小鼠B淋巴瘤A20细胞株mCD99L2基因表达检测及真核表达载体构建

目的 检测及克隆小鼠B淋巴瘤A20细胞株mCD99L2基因,构建真核表达载体。方法 设计寡核苷酸探针。应用原位分子杂交方法检测A20细胞中mCD99L2基因的mRNA表达,RT-PCR法从A20细胞总RNA中获取mCD99L2基因含编码区全长cDNA,克隆入T载体,筛选阳性克隆、酶切鉴定并经序列测定;设计含酶切位点的PCR引物,PCR获取含mCD99L2基因编码区片段,用限制性内切酶EcoRI和Xho I双酶切取所需目的片段．利用分子克隆技术与pcDNA3．1／MycHisC（＋）质粒重组,对产生的重组子进行PCR、双酶切鉴定,并经过测序证实。结果 原位杂交方法检测A20细胞中mCD99L2基因mRNA呈阳性表达;RT-PCR法成功获得mCD99L2基因编码区全长cDNA序列,DNA序列测序结果与GenBank提供的已知序列（NM—138309）比较,结果完全一致;重组质粒pcDNA3．1．mCD99L2中的插入片段经DNA测序后与GenBank中mD99L2基因相应序列比较,100％同源。结论 小鼠B淋巴瘤A20细胞株存在mCD99L2基因,采用RT-PCR和T．A技术克隆了A20细胞的mCD99L2基因,成功构建了pcDNA3．1．mCD99L2真核表达载体,为下一步探索mCD99L2基因在小鼠B淋巴瘤A20细胞株中的功能奠定了实验基础。     

人源间变性大细胞淋巴瘤BALB/c小鼠建模的免疫学机制

目的 建立人源间变性大细胞淋巴瘤（ALCL） BALB/c小鼠模型,探讨成瘤的免疫学机制.方法 BALB/c小鼠环磷酰胺（CTX）预处理,Karpas-299细胞右腋下注射;流式细胞术检测各组小鼠外周血淋巴细胞亚群比例.结果 ①成功建立人源间变性大细胞淋巴瘤BALB/c小鼠模型.②成瘤组与CTX组相比,CD3＋、CD8＋和CD19＋细胞减少（P＜0.05）;未成瘤组与CTX组相比,CD8＋、CD19＋细胞减少,CD20＋细胞增多（P＜0.05）;成瘤组CD3＋、CD8＋细胞较CTX组和未成瘤组均减少（P＜0.05）;未成瘤组CD20＋细胞较CTX组和成瘤组均增多（P＜0.05）.③注射CTX第3天,BALB/c小鼠CD3＋细胞增多,CD19＋细胞减少（P＜0.05）;第10天CD8＋、CD19＋、CD20＋细胞较注射CTX前减少（P＜0.05）;第17天和第24天,CD8＋、CD19＋、CD20＋细胞仍低于注射CTX前（P＜0.05）,但较第10天有逐渐回升趋势（P＞0.05）.结论 CTX所致机体免疫抑制在ALCL成瘤起始阶段起决定性作用,ALCL的生长可能与CD3＋、CD8＋细胞减少有关.     

B细胞淋巴瘤Fab噬菌体抗体库的构建

目的构建B细胞淋巴瘤Fab噬菌体抗体库。方法从人B细胞淋巴瘤细胞系Raji细胞免疫的BALB/c小鼠脾细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增免疫球蛋白轻链κ基因及重链Fd片段,然后经酶切、纯化、连接等步骤将轻链κ基因和重链Fd片段依次克隆入噬菌体载体pComb3H-SS中,并电转化大肠杆菌XL1-Blue。结果构建了抗人B细胞淋巴瘤Fab噬菌体抗体库,轻链κ基因、重链Fd片段与载体的重组率分别为100%和78%,库容量为2.18×107。结论成功构建了抗人B细胞淋巴瘤Fab噬菌体抗体库,方便进一步筛选抗人B细胞淋巴瘤抗体。     

原发性胃弥漫大B细胞淋巴瘤1例

笔者报告收治的原发性胃弥漫大B细胞淋巴瘤（primarygastric diffuse large B-cell lymphoma,PG-DLBCL）1例。患者女,44岁。临床上有消化不良、恶心和呕吐,无B症状（盗汗,不明原因发热,体温〉38℃且持续时间超过3d,     

脾脏原发惰性小B细胞淋巴瘤2例

脾脏是机体最大的免疫器官,是淋巴造血组织肿瘤尤其是淋巴瘤最常累及的部位之一。脾脏的淋巴瘤可以是原发和继发,多见的是继发性淋巴瘤,原发于脾脏的淋巴瘤较少见,现将2例脾脏原发惰性小B细胞淋巴瘤报告如下。     

急性B淋巴细胞白血病动物模型的建立

目的:建立急性B淋巴细胞系白血病动物模型,为药物进行体内靶向杀伤研究奠定基础.方法:裸鼠用环磷酰胺预处理后,尾静脉 注射5×106个Nalm-6细胞,观察小鼠症状,记录发病时间,取其各个组织做病理检 查,了解肿瘤细胞浸润情况.结果:小鼠注射肿瘤细胞(19.4±0.55)d后出 现严重消瘦、脊柱侧弯和弓背症状,平均死亡时间(24.75±0.87)d;病理切片观察到小鼠骨 髓、肝、脾、肾、脑膜、脑实质、卵巢、肺都有肿瘤细胞浸润,部分肝脾组织出现坏死.结论:采用裸鼠成功建立了急性B淋巴细胞系白血病的动物模型,为靶向治疗 白血病研究奠定了基础.     

B细胞淋巴瘤致多发肠内瘘一例

1 病例简介 患者,男,56岁,因"反复腹泻、腹痛8个月,加重2 d"入院.患者于8个月前无明显诱因出现腹泻,2~4次/d,有时成形、有时不成形,色黄,伴少量黏液.腹痛以脐周及下腹部明显,呈阵发性隐痛;2个月前症状加重,腹泻次数增多,4~6次/d,最多时达10余次/d,伴乏力、食欲不振;患病以来体质量下降10 kg.体格检查:体温(T) 36.5 ℃,脉搏(P) 90次/min,呼吸(R) 18次/min,血压(BP) 105/74 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa);消瘦,全身浅表淋巴结未扪及肿大,心肺无异常,腹部平软,左下腹部有压痛,无反跳痛及肌紧张,肝脾肋下未扪及,双肾区无叩击痛,肠鸣音5次/min;余未见异常.     

Humoral immune responses induced by anti-idiotypic antibody fusion protein of 6B11scFv/hGM-CSF in BALB/c mice

Background We have previously developed and characterized a monoclonal anti-idiotype antibody, designated 6B 11, which mimics an ovarian carcinoma associated antigen OC166-9 and whose corresponding monoclonal antibody is COC166-9 （Abl）. In this study, we evaluate the humoral immune responses induced by the fusion protein 6B11 single-chain variable fragment （scFv）/human granulocyte macrophage colony-stimulating factor （hGM-CSF） and 6B 1 lscFv in BALB/c mice. Methods The fusion protein 6B 11 scFv/hGM-CSF was constructed by fusing a recombinant single-chain variable fragment of 6B11scFv to GM-CSE BALB/c mice were administrated by 6B11scFv/hGM-CSF and 6B11scFv, respectively. Results The fusion protein 6B11scFv/hGM-CSF retained binding to the anti-mouse F（ab）2＇ and was also biologically active as measured by proliferation of human GM-CSF dependent cell TF1 in vitro. After immunization with the 6B11scFv/hGM-CSF and 6BllScFv, BALB/c mice showed significantly enhanced Ab3 antibody responses to 6B11 scFv/hGM-CSF compared with the 6B11 scFv alone. The level of Ab3 was the highest after the first week and maintained for five weeks after the last immunization. Another booster was given when the Ab3 titer descended, and it would reach to the high level in a week. Conclusion The fusion protein 6B11scFv/hGM-CSF can induce humoral immunity against ovarian carcinoma in vivo. We also provide the theoretical foundation for the application of the fusion protein 6B11 scFv/hGM-CSF for active immunotherapy of ovarian cancer.     

富余组织-T细胞的弥漫大B细胞淋巴瘤复发1例

<正>1病例资料患者,女性,77岁,因“季肋区疼痛半月,加重伴双下肢活动受限3天”于2019年2月26日就诊于河北省人民医院。胸椎MRI示：C7-T7椎体及附件、T6椎体水平髓外异常信号影,转移不排除。PET-CT(2019年3月4日)示：全身多组高代谢淋巴结,多处骨骼高密度影,肝内多处及右肺下叶胸膜区高代谢结节,脾大并代谢弥漫、局限性增高,淋巴瘤可能性大。Ann Arbor分期Ⅳ期。IPI评分5分（见图1A）。初步诊断：淋巴瘤,Ann Arbor分期为Ⅳ期B（累及脊柱、肺、肝、脾）。     

诱发性胸腺淋巴瘤动物模型的建立

胸腺瘤是最常见的纵隔肿瘤,其病因学和发病机制尚不清楚.合适的动物模型是研究该病病因学、发病机制以及治疗措施重要手段.本文就物理、化学和生物因素等致癌因素诱发胸腺瘤肿瘤模型作一回顾,并对其诱发机制以及影响因素作一概述.同时对诱发胸腺瘤模型的优点进行简单综述.     

mCD99L2基因沉默对小鼠B淋巴瘤细胞A20生物学特性的影响

目的探究mCD99L2基因沉默对小鼠B淋巴瘤细胞系A20细胞生物学特性的影响。方法采用MTT法和流式细胞仪检测mCD99L2基因沉默前后干扰组A20-LV-mCD99L2和未干扰组A20细胞的增殖率和细胞周期;Transwell法测定两组细胞的体外侵袭能力;采用裸鼠与BALB/c鼠皮下成瘤实验观察比较两组细胞在体内的成瘤时间和成瘤率。结果MTT法显示干扰组A20-LV-mCD99L2增殖率为(0.61±0.12),低于未干扰组增殖率(0.75±0.20),差异有统计学意义(P=0.000);干扰组A20-LV-mCD99L2处于G2期的细胞比例为(10.58±4.97),高于未干扰组(3.33±1.31),差异有统计学意义(P=0.009);Transwell法显示干扰组A20-LV-mCD99L2运动能力较未干扰组下降。裸鼠皮下成瘤时间干扰组(13.33±4.63)d长于未干扰组(9.50±2.90)d,成瘤率均为100%;BALB/c鼠皮下成瘤时间干扰组(10d)长于未干扰组(7.0±0.82)d,成瘤率干扰组为14.3%,显著低于未干扰组(100%),差异有统计学意义(P=0.000)。结论mCD99L...     

体外受精-胚胎移植模型的建立

目的　为临床治疗不孕症建立体外受精 -胚胎移植 (IVF -ET)动物模型。方法和结果　 1995年 11月开始对小鼠受精卵进行体外培养 ,至 1998年 6月成功地建立了动物模式。结论　根据小鼠受精卵的发育来检测培养液的质量 ,了解仪器设备、周围环境是否适合胚胎的生长 ,将此作为IVF -ET的质量控制。     

乙型肝炎急性感染小鼠模型的建立

目的 通过尾静脉注射感染性小鼠血清的方法 建立一种简单复制乙型肝炎急性感染的小鼠模型.方法 收集通过水压法复制第3天的小鼠血清,使用不同剂量尾静脉注射感染同系小鼠.分别在不同的时间阶段检测血清中的HBsAg和HBeAg,肝组织中的HBcAg和血清中HBV的DNA.结果 注射0.1 ml血清的感染组的检测结果 均高于0.2 ml组.结论 通过注射感染血清可以成功地复制急性小鼠感染模型.该模型复制方法 中,感染的结果 与注射感染血清的剂量无关.     

Afp-cre-lacZ转基因小鼠的构建

目的 研究甲胎蛋白(Afp)阳性细胞的增殖分化在组织生长修复,肿瘤发生过程中的作用,建立Afp-CreERT转基因小鼠细胞示踪系统.方法 采用DNA雄原核显微注射方法获得Afp-CreERT转基因小鼠,筛选出合适的品系后,使之与Rosa26-lacZ工具小鼠杂交,获得Cre/lacZ双阳性的Afp-cre-lacZ转基因小鼠.结果 显微注射后,共出生小鼠56只,经PCR鉴定Cre阳性小鼠共4只,阳性小鼠传代后各为一系.筛选内源性Afp表达与Cre表达相对符合的品系作为Afp-CreERT转基因小鼠品系建系.Afp-CreERT转基因小鼠与Rosa26-lacZ工具小鼠杂交,经PCR鉴定后获得Cre/lacZ双阳性的Afp-cre-lacZ转基因小鼠.经实时PCR,X-gal染色,免疫荧光染色鉴定后得到Afp-cre-lacZ转基因小鼠细胞示踪系统,同时证实该系统能够正确示踪Afp表达阳性的细胞,同时也能够应用于肝损伤小鼠模型中.结论 成功构建了Afp-cre-lacZ转基因小鼠细胞示踪系统,为研究这类细胞的谱系发生提供了工具.     

制作马拉色菌系统性感染小鼠动物模型探索

目的探索马拉色菌系统性感染的小鼠动物模型制作方法.方法用环磷酰胺制备免疫抑制小鼠,尾静脉注射马拉色菌悬液,对感染死亡及处死小鼠心、肺、肝、脾、肾标本进行HE染色、PAS染色进行观察.结果各实验小组小鼠一般状况变差,陆续死亡;各脏器均可见PAS阳性孢子、组织变性坏死、肉芽肿改变、真菌孢子栓子及坏死组织栓子等病理改变.结论免疫抑制小鼠经尾静脉注射菌悬液可成功制作马拉色菌系统性感染小鼠动物模型.     

实验性糖耐量异常动物模型的建立

目的 :建立一种典型稳定的糖耐量异常 (IGT)动物模型。方法 :雄性Wistar大鼠生后 2 4h内一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ) 80mg/kg ,10周后检测经腹腔葡萄糖耐量试验及血清胰岛素水平 ,16周后复查。结果 :实验组与正常对照组比较空腹血糖 ,胰岛素水平无统计学意义 (P >0 0 5 ) ;糖负荷后血糖明显升高 ,IGT ,血清胰岛素水平低于正常对照组。结论 :新生大鼠一次性腹腔注射STZ可成功制备IGT动物模型     

不同途径注射链脲佐菌素致大鼠糖尿病模型的研究

目的：探讨不同给药途径致大鼠糖尿病成模状况的差异。方法：本实验通过不同的途径给药（腹腔非空腹给药、腹腔空腹给药、尾静脉给药）以建立大鼠糖尿病模型，给药后48h检测血糖，尿糖，同时观察糖尿病大鼠的胰腺变化。结果：尾静脉给药成模率最高，胰腺形态学检查病程3、6月胰岛萎缩、β细胞减少。结论：尾静脉给药是注射链脲佐菌素致大鼠糖尿病模型的最佳途径。     

乙型肝炎实验动物模型的研究进展

建立合适的乙型肝炎病毒(HBV)感染的实验动物模型,对于开展抗乙肝中药的筛选,探索HBV感染机制,寻找有效的防治方法等,具有重要的意义。当代病毒学、分子生物学及免疫学等相关学科的发展,极大地推动了HBV感染动物模型的研究[1]。本文就近年来有关HBV及其它嗜肝病毒感染的动物模型的造模方法作一综述。     

自发的2型糖尿病动物模型

GK大鼠是1975年由Goto等在日本仙台从Wistar大鼠中反复选择形成的非肥胖性2型糖尿病鼠种。该鼠具有葡萄糖刺激的胰岛素分泌受损,β细胞分泌受损,空腹高血糖,肝糖原生成增多,肝脏、肌肉和脂肪组织中度胰岛素抵抗等特点,晚期合并各种并发症,与人类2型糖尿病进展极为相似。