白芍总苷对巨噬细胞核转录因子-κB活化的影响及其机制研究

目的:研究白芍总苷(TGP)对核转录因子-κB(NF-κB)活化的调节作用及其机制。方法:不同剂量(10,30,100,300μg.mL^-1)的TGP作用于大鼠腹腔巨噬细胞2 h后,加入脂多糖(LPS)刺激20 min或1 h,Westernblot方法分别观察NF-κB抑制蛋白IκBα在胞浆中的含量及NF-κB亚基p65在胞核中的含量,同时检测NF-κB与DNA的结合活性。结果:TGP显著增加了LPS刺激后的巨噬细胞胞浆中IκBα蛋白的含量,同时显著减少了胞核中NF-κB p65蛋白含量,并对LPS诱导的NF-κB与DNA的结合活性也有明显抑制作用。结论:TGP可抑制LPS诱导的巨噬细胞NF-κB的活化,其机制与TGP抑制IκBα蛋白的降解,阻遏NF-κB p65蛋白的核转移和抑制NF-κB与DNA的结合密切相关。     

益母草水苏碱干预NE诱导乳鼠心肌细胞肥大的作用

目的:探讨益母草水苏碱干预NE诱导乳鼠心肌细胞肥大的作用。方法:采用改良Simpson法培养乳鼠心肌细胞,选用NE诱导制作心肌细胞肥大模型,随机分为对照组,NE(10-6M)组,Sta高中低剂量(10-4M、10-5M、10-6M)组及Car(10-6M)组。在药物作用的1d、3d、5d和7d后收集细胞,采用图像分析系统测量心肌细胞表面积,BCA法检测细胞蛋白含量,荧光微量测定细胞DNA含量,ELISA法检测细胞ANP和BNP含量,以细胞表面积、Protein/DNA比值以及ANP和BNP含量作为检测指标,观察益母草水苏碱对肥大心肌细胞的药效学作用。结果:益母草水苏碱作用于细胞1d后,Sta大中小剂量组与NE组比较各项指标没有统计学差异。益母草水苏碱作用于细胞3d后,Sta大中剂量组与NE组比较可以明显降低细胞的表面积、Protein/DNA的比值及ANP含量(P0.05),Sta小剂量组较NE组降低了细胞表面积(P0.05),其它各项指标没有差异。益母草水苏碱作用于细胞5d后,Sta大中小剂量组较NE组显著降低细胞的表面积、Protein/DNA的比值及ANP含量(P0.05),各组BNP含量与NE组比较,有降低的趋势,但是没有统计学差异。益母草水苏碱作用于细胞7d后,Sta大中小剂量组与NE组比较,明显降低细胞的表面积、Protein/DNA的比值、ANP和BNP含量(P0.05)。结论:益母草水苏碱具有抗NE诱导乳鼠心肌细胞肥大作用。     

益母草水苏碱对大鼠心肌细胞肥大的肌浆网钙摄取及SERCA活性的影响

目的:探讨益母草水苏碱(stachydrine,Sta)对去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)诱导的新生大鼠心肌细胞肥大肌浆网钙摄取及SERCA活性的影响。方法:采用不同浓度的益母草水苏碱(10-4,10-5,10-6mol·L-1)对NE诱导的心肌肥大模型组进行干预,通过大鼠心肌肌浆网的蛋白水平和钙摄取能力来反映益母草水苏碱对NE诱导的新生大鼠心肌细胞肥大的影响。结果:益母草水苏碱能够明显减少心肌细胞蛋白含量,降低Protein/DNA比值;益母草水苏碱可剂量依赖地提高NE诱导的心肌肥大细胞的肌浆网钙摄取和SERCA活性。结论:益母草水苏碱对NE诱导的心肌肥大细胞的肌浆网钙摄取功能有一定的程度的提高,与剂量有一定的依赖关系,随着益母草水苏碱的浓度的提高,肌浆网的钙摄取速率和SERCA活性也明显提高。     

益母草水苏碱对大鼠心肌细胞肥大的肌浆网钙摄取及SERCA活性的影响

目的 :探讨益母草水苏碱(stachydrine,Sta)对去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)诱导的新生大鼠心肌细胞肥大肌浆网钙摄取及SERCA活性的影响。 方法 :采用不同浓度的益母草水苏碱(10^-4,10^-5,10^-6mol/L)对NE诱导的心肌肥大模型组进行干预,通过大鼠心肌肌浆网的蛋白水平和钙摄取能力来反映益母草水苏碱对NE诱导的新生大鼠心肌细胞肥大的影响。 结果: 益母草水苏碱能够明显减少心肌细胞蛋白含量,降低Protein／DNA比值;益母草水苏碱可剂量依赖地提高NE诱导的心肌肥大细胞的肌浆网钙摄取和SERCA活性。 结论: 益母草水苏碱对NE诱导的心肌肥大细胞的肌浆网钙摄取功能有一定的程度的提高,与剂量有一定的依赖关系,随着益母草水苏碱的浓度的提高,肌浆网的钙摄取速率和SERCA活性也明显提高。     

苓桂术甘汤含药血清对脂多糖诱导大鼠心肌细胞IKK/IκB/NF-κB信号通路蛋白表达的影响

目的观察苓桂术甘汤含药血清对脂多糖诱导的大鼠原代心肌细胞IKK/IκB/NF-κB信号通路相关蛋白表达的影响,探讨其保护心肌细胞的分子机制。方法采用差速贴壁法和化学抑制法分离大鼠原代心肌细胞,分别设正常对照组、模型组、正常血清对照组、苓桂术甘汤含药血清(5%、10%、20%)组。通过脂多糖诱导复制心肌细胞损伤模型,检测含药血清预处理后心肌细胞NF-κBp65、IKK-β、IκB-α和p-IκBα蛋白表达,NF-κBp65核移位情况,TNF-α、IL-1β和IL-6的含量变化。结果与正常对照组比较,模型组和正常血清对照组心肌细胞NF-κBp65、p-IκBα和心肌细胞核内NF-κBp65蛋白表达增加(P0.01),心肌细胞IKK-β、IκB-α蛋白表达降低(P0.01),细胞上清液IL-1β、IL-6和TNF-α含量升高(P0.01);与模型组比较,苓桂术甘汤5%、10%、20%浓度含药血清组心肌细胞NF-κBp65、p-IκBα和心肌细胞核内NF-κBp65蛋白表达降低(P0.05),心肌细胞IKK-β、IκB-α蛋白表达增加(P0.05),细胞上清液IL-1β、IL-6和TNF-α含量降低(P0.05),且干预效应与苓桂术甘汤含药血清呈浓度依赖趋势。结论苓桂术甘汤可调节IKK/IκB/NF-κB信号通路相关蛋白表达,干预下游靶分子的转录调控,有效抑制细胞因子的过度激活。     

去甲斑蝥素抗骨髓瘤作用及其机制研究

目的 探讨去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)抗骨髓瘤作用及其相关机制.方法 MTT法检测NCTD对人骨髓瘤细胞株RPMI 8226增殖的抑制作用,并观察其对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting 检测核因子-κB (NF-κB) p65、磷酸化NF-κB p65 (p-NF-κB p65)、NF-κB抑制因子IkBα、磷酸化IkBα(p-IkBα)、IkB激酶α(IKKα)以及Survivin、Bcl-2、Bax蛋白表达水平,分光光度法检测Caspase-3活性,RT-PCR检测NF-κB mRNA表达.结果 NCTD抑制RPMI 8226细胞增殖,促进其凋亡;其剂量为20、40 mg/kg时对荷瘤小鼠的抑瘤率分别为29.8％、53.5％.NCTD抑制胞核NF-κB p65、p-NF-κB p65以及胞浆p-IkBα、IKKα的表达,增加胞浆IkBα的表达,对胞浆NF-κB p65的表达无显著影响.NCTD还抑制Survivin、Bcl-2蛋白的表达,促进Bax的表达和RPMI 8226细胞Caspase-3的活化,Caspase-3抑制剂能部分拮抗NCTD引起的RPMI 8226细胞凋亡(P＜0.05).结论 NCTD对RPMI 8226细胞有抗增殖和促凋亡作用,其机制可能与NF-κB信号通路有关.     

生血合剂干预下免疫介导再障小鼠骨髓核因子κB表达变化

目的:进一步探讨获得性再生障碍性贫血(AA)发病机制及健脾补肾活血方生血合剂治疗AA的疗效机制。方法:以环孢素为对照,免疫介导AA小鼠为研究对象,采用定量PCR(Q-PCR)、免疫组织化学等方法分析生血合剂干预前后AA小鼠骨髓核因子κB(NF-κB)mRNA水平、蛋白表达及活性变化。结果:AA小鼠骨髓单个核细胞NF-κBmRNA水平未见明显改变,与正常对照比无显著差异(P>0.05);骨髓细胞NF-κB/p65蛋白表达较正常组增加,p-IκBα表达明显下降,生血合剂干预后NF-κB/p65蛋白表达减少,而p-IκBα表达明显提高;与之相比,环孢素作用后NF-κB/p65蛋白及p-IκBα均急剧下降。结论:NF-κB蛋白表达异常及活性改变可能参与了免疫介导AA小鼠模型的形成;生血合剂可能通过调节NF-κB的表达及活性发挥改善免疫介导AA小鼠造血功能的作用。     

清肾颗粒对慢性肾衰竭湿热证患者氧化应激介导的NF-κB信号通路活化的影响

目的观察清肾颗粒对慢性肾衰竭(chronic renal failure,CRF)湿热证患者氧化应激介导的NF-κB信号通路的影响,探讨清肾颗粒的作用机制。方法选择60例CRF湿热证患者,按随机数字表法随机分为治疗组和对照组各30例,实际完成57例,对照组28例,治疗组29例,并设正常组20例。治疗组和对照组均给予西医基础治疗,治疗组加用清肾颗粒,每日3次,每次1袋,疗程均为12周。观察患者临床疗效、治疗前后血肌酐(serum creatinine,Scr)、估算肾小球滤过率(estimated glomerular filtration rate,eGFR)以及外周血中活性氧(reactive oxygen species,ROS)、核转录因子-κBp65(nuclear factors-κB,NF-κBp65)、磷酸化NF-κB抑制蛋白(phosphonated inhibitor of nuclear factors-κB,p-IκBα)的蛋白表达情况。结果治疗组临床疗效和中医证候疗效总有效率为89.66%和86.21%,优于对照组的57.14%和53.57%(P0.05)。治疗后治疗组Scr、eGFR的水平均较治疗前改善,且优于对照组(P0.05)。治疗前治疗组与对照组的ROS、NF-κBp65、p-IκBα的表达均高于正常组(P0.01),治疗后治疗组ROS、NF-κBp65、p-IκBα表达均较治疗前降低(P0.01),且低于同期对照组(P0.01)。结论清肾颗粒可以降低CRF湿热证患者外周血中ROS、NF-κBp65、pIκBα的表达,抑制氧化应激介导NF-κB信号通路的活化,进而减轻CRF湿热证患者的临床症状,改善肾功能。     

益母草水苏碱对大鼠心肌细胞肥大的肌浆网钙摄取能力的影响

目的：探讨益母草水苏碱（stachydrine,Sta）对去甲肾上腺素（norepinephrine,NE）诱导的新生大鼠心肌细胞肥大肌浆网钙摄取能力的影响。方法：采用不同浓度的益母草水苏碱（10-4、10-5、10-6mol/L）对NE诱导的心肌肥大模型组进行干预,通过大鼠心肌肌浆网的蛋白水平和钙摄取能力来反映益母草水苏碱对NE诱导的新生大鼠心肌细胞肥大的影响。结果：益母草水苏碱能够明显减少心肌细胞蛋白含量,降低Protein/DNA比值;益母草水苏碱可剂量依赖地提高NE诱导的心肌肥大细胞的肌浆网钙摄取功能。结论：益母草水苏碱对NE诱导的心肌肥大细胞的肌浆网钙摄取功能有一定的程度的提高,与剂量有一定的依赖关系,随着益母草水苏碱的浓度的提高,肌浆网的钙摄取速率也明显提高。     

活性氧参与益母草水苏碱抗AngⅡ诱导心肌细胞肥大的影响

目的利用新生大鼠心肌细胞,观察益母草水苏碱对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌细胞肥大和活性氧（ROS）含量的影响。方法培养新生大鼠心肌细胞,利用AngⅡ诱导心肌细胞肥大,观察不同浓度的益母草水苏碱对细胞肥大的影响（细胞数目、蛋白以及DNA含量）,同时用H2DCFDA荧光探针标记、流式细胞仪检测ROS含量。结果①AngⅡ（10^-6mol／L）使心肌细胞蛋白含量明显增高（P〈0．05）,对细胞数目和DNA含量无影响（P〉0．05）;②10^-7mol／L～10^-4mol／L浓度的益母草水苏碱呈剂量依赖性关系对抗AngⅡ导致的蛋白含量的增高（P〈0．05）;③AngⅡ可诱导心肌细胞内ROS含量增加,加入益母草水苏碱抑制了AngⅡ的这一作用。结论益母草水苏碱可抑制AngⅡ诱导的新生大鼠心肌细胞肥大,抑制ROS含量增加可能是其作用机制之一。     

电针对肥胖胰岛素抵抗大鼠下丘脑TLR4/IκBα/NF-κB信号通路的影响

目的:观察电针对肥胖胰岛素抵抗(OIR)大鼠下丘脑Toll样受体4(TLR4)/核因子κB抑制剂α(IκBα)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响,探讨电针治疗OIR的机制.方法:从42只Wistar雄性大鼠中随机挑选8只作为正常组,剩余大鼠给予高脂饲料喂养8周,建立OIR大鼠模型.将造模成功的16只大鼠随机分为...     

鼻渊舒口服液对兔慢性鼻-鼻窦炎模型鼻窦黏膜上皮NF-κBp65蛋白表达的影响

目的:观察兔慢性鼻-鼻窦炎( chronic rhinosinusitis,CRS)模型鼻窦黏膜上皮核因子-κB(NF-κB) p65蛋白表达的变化及鼻渊舒口服液对其的影响,探索鼻渊舒治疗CRS的可能机制.方法:取新西兰大白兔100只,适应性喂养1周后,随机分为正常组、模型组、假手术组、鼻渊舒组、西药治疗组,每组20只,建立CRS模型;鼻渊舒组、西药治疗组分别给予鼻渊舒口服液ig 4.05 g·kg -1,克拉霉素ig 25 mg· kg -1,共14 d,处死后取鼻窦黏膜组织HE染色光镜观察鼻窦黏膜病理变化,Western blotting法检测鼻窦黏膜上皮细胞胞质及细胞核NF-κB p65蛋白表达.结果:模型组鼻窦黏膜呈慢性炎症表现,黏膜炎细胞浸润,上皮细胞、腺体和杯状细胞明显增生;胞质及细胞核NF-κB p65蛋白表达较正常组显著增高(P＜0.01).经鼻渊舒治疗后鼻窦黏膜上皮修复较好,炎细胞浸润、腺体和杯状细胞增生不明显;胞浆NF-κB p65蛋白表达虽显著低于模型组(P＜0.01),但显著高于正常、假手术及西药组(P＜0.01);胞核NF-κB p65蛋白表达显著低于模型组(P＜0.01),与正常、假手术及西药组比较无显著性差异.结论:NF-κB参与了CRS的发生,鼻渊舒口服液主要通过抑制NF-κB p65向细胞核易位而起治疗作用.     

乳香挥发油及地塞米松对IL-1β介导的兔视网膜色素上皮细胞增殖、凋亡及NF-κB信号通路的影响

目的观察IL-1β对兔视网膜色素上皮细胞增殖的影响,并研究乳香挥发油及地塞米松对IL-1β介导的兔视网膜色素上皮细胞增殖、凋亡及NF-κB信号通路的影响。方法MTT法检测IL-1β(2.5、5、10、15、20、30 g/L)作用兔视网膜色素上皮(RPE)细胞24、48、72 h后对其增殖的影响,以及乳香挥发油(0.15、0.3、0.45、0.6、0.75 mg/mL)、地塞米松(50、100、200、400、600 mg/L)对IL-1β介导的兔RPE细胞增殖的影响。流式细胞仪检测乳香挥发油及地塞米松对IL-1β介导的细胞凋亡的影响。根据MTT检测结果及凋亡率检测结果筛选乳香挥发油及地塞米松低、中、高剂量组。免疫细胞化学染色法观察乳香挥发油对IL-1β作用下兔RPE细胞NF-κBp65、p-IκBα、COX-2蛋白表达的影响。结果与空白对照组比较,除外20、30 g/L IL-1β组24 h,其余IL-1β组24、48、72 h细胞存活率均显著增高(P<0.05,P<0.01),尤以浓度为10 g/L时最为明显;与本组24 h比较,20 g/L IL-1β组48 h及15、20、30 g/L IL-1β组72 h细胞存活率增高(P<0.05,P<0.01),同时30 g/L IL-1β组72 h细胞存活率高于本组48 h(P<0.01)。综合以上,选取浓度为10 g/L的IL-1β进行后续实验。与空白对照组比较,IL-1β对照组及溶媒对照组OD值及细胞存活率增高,早期及晚期凋亡率降低(P<0.01)。与IL-1β对照组比较,乳香挥发油各剂量组及地塞米松各剂量组OD值及细胞存活率降低,早期及晚期凋亡率增高(P<0.05,P<0.01),同时均具有浓度依赖性(P<0.05,P<0.01)。与空白对照组比较,IL-1β对照组NF-κBp65、p-IκBα、COX-2蛋白表达增高(P<0.01)。与IL-1β对照组比较,低、中、高剂量乳香挥发油组及低、中、高剂量地塞米松组NF-κBp65、p-IκBα、COX-2蛋白表达降低(P<0.01)。同时乳香挥发油组及地塞米松组各剂量间存在剂量依赖性(P<0.01)。结论IL-1β可明显促进兔RPE细胞增殖,其中浓度为10 g/L时促增殖作用最为明显;乳香挥发油及地塞米松可显著抑制IL-1β介导的兔RPE细胞增殖;乳香挥发油及地塞米松干预24 h可显著提高IL-1β介导的兔RPE细胞的早期及晚期凋亡率并可有效抑制IL-1β干预后所致的NF-κBp65核转移及p-IκBα、COX-2蛋白表达量增加。     

止麻消痰活血汤治疗大鼠无复流心肌梗死实验研究

目的:探讨止麻消痰活血汤对心肌梗死无复流大鼠的治疗效果.方法:选择健康雄性大鼠60只,随机分为对照组、模型组和止麻消痰活血汤组,各20只.除对照组外,其他两组通过冠状动脉结扎方法建立心肌梗死无复流模型,自造模之日起,对照组和模型组给予生理盐水灌胃,止麻消痰活血汤组给予止麻消痰活血汤干预.造模成功4周后,观察各组心功能情...     

补阳还五汤抗Hcy致动脉硬化作用与调控核因子-κB活性相关性的研究

 目的 探讨补阳还五汤对同型半胱氨酸（homocysteine, Hcy）致动脉粥样硬化（AS）的保护作用与核因子（NF）-κB的关系。方法 给予ApoE^-/-小鼠Hcy(0.1 g·kg^-1)灌胃8周后造成动脉粥样硬化（AS）模型,治疗组给予补阳还五汤（5, 10, 20 g·kg^-1）进行灌胃。8周后 HE染色观察和测量主动脉根部AS斑块面积、血管壁面积,检测主动脉NF-κB活性、活性氧（ROS）含量、I-κBα蛋白表达变化。结果 模型组AS病变明显,与正常对照组相比,主动脉组织中ROS含量显著升高（P<0.01）,I-κBα蛋白表达明显降低,NF-κB活性显著激活;不同剂量的补阳还五汤改善AS病变的同时显著降低血管组织中ROS含量、促进I-κBα蛋白表达升高,抑制NF-κB的活化。结论 补阳还五汤可能通过抑制NF-κB的活化达到抗Hcy所致动脉硬化的作用。     

益气化痰活血方对动脉粥样硬化小鼠主动脉p-NF-κB(p65)、p-IκB表达的影响

目的 探讨益气化痰活血方调脂通脉颗粒对载脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)基因敲除小鼠血脂、主动脉弓粥样硬化斑块、主动脉弓磷酸化核因子 κB(phosphorylated nuclear factor kappa B,p-NF-κB)及腹主动脉p-NF-κB、磷酸化κB抑制蛋白(phosphoryl...     

温阳益心方对心肌缺血再灌注损伤大鼠NIK/IKK/IκB/NF-κB信号转导通路的影响

目的 观察温阳益心方对大鼠心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemic-reperfosion injury,MI/RI)NIK/IKK/IκB/NF-κB信号转导通路的影响.方法 采用随机数字表法将32只SD大鼠随机分为假手术组、MI/RI模型组、温阳益心方组及氟伐他汀组.假手术组、MI/RI模型组大鼠...     

开心胶囊预处理对犬心肺复苏后心肌细胞NF-кB活性的影响

目的:研究开心胶囊预处理对犬心跳骤停复苏后心肌细胞NF-кB活性的影响。方法:选健康杂种犬15只,随机分为假手术组、模型组、开心胶囊组,复制犬心跳骤停复苏模型。在恢复自主循环180min后迅速摘取心脏,提取核蛋白,进行凝胶电泳迁移率变化分析。结果:复苏后模型组心肌细胞NF-кB的活性明显高于假手术组(P<0.05)。与模型组相比,开心胶囊组心肌细胞NF-кB的活性明显下降(P<0.05)。结论:心肺复苏使心肌细胞NF-кB活化增加,开心胶囊预处理抗复苏后心功能不全机制可能是与抑制心肌细胞NF-кB的活化有关。     

基于NF-κB/NLRP3信号通路和肺泡巨噬细胞活化研究肺肠合治法抑制炎症反应治疗急性肺损伤的作用机制

中医肺肠合治法治疗急性肺损伤疗效显著,该研究以体现肺肠合治的麻黄汤和大承气汤联合应用,探究肺肠合治法经核转录因子-κB(nuclear factor kappaB,NF-κB)/NOD样受体家族3(nucleotide binding oligomerization domain-like receptors-3,NL...     

三七对酒精性肝病大鼠肝组织NF-κB、c-Jun表达的影响

 目的 观察三七对酒精性肝病大鼠肝组织NF-κB、c-Jun表达的影响。方法 SD雄性大鼠连续14周给予酒精建立酒精性肝病模型,随机分为模型对照组,三七高、低剂量组和硫普罗宁组,在模型制备同时,每天下午分别灌服给药,连续14周。同时设立正常对照组,连续14周灌胃给水。免疫组化法检测肝组织中NF-κBp65/IκBα、p-IκBα、p-JNK、c-Jun蛋白的表达。结果 模型对照组大鼠肝组织NF-κBp65/IκBα、p-IκBα、p-JNK/c-Jun均较正常对照组明显升高（P<0.01）;三七高、低剂量组大鼠肝组织NF-κBp65/IκBα、p-IκBα、p-JNK/c-Jun表达较模型对照组明显降低（P<0.01,P<0.05）。结论 三七能显著抑制肝组织中NF-κBp65/IκBα、p-JNK/c-Jun的过度表达,这可能是其有效防治酒精性肝病发生发展的重要机制之一。