LAK细胞有效制备方法研究

制备大量的具有显著抗肿瘤活性的ＬＡＫ细胞是确保ＩＬ－２／ＬＡＫ疗法发挥抗肿瘤作用的前提。本文介绍增强ＬＡＫ活性和ＬＡＫ数量的有效的制备方法。如ＩＬ－２的诱导剂量、不同材料（脾细胞、淋巴结细胞、外周血淋巴细胞、胸腺细胞等）的ＬＡＫ产生的时间动力学及多种ＬＡＫ细胞增强剂的协同应用，从而获得高效价和大数量的ＬＡＫ细胞。     

卡介克蟹对人胎胸腺和脾脏细胞LAK活性的调节作用

卡介克蟹是ＢＣＧ的提取物。应用ＭＴＴ法观察了卡介克蟹对人胎儿胸腺和脾脏细胞ＬＡＫ活性的影响，结果显示：人胎胸腺及脾脏细胞经ＩＬ－２诱导后均能产生明显的ＬＡＫ细胞杀伤活性；卡介克蟹能协同增强ＩＬ－２诱导的胸腺及脾脏细胞ＬＡＫ杀伤活性；且卡介克蟹与ＰＨＡ和ＩＬ－２三者联合诱导的ＬＡＫ细胞杀伤活性不仅高于ＰＨＡ和ＩＬ－２和及ＩＬ－２卡介克蟹联合诱导的ＬＡＫ活性，更明显高于仅用ＩＬ－２单独诱导的胸腺和脾细胞ＬＡＫ杀伤活性。提示卡介克蟹可能成为ＬＡＫ治疗中的生物反应调节剂（ＢＲＭ）。     

肺癌常用化疗药物对IL－2诱导LAK细胞活性的影响

选用３Ｈ－ＴｄＲ释放法及掺入法分别检测ＬＡＫ细胞活性、ＬＡＫ细胞增殖功能及９种临床常用肺癌化疗药物对ＬＡＫ细胞抗肿瘤活性的影响。结果显示，不同化疗药物对ＩＬ－２诱导ＬＡＫ细胞活性的影响不同，同种化疗药物不同浓度间的影响也有差异。卡铂（Ｃａｒｂｏ）、足叶乙甙（ＶＰ１６）、５－氟尿嘧啶（５－Ｆｕ）有增强作用；环磷酰胺（ＣＴＸ）、顺铂（ＣＤＤＰ）、长春新碱（ＶＣＲ）、甲氨喋呤（ＭＴＸ）对ＩＬ－２诱导ＬＡＫ细胞活性无明显影响；阿霉素（ＡＤＭ）、丝裂霉素（ＭＭＣ）在较高浓度时，抑制ＬＡＫ细胞活性产生。除ＣＴＸ外的８种药物均显著抑制ＬＡＫ细胞增殖功能。实验表明：常规剂量的化疗不会抑制ＬＡＫ细胞活性的产生，５－Ｆｕ、Ｃａｒｂｏ、ＶＰ１６与ＩＬ－２结合抗癌可望产生协同疗效．ＩＬ－２先于化疗给药并维持至化疗后一定时间，其联合抗癌效果可能更佳。     

成纤维细胞介导的白细胞介素2基因疗法的免疫增强作用及其抗肿瘤效果

为了使白细胞介素２（ＩＬ－２）在体内持续有效地发挥生物学效应，作者探讨了成纤维细胞为介导途径的ＩＬ－２基因疗法以及该疗法在小鼠体内的抗肿瘤作用。将基因转染后、高分泌ＩＬ－２的成纤维细胞（ＮＩＨ３Ｔ３－ＩＬ－２＋）包裹入胶原后移植入小鼠腹腔内，可使小鼠血清中持续性地存在一定水平的ＩＬ－２，并能非常显著地增强小鼠脾细胞的增殖反应、天然杀伤细胞（ＮＫ）活性和淋巴因子激活的杀伤细胞（ＬＡＫ）活性、分泌细胞因子（ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ、ＩＬ－２）的水平，尤其有意义的是诱导出内源性的ＬＡＫ活性。ＮＩＨ３Ｔ３－ＩＬ－２＋腹腔内移植后对腹水型肝癌小鼠有较显著的治疗效果，当与ＬＡＫ细胞腹腔内注射联合应用后，治疗效果更佳，表明成纤维细胞介导的ＩＬ－２基因疗法能通过增强机体的免疫功能发挥显著的抗肿瘤作用，而且当其与ＬＡＫ细胞过继回输合用后抗肿瘤作用更强。     

LAK细胞在单克隆抗体介导下的抗癌作用

探讨增强ＬＡＫ细胞抗肿瘤作用的新方法，用健康人外周血经密度梯度离心法分离出单个核细胞，再加入白细胞介素２（ＩＬ－２）后诱导的ＬＡＫ细胞为效应细胞，采用４－ｈ＾５１Ｃｒ释放法检测了其对胃癌细胞ＫＡＴＯⅢ的杀伤作用及加入有癌单克隆抗体ＭＧｂ２后的影响。结论：利用单抗ＭＧｂ２和ＬＡＫ细胞产生的ＡＤＣＣ效应可以明显增强ＬＡＫ细胞的抗胃癌作用。     

LAK细胞联合复方白细胞介素2疗法及其抗肿瘤治疗

用低剂量ＩＬ－２，同时加入人ＲＢＣ诱导制备同种异体ＬＡＫ细胞，可见ＬＡＫ细胞的增殖明显和杀伤活性显著提高。用自制的复方白细胞介素２及ＬＡＫ细胞组成ＬＡＫ细胞联合复方白细胞介素２（ＬＡＫ／ＩＬ－２Ｃｏ．）过继免疫疗法和联合放疗、化疗的综合疗法，共治疗中、晚期恶性肿瘤１３８例，疗效结果判定，单纯免疫疗法治疗组，无ＣＲ，ＰＲ３０．３％，综合疗法治疗组ＣＲ＋ＰＲ为５８％，且副反应均较轻，本项应用研究结果是安全有效的，能作为抗肿瘤优选的治疗方案     

肿瘤化疗药物对人LAK细胞活性的影响

用四氮唑（ＭＴＴ）法分别检测顺氨氯铂（ＰＤＤ），丝裂霉素－Ｃ（ＭＭＣ）、阿霉素（ＡＭＤ）、氟尿嘧啶（５－Ｆｕ），阿糖胞苷（Ａｒａ－ｃ），长春新碱（ＶＣＲ）对ＩＬ－２诱导人外周血ＬＡＫ细胞活性的影响，及其与ＬＡＫ细胞对胃癌细胞的相加杀伤作用。①ＭＭＣ、ＡＤＭ、５－Ｆｕ、ＶＣＲ对ＩＬ－２诱导ＬＡＫ细胞活性稍有下降，Ａｒａ－Ｃ能抑制ＩＬ－２诱导ＬＡＫ细胞活性，ＰＤＤ对ＩＬ－２诱导ＬＡＫ细胞活性明显提高。     

正常鼠和免疫鼠CD3AK细胞和LAK细胞杀伤活性的比较研究

实验取正常鼠和Ｐ８１５肿瘤细胞致敏的免疫鼠脾细胞，经抗ＣＤ３抗体与低剂量ＩＬ－２或高剂量ＩＬ－２分别诱生为ＣＤ３ＡＫ细胞和ＬＡＫ细胞，用改良的乳酸脱氢酶释放法以Ｐ８１５细胞和ＹＡＣ－１细胞为靶细胞，测定ＣＤ３ＡＫ和ＬＡＫ细胞的杀伤活性。结果表明：正常鼠ＣＤ３ＡＫ细胞对Ｐ８１５细胞的杀伤活性高于ＬＡＫ细胞，对ＹＡＣ－１细胞的杀伤活性低于ＬＡＫ细胞。免疫鼠ＬＡＫ细胞对Ｐ８１５细胞的杀伤活性明显增高，高     

瘤体内注射OK－432和白细胞介素2治疗原发性肝癌的实验研究

本实验分组观测了不同给药方法时，ＯＫ－４３２和白细胞介素２（１Ｌ－２）对荷瘤鼠外周血ＮＫ细胞和ＬＡＫ细胞活性的影响。结果表明：ＯＫ－４３２和ＩＬ－２单独瘤体内注射对ＮＫ和ＬＡＫ细胞活性均有明显增强作用；联合给药时，ＯＫ－４３２和ＩＬ－２可产生明显的协同作用，这种协同作用以先注射ＯＫ－４３２接着注射ＩＬ－２或ＯＫ－４３２、ＩＬ－２同时注射时最强。     

瘤体内注射OK—432和白细胞介素2治疗原发性肝癌的实验研究

本实验分组观察了不同给药方法时，ＯＫ－４３２和白细胞介素２（ＩＬ－２）对荷瘤鼠外周血ＮＫ细胞和ＬＡＫ细胞活性的影响。结果表明：ＯＫ－４３２和ＩＬ－２单独瘤体内注射对ＮＫ和ＬＡＫ细胞活性均有明显增强作用；联合给药时，ＯＫ－４３２和ＩＬ－２可产生明显的协同作用，这种协同作用以先注射ＯＫ－４３２接着注射ＩＬ－２或ＯＫ－４３２、ＩＬ－２同时注射时最强。     

Determination of IL-2 and cytotoxicity of killer cells in MTT colorimetry

Summary The activity of interleukine 2 (IL-2) in culture supernatants of lymphokine-activated killer (LAK) cells and tumor infiltrating lymphocytes (TIL) as well as cytotoxicity of LAK cells on cultured leukemic cells were determined by MTT colorimetry. The results showed that higher activity of IL-2 in culture supernatant of LAK and TIL cells was found it could be used to support the culture of IL-2 dependent cell lines. The significant cytotoxicity of LAK cells on leukemic cell lines could be found in vitro, and it was consistent with the ratio of effector cells to target cells. The number of living leukemic cells is consistently related with the concentration of formazan metabolite of MTT. It suggested that the numbers of living cells and cytotoxicity of LAK cells could be estimated by determination of formazan metabolite OD value.     

体外诱导激活的杀伤细胞对癌细胞的作用

作者用低浓度(200 U/ml)重组人白细胞介素2(γIL-2)体外诱导人外周血淋巴细胞,研究了体外淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)对传代瘤细胞株的杀伤作用机理。倒置显微镜卜观察。LAK细胞可在体外增殖,较一般淋巴细胞体积增大3～7倍,且在培养96 h后,可见分裂象。在LAK细胞与瘤细胞共育时,LAK细胞对瘤细胞有显著的趋向性,首先接近包围瘤细胞,然后裂解为小效应细胞,攻击进入瘤细胞浆内,致其崩溃死亡。     

LAK细胞对肿瘤细胞杀伤作用的形态学研究

本文报道了用人胚胎中期脾脏和胸腺细胞经人重组ＩＬ－２激活而成的ＬＡＫ细胞与正常人淋巴细胞在形态、活性上的区别。并观察了在体外培养条件下ＬＡＫ细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。     

LAK细胞对Hela细胞杀伤作用的初步探讨

IL-2诱导正常人 PBL 后,所产生的 LAK 细胞在体外对 Hcla 细胞的杀伤作用,以90u/ml 的 IL-2诱导 PBL 产生的 LAK 细胞对 Hela 细胞杀伤作用较明显。实验揭示出 LAK 细胞的作用比单独使用 IL-2效果好,而 IL-2与 LAK 细胞的联合作用,其效果更佳。     

A－LAK细胞与LAK细胞体外增殖及抗肿瘤作用的比较

本实验观察了Ａ－ＬＡＫ细胞的体外扩增及其抗肿瘤作用，并与ＬＡＫ细胞进行了比较。结果表明，Ａ－ＬＡＫ细胞在短期内大量扩增，在培养第７天时达到增殖高峰，Ａ－ＬＡＫ细胞增加１２．０２倍，而ＬＡＫ细胞增加２．６９倍，培养３周后Ａ－ＬＡＫ细胞增加５３．５０倍，而ＬＡＫ细胞仅增加４．４５倍。１８小时ＬＤＨ－Ｌ释放试验表明，Ａ－ＬＡＫ细胞对Ａｎｉｐ９７３和Ｋ５６２细胞均显示较高的杀伤活性，与ＬＡＫ细胞相比有显著差异（Ｐ＜０．０５）。通过ＦＡＣＳ细胞表型分析显示，Ａ－ＬＡＫ细胞大量表达ＣＤ１６、ＣＤ５６抗原，提示Ａ－ＬＡＫ细胞可能来源于ＬＧＬ－ＮＫ细胞群。     

IL—2／LAK与放,化疗联合治疗晚期恶性肿瘤

目的：探讨ＩＬ－／ＬＡＫ细胞与放疗和／或化疗联合治疗晚期恶性肿瘤的价值。方法：本组共３０例,其中单纯ＩＬ－２／ＬＡＫ细胞治疗５例（包括２例ＴＩＬ细胞胸腹腔灌注）,ＩＬ－２／ＬＡＫ细胞联合放疗１８例（包括１例动脉灌注）,ＩＬ－２／ＬＡＫ细胞联合化疗４例）包括１例动态灌注）,ＩＫ－２／ＬＡＫ细胞联合放疗和化疗３例。结果：完全缓解率２０．０％（６／３０）,总有效率５０．０％（１５／３９）,其中单纯ＩＬ－     

人癌性腹水渗出淋巴细胞的体外实验性扩增及其LAK活性的诱导

实验及临床研究证明LAK细胞具有抗肿瘤、抗转移作用,且其体内抗肿瘤、抗转移作用与LAK细胞输入的数量、次数及IL-2的投入量有关。目前临床上多采用患者自身外周血分离淋巴细胞在体外诱导LAK细胞,为此需     

胎儿LAK细胞治疗18例晚期恶性肿瘤的疗效观察

以人胎脾、胸腺细胞作为ＬＡＫ前体细胞，建立了一套体外大规模扩增、培养、制备ＬＡＫ细胞的生产流程，制备的ＬＡＫ细胞工艺简单，获取量大、活性高，联合应用ＩＬ－２、ＴＮＦ，治疗晚期恶性肿瘤共１８例。结果表明：多数患者自觉症状有改善，生活质量提高，部分患者肿块缩小，白细胞数升高、外周血免疫功能提高。用同种胎儿ＬＡＫ细胞代替肿瘤患者的自身ＬＡＫ细胞作过继性免疫疗法安全可行，可有效地解决ＬＡＫ前体来源困难的问题。     

CD3AK细胞治疗恶性脑质瘤体外实验

目的：提高人脑胶质瘤过继免疫治疗的效果,探讨治疗脑胶质瘤的新途径。方法：用CD3和rIL-2共同诱导人外周血单个核细胞,诱导、扩增新型抗胶质瘤效应细胞CD3AK细胞,并与LAK细胞在某些生物学方面进行了比较。结果两组效应细胞增曲线均于第6天达高峰,峰值可见,CD3AK细胞＞LAK细胞（P＜0．05）;CD3AK细胞扩增倍数明显高于LAK细胞（P＜0．05）;两组效应细胞于培养的第6、8、10天所测得的杀伤胶质瘤细胞BT325活性可见,CD3AK细胞＞LAK细胞（P＜0．05或P＜0．01）。结论CD3和rIL-2具有协同增强作用,使CD3A细胞成为较LAK细胞增殖能力、杀伤活性更强的免疫效应细胞,且rIL-2用量减少,有胶质瘤的过继免疫治疗打下了理论基础。     

树突状细胞诱导的CTLs与CIK及LAK细胞对神经胶质瘤杀伤作用比较

目的 比较树突状细胞（DCs）诱导的细胞毒性T淋巴细胞（CTLs）、细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK细胞）和淋巴细胞因子激活的杀伤细胞（LAK细胞）对神经胶质瘤的体外杀伤作用。方法 向外周血单个核细胞分别加入不同细胞因子组合,诱导出DCs、CIK细胞和LAK细胞,DCs负载胶质瘤抗原后激活CTLs,MTT法检测对胶质瘤细胞的体外杀伤效应。结果 CTLs对胶质瘤细胞的杀伤作用明显强于CIK细胞和LAK细胞（F=6．42～8．26,q=8．02～10．18,P〈0．01）;CIK细胞对胶质瘤的杀伤作用明显强于LAK细胞（q=8．43～9．24,P〈0．01）。CIK细胞对K562细胞的杀伤作用明显强于LAK细胞和CTLs（F=5．36～7．69,q=7．23～9．56,P〈0．01）,LAK细胞对K562细胞的杀伤作用明显强于CTLs（q=8．83～9．15,P〈0．01）。结论 从人外周血中诱导出的DCs负载胶质瘤抗原后,激活的CTLs在体外对胶质瘤细胞能产生高效而特异的杀伤作用,明显强于CIK细胞和LAK细胞,为临床应用DCs瘤苗奠定基础。