Ghrelin对大鼠主动脉血管平滑肌细胞内钙离子浓度的影响

目的：研究Ghrelin对大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（VSMCs）内游离钙离子浓度的影响,并揭示Ghrelin血管活性的调节机制。方法：组织贴块法培养大鼠胸主动脉VSMCs,Western blot验证生长激素促泌素受体（GHS-R1a）在VSMCs中的表达。钙荧光染料furo-2AM标记VSMCs,高速钙离子成像分析系统检测Ghrelin对静息状态胞内钙荧光强度（FI）的影响,并观察Ghrelin对KCl和AngII增强胞内钙FI作用的影响,以及腺苷酸环化酶抑制剂Sq22536和GHS-R1a拮抗剂（D-Lys3）-GHRP-6对Ghrelin作用的影响。结果：GHS-R1a在VSMCs内有表达。Ghrelin本身对VSMCs内钙FI无作用,也不能抑制KCl引起的VSMCs内钙FI升高,但可抑制AngII引起的VSMCs内钙FI升高,而这种抑制作用可被Sq22536和GHS-R1a逆转。结论：Ghrelin可抑制由AngII引起的大鼠主动脉VSMCs胞内钙离子的升高,机制可能和激活cAMP/PKA信号通路有关。     

兔实验性食管炎模型的建立及评价

目的 利用酸灌注的方法制备兔实验性食管炎模型。方法 将胃管插入家兔食管在食管下端括约肌（ＬＥＳ）上方约５ｃｍ处,灌注０．１ｍｏｌ／ＬＨＣｌ（１ｍＬ／ｍｉｎ,３０ｍｉｎ／ｄ）连续灌注４ｄ同时于灌注前及灌注后测定食管下端括约肌（ＬＥＳ）的压力。结果 酸灌注后的食管病理改变明显,光镜下可见食管下段粘膜基底细胞层明显增生,固有层中性粒细胞浸润,电子显微镜下可见细胞同隙增加,平滑肌细胞内线粒体肿大,嵴溶解,     

食管炎性结节性增生误诊为食管平滑肌瘤2例

<正> 反流性食管炎是指胃肠内容逆流到食管引起的消化性炎症改变,近年来随着纤维食管镜检查的普及与食管功能研究的进展已经越来越多地引起了人们的注意。到本病的慢性期,由于食管壁内大量的炎性细胞浸润致管壁增厚并可形成结节状炎性灶突向管腔,从而造成诊断上的困难。我院胸外科自1983年1月至1992年12月共以食管平滑肌瘤收治的33病人中,经手术病理证实有2例为食管炎性结节性增生,现结合文献报告如下。 1 病历简介 例1。男性,23岁。主因吞咽困难3年,加重1个月入院,既往有反酸、呃逆史。查体无明显异常发现,食管造影显示胸下段食管至贲门长约7cm粘膜不整、管腔不规则充盈缺损纤维食管镜检查距门齿35—41cm处食管壁内多个直径约5mm的结节状肿物,活动,表面粘膜充血,经咬检病理为粘膜慢性炎症,以食管多发性平滑肌瘤收住院.经术前准备于1990年9月11日开胸手术探查,发现胸下段食管周围软组织明显增厚变韧,可     

荧光定量法测量平滑肌细胞内钙离子浓度的探讨

目的 研究平滑肌细胞内Ca^2 浓度的动力学变化，建立一种定量测量细胞内Ca^2 浓度的方法。方法 分离肠系膜细动脉血管平滑肌(ASMC)细胞，用荧光探针Indo-1和激光扫描共聚焦显微成像技术测定单个平滑肌细胞Ca^2 浓度的动力学变化；首先在37℃环境下标定Ca^2 探针indo-1的解离常数Kd值，根据荧光-浓度换算公式将测量的荧光强度值换算成Ca^2 浓度值。结果 激光扫描共聚焦显微成像技术测量的细胞荧光图像分析显示．平滑肌细胞[Ca^2 ]i在地塞米松的刺激下显著上升，有时会出现自发钙波的现象，并且细胞内出现钙超载的现象(细胞荧光图像呈现白色)。通过测量得到的Kd值结合荧光强度-浓度换算公式可准确地测量细胞内[Ca^2 ]i。结论 荧光定量法结合共聚焦显微成像技术可以简易、快捷地监测细胞内钙离子的动力学变化，不失为一种定量测量细胞内钙离子的方法。     

三七花总皂苷对人主动脉血管平滑肌细胞增殖及细胞内钙离子浓度的影响

目的:观察三七花总皂苷(PNFS)对血管平滑肌细胞增殖及细胞内钙离子浓度的影响.方法:采用去甲肾上腺素诱导的人主动脉血管平滑肌细胞增殖和钙超载模型,应用CCK-8法观察血管平滑肌细胞增殖活力;钙荧光指示剂Fluo-3/AM检测细胞内钙浓度变化.观察不同剂量PNFS对两者的影响.结果:PNFS能够改善去甲肾上腺素诱导的人主动脉血管平滑肌细胞增殖,降低细胞内钙离子浓度,并呈一定的量效关系.结论:PNFS对去甲肾上腺素诱导的人主动脉血管平滑肌细胞增殖有抑制作用,这一作用可能与降低细胞内钙离子浓度有关.     

哇巴因对大鼠血管平滑肌细胞内钙离子浓度的影响

目的探讨哇巴因对大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells, VSMCs）内Ca2+浓度的影响。方法用组织
块贴壁法进行大鼠胸主动脉VSMCs原代培养,用免疫组织化学方法进行细胞鉴定,采用放射自显影术检测哇巴因对大鼠胸主动
脉VSMCs的结合能力,采用Fluo 3-AM（钙离子荧光探针）法研究哇巴因在短时间内对VSMCs细胞内Ca2+浓度的影响,探讨不同
浓度的钠泵α2亚单位截断性片段的拮抗作用。结果（1）放射自显影术检测结果显示,哇巴因与VSMCs间有一定的结合能力。
在0.1~100 nmol/L浓度范围,随着哇巴因浓度的增加,VSMCs与哇巴因的结合能力增加;（2）Fluo 3-AM检测VSMCs内Ca2+浓度
结果显示：不同浓度的哇巴因在短时间内能够引起VSMCs内Ca2+浓度的变化。在0~3200 nmol/L浓度范围,细胞内Ca2+离子浓
度会随着哇巴因浓度的增加呈现出逐渐升高的趋势;（3）不同浓度的钠泵α2亚单位截断性片段可以拮抗哇巴因引起的VSMCs内
Ca2+浓度的升高作用。结论哇巴因引起的细胞内高钙是高哇巴因高血压发生的细胞学基础,钠泵α2亚单位截断性片段可以拮
抗哇巴因引起的VSMCs内Ca2+浓度的升高作用,为进一步探讨哇巴因的作用机制结高血压的治疗提供了实验依据。
     

N-苄基氟哌啶醇氯化物对大鼠血管平滑肌细胞内钙离子的影响

目的:动态观察N_苄基氟哌啶醇氯化物(F3)对大鼠胸主动脉平滑肌细胞内Ca2+的影响。方法:用Ca2+荧光染料Fluo_3_AM负载大鼠胸主动脉平滑肌细胞,在激光扫描共聚焦显微镜上测定细胞内游离钙的变化。结果:在含CaCl2(1.26mmol/L)的细胞外液中,30 mmol/L KCl使细胞内钙荧光强度(FI)迅速增强,F3可以拮抗KCl诱导钙FI增强作用,并呈量效依赖和时间依赖关系。4种浓度F3(0.01、0.1、1.0、10μmol/L)作用3 min时,使KCl诱导细胞内钙FI从(81±4)%分别降至(71±18)%(n=20,P<0.05)、(51±12)%(n=20,P<0.01)、(39±14)%(n=20,P<0.01)、(28±14)%(n=20,P<0.01)。钙FI变化最快的时程是在给药后的0~30 s。结论:F3通过阻断细胞膜电压依赖性钙通道降低平滑肌细胞内钙浓度,这可能是其扩张血管,改善心肌缺血的机制。     

细胞周期和胞内钙离子浓度在Ro13-7410作用HL-60细胞中的变化

本文用流式细胞术和Ｆｕｒａ－２测定胞内钙离子方法分别观察了Ｒｏ１３－７４１０作用人白血病ＨＬ－６０细胞不同时间的细胞周期分布以及细胞内钙离子浓度的变化。结果显示Ｒ０１３－７４１０将多数细胞阻止在Ｇｚ／Ｍ期，同时伴随了胞内钙离子的明显上升，且与Ｒｏ１３－７４１０对Ｈ１－６０细胞的诱导凋亡和分化作用有关。     

双色流式细胞术在检测特定亚群淋巴细胞Ca2+变化中的应用

目的: 建立检测特定亚群淋巴细胞内钙离子的方法. 方法: 以PHA刺激96h的PBMC作为研究对象,在以quantum-red标记的抗膜表面抗原CD8进行膜表面染色的同时,进行Fluo-3/AM负载及细胞内Ca2 的检测,摸索以双色流式细胞术检测特定亚群淋巴细胞内Ca2 变化的最佳条件. 并检测经钙离子载体A23187和趋化性细胞因子刺激后,PHA活化的PBMC中CD8 细胞内的Ca2 变化. 结果: ①选择1 μmol/L作为Fluo-3/AM负载的最佳浓度;②与Fluo-3/AM负载相适应的改良染色条件不影响膜表面荧光染色的阳性率和平均荧光强度;③趋化性细胞因子刺激后,CD8 细胞内Ca2 浓度有一定水平上调,但远不如A23187的作用明显. 结论: 建立了以双色流式细胞术鉴定特定亚群淋巴细胞内钙离子变化的方法,可广泛用于不同淋巴细胞亚群钙离子的快速精确测量.     

2,3,7,8-TCDD对培养乳鼠心肌细胞内游离钙离子浓度影响的研究

目的 测定培养SD大鼠乳鼠心肌细胞内游离钙离子浓度[Ca^2＋]i,观察2,3,7,8-四氯二苯并二噁英（2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin,以下略为TCDD）对心肌细胞[Ca^2＋]i的影响。方法将实验动物分为0．05、0．5、5、10μg／kg4个染毒组,采用Fluo-3／AM同时加入Pluronic F-127作为细胞内游离钙离子的荧光探针,负载培养的心肌细胞,应用共聚焦激光扫描显微镜（CLSM）技术检测空白组及染毒组乳鼠心肌细胞[Ca^2＋]i。结果静息时,心肌细胞[Ca^2＋]i为（77．68-4-12．00）nmol／L。染毒组心肌细胞的[Ca^2＋]i显示不同程度的升高,且呈剂量依赖性。结论应用Fluo-3／AM和Pluronic F-127结合CLSM技术可以精确的反映细胞内游离钙离子浓度,TCDD可能通过某种机制增加心肌细胞[Ca^2＋]i从而对乳鼠心脏功能产生一定损伤。     

Relationship of intracellular free Ca2+ concentration and calcium-activated chloride channels of pulmonary artery smooth muscle cells in rats under hypoxic conditions

Summary To investigate the relationship between intracellular free Ca²⁺ concentration ([Ca²⁺]_i) and calcium-activated chloride (Cl_CB) channels of pulmonary artery smooth muscle cells (PASMCs) in rats under acute and chronic hypoxic conditions, acute hypoxia-induced contraction was observed in rat pulmonary artery by using routine blood vascular perfusionin vitro. The fluorescence Ca²⁺ indicator Fura-2/AM was used to observe [Ca²⁺]_i of rat PASMCs under normal and chronic hypoxic condition. The effect of Cl_CB channels on PASMCs proliferation was assessed by MTT assay. The Cl_CB channel blockers niflumic acid (NFA) and indaryloxyacetic acid (IAA-94) exerted inhibitory effects on acute hypoxia-evoked contractions in the pulmonary artery. Under chronic hypoxic condition, [Ca²⁺]_i was increased. Under normoxic condition, [Ca²⁺]_i was (123.63±18.98) nmol/L, and in hypoxic condition, [Ca²⁺]_i was (281.75±16.48) nmol/L (P<0.01). Under normoxic condition, [Ca²⁺]_i showed no significant change and no effect on Cl_CB channels was observed (P>0.05 Chronic hypoxia increased [Ca²⁺]_i which opened Cl_CB channels. The NFA and IAA-94 blocked the channels and decreased [Ca²⁺]_i from (281.75±16.48) nmol/L to (117.66±15.36) nmol/L (P<0.01). MTT assay showed that under chronic hypoxic condition NFA and IAA-94 decreased the value of absorbency (A value) from 0.459±0.058 to 0.224±0.025 (P<0.01). Hypoxia increased [Ca²⁺]_i which opened Cl_CB channels and had a positive-feedback in [Ca²⁺]_i. This may play an important role in hypoxic pulmonary hypertension. Under chronic hypoxic condition, Cl_CB channel may play a part in the regulation of proliferation of PASMCs. YANG Zhao, female, born in 1967, Doctor in Charge     

异丙基肾上腺素通过减少气道平滑肌细胞内钙离子振荡频率诱导气道舒张

目的了解细胞内钙信号调节在气道平滑肌舒张过程中的意义。方法利用相差和双光子显微镜技术观察异丙基肾上腺素(ISO)对小鼠肺组织切片中气道平滑肌收缩状态和细胞内钙信号的作用。结果在乙酰甲胆碱(MCh)预收缩的气道中,ISO、Forskolin和8BromocAMP可诱发剂量依赖的气道舒张及平滑肌细胞内钙离子振荡频率的降低;钙离子振荡频率越低,气道舒张程度越大。结论ISO诱导气道舒张与降低平滑肌细胞内钙离子振荡频率有关。细胞内钙离子振荡的频率调节可能是环磷酸腺苷(cAMP)通路刺激剂调控气道平滑肌舒缩的基本方式。     

降钙素基因相关肽对心肌细胞缺血缺氧状态下胞内钙的影响

目的 观察降钙素基因相关肽（CGRP）对急性分离心肌细胞在模拟缺血缺氧状态下胞内钙的影响。方法 急性分离心肌细胞在模拟缺血缺氧状态下，以Fluo-3作为钙指示剂，用共聚焦显微镜测定胞内钙的变化。结果 急性缺血缺氧时，心肌细胞胞内钙浓度降低，加入CGRP后，钙浓度恢复；先加入CGRP，再在缺血缺氧的条件下，胞内钙浓度基本保持不变，结论 CGRP可恢复因急性缺血缺氧而导致的细胞内钙浓度降低。     

Effects of Iptakalim on intracellular free calcium concentration of cultured rabbit pulmonary arterial smooth muscle cells

Objective:To explore the effects of Iptakalim on intracellular free calcium concentration and on the proliferation of cultured rabbit pulmonary arterial smooth muscle cells induced by endothelin-1(ET-1) in vitro. Methods:A cell culture model, [3H]-thymidine([3H]-TdR) incorporation test and confocal microscope were used to observe proliferation and intracellular free calcium concentration([Ca2 ]i) of rabbit PASMC induced by ET-1 in vitro. Results:The value of [3H]-TdR incorporation in ET-1 group was increased 1.468 times higher than that in control group. Iptakalim at the concentration of 10-7mol/L,10-6 mol/L,10-5 mol/L lowered [3H]-TdR incorporation by (19.8±4.6)%, (41.2±9.5)%, (54.7±10.1)%, respectively, compared with the value of the cells treated with ET-1(P＜0.01); The intracellular fluorescence intensity of PASMC in ET-1 group was increased from 73.70±10.12 to 143.84±28.23, significantly higher than that in control group(P＜0.01); whereas with Iptakalim,the fluorescence intensity(FI) was only increased from 74.30±10.20 to 86.03±9.82, significantly lower than that in ET-1 group(P＜0.01). Conclusion:Iptakalim inhibited proliferation of PASMC and decreased intracellular free calcium concentration of cultured rabbit PASMC induced by ET-1.     

Effects of lptakalim on intracellular free calcium concentration of cultured rabbit pulmonary arterial smooth muscle cells

Objective：To explore the effects of Iptakalim on intracellular free calcium concentration and on the proliferation of cultured rabbit pulmonary arterial smooth muscle cells induced by endothelin-1 （ET-1） in vitro. Methods：A cell culture model, [^3H]-thymidine（[^3H]-TdR） incorporation test and confocal microscope were used to observe proliferation and intracellular free calcium concentration（[Ca^2±]） of rabbit PASMC induced by ET-1 in vitro. Results：The value of [^3H]-TdR incorporation in ET-1 group was increased 1.468 times higher than that in control group. Iptakalim at the concentration of 10^-7mol/L, 10^-6mol/L ,10^-5 mol/L lowered [^3H]-TdR incorporation by （19.8 ± 4.6）%, （41.2 ± 9.5）%, （54.7 ± 10.1）%, respectively, compared with the value of the cells treated with ET-1（P〈 0.01）; The intracellular fluorescence intensity of PASMC in ET-1 group was increased from 73.70 ± 10.12 to 143.84 ± 28.23, significantly higher than that in control group（P 〈 0.01）; whereas with Iptakalim,the fluorescence intensity（FI） was only increased from 74.30 ± 10.20 to 86.03 ± 9.82, significantly lower than that in ET-1 group（P 〈 0.01）. Conclusion：Iptakalim inhibited proliferation of PASMC and decreased intracellular free calcium concentration of cultured rabbit PASMC induced by ET-1.     

针刺血清对体外培养神经细胞内钙离子浓度的影响

目的:通过观察针刺大鼠经穴后收集的血清对体外培养的神经细胞内Ca2 浓度的影响,为探讨针灸作用的机制中是否存在着体液因素提供直接的证据.方法:取新生大鼠大脑皮层细胞进行原代培养.7～10 d后应用荧光分子探针Fluo-3AM染色,激光共焦扫描显微镜动态扫描观察加入正常大鼠血清和电针刺激百会、足三里、曲池、三阴交2周后的血清对神经细胞内Ca2 浓度的影响.结果:加入正常血清后,细胞内的Ca2 浓度会有一定的升高,经过一段时间后升高的Ca2 浓度会趋向平稳.而再加入针刺血清后,在一定程度上可以降低神经细胞Ca2 的浓度.结论:针刺腧穴后,除了神经的调节机制外,针刺血清中存在某种活性物质,可以明显地使神经细胞内Ca2 浓度降低,为针灸体液因素的存在提供了直接的证据.