伊马替尼与干扰素联合治疗慢性粒细胞白血病的疗效分析

目的：探讨伊马替尼与干扰素联合化疗治疗慢性粒细胞白血病（CML）的疗效。方法：2004年6月-2009年7月新诊断的58例Ph染色体阳性CML慢性期患者,随机分为伊马替尼组和干扰素联合化疗组,比较两组临床疗效。结果：两组总有效率差异无统计学意义（P〉0．05）;伊马替尼组完全血液学缓解率,完全细胞遗传学缓解率、完全分子学效应率、5年总生存率均明显高于干扰素联合化疗组（P〈0．05）。结论：伊马替尼和干扰素联合化疗都可作为CML慢性期的有效治疗方法,应依据不同情况实施个体化治疗。     

慢性粒细胞白血病病人Mcl一1基因和Bcr／Abl基因的表达及临床意义

目的探讨慢性粒细胞白血病（CML）病人Mcl—l基因和Bcr／Abl融合基因的表达水平及临床意义。方法应用实时荧光定量PCR技术检测了4l例cML病人（包括慢性期15倒、加速期6例、急变期6例、伊马替尼治疗后遗传学完全缓解8例及非伊马替尼治疗的未缓解的CML病人6例）骨髓标本Mel—l基因、Ber／Abl融合基因的表达水平,以10例正常人作为对照。结果CML各组Mcl—I和Bcr／AblmRNA的表达水平差异均有显著性（X2=19．12—36．08,P〈0．05）。伊马替尼治疗组与正常对照组Mel—lmRNA的表达明显低于其他各组（z=2．547—3．254,P〈0．05）;加速期、急变期及非伊马替尼治疗组之间Mcl—lmRNA的表达水平差异无显著性（z=0．481一1．922,P〉0．05）,但均明显高于慢性期（z=2．65—3．465,P〈0．05）。Ber／AblmRNA在慢性期、加速期、急变期及非伊马替尼治疗组之间表达差异无显著性（z=0．48—1．196,P〉0．05）。CML患者Mel—l与Bcr／AblmRNA的表达水平呈正相关（r=0．68,P〈0．05）。结论Mcl—l和Ber／Abl与CML的病情密切相关,参与cML的发生和发展,是判断病情进展及预后的分子标记物。     

慢性粒细胞白血病错配修复基因的研究

目的 探讨慢性粒细胞白血病（CML）错配修复（MMR）基因的表达水平及调控机制。方法 用半定量RT-PCR方法检测62例CML患者及K562细胞的5个MMR基因（hMSH2、hMSH3、hMSH6、hMLH1、hPMS2）mRNA的表达；用RT-PCR方法动态检测26例进行异基因外周血造血干细胞移植（allo-PBSCT）及4例使用伊马替尼治疗的CML患者ber-abl及MMR mRNA的表达水平；用伊马替尼体外作用于CML患者的单个核细胞（MNC）及K562细胞后，用Western blot方法检测BCR—ABL融合蛋白的酪氨酸磷酸化水平，RT-PCR方法检测MMR mRNA表达水平。结果 与正常人比较，CML患者及K562细胞的hMSH2、hMSH3、hMLH1 mRNA的表达明显降低（P〈0．05）；26例行allo—PBSCT及4例使用伊马替尼治疗的CML患者，其hMSH2、hMSH3、hMLH1 mRNA的表达随着bcr—abl mRNA的表达降低而升高；伊马替尼体外作用于CML患者MNC及K562细胞后，其hMSH2、hMSH3、hMLH1 mRNA的表达随着BCR—ABL融合蛋白酪氨酸磷酸化水平的降低而升高。结论 CML患者、K562细胞hMSH2、hMSH3、hMLH1 mRNA比正常人降低，bcr—abl融合基因抑制hMSH2、hMSH3、hMLH1 mRNA的表达。     

慢性粒细胞性白血病干细胞抗伊马替尼机制的初步分析

目的：了解伊马替尼对慢性粒细胞性白血病患者体内BCR／ABL融合基因阳性的原始及定向白血病干，祖细胞分化及增殖的影响，从而更深入阐明部分慢性粒细胞性白血病患者在经历一段血液学甚至是细胞遗传学水平上的完全缓解后复发及对伊马替尼耐药的机制。 方法：实验于2006—09/2007—06在河南省血液病研究所完成。①对象：选取10例慢性粒细胞白血病患者，患者对治疗及实验知情同意：实验经医学伦理委员会批准。实验过程中应用的伊马替尼为Novartis公司产品，批号B-1701-0001-000005；氟波酯为浙川制药公司产品，批号030321495。②实验方法：抽取慢性粒细胞性白血病患者骨髓10mL，分离得到具有血液血管干细胞特性、BCR／ABL融合基因阳性的FIk1^＋CD31^-CD34细胞。以诱导造血集落的前48h，96h，120h内培养体系中含5μmol/L伊马替尼分别作为伊马替尼1，2，3组，设立空白对照，均体外培养18d，检测伊马替尼对造血集落培养基中的未分化及处于分化阶段的BCR／ABL融合基因阳性FIk1^＋CD31^-CD34细胞的增殖抑制作用。采用流式细胞术将BCR／ABL融合基因阳性FIk1^＋CD31^-CD34细胞分为3个亚群，即G0期、G1期及S/G2＋M期，分别评估氟波酯、伊马替尼、氟波酯联合伊马替尼对3个亚群细胞的体外增殖及凋亡的影响。 结果：①伊马替尼对处于分化阶段BCR／ABL融合基因阳性FIk1^＋CD31^-CD34细胞增殖及向血管内皮细胞分化的影响：与空白对照组比较，伊马替尼1组每1000个BCR／ABL融合基因阳性FIk1^＋CD31^-CD34细胞产生的粒-单系祖细胞集落数、红系爆式集落数无明显变化（P〉0．05），伊马替尼2，3组两种造血集落数均显著降低（P〈0．05）。在内皮诱导体系中与空白对照组比较，伊马替尼3组CD31^＋／vWF^＋细胞出现率明显降低（P〈0．05），且分化形成血管样结构的时间延迟。②伊马替尼诱导BCR／ABL融合基因阳性FIk1^＋CD31^-CD34细胞及其分化细胞凋亡的比较：5μmol/L伊马替尼作用48h后，BCR／ABL融合基因阳性FIk1^＋CD31^-CD34细胞凋亡数量明显低于其分化的造血、血管内皮细胞（P〈0．05）。③氟波酯联合伊马替尼对白血病干细胞体外分化及凋亡的影响：氟波酯联合伊马替尼能显著诱导处于G0期的BCR／ABL融合基因阳性FIk1^＋CD31^-CD34细胞分化为造血细胞，同时也能显著诱导其凋亡。单独应用氟波酯或伊马替尼均对处于Go期的BCR／ABL融合基因阳性FIk1^＋CD31^-CD34细胞凋亡无呀显影响．进入G，期及S/G2＋M期后有一定的促凋亡作用。 结论：①临床所观察到的慢性粒细胞性白血病患者在运用伊马替尼一段时间后出现正常的造血恢复现象，可能仅仅是因为伊马替尼清除了定向恶性白血病祖细胞的增殖。②氟波酯联合伊马替尼可有效诱导原始白血病干细胞的分化及凋亡。     

慢性髓系白血病急变期分子遗传学研究进展

9号和22号染色体相互易位产生Ph染色体及BCR-ABL融合基因,几乎在所有慢性髓系白血病（CML）出现,BCR-ABL编码的蛋白具有持续增高的酪氨酸激酶活性,使白血病细胞异常增殖。急变期是CML的晚期,在此期间常常出现其它附加染色体和分子的改变。大量研究表明,BCR-ABL基因与其他失调的基因共同作用并异常激活下游的信号传导通路,促进了疾病的进展。酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼对大多数慢性期CML患者治疗效果显著。IRIS5年的临床试验显示：用伊马替尼治疗的98%患者达血液学完全缓解,92%患者达主要细胞遗传学缓解,87%患者达完全细胞遗传学缓解。然而,仍有少数慢性期和大多数进展期患者用伊马替尼治疗疗效欠佳。在耐药机制的研究中发现ABL激酶区点突变与临床耐药关系密切。第二代酪氨酸激酶抑制剂可改善伊马替尼耐药,本文就急性变的分子机制、伊马替尼耐药等做一综述。     

慢性粒细胞白血病干细胞生物学特性研究进展

慢性粒细胞白血病(CML)是一种造血干细胞(HSC)恶性克隆性疾病,其典型特征是费城染色体阳性(Ph+)并表达具有强酪氨酸激酶活性的BCR/ABL融合蛋白。近年来,BCR/ABL酪氨酸激酶的信号转导抑制剂甲磺酸伊马替尼在CML治疗中的成功应用,开辟了CML靶向治疗的新途径。然而,甲磺酸伊马替尼不能根除白血病细胞克隆,容易出现耐药与复     

46例慢性粒细胞白血病遗传学与分子生物学分析及其临床意义

目的 探讨在慢性粒细胞白血病(CML)诊断和微小残留病(MRD)监测中,染色体核型分析、荧光原位杂交(FISH)和实时荧光定量PCR(RO-PCR)的应用价值及其临床意义.方法 采用染色体G显带、FISH和RO-PCR技术对46例CML初发慢性期(CP)患者进行核型分析、BCR/ABL融合基因检测.并对伊马替尼、羟基脲和干扰素治疗后进行追踪观察.结果①46例CML初发患者Ph染色体均为阳性,其中1例伴有附加染色体异常;FISH检测BCR/ABL融合基因均阳性,阳性细胞平均数为(92.20±7.80)%;RQ-PCR检测BCR-ABL/ABL的平均值(68.18±26.67)%.②46例患者随访时间6～24个月,其中17例采用伊马替尼治疗,27例羟基脲治疗,2例干扰素治疗.随访期间,7例出现附加染色体异常,同时FISH检测BCR-ABL融合基因均为阳性(82%～100%),RQ-PCR检测BCR-ABL/ABL值为(51.10±16.30)%,并于0～12个月内进入加速期或急变期.其余39例患者(包括伊马替尼治疗组16例,羟基脲和干扰素治疗组29例),伊马替尼治疗组FISH检测仅4例为阳性(1.0%～5.0%),RQ-PCR检测BCR-ABL/ABL转录本相对平均值(0.10±0.08)%,与治疗前相比明显下降;羟基脲和干扰素治疗组FISH检测均阳性(79%～100%),BCR-ABL/ABL转录本相对平均值(53.65±12.60)%,与治疗前相比无明显改善.结论 染色体核型分析、FISH、RQ-PCR能够有效提高CML患者的诊断和治疗后MRD的监测水平.     

达沙替尼治疗对伊马替尼耐药的BCR/ABL阳性白血病效果观察

目的探讨达沙替尼治疗对伊马替尼耐药的BCR/ABL阳性白血病患者的临床效果。方法选取伊马替尼耐药的慢性髓系白血病(CML)或Ph阳性急性淋巴细胞白血病(Ph+ALL)患者12例,所有患者均给予口服100~140 mg·d-1达沙替尼进行治疗,评估达沙替尼的临床治疗效果和耐受性。结果本次研究过程中12例BCR/ABL患者中10例患者得到完全血液学反应(CHR),获得率为83.33%,12例患者中3例获得完全细胞遗传学缓解(CCyR),4例获得部分细胞遗传学缓解(PCyR),临床细胞学效应的缓解率为58.33%。在治疗过程中出现的主要血液系统不良反应包括血小板减少7例、中性粒细胞减少5例、患者出现贫血3例,非血液系统不良反应包括肺部感染2例、心包积液2例、胸腔积液1例,本研究的所有不良反应均发生在用药治疗12个月内。结论达沙替尼用于治疗对伊马替尼耐药的BCR/ABL阳性白血病患者的临床效果确切,可以有效改善患者的血液学与细胞遗传学状态,同时具有良好的耐受性。     

达沙替尼治疗伊马替尼耐药的BCR/ABL阳性白血病的临床研究

本研究评价达沙替尼治疗原发或继发伊马替尼耐药的BCR/ABL阳性白血病的疗效和安全性。对27例原发或继发伊马替尼耐药的慢性髓系白血病(CML)或Ph阳性急性淋巴细胞白血病(Ph+ALL)患者,给予达沙替尼100-140 mg/d口服治疗,评估疗效、总体生存和耐受情况。结果表明:27例伊马替尼耐药的BCR/ABL阳性白血病中位达沙替尼治疗时间8(1-66)个月,中位随访时间54(3-75)个月。27例接受达沙替尼治疗的患者中,88.8%获得完全血液学反应(CHR),44.4%获得主要细胞遗传学反应(mCyR),37%获得完全遗传学反应(CCyR),18.5%获得主要分子学反应(MMR)。伊马替尼耐药的进展期(CML-AP、CML-BC、骨髓复发Ph+ALL)患者接受达沙替尼治疗获CCyR率低于疾病稳定期(CML-CP、骨髓缓解Ph+ALL)患者(P=0.0377),且3-4级不良反应发生率明显增高。达沙替尼治疗后获得CCyR的患者生存期(OS)较未达CCyR者明显延长(63个月vs 9个月,P=0.0126)。达沙替尼治疗后最常见的3-4级不良反应包括血液学反应如血小板减少(51.8%)、中性粒细胞减少(48.1%)、贫血(33.3%)和非血液学反应如胸腔积液(18.5%)、肺部感染(18.5%)、心包积液(11.1%)。3-4级不良反应主要发生在疾病进展期时改服达沙替尼者,均发生于服药12个月内。结论:达沙替尼治疗伊马替尼耐药的BCR/ABL阳性白血病有效,且在疾病稳定期改服达沙替尼疗效和耐受性更好。     

伊马替尼耐药的K562细胞系的建立及其生物学特性研究

目的　体外建立一株对伊马替尼 (imatinib)耐药的白血病细胞并阐明其生物学特性。方法　以药物浓度递增的方法诱导人白血病细胞株K5 6 2对伊马替尼产生耐药性 ,以MTT法确定其耐药倍数及抗药谱。用RT PCR和Westernblot方法检测耐药细胞中bcr/abl及mdr1基因及其蛋白BCR/ABL和P gp的表达。用免疫共沉淀法检测耐药细胞中BCR/ABL的磷酸化活性。用双色荧光原位杂交法检测细胞中融合基因bcr/abl拷贝数。结果　建立了针对伊马替尼的人白血病耐药细胞系K5 6 2 /G0 1,耐药倍数为 (15 .2± 3.0 )倍 ,其对阿霉素、三尖杉酯碱和鬼臼乙叉甙具有不同程度的交叉耐药性。主要的耐药机制为上调bcr/abl融合基因及其融合蛋白BCR/ABL表达 ,增强BCR/ABL磷酸化活性。此外 ,多药耐药相关基因mdr1及其蛋白产物P gp高表达也参与了耐药性的形成。 结论　建立了我国第一株对伊马替尼耐药的人白血病细胞系K5 6 2 /G0 1,并阐明了部分耐药机制。     

BCR/ABL探针在骨髓增殖性疾病中的临床运用

本研究通过回顾分析荧光原位杂交(FISH)检测BCR/ABL融合基因结果,探讨其在慢性骨髓增殖性疾病(CMPD)和Ph+急性淋巴细胞白血病(Ph+ALL)的鉴别诊断及治疗后微小残留病(MRD)动态监测中的运用价值。初诊和治疗后病例分别使用BCR/ABL(ES)和BCR/ABL(DF)探针检测BCR/ABL融合基因。结果表明:初诊CMPD 49例,形态学符合CML骨髓象28例,确诊CML 23例,形态符合率23/28(82.1%),BCR/ABL阳性23/23,敏感度、特异度均为100%。确诊病例BCR/ABL阳性细胞率为81.3%±17.7%;allo-HSCT 13例,9例长期无病生存,4例复发,经供者淋巴细胞输注(DLI)、伊马替尼或allo-HSCT治疗后多次监测BCR/ABL阴性;伊马替尼治疗16例,其中11例于1年后多次监测BCR/ABL阴性,5例分别于6、7、10年后监测BCR/ABL阳性,其中1例经allo-HSCT成功,BCR/ABL转阴。结论:FISH技术是一项敏感、特异的诊断技术,针对初诊和治疗后病例分别运用两种不同的探针检测BCR/ABL融合基因,有助于准确、快速鉴别诊断CML、Ph+ALL,动态监测酪氨酸激酶抑制剂治疗和allo-HSCT后MRD。     

CIAPIN1基因在白血病患者骨髓单个核细胞中表达的研究

本研究旨在检测CIAPIN1基因在白血病患者中的表达,探讨其在白血病中的作用。收集112例初治白血病患者的新鲜骨髓,用TRIzoL一步法提取细胞总RNA、合成cDNA、以β-actin为内参,应用实时定量PCR方法检测CIAPIN1mRNA的表达;实验中选择10例正常人的骨髓作为对照。结果表明:骨髓单个核细胞(MNC)中CIAPIN1mRNA在急性髓系白血病(AML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)和慢性髓系白血病(CML)患者中的表达均高于正常人(p<0.05);在慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者中的表达与正常人相比差异无统计学意义(p>0.05)。结论 :CIAPIN1基因在初治白血病患者MNC中表达升高,其表达上调在白血病的发病中可能有一定的作用。     

PY20抗体检测慢性髓系白血病细胞内酪氨酸磷酸水平的临床应用

本研究探讨PY20抗酪氨酸磷酸单克隆抗体检测在慢性髓系白血病（CML）诊断中的特异性及其临床应用的可能性。采用抗PY20和CD45抗体标记,通过流式细胞术检测28倒初诊CML患者治疗前后PY20阳性率,比较其与bcr—abl融合基因及Ph染色体结果的符合率。另外,随访监测7例异基因造血干细胞移植后CML患者的PY20阳性率、bcr—abl融合基因及Ph染色体的变化。结果表明：@28例初诊CML患者PY20在慢性期、加速期、急变期表达率分别为（40．31±1．22）％、（77．28±1．14）％,（78．12±1．32）％。CML慢性期PY20袁达率低于加速期或急变期（P〈0．05）,加速期和急变期之间无显著差异（P〉0．05）。②28例初诊CML患者经治疗后获得CR、PR、NR患者的PY20阳性率分别为（15．56±1．51）％、（38．73±2．31）％、（60．43％±2．04）％。CR患者PY20阳性率明显低于PR及NR的患者（P〈0．05）。PR患者低于NR患者（P〈0．05）。③初诊患者PY20与RT—PCRbcr-abl检测的阳性符合率为92．31％,阴性符合率为95．45％;PY20与Ph染色体检测的阳性符合率为88．46％,阴性符合率为95．46％。④7例患者移植后Ph染色体均为阴性,移植后bcr—abl融合基因持续阴性5例,持续阳性2例。此7例PY20细胞表达均为阴性。结论：①流式细胞术检测CML细胞酪氨酸磷酸化水平阳性率有较好的特异性及敏感性,可应用于CML的早期、快速辅助诊断。②PY20阳性率对CML分期、病情监测及疗效判断有一定的临床指导意义。⑧流式细胞术、RT—PCIR及染色体核型分析能相互补充提高CML的诊断率。     

接合物蛋白磷酸化水平在伊马替尼治疗慢性粒细胞白血病中的临床意义

目的 探讨接合物蛋白(CRKL)的磷酸化水平在伊马替尼治疗慢性粒细胞白血病(CML)中的临床意义.方法 分别采用筑巢式PCR扩增ABL激酶区序列、实时荧光定量PCR法、流式细胞术检测35例CML患者不同时期52份骨髓标本ABL激酶区点突变、BCR-ABL基因转录水平、CRKL磷酸化水平,分析CRKL磷酸化水平与前两者的关系.结果 15例伊马替尼耐药患者中6例(40.0%)检测到ABL激酶区点突变,涉及四种类型氨基酸的改变,分别为Y253H 1例、E255K 1例、T315I 3例、F317L 1例,其中2例(T315I、Y253H)处于急变期,3例(E255K、T315I、F317L)处于加速期,1例(T315I)处于慢性期.初诊组BCR-ABL mRNA水平高于伊马替尼治疗有效组(P=0.01);伊马替尼耐药组BCR-ABL mRNA水平高于伊马替尼治疗有效组(P=0.03);伊马替尼耐药组BCR-ABLmRNA水平与初诊组差异无统计学意义(P=0.18).伊马替尼耐药组与初诊组磷酸化CRKL阳性细胞百分率及平均荧光强度(MFI)均明显升高,两组差异无统计学意义(P=5.130;P=3.178);但初诊组较伊马替尼治疗有效组患者显著增高(P=0.000;P=0.01),伊马替尼耐药组较伊马替尼治疗有效组患者显著增高(P=0.000;P=0.02);磷酸化CRKL阳性细胞百分率、MFI与BCR-ABL mRNA表达水平存在正相关关系(P＜0.05).结论 应用流式细胞术检测P210BCR-ABL主要底物CRKL蛋白的磷酸化水平,是快速便捷的检测CML患者酪氨酸激酶活性的方法,CRKL磷酸化水平可作为评价伊马替尼治疗CML的疗效指标.

Abstract：

Objective To investigate the adaptor protein CRKL phosphorylation level( p-CRKL) and its significance in chronic myeloid leukemia(CML) treated with imatinib. Methods ABL kinase domain was amplified by nested RT-PCR, domain point mutations analysis by direct sequencing, BCR-ABL mRNA level by real time-PCR, and p-CRKL level by flow cytometry in 52 bone marrow samples from 35 CML patients,and the relationship of p-CRKL level with ABL kinase domain mutation and with BCR-ABL mRNA level was analyzed. Results In the 15 imatinib-resistant patients, ABL domain point mutations were detected in 6 with 4 types of nucleotide substitutions: T315I ( n = 3 ), Y253 H ( n = 1 ), E255 K and F317 L. The incidence of mutations in disease chronic phase ( CP), accelerated phase (AP) and blast phase (BP) was 25.00%,40.00% and 30.00%, respectively. The BCR-ABL mRNA level in newly diagnosed CML was higher than that in imatinib-responded patients (P =0.01 );and so did in imatinib-resistant patients than in imatinib-effective patients ( P = 0. 03 ). The level of BCR-ABL mRNA was not significantly different between newly diagnosed CML and imatinib-resistant patients. p-CRKL%, MFI showed a high degree of phosphorylation in newly diagnosed CML and imatinib-resistant patients(P = 5.130; P = 3.178 ). The level of p-CRKL % and MFI in newly diagnosed group was higher than that in imatinib responded group( P = 0.000; P = 0.01 ) and also higher in imatinib-effective group than in imatinib-resistant group (P = 0. 000; P = 0. 02 ). There was apositive correlation between the level of BCR-ABL expression and p-CRKL % ( and the MFI of p-CRKL)( P ＜ 0. 05 ). Conclusion It seems that p-CRKL detection might be helpful in predicting imatinib treatment outcomes.     

CD25在急性B淋巴细胞白血病中的表达及其临床意义探讨

本研究旨在通过流式细胞术标记CD25,探讨其与急性B淋巴细胞白血病（B—ALL）的关系及其临床意义。选择88例初发B—ALL患者骨髓,应用流式细胞术检测免疫表型标记,包括白介素2受体α链（CD25）、B链（CD122）、Y链（CD132）,CD19、CD20、CD10、CD34、CDIgM、CD79a、CD22、CDTDT;用定性PCR方法检测BCR／ABL融合基因表达,实时定量PCR检测IL2RA（CD25基因）的表达。结果表明,CD25＋和CD25-的B—ALL患者白细胞计数（WBC）、血红蛋白（Hb）、血小板（Plt）、骨髓原始细胞比例（marrowblast％）、外周血原始细胞比例（peripheralblast％）、肝脾和淋巴结肿大、cD10、cD20、cD22、cD34、CD79a、CDTDT、CDIgM表达水平差别均无统计学意义（P〉0．05）,而CD19在CD25＋组中表达水平高于CD25-组（P〈0．05）。本组BCR／ABL＋患者为21例（23．9％,21／88）,CD25＋表达率为66．7％（14／21）;BCR／ABL-患者为67例,CD25＋表达率为4．5％（3／67）,两组间差别有统计学意义（P〈0．05）。IL2RA基因mRNA表达水平在CD25＋和CD25-两组间无统计学差异（P〉0．05）。21例BCR／ABL＋B—ALL患者中,CD25＋与CD25-两组间在缓解率和复发率方面差异无统计学意义（P〉0．05）。BCR／ABL＋B—ALL患者中有8例复发,复发率为38．1％（8／21）,BCR／ABL。组有9例复发,复发率为13．4％（9／67）,两组间差异有统计学意义（P〈0．05）。BCR／ABL＋组无复发生存时间（relapse—freesurvival,RFS）为21个月,BCR／ABL＋CD25＋患者RFS时间为15个月,而BCR／ABL＋CD25-患者RFS时间为21个月,BCR／ABL—CD25-患者RFS时间为24个月。结论：CD25在BCR／ABL＋B-ALL上患者中呈高水平表达,可以作为B—ALL的BCR／ABL融合基因表达的预测指标,与疾病复发有关,CD25＋可以作为判断B—ALL不良预后的辅助标志。     

BCR/ABL双色双融-荧光原位杂交技术的信号模式探讨

目的研究BCR/ABL双色双融合探针荧光原位杂交技术(dual color dual fusion BCR/ABL probe-fluorescence in situ hy-bridization,DCDF-FISH)在白血病遗传学异常检测中的常见信号模式,探讨各种信号模式与染色体异常的关系。方法采用BCR/ABL的DCDF-FISH技术和染色体核型分析技术对初诊的40例慢性粒细胞白血病(chronic myelocytic leukemia,CML)、30例急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)以及10例其它(包括AML和骨髓增生性疾病)患者骨髓标本进行检测,比较DCDF-FISH各种信号模式与染色体关系。结果DCDF-FISH检测见11种信号模式:2R2G为正常细胞信号模式;2R3G、3R2G及3R3G为无BCR/ABL融合基因的异常信号模式;1R1G2F、1R1G1F、1R2G1F和2R1G1F模式的核型都为t(9;22);1R1G3F核型模式为t(9;22)伴有Ph+;2R2G1F为三条以上染色体易位t(9;22;V);1R2G2F为t(9;22)伴多一条22号染色体,这些信号模式的细胞内都存在着BCR/ABL融合基因。结论BCR/ABL DCDF-FISH检测时存在着多种信号模式,明确各种信号模式的意义,对临床疾病的诊断、预后有重要指导意义。     

P27^kip1与细胞周期蛋白G在急性白血病中的表达及相关性研究

为了探讨P27^kip1与细胞周期蛋白G（cyclin G）在急性白血病患者中的表达及其相关性,采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测89例急性白血病患者和10例正常人白细胞的P27^kip1与cyclin G mRNA水平,采用Wes—tern blot检测39例急性白血病患者和10例正常人白细胞的P27^kip1与cyclinG蛋白表达水平。结果显示：急性白血病初治／复发组的cyclin G mRNA与蛋白表达水平均明显高于缓解组和正常对照组（P〈0．05或P〈0．01）;缓解组与正常对照组之间无显著差异（P〉0．05）。急性白血病初治／复发组的P27^kip1 mRNA水平与缓解组和正常对照组比较均无明显差异（P〉0．05）。而急性白血病缓解组和正常对照组的P27^kip1的蛋白表达水平高于初治／复发组（P〈0．05）,缓解组与正常对照组之间无显著差异（P〉0．05）。P27却。与cyclin G的表达呈低度负相关。结论：P27螂。与cyclin G在白血病患者中有异常表达,与白血病的发生发展有一定联系;P27^kip1的低表达与cyclin G的异常高表达可能是白血病预后不良的因素之一。     

荧光原位杂交技术检测BCR/ABL融合基因

目的建立荧光原位杂交(FISH)技术,直接原位检测间期细胞中BCR/ABL融合基因,辅助临床诊断和治疗慢性粒细胞性白血病(CML)。方法应用FISH技术检测15例CML患者骨髓培养细胞BCR/ABL融合基因,其中5例CML患者同时取骨髓直接涂片检测,5例CML患者同时取外周血浓缩单个核细胞直接涂片检测。以5例非CML患者骨髓培养细胞为阴性对照。结果15例患者骨髓标本成功培养10例,染色体分析检测到Ph1染色体8例。15例患者骨髓培养细胞FISH检测BCR/ABL融合基因阳性14例。5例CML患者同时做骨髓直接涂片FISH检测,结果阳性4例。5例CML患者同时做血标本浓缩单个核细胞FISH检测阳性2例。5例非CML患者FISH结果均阴性。结论FISH技术能直接原位检测间期细胞中BCR/ABL融合基因,且快速、可靠、成功率高,是诊断和监测CML的一项有效新技术。     

格列卫对慢性粒细胞白血病病人Ph染色体和bcr／abl融合基因表达影响

目的探讨格列卫治疗Ph染色体阳性慢性粒细胞白血病病人后骨髓Ph染色体及bcr／abl融合基因表达的变化。方法采用R显带和半定量RTPCR分别检测11例慢性粒细胞白血病病人服用格列卫前后骨髓标本中Ph染色体和bcr／abl基因的表达。结果用药后9例慢性期慢性粒细胞白血病病人,7例分别在用药3～24个月后染色体检查为Ph染色体阴性,1例用药1个月后其Ph染色体仍为阳性,后失访;1例用药2个月后Ph染色体阳性率为30％;1例急变期慢性粒细胞白血病病人用药6个月后其Ph染色体阳性率为70％;1例加速期慢性粒细胞白血病病人用药12个月后Ph染色体阳性率为60％。服用格列卫的CML病人Ph染色体转阴后仍能检测到bcr／abl基因的表达,但其表达水平较用药前明显降低,差异有显著性（t=3．77、5．13,P〈0．01）,随着用药时间的延长bcr／abl基因表达逐渐降低。结论格列卫能有效治疗Ph染色体阳性的慢性粒细胞白血病病人,并且对其预后具有重要的意义。