去铁胺激活半胱天冬酶3诱导HL-60凋亡

为了研究铁螯合剂-去铁胺（deferoxamine,DFO）诱导人白血病细胞株HL-60凋亡时半胱天冬酶-3（caspase-3）活性的变化并探讨DFO诱导凋亡的可能机制.HL-60细胞经HE染色,在光学显微镜下观察其形态结构变化,用TUNEL法和流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡,免疫组织化学法检测caspase-3活性,原位杂交法检测凋亡基因bax的转录水平.结果表明,HL-60经去铁胺处理后,典型的细胞形态改变、DNA末端原位标记和FCM检测均证实DFO可诱导细胞凋亡,凋亡率与药物剂量和作用时间呈依赖性.在DFO诱导HL-60凋亡过程中,caspase-3活性明显升高,凋亡基因bax的转录水平均较对照组增高（P＜0.05）.caspase广谱抑制剂Z-AVD可明显降低DFO诱导的细胞凋亡率.结论：DFO通过激活caspase-3和增强bax活性而诱导HL-60凋亡.     

白血病细胞可变铁池的检测及其意义

为了研究细胞可变铁池（1abile iron pool,LIP）的检测方法,用不同浓度的去铁胺（DFO）与K562及HL-60细胞共同培养0、6、12、24、48小时,用钙荧光素（caicein）负荷K562及HL-60细胞,荧光分辨仪检测细胞荧光量;用快速铁螯合剂螯合铁,使恢复荧光,然后计算2次荧光差值.结果表明：浓度为50和100μmol/L的DFO作用于K562及HL-60细胞12小时后,荧光值明显高于对照组（P＜0.05）,且LIP的荧光差值（△LIP）随DFO作用时间的延长及浓度增加而降低,即呈一定的时间及剂量依赖性.结论：DFO通过螯合细胞内铁降低了白血病细胞LIP;calcein AM荧光可作为检测细胞LIP变化的比较可靠的方法.     

丙戊酸诱导白血病HL-60细胞凋亡及其对h-tert基因表达的影响

为了探讨丙戊酸（valproic acid,VPA）对白血病HL-60细胞诱导凋亡的作用及其可能的机制,采用细胞毒性试验（CCK-8法）观察不同浓度VPA在不同作用时间对HL-60细胞增殖的影响,采用荧光显微镜检及流式细胞术检测细胞凋亡,并观察VPA作用后HL-60细胞端粒酶亚单位h-tert基因、凋亡相关蛋白表达和caspase-3活性的变化。结果表明：VPA呈剂量依赖性抑制HL-60细胞增殖（r=-0.87）.,诱导细胞凋亡;同时,抗凋亡蛋白BCL-2表达明显下降,促凋亡蛋白BAX表达上调,caspase-3活性增强,h-tert mRNA表达逐渐下降,HL-60细胞的凋亡率与h-tert mRNA表达呈负相关。结论：VPA可抑制白血病HL-60细胞增殖,诱导细胞凋亡;VPA可能通过下调h-tert mRNA、BCL-2蛋白表达,上调BAX表达及增强caspase-3活性而发挥抗白血病作用。     

TNF相关凋亡诱导配体联合阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡及其机制的研究

本研究探讨人重组可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（hrsTRAIL）单用或联合阿糖胞苷（Ara—C）诱导HL-60细胞凋亡作用及其机制。在体外以人类急性白血病细胞株HL-60为研究对象，分5组进行细胞培养：对照组、Ara—C组、rsTRAIL组、同时给药组（Ara—C＋rsTRAIL）、先后给药组（Ara—C→rsTRAIL）。采用MTT比色法测定细胞生长抑制率；应用Annexin V／PI染色和流式细胞术检测细胞凋亡率；使用流式细胞术检测不同浓度的Ara—C对细胞表面DR5表达水平的影响及rsTRAIL单药组、先后给药组细胞表面DR5表达水平和细胞内caspase-8活性。结果表明：rsTRAIL能抑制HL-60细胞生长并诱导HL-60细胞凋亡。先后给药组诱导HL-60细胞凋亡率大于同时给药组。先后给药组细胞表面DR5表达水平和细胞内caspase-8的活性高于rsTRAIL组。5mg／L、10mg／LAra—C作用于HL-60细胞24小时，其细胞表面DR5表达水平升高，大于对照组。结论：rsTRAIL抑制HL-60细胞生长．诱导HL-60细胞凋亡。Ara—C上调HL-60细胞表面DR5表达水平。增强rsTRAIL诱导HL-60细胞凋亡的作用。Ara—C和rsTRAIL联合用药时，在先加Ara—C、再加rsTRAIL组诱导HL-60细胞凋亡的效果比同时给药组效果好，其机制可能与Ara—C上调细胞表面DIL5表达水平和（或）增强细胞内caspase-8的活性有关。     

手霉素通过线粒体凋亡途径诱导U937和HL-60细胞凋亡

目的 研究法尼酰基转移酶抑制剂手霉素（Manumycin）诱导白血病细胞凋亡的机制。方法 用2μmol／L手霉素处理白血病细胞系U937和HL-60细胞不同时间，用流式细胞术检测细胞凋亡。免疫印迹技术检测细胞色素C、caspase9、caspase8、caspase3的表达。用荧光染料JC-1检测法测定线粒体膜电位（Δψm），并用caspase抑制剂Z—VAD—fmk阻断caspase的活化，探讨caspase在手霉素诱导白血病细胞凋亡中的作用。结果 2μmol／L手霉素处理U937和HL-60细胞16h，Δψm显著下降，相对值分别是0．51±0．07和0．41±0．06（P〈0．01）。手霉素诱导细胞色素C从线粒体释放到细胞质，激活caspase-9、caspase8和caspase-3。50μmol／L的Z—VAD—fmk可完全阻断caspase激活，但仅部分阻断手霉素诱导的U937和HL-60细胞凋亡，细胞凋亡率分别减少51．69％和56．47％。结论 手霉素通过线粒体途径诱导U937和HL-60细胞凋亡。     

细胞色素C对阿糖胞苷诱导白血病细胞凋亡的影响

【目的】探讨细胞色素C（CytC）对小剂量阿糖胞苷（LD-Ara—C）诱导白血病细胞凋亡的影响。【方法】用HL-60白血病细胞株进行传代培养,MTT试验检测Ara—c和Cyt C不同药物浓度对白血病细胞增殖的影响,流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡。【结果】12μg／ml浓度以下的CytC具有促进HL-60细胞增殖的作用,不同浓度的CytC干预后HL-60细胞凋亡率均低于干预前（P〈0．01）。联合应用CytC和LD-Ara—C,HL-60细胞凋亡率明显高于单用LD-Ara—C组（P〈0．01）。【结论】外源性CytC在12μg／ml浓度以下时仅能促进白血病细胞增殖,联合应用CytC和LD-Ara—C可增强LD-Ara—C诱导白血病细胞凋亡的作用。     

脐带间充质干细胞降低HL-60对阿糖胞苷的敏感性

本研究探讨脐带间充质干细胞（hUC-MSC）对HL-60白血病细胞药物治疗敏感性的影响,为研究hUC-MSC对白血病细胞的调节作用提供资料。体外建立HL-60细胞与hUC-MSC的transwell及直接接触共培养体系;使用流式细胞仪检测阿糖胞苷对HL-60细胞凋亡的影响,并检测与hUC-MSC共培养对HL-60细胞细胞周期的影响;应用RT-PCR和Western blot检测Caspase 3 mRNA和蛋白表达变化;通过transwell共培养体系观察hUC-MSC对HL-60细胞凋亡影响的作用机制。结果表明,与hUC-MSC共培养可以显著减少阿糖胞苷诱导的HL-60细胞凋亡（P〈0.05）;hUC-MSC可以将HL-60细胞阻滞于G0/G1期,阻止其进入S期（P〈0.05）;与hUC-MSC共培养可以降低HL-60细胞中Caspase 3 mRNA和蛋白水平的表达（P〈0.05）;transwell体系中hUC-MSC同样可以减少阿糖胞苷诱导的HL-60细胞的凋亡（P〈0.05）。结论：hUC-MSC通过分泌可溶性细胞因子减少阿糖胞苷诱导的HL-60细胞凋亡,其机制可能与通过调节HL-60细胞周期及下调Caspase 3表达有关。     

塞来西布对HL-60细胞增殖、凋亡及表达VEGF影响的体外研究

目的研究塞来西布（Celecoxib）对急性髓系细胞白血病（AML）HL-60细胞的增殖抑制、诱导凋亡作用及其机制。方法以不同浓度的Celecoxib作用于体外培养的HL-60细胞,用MTT法检测细胞生长抑制率;用流式细胞仪分析凋亡细胞的百分率和细胞周期变化;QRT—PCR法检测VEGF表达水平。结果Celeeoxib以浓度依赖性方式有效地抑制HL-60细胞增殖,Celecoxib增加G0／G1期HL-60细胞百分率,降低S、G2期HL-60细胞百分率;Celecoxib能以浓度依赖性方式诱导HL-60细胞凋亡。当Celecoxib浓度大于40μmol／L时,随着Celecoxib浓度增高,HL-60细胞VEGF-mRNA的表达逐渐降低,呈浓度依赖性变化。结论Celecoxib对HL-60细胞具有显著的增殖抑制和诱导凋亡作用,增殖抑制可能在于阻断了细胞周期的进行,降低VEGF活性可能是其诱导凋亡重要作用机制之一。     

Mcl-1和Bax基因在2-甲氧基雌二醇诱导骨髓增生异常综合征细胞凋亡中的调控作用

本研究探讨bcl-2基因家族成员调控2-甲氧基雌二醇（2-ME）诱导骨髓增生异常综合征（MDS）细胞凋亡的机制。用2一ME预处理MUTZ—1细胞,荧光比色法检测凋亡信号蛋白半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）活性,用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测凋亡相关基因-髓细胞白血病基因-1（mcl-1）和bcl-2相关X蛋白（bax）mRNA的表达。结果表明：与对照组相比,2-ME增强MUTZ-1细胞内caspase-3活性,并呈浓度和时间依赖性（P〈0．05）;随着2-ME浓度的增加,细胞内mcl—1mRNA表达下降（P〈0．05）,且mcl-1mRNA表达量与相应时间点caspase-3活性呈负相关（r=-0．992,P〈0．01）,而baxmRNA表达没有明显变化（P〉0．05）。结论：2-ME可能通过下调mcl-1表达和增强caspase-3活性的途径来调控MDs细胞凋亡。     

TGF-β1诱导HL-60细胞凋亡后Smads蛋白的变化

【目的】探讨转化生长因子（TGF-β1）诱导HL-60细胞凋亡后Smads蛋白的变化。【方法】用不同浓度的TGF-131处理HL-60细胞,采用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR方法检测Smads蛋白。【结果ITGF-β1对HL-60细胞有增殖抑制作用,其抑制效应呈时间及剂量依赖性,10．4ng／mL TGF-β1增殖抑制作用较为明显;在细胞凋亡过程中,Smad3、Smad7表达呈逐渐升高趋势（P〈0．05）,而Smad2、Smad4则无明显变化。【结论】TGF-β1可抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡,且呈时间、剂量依赖性;Smad3、Smad7可能参与TGF-β1诱导HL-60细胞凋亡过程,其变化与HL-60细胞凋亡密切相关。     

大黄素抑制HL-60/ADR耐药细胞增殖和诱导凋亡的作用

本研究探讨中药大黄素(emodin)对人白血病耐药细胞株HL-60/ADR的增殖、凋亡影响及其相应的可能作用机制。采用MTT法绘制细胞生长曲线;集落培养法观察大黄素对HL-60/ADR克隆形成的影响;细胞周期分析、线粒体跨膜电位检测、Caspase-3酶活性检测、Annexin V FITC/PI法、TdT酶介导的原位缺口末端标记法(TUNEL)分析凋亡细胞;RT-PCR及Western blot法检测大黄素作用后不同时间段bcl-2、c-myc mRNA及Bcl-2、c-Myc、Caspase-3前体蛋白表达水平的变化。结果表明,大黄素对HL-60/ADR细胞增殖具有明显的抑制作用,呈时间和浓度依赖性。较低浓度大黄素即可抑制HL-60/ADR细胞集落形成,IC50值为5.79μmol/L。细胞周期分析显示,与对照组比较,40、80μmol/L浓度组细胞被阻滞于G0/G1期比率明显增高(p<0.01),G2/M期细胞比率降低(p<0.01),而20μmol/L浓度组细胞周期改变差异不具有显著性(p>0.05),各浓度组均检测到典型的亚二倍体峰(凋亡峰)。大黄素作用12小时HL-60/ADR细胞线粒体跨膜电位降低,Annexin V FITC/PI法检测到早期凋亡细胞,作用24小时caspase-3酶活性显著升高,作用48小时TUNEL法检测到晚期凋亡细胞,细胞凋亡率呈药物浓度依赖性。大黄素作用HL-60/ADR细胞不同时间段,bcl-2、c-myc mRNA和Bcl-2、c-Myc、Caspase-3前体蛋白表达水平均有不同程度下调,并呈时间依赖性。结论:大黄素能够有效抑制HL-60/ADR细胞增殖,并诱导其凋亡,bcl-2、c-myc表达水平下调,线粒体跨膜电位水平降低和caspase-3激活可能参与了该过程。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对白血病HL-60细胞的体外增殖抑制作用及机制的探讨

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂匹格列酮（PGZ）对白血病HL-60细胞的体外增殖抑制作用及其作用机制。方法以不同浓度的PGZ（20～80μmol/L）作用于体外培养的HL-60细胞24h、48h及72h,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术（FCM）检测细胞周期及细胞凋亡。应用RT-PCR及免疫印迹法（Westernblot）检测药物作用后PPARγ、Caspase-3及其裂解底物多聚（ADP-核糖）聚合酶（PARP）表达水平的变化。结果 PGZ可显著抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,呈现出明显的量-效与时-效关系。FCM检测结果表明,细胞主要被阻滞在G0/G1期,60μmol/L的PGZ作用48h后可以出现典型的亚G1期峰（细胞凋亡峰）,PGZ在诱导细胞凋亡的同时,PPARγmRNA及蛋白的表达水平均逐渐升高。RT-PCR表明,Caspase-3酶原及其作用底物PARP表达水平逐渐降低,Westernblot结果显示32kD的Caspase-3酶原被活化出现17kD亚单位片段,同时Caspase-3的底物PARP被裂解出现89kD的亚单位片段。结论 PGZ在体外对HL-60细胞具有显著的细胞周期阻滞作用,并诱导细胞发生调亡。通过依赖PPARγ信号途径以及激活Caspase-3可能是PGZ抑制细胞增殖及诱导细胞发生凋亡的重要作用机制之一。     

去铁胺对白血病细胞K562/A02的影响及机制研究

本研究旨在探讨铁螯合剂去铁胺对人白血病耐阿霉素细胞K562/A02的影响及其作用机制。采用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测不同浓度去铁胺作用48小时对K562/A02细胞增殖的抑制效应;流式细胞术检测去铁胺25、50、100和200μmol/L作用K562/A02细胞48小时后细胞的凋亡率;半定量RT-PCR检测各组细胞凋亡基因BAX、BCL-2以及多药耐药基因1(MDR1)mRNA表达变化;Western blot检测各组细胞P-糖蛋白(P-gp)表达变化。结果显示,随着去铁胺药物浓度的增加,细胞活力逐渐下降,凋亡率明显增加,呈剂量依赖性;随着去铁胺浓度增加,BAX表达水平逐渐升高,但MDR1 mRNA与P-gp的表达受到显著抑制。结论:去铁胺可以通过螯合细胞内铁,影响细胞DNA的合成;同时去铁胺可抑制阿霉素诱导的MDR1、P-gp表达,增加白血病细胞对化疗药物的敏感性,进而诱导凋亡。     

硼替佐米增加HL-60细胞对TRAIL的敏感性

本研究旨在探讨硼替佐米（bortezomib）是否可以增加HL-60细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TNF—related apoptosis—inducing ligand,TRAIL）的敏感性及其可能的作用机制。选择亚细胞毒浓度的硼替佐米与不同浓度的TRAIL联合处理HL-60细胞,用MTT法检测并绘制增殖抑制曲线．用Annexinv／PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测caspase-8的表达。结果表明,亚细胞毒浓度的硼替佐米与10ng／ml的TRAIL联合作用于HL-60细胞时细胞凋亡率较单独应用TRAIL时增加,相应的caspase-8的表达也随之增加。结论：亚细胞毒浓度的硼替佐米可以增加HL-60细胞对TRAIL的敏感性,其机制可能与促进caspase-8表达有关。     

VPA增强ORI诱导HL-60细胞凋亡及机制研究

目的：探讨VPA与冬凌草甲素（oridonin,ORI）联合诱导HL-60细凋亡的作用及其机制。方法：CCK-8法选取ORI和VPA最佳协同作用剂量;VPA和ORI单独或联合作用于HL-60细胞后,Hoechst33342染色后荧光显微镜下观察细胞核形态学变化;Western blot检测凋亡相关基因caspase-3剪切片段的蛋白表达;预先加入或不加入caspase抑制剂处理HL-60细胞,采用Annexin V／PI流式试剂盒检测两药联合后细胞凋亡的变化。结果：Hoechst33342染色后荧光显微镜下,ORI＋VPA组比单独用药纽核碎裂数目明显增多;ORI和VPA单独作用组caspase-3活性片段表达较对照组高但均不如ORI＋VPA组明显;ORI＋VPA组细胞凋亡率（16．7±2．0）％。与对照组（1．2±1．5）％相比,具有显著差异（P〈0．05）;预先加入caspase抑制剂组细胞几乎没有凋亡,与对照组相比,不具有显著差异（P〉0．05）。结论：VPA确实能增强冬凌草甲素诱导HL-60细胞凋亡,且凋亡机制与caspase凋亡通路密切相关。     

和厚朴酚对HL-60细胞增殖抑制作用及其相关机制研究

本研究旨在探讨和厚朴酚（honokiol,HNK）对急性髓系白血病细胞HL-60增殖和凋亡的影响及其作用机制。MTT法检测HNK对HL-60细胞增殖抑制作用。流式细胞术检测细胞周期变化。Annexin V/PI法检测细胞凋亡情况。Western blot检测细胞周期蛋白（cyclins）、细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）、P53、P21、P27、BCL-2、BCLXL、BAX、caspase-3、-9、M APK信号通路蛋白。结果表明：HNK能够抑制HL-60细胞增殖,呈时间剂量依赖性。HNK阻滞HL-60细胞于G0/G1期,S期细胞显著减少（P〈0.05）。HNK作用HL-60细胞24 h后,cyclin D1、cyclin A、cyclin E、CDK2、4、6表达显著下调（P〈0.05）,P53、P21表达显著上调（P〈0.05）。HNK作用24 h后HL-60细胞凋亡增加,活化的caspase-3、-9表达显著增加;BCL-2和BCL-XL表达下调,而BAX表达上调。MAPK亚族P38、JNK表达无明显变化;而M EK1/2-ERK1/2的表达显著下调（P〈0.05）。结论：HNK通过干预M EK1/2-ERK1/2信号通路阻滞HL-60细胞于G0/G1期并诱导HL-60细胞凋亡。