、pAKT/AKT和p-mTOR/mTOR的表达明显高于HDMSCs（P<0.05）。阻断PI3K磷酸化后,p-AKT/AKT和p-mTOR/mTOR的表达及ASMSCs的自噬可恢复至HDMSCs的水平。结论 TNF-α诱导下,PI3K/AKT/mTOR信号通路异常是导致ASMSCs自噬减弱的关键,可能参与AS慢性炎症的发生。     

小鼠骨髓间充质干细胞自噬与衰老的关系

目的 探讨小鼠骨髓间充质干细胞（BM-MSCs）自噬与衰老的关系。方法 通过体外分离培 养年轻组小鼠（8 周龄）和老年组小鼠（18 个月龄）BM-MSCs,流式细胞术检测细胞表型,TUNEL 染色检 测细胞凋亡,ELISA 试剂盒检测BM-MSCs 分泌蛋白VEGF、bFGF、IGF-1、HGF 的表达,Western blot 检 测自噬相关蛋白LC3- Ⅰ、LC3- Ⅱ、Beclin 1、ATG12-5、p62 及信号通路蛋白p-Akt、Akt、p-mTOR、 mTOR 的表达。结果 与年轻组比较,老年组BM-MSCs 凋亡增加（P <0.05）,分泌功能下降（P <0.05）,自 噬相关蛋白LC3- Ⅰ、LC3- Ⅱ、Beclin 1、ATG12-5 表达水平下降（P <0.05）,相反p62 蛋白表达水平升高 （P <0.05）,自噬信号通路相关蛋白p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR 表达升高。结论 老年小鼠BM-MSCs 凋亡增加,自噬活性及旁分泌功能下降。     

脑缺血再灌注不同时间对大鼠海马神经元自噬及PI3K/mTOR通路的影响

目的：探讨脑缺血再灌注不同时间对大鼠海马神经元自噬及PI3K/mTOR通路的影响。方法：72只大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注组（分别再灌0、6、12、24、36 h）,每组12只。采用四血管阻断法建立大鼠全脑缺血再灌注损伤模型。神经功能缺损评分评价大鼠海马神经功能,HE染色检测大鼠海马神经细胞损伤,透射电镜下观察海马神经元内自噬小体,Western blot检测Beclin-1、LC3 II、p62、p-PI3K、p-Akt及p-mTOR蛋白表达。结果：与假手术组比,随着脑缺血再灌注的时间延长,脑缺血再灌注大鼠神经功能缺损评分、脑梗死面积、自噬小体数量均增加（均P＜0.05）;随着脑缺血再灌注的时间延长,大鼠海马组织自噬相关蛋白Beclin-1和LC3 II表达显著上调、p62表达下调（P＜0.05）;PI3K/mTOR通路相关蛋白p-PI3K、p-Akt、p-mTOR表达显著下调（P＜0.05）。结论：脑缺血再灌注可增强大鼠海马神经元自噬,抑制PI3K/mTOR信号通路。     

银杏内酯K调节AMPK/mTOR/ULK1信号通路对乳腺癌细胞自噬和凋亡的影响

目的 探讨银杏内酯K（GK）调节AMPK/mTOR/ULK1信号通路对乳腺癌细胞自噬和凋亡的影响。方法 取对数生长期的MCF-7细胞,设置分组为对照组、GK低浓度（GK-L,12.5 μg/mL）组、GK中浓度（GK-M,25 μg/mL）组、GK高浓度（GK-H,50 μg/mL）组、GK-H+AMPK抑制剂（Compound C,50 μg/mL GK+50 μmol/L Compound C）组。观察各组细胞形态以及细胞增殖、凋亡、自噬状况并分析自噬相关基因LC3、P62、Beclin1 mRNA表达以及AMPK、p-mTOR、mTOR、p-ULK1、ULK1、LC3、P62、Beclin1表达。结果 与对照组相比,GK-L、GK-M、GK-H组细胞自噬泡数量增多,增殖率、p-mTOR/mTOR、p-ULK1/ULK1、p62表达显著下降,凋亡率、LC3、Beclin1表达、AMPK蛋白表达显著增加（P＜0.05）;与GK-H组相比,GK-H+Compound C组细胞自噬泡数量减少,增殖率、p-mTOR/mTOR、p-ULK1/ULK1、p62显著增加,凋亡率、LC3、Beclin1表达、AMPK蛋白表达显著降低（P＜0.05）。结论 GK可以诱导乳腺癌细胞自噬和凋亡、抑制其增殖,可能与激活AMPK/mTOR/ULK1信号通路有关     

肺炎支原体肺炎患儿外周血白细胞自噬相关蛋白表达及临床意义

目的 探讨肺炎支原体肺炎（MPP）患儿外周血白细胞自噬相关蛋白抗微管相关蛋白1轻链3（LC3）、Beclin1的表达及临床意义。方法 采用前瞻性研究方法,收集2019年1月～2020年5月山西省人民医院住院的轻症、重症肺炎支原体肺炎患儿血液标本及正常门诊体检儿童外周血,分离白细胞,采用Western Blot检测白细胞中LC3II、LC3I、Beclin-1的表达量,计算LC3II/I比例;ELISA法检测血清白细胞介素-6 （IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）含量;比较上述指标在3组儿童血清中的表达量,并分析自噬和细胞因子之间的相关性。 结果 ①共纳入MPP组50例,其中轻症28例,重症22例;对照组（正常体检儿童）25例。②MPP轻症组、重症组外周血白细胞中自噬相关蛋白LC3II/I比例及Beclin1表达量高于对照组,MPP重症组高于轻症组,差异有统计学意义(P＜0.05)。③MPP轻症组、重症组IL-6、TNF-α水平高于对照组,MPP重症组IL-6、TNF-α水平高于轻症组,差异有统计学意义(P＜0.05)。④自噬相关蛋白LC3II/I比例、 Beclin1表达量与IL-6、TNF-α均成正相关(P＜0.05)。结论 MPP中发生了自噬,自噬和病情程度有关,病情越重,自噬程度越高。MPP中细胞因子水平增高,炎症反应明显。自噬和细胞因子呈正相关,提示MPP发生自噬影响细胞因子改变,从而影响疾病严重程度。     

PPAR-γ调控的自噬通路在染料木黄酮抑制肝星状细胞激活过程中的作用

目的探讨染料木黄酮在体外抑制肝星状细胞（HSC）活化的效应以及PPAR-γ调控的自噬通路在其中发挥的作用。方法 将体外培养的HSC细胞分别给予不同浓度的染料木黄酮作用48 h后,用Western blot法测定HSC激活标志蛋白α-SMA、α1（I） collagen的表达以及自噬相关蛋白LC3Ⅱ\p62和PPAR-γ的表达;利用自噬抑制剂和PPAR-γ抑制剂验证自噬在染料木黄酮抑制 HSC激活过程中的作用以及PPAR-γ对自噬的调控作用。结果染料木黄酮作用于HSC细胞后,HSC活化标志蛋白α-SMA、α1 （I）collagen的水平明显降低（P<0.05）,而自噬相关蛋白LC3Ⅱ的表达明显升高、泛素结合蛋白p62水平明显降低,同时PPAR-γ 表达明显增加（P<0.05）;与单纯染料木黄酮刺激组相比,用3-MA处理后HSC活化标志蛋白α-SMA、α1（I）collagen的表达明显 升高;并且加入PPAR-γ抑制剂后,自噬相关蛋白LC3Ⅱ的表达明显降低、泛素结合蛋白p62 水平明显增加（P<0.05）。结论 PPAR-γ调控的自噬通路在染料木黄酮抑制HSC细胞激活的过程中发挥着重要作用。     

自噬相关蛋白Beclin1、LC3-Ⅱ、Atg5在前列腺腺癌组织中的表达及意义

目的探讨自噬相关蛋白Beclin1、LC3-Ⅱ、Atg5在前列腺腺癌（PCa）中的表达情况及其临床意义。方法收集60例PCa标本（观察组）和15例良性前列腺增生（BPH）标本15例（对照组）。应用免疫组化法检测PCa组织和BPH组织中Beclin1、LC3-Ⅱ、Atg5的表达情况,比较两组间的差异;分析PCa组织中Beclin1、LC3-Ⅱ、Atg5蛋白的表达情况与PCa的Gleason评分、血清PSA水平、淋巴结转移、骨转移等临床参数之间的关系。结果PCa组织中Beclin1、LC3-Ⅱ阳性表达率（38.3%、33.3%）明显低于BPH组织（60.0%、53.3%）,而PCa组织中Atg5阳性表达率（83.3%）显著高于BPH组织（6.7%）,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。Beclin1与LC3-Ⅱ的表达呈正相关,两者与Gleason评分、血清PSA水平、淋巴结转移、骨转移有关（均P＜0.05）,而与年龄无关（P＞0.05）。Atg5的表达与年龄、Gleason评分、血清PSA水平、淋巴结转移、骨转移均无关（均P＞0.05）。结论自噬相关蛋白Beclin1、LC3-Ⅱ、Atg5在PCa中的异常表达,提示自噬活动增强和自噬体形成增多在PCa发展过程中起着重要作用。     

脂多糖通过p38/MAPK通路对巨噬细胞自噬的调控作用

摘 要:【目的】 观察脂多糖(LPS)对巨噬细胞自噬的影响及p38/MAPK通路在其中的作用?【方法】 体外培养巨噬细胞株RAW264.7,分为对照组?饥饿状态激活自噬组?单纯LPS刺激组?LPS+P38抑制剂(SB203582)组和LPS+mTOR抑制剂(rapamycin)组?将前期构建的载体pcDNA3.1-GFP-LC3,转染RAW264.7,通过荧光显微镜观察各组细胞中自噬体形成情况?qRT-PCR方法检测各组中与细胞自噬相关的基因Atg5,Atg7,LC3-Ⅱ和Bnip3 mRNA表达水平的改变?利用Western blotting检测LC3-Ⅱ?p-P38?P38蛋白在各组中的表达情况,以评价LPS激活巨噬细胞自噬过程中p38/MAPK通路的作用?【结果】 在荧光显微镜下可以观察到自噬在饥饿状态组?LPS+SB203582组和LPS+rapamycin组有明显增强;qRT-PCR检测到自噬相关基因Atg5,Atg7,LC3-Ⅱ,和Bnip3 mRNA的表达在饥饿状态组?LPS+SB203582组和LPS+rapamycin组有明显增强;Western blotting 检测发现p-P38在饥饿状态组?LPS组和LPS+rapamycin组中表达明显升高; LC3-Ⅱ的表达在饥饿状态组?LPS+SB203582组和LPS+rapamycin组中表达要高于对照组和LPS组?【结论】 LPS参与巨噬细胞自噬的调控,除经典mTOR通路之外,p38/MAPK通路是其抑制通路之一?     

脂肪乳剂通过激活自噬流解救布比卡因心肌毒性

目的：探讨自噬在脂肪乳剂解救布比卡因心肌毒性中的作用。方法：取对数生长期的H9C2心肌细胞随机分成空白溶剂组（DMSO组）、布比卡因组（Bup组）、脂肪乳剂组（Lip组）、脂肪乳剂联用布比卡因组（BLp组）,相应药物处理24 h后,CCK8检测细胞增殖抑制率,光镜下观察细胞形态,电镜下观察细胞自噬现象,激光共聚焦显微镜下监测自噬流情况,Western blot和RT-PCR检测LC3II/I、p62蛋白和mRNA表达水平。结果：与DMSO组相比较,Bup组心肌细胞增殖抑制率明显升高（P ＜0.05）,光镜下可见细胞大量死亡皱缩,形态不规则,胞核不清,电镜下见自噬体大量堆积,激光共聚焦显微镜下见自噬流被抑制,LC3II/I、p62蛋白和mRNA表达水平均显著升高（P ＜0.05）。与Bup组相比较,BLp组与Lip组心肌细胞增殖抑制率显著下降（P ＜0.05）;光镜下心肌死亡细胞减少,细胞界限清楚,胞浆清晰,胞核清楚;电镜下自噬体减少;自噬流加快自噬体清除;LC3II/I、p62 蛋白和mRNA表达水平均显著下降（P ＜0.05）。结论：脂肪乳剂可通过激活自噬流来加快自噬体的清除从而解救布比卡因所致心肌毒性。     

芹菜素通过AMPK/mTOR通路调控肺癌A549细胞自噬

目的 探讨芹菜素（APG）对肺癌A549细胞增殖及自噬的影响及其与AMPK/mTOR通路的关系。方法 体外培养肺癌A549细胞,采用CCK-8法检测不同浓度芹菜素处理A549细胞不同时间后对细胞增殖的影响。后续实验分为空白对照组(0 μmol/L APG),低、中、高浓度实验组和抑制剂组5组,采用MDC染色法检测各组对细胞自噬的影响,免疫印迹法检测自噬相关蛋白以及AMPK/mTOR通路相关蛋白表达情况。结果 芹菜素可显著抑制A549细胞增殖,且呈浓度依赖性（P<0.05）;20、40、80 μmol/L芹菜素组随作用时间延长,对A549细胞的增殖抑制率逐渐增加,呈时间依赖关系（P<0.05）。与空白对照组比较,实验组A549细胞中含高亮点状荧光的自噬小泡数量及IOD值逐渐增加（P<0.05）,芹菜素可浓度依赖性上调LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p-AMPKα蛋白表达水平及p-AMPKα/AMPKα比值（P<0.05）,下调p-mTOR、p62蛋白表达水平及p-mTOR/mTOR比值（P<0.05）。与高浓度实验组比较,抑制剂组细胞中含高亮点状荧光的自噬小泡减少,IOD值下降,LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p-AMPKα蛋白表达水平及p-AMPKα/AMPKα比值降低,而P62、p-mTOR蛋白表达水平及p-mTOR/mTOR比值升高（P<0.05）。结论 芹菜素能抑制肺癌A549细胞增殖,诱导其自噬,作用机制可能与AMPK/mTOR通路有关     

PARP-1介导的自噬流受阻在大鼠心肌细胞缺血再灌注损伤中的作用

目的探讨PARP-1介导的自噬流受阻在大鼠心肌缺血再灌注损伤（MIRI）中的作用。方法采用大鼠心肌细胞H9c2制备 缺血再灌注细胞模型。实验分为对照组、缺氧/复氧处理模型组、PARP-1抑制剂组、PARP-1抑制剂+模型组（PJ34+H/R组）。取 各组处理后的6孔板H9c2细胞提取总蛋白后Western blot分别检测PARP-1活性蛋白pADPr,凋亡相关蛋白Bax,细胞DNA损 伤标记蛋白p-γH2ax的表达,细胞自噬流相关蛋白：LC3BII/LC3I、Beclin-1、P62的表达量。通过GraphPad Prism 6 统计软件对 数据进行分析,比较各组间差异。结果与对照组比较,MIRI模型组PARP-1活性标记物pADPr表达更高表示PARP-1激活增 多,细胞凋亡损伤增加,DNA损伤（p-γH2ax）也增多（P<0.05）。LC3B II、beclin-1表达增高,同时p62表达也增高（P<0.05）,表示自 噬流受阻。与模型组比较,加入PARP-1抑制剂后（H/R+PJ34组）可明显抑制心肌细胞内PARP-1活性（pADPr）,细胞凋亡减少, 细胞DNA损伤也减轻（P<0.05）;自噬相关蛋白LC3B II、beclin-1表达无明显变化,而p62表达降低（P<0.05）,表明自噬流受阻情 况得到缓解（P<0.05）。结论PARP-1激活介导的自噬流受阻在大鼠MIRI中发挥着作用,通过抑制PARP-1活性后可明显逆转 自噬流受阻情况,减轻MIRI。     

microRNA-103通过调节自噬参与调控妊娠期糖尿病机制的临床研究

目的：研究microRNA-103通过调节自噬参与调控妊娠期糖尿病的作用机制。方法：选取2020年8月-2021年8月在莆田学院附属医院住院分娩的30例妊娠期糖尿病孕妇纳入研究组;另选取同时期住院分娩的30例健康孕妇纳入对照组。两组均于产妇分娩后立刻收集胎盘组织,运用实时荧光定量聚合酶链式反应法测定microRNA-103表达水平,运用蛋白质印迹法检测胎盘组织微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)、自噬相关蛋白5(Atg5)蛋白表达水平,运用电镜检测组织自噬小体。比较研究组与对照组胎盘组织microRNA-103、LC3-Ⅱ与Atg5蛋白的表达水平及自噬小体数量,运用Pearson相关性分析法分析观察组LC3-Ⅱ蛋白、Atg5蛋白与microRNA-103的相关性。结果：研究组胎盘组织microRNA-103、LC3-Ⅱ与Atg5蛋白的表达水平均高于对照组(P<0.05)。研究组胎盘组织中的自噬小体数量多于对照组(P<0.05)。LC3-Ⅱ蛋白、Atg5蛋白与microRNA-103均呈正相关(P<0.05)。结论：microRNA-103在妊娠期糖尿病胎盘组织中的表达...     

抗菌肽LL-37对结肠癌小鼠肿瘤生长的抑制作用及其机制

目的：探讨抗菌肽LL-37对结肠癌小鼠肿瘤生长和细胞凋亡的影响,阐明其抗肿瘤作用的可能分子机制。方法：构建LL-37过表达结肠癌HT-29细胞,采用qRT-PCR和Western blotting法检测HT-29细胞中LL-37 mRNA和蛋白表达水平。30只BALB/c小鼠随机分为对照组（给予未经感染的HT-29细胞）、空载组（给予感染空载质粒的HT-29细胞）、LL-37过表达组（给予感染LL-37过表达载体的HT-29细胞）、AMPK抑制剂组[给予感染空载体的HT-29细胞后,立刻尾静脉注射2 mg·kg^-1（Dorsomorphin,Dor）]和联合组（给予感染LL-37过表达载体的HT-29细胞后,立刻尾静脉注射2 mg·kg^-1 Dor）,每组6只。采用结肠癌HT-29细胞复制结肠癌小鼠模型,观察各组小鼠肿瘤体积并绘制生长曲线,感染24 d后剥离肿瘤测量质量并计算抑瘤率,TUNEL染色检测各组小鼠肿瘤细胞凋亡情况,Western blotting法检测各组小鼠肿瘤组织中自噬相关蛋白Beclin1、Atg5、LC3Ⅰ和LC3Ⅱ及AMPK/mTOR通路相关蛋白AMPK、p-AMPK、mTOR及p-mTOR表达水平。结果：与对照组和空载组比较,LL-37过表达组小鼠结肠癌HT-29细胞中LL-37 mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,肿瘤质量和体积明显降低（P<0.05）,抑瘤率升高（P<0.05）,肿瘤细胞凋亡数减少,肿瘤组织中自噬相关蛋白Beclin1和Atg5表达水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值及p-AMPK/AMPK比值均明显升高（P<0.05）,p-mTOR/mTOR比值明显降低（P<0.05）;与空载组比较,AMPK抑制剂组小鼠肿瘤质量和体积明显升高（P<0.05）、抑瘤率降低（P<0.05）,肿瘤细胞凋亡数减少,自噬相关蛋白Beclin1和Atg5表达水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值及p-AMPK/AMPK比值明显降低（P<0.05）,p-mTOR/mTOR比值明显升高（P<0.05）;与LL-37过表达组比较,联合组小鼠肿瘤组织中Beclin1和Atg5表达水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值及p-AMPK/AMPK比值明显降低（P<0.05或P<0.01）,p-mTOR/mTOR比值明显升高（P<0.01）。结论：抗菌肽LL-37能激活AMPK/mTOR信号通路促进细胞自噬,进而抑制结肠癌HT-29荷瘤小鼠的肿瘤生长。     

自噬在脂多糖诱导成牙本质细胞凋亡中的作用

目的 探讨自噬在脂多糖（LPS）诱导成牙本质细胞（mDPC-23）凋亡中的作用。方法 将5 μg/mL脂多糖作用于成牙本质细胞0、6、12、24 h后,CCK8检测细胞活力,TUNEL染色检测细胞凋亡。5 μg/mL脂多糖作用细胞24 h后,用Western blot检测自噬标志蛋白LC3、Beclin1和Atg5以及自噬相关通路AKT、p-AKT、mTOR和p-mTOR的表达水平。以脂多糖（5 μg/mL）和脂多糖（5 μg/mL）+3-甲基腺嘌呤（3-MA,5 mmol/L）为实验组,不加脂多糖或3-MA为空白对照组,作用细胞24 h后,Western blot检测凋亡蛋白Caspase 3和Bax的表达水平。结果 脂多糖作用mDPC-23细胞6、12 h,细胞增殖能力和凋亡无明显变化;作用24 h后,其增殖能力较对照组显著降低（P<0.05）,凋亡水平较作用0 h明显增加（P<0.05）。且脂多糖作用mDPC-23细胞24 h后,自噬标志蛋白LC3、Beclin1和Atg5表达较对照组均明显增加（P<0.05）,通路相关蛋白p-AKT和p-mTOR较对照组表达下降（P<0.05）。脂多糖组凋亡蛋白Caspase 3和Bax显著高于对照组（P<0.05）;脂多糖+3-MA组中凋亡蛋白明显低于脂多糖组（P<0.05）。结论 脂多糖可通过诱导mDPC-23自噬发生以促进细胞凋亡;而抑制自噬,可减弱脂多糖的促凋亡作用,提示在炎性牙髓组织损伤中,自噬发挥重要作用。