去铁胺激活半胱天冬酶3诱导HL-60凋亡

为了研究铁螯合剂-去铁胺（deferoxamine,DFO）诱导人白血病细胞株HL-60凋亡时半胱天冬酶-3（caspase-3）活性的变化并探讨DFO诱导凋亡的可能机制.HL-60细胞经HE染色,在光学显微镜下观察其形态结构变化,用TUNEL法和流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡,免疫组织化学法检测caspase-3活性,原位杂交法检测凋亡基因bax的转录水平.结果表明,HL-60经去铁胺处理后,典型的细胞形态改变、DNA末端原位标记和FCM检测均证实DFO可诱导细胞凋亡,凋亡率与药物剂量和作用时间呈依赖性.在DFO诱导HL-60凋亡过程中,caspase-3活性明显升高,凋亡基因bax的转录水平均较对照组增高（P＜0.05）.caspase广谱抑制剂Z-AVD可明显降低DFO诱导的细胞凋亡率.结论：DFO通过激活caspase-3和增强bax活性而诱导HL-60凋亡.     

HL-60细胞IRP2 mRNA、TfR mRNA、Fn mRNA的表达关系研究

为了探讨白血病细胞铁代谢及其调节机制，以及铁调节蛋白2（IRP2）在HL-60细胞铁代谢中的作用，将FeCl3或去铁胺（desferrioxamine，DFO）加入含有10％胎牛血清的RPMl1640培养液中，使HL-60细胞处于缺铁或富铁的不同状态下进行培养。分别于细胞培养后第12、24和48小时收集细胞，提取总RNA，采用RT-PCR半定量法测定IRP，mRNA、铁蛋白（Fn）mRNA和转铁蛋白受体（TfR）mRNA等指标的相对表达量。结果表明：①各实验组之间IRP2 mRNA的表达量变化不大，组间差异无统计学意义（F组间=1．199，P〉0．05）；而细胞培养时间对IRP2 mRNA的表达有影响，组内差异有统计学意义（F组内=43．418，P〈0．01），表现为随时间的延长，IRP2 mRNA的表达降低。②各实验组之间TfR mRNA的表达差异有统计学意义（F组内=7．184，F组间=113．926，P〈0.01）。在加入DFO的两个实验组中，TfR mRNA的表达升高。在加铁的两个实验组中，与对照组相比较，于12小时时TfR mRNA的表达量上升，24小时时达到高峰，之后迅速下降。③在加铁的两个实验组中，Fn mRNA的表达量较高，大约是对照组的2倍，它们与对照组比较，差异具有统计学意义（P〈0．05）；而在加入DFO的两个实验组中Fn mRNA的表达与对照组相比较，无明显的差异（P〉0．05）。④IRP，mRNA与TfR mRNA及Fn mRNA的表达均不相关（r=-0．005，r=0．074，P〉0．05）。结论：①IRP2在转录水平上可能是通过自身不同片段的量的变化，而在转录后水平上是以氧化修饰的方式通过自身降解，对HL-60细胞的铁代谢进行调节。②Fn mRNA和TfR mRNA不同程度地参与了对HL-60细胞内铁的调控过程。     

白血病细胞可变铁池的检测及其意义

为了研究细胞可变铁池（1abile iron pool,LIP）的检测方法,用不同浓度的去铁胺（DFO）与K562及HL-60细胞共同培养0、6、12、24、48小时,用钙荧光素（caicein）负荷K562及HL-60细胞,荧光分辨仪检测细胞荧光量;用快速铁螯合剂螯合铁,使恢复荧光,然后计算2次荧光差值.结果表明：浓度为50和100μmol/L的DFO作用于K562及HL-60细胞12小时后,荧光值明显高于对照组（P＜0.05）,且LIP的荧光差值（△LIP）随DFO作用时间的延长及浓度增加而降低,即呈一定的时间及剂量依赖性.结论：DFO通过螯合细胞内铁降低了白血病细胞LIP;calcein AM荧光可作为检测细胞LIP变化的比较可靠的方法.     

阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡时线粒体膜电位变化

为研究阿糖胞苷(Ara-C)诱导HL-60细胞凋亡时线粒体膜电位(△Ψm)的变化及相互关系,采用Rhodamine123染色及流式细胞术检测HL-60细胞线粒体膜电位变化;流式细胞仪、AO/EB染色检测HL-60细胞凋亡.结果显示Ara-C作用于HL-60细胞6小时时出现细胞线粒体膜电位下降,当Ara-C浓度为0.05 mg/ml作用6、12、24小时时HL-60细胞线粒体中Rhodamine123荧光强度分别为117.9±7.6,100.9±7.7,87.6±10.7,不同时间荧光强度差异有显著性(p＜0.05);当Ara-C浓度为0.1 mg/ml作用6、12、24小时时HL-60细胞线粒体中Rhodamine123荧光强度分别为111.9±10.1,86.6±9.2,68.4±12.2,不同时间差异有显著性(p＜0.05);不同浓度组在12、24小时时比较有显著性差异(p＜0.05).当Ara-C浓度为0.05 mg/ml作用6、12、24小时时HL-60细胞凋亡率分别为(41.2±3.0)%,(53.7±5.1)%,(65.8±2.6)%,不同时间差异有显著性(p＜0.01);当Ara-C浓度为0.1 mg/ml作用6、12、24小时时HL-60细胞凋亡率分别为(45.7±4.1)%,(58.2±4.3)%,(70.1±2.3)%,不同时间差异有显著性(p＜0.01);不同浓度Ara-C在相同时间凋亡率无差别.HL-60细胞线粒体膜电位变化与其凋亡率呈高度负相关,当Ara-C浓度为0.05 mg/ml时,r=-0.89,p＜0.01;当Ara-C浓度为0.1 mg/ml时,r=-0.76,p＜0.01.结论阿糖胞苷在诱导HL-60细胞凋亡时伴有线粒体膜电位下降,两者呈显著负相关.线粒体膜电位下降可能是阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡的重要机制之一.     

丙戊酸诱导白血病HL-60细胞凋亡及其对h-tert基因表达的影响

为了探讨丙戊酸（valproic acid,VPA）对白血病HL-60细胞诱导凋亡的作用及其可能的机制,采用细胞毒性试验（CCK-8法）观察不同浓度VPA在不同作用时间对HL-60细胞增殖的影响,采用荧光显微镜检及流式细胞术检测细胞凋亡,并观察VPA作用后HL-60细胞端粒酶亚单位h-tert基因、凋亡相关蛋白表达和caspase-3活性的变化。结果表明：VPA呈剂量依赖性抑制HL-60细胞增殖（r=-0.87）.,诱导细胞凋亡;同时,抗凋亡蛋白BCL-2表达明显下降,促凋亡蛋白BAX表达上调,caspase-3活性增强,h-tert mRNA表达逐渐下降,HL-60细胞的凋亡率与h-tert mRNA表达呈负相关。结论：VPA可抑制白血病HL-60细胞增殖,诱导细胞凋亡;VPA可能通过下调h-tert mRNA、BCL-2蛋白表达,上调BAX表达及增强caspase-3活性而发挥抗白血病作用。     

七叶皂苷诱导HL-60细胞凋亡的研究

本研究观察七叶皂苷对髓系白血病HL-60细胞的抑制和诱导凋亡作用。取对数期生长的HL-60细胞经饥饿处理后，加入不同浓度的七叶皂苷观察七叶皂苷抑制细胞生长的指数、形态学变化，用DNA片段凝胶电泳（DNALadder）和Annexin V／PI—FITC双标法分析诱导细胞凋亡的作用。结果表明：七叶皂苷抑制HL-60细胞生长．15—120mg／L的七叶皂苷处理细胞48小时后，存活率为（92．2±0．69）％-（8．2±0．96）％，均明显低于不加药的对照组（99．4±0．31）％（P均〈0．05）；七叶皂苷15—60mg／L处理细胞24小时后细胞发生凋亡。Annexin V／PI分析显示，给药组Annexin V阳性细胞为（12．7±0．58）％-（65．4±1．30）％，明显高于对照组的（0．57±0．03）％（P均〈0．01）。七叶皂苷处理的细胞DNA琼脂糖凝胶电泳显示典形的凋亡DNA梯形条带。结论：七叶皂苷能特异性地诱导HL-60细胞凋亡，此研究结果为七叶皂苷今后作为治疗白血病的辅助药物提供实验依据。     

去铁胺单独及联合三氧化二砷对裸鼠HL-60细胞移植瘤的抑制作用及其可能机制

目的 探讨去铁胺(DFO)单独及联合三氧化二砷(As2O3)对裸鼠HL-60白血病细胞移植瘤的抑制作用及机制,为临床采用铁螯合剂治疗或辅助治疗白血病提供实验依据.方法 用高致瘤性HL-60细胞建立裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为4组:50 mg/kg DFO单药组、3 mg/kg As2O3单药组、联合用药组(50 mg/...     

TGF-β1诱导HL-60细胞凋亡后Smads蛋白的变化

【目的】探讨转化生长因子（TGF-β1）诱导HL-60细胞凋亡后Smads蛋白的变化。【方法】用不同浓度的TGF-131处理HL-60细胞,采用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR方法检测Smads蛋白。【结果ITGF-β1对HL-60细胞有增殖抑制作用,其抑制效应呈时间及剂量依赖性,10．4ng／mL TGF-β1增殖抑制作用较为明显;在细胞凋亡过程中,Smad3、Smad7表达呈逐渐升高趋势（P〈0．05）,而Smad2、Smad4则无明显变化。【结论】TGF-β1可抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡,且呈时间、剂量依赖性;Smad3、Smad7可能参与TGF-β1诱导HL-60细胞凋亡过程,其变化与HL-60细胞凋亡密切相关。     

检测白血病细胞凋亡的二苯胺法

现有细胞凋亡的定量方法操作复杂且需贵重试剂或仪器。定性方法又难以精细研究细胞凋亡这一现象。我们参照Mangan等［1］的方法，建立一种以二苯胺(DPA)法测定DNA片段率来分析细胞凋亡的简单方法，并以此方法分析白血病细胞株HL-60受抗癌药物鬼臼乙叉甙(Etoposide)诱导时的凋亡情况。 材料和方法 一、细胞 HL-60细胞株(本院血液病研究室提供)，常规RPMI 1640培养基(Gbico产品)培养，隔天换液，实验选用对数生长期的细胞，将细胞浓度调整至106/ml，加入以二甲基亚砜(DMSO)溶解的鬼臼乙叉甙(Sigma产品)，最终浓度分别为0、5、10、20、40 μg/ml，作用3.5 h，用PBS(pH 7.2，不含Ca2＋、Mg2＋，下同)洗涤收获细胞。     

一氧化氮供体诱导HL-60细胞凋亡过程中活性氧自由基和抗氧化能力的变化

为了研究外源性一氧化氮（NO）供体硝普钠（SNP）诱导HL-60细胞凋亡过程中活性氧自由基和抗氧化能力的变化，将HL-60细胞与SNP在体外培养，用MTT法观察NO对细胞的抑制作用；用透射电子显微镜和光学显微镜观察细胞结构的变化；用DNA凝胶电泳、细胞DNA含量、Annexin-V／PI法等分析细胞凋亡；用双氢罗丹明123（DHR）标记、流式细胞仪检测细胞内活性氧（ROS），并同时测定细胞内谷胱甘肽（GSH）和3种抗氧化酶的活性。结果表明：SNP能抑制HL-60细胞生长，典型的细胞形态改变、DNA片段化、亚二倍体峰比例增加、DNA末端标记和Annexin-V^＋／PI^-表达增加等证实NO能诱导白血病细胞凋亡，且两者之间有明显的量效和时效关系。在此过程中，细胞内ROS水平增加，细胞内谷胱甘肽和过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽S转移酶（GST）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）活性降低。ROS含量和CAT、GST、GPX活性与SNP之间也有明显的量效关系。结论：细胞内活性氧自由基增加和抗氧化能力下降在外源性一氧化氮供体诱导HL-60细胞凋亡中发挥了重要作用。     

青蒿琥酯诱导HL-60细胞凋亡的研究

本研究旨在研究青蒿琥酯体外诱导HL-60细胞凋亡及其过程中Bcl-2与ICAD蛋白表达的变化。采用MTT法测定青蒿琥酯对HL-60细胞的生长抑制作用;用光学显微镜检、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术观察和检测青蒿琥酯诱导HL-60细胞的凋亡;应用蛋白印迹法检测青蒿琥酯诱导HL-60细胞凋亡过程中Bcl-2与ICAD的表达变化情况。结果表明：青蒿琥酯对HL-60细胞有明显的生长抑制作用,并呈时间、剂量依赖性。48小时IC50值为18.33μg/ml,其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关;Bcl-2和ICAD在HL-60细胞中均有表达,且随药物浓度的增高表达量逐渐降低。结论：青蒿琥酯可诱导HL-60细胞凋亡,Bcl-2和ICAD在青蒿琥酯诱导HL-60细胞凋亡的信号传导途径中可能是重要的调控因子。     

Induction of caspase-3-dependent apoptosis in human leukemia HL-60 cells by paclitaxel

BACKGROUND: Paclitaxel, an antineoplastic drug, inhibits cell growth and cell cycle progression and induces apoptosis in human leukemia HL-60 cells. Caspase-3 plays a direct role in proteolytic cleavage of cellular proteins responsible for progression to apoptosis. METHODS: We examined the cell morphology and apoptosis in HL-60 cells after exposure to paclitaxel and measured caspase-3 activities with or without z-VAD-fmk (a broad-spectrum caspase inhibitor) pretreatment by flow cytometric analysis and Western blotting. RESULTS: Together, our results were (1) paclitaxel mainly induced G2/M cell cycle arrest in HL-60 cells (p<0.001); (2) time (p<0.001)- and dose-dependent (p<0.001) apoptosis of HL-60 cells was induced by paclitaxel; (3) in HL-60 cells, z-VAD-fmk blocked paclitaxel-induced apoptosis (12 h: p<0.001; 24 h: p<0.01; 48 h: p<0.01; 72 h: p<0.001) and caspase-3 activation (12 h: p<0.05; 24 h: p<0.01; 48 h: p<0.01; 72 h: p<0.01). CONCLUSIONS: These results suggest that paclitaxel can induce G2/M cell cycle transition and apoptosis via caspase-3 activity in HL-60 cells.     

bcl-2在HL-60细胞分化和凋亡过程中的表达

细胞凋亡抑制基因bcl-2在髓系造血细胞中的表达与细胞分化程度有关。本研究证实全反式维甲酸(ATRA)可诱导HL-60细胞凋亡。流式细胞仪分析表明,在HL-60细胞分化凋亡过程中bcl-2表达逐渐下降,凋亡细胞bcl-2表达水平较低,而未凋亡细胞bcl-2仍维持在高水平。上述结果提示:经ATRA诱导分化成熟的HL-60细胞与正常粒细胞相似,最终走向凋亡;bcl-2表达降低可能对终末分化细胞凋亡有易化作用;未凋亡细胞bcl-2高表达可能是肿瘤细胞耐药和白血病复发的重要因素。     

重组荞麦胰蛋白酶抑制剂对HL-60细胞的促凋亡作用

为了研究基因重组荞麦胰蛋白酶抑制剂诱导HL-60细胞凋亡的作用并探讨其抗癌作用机理,用不同浓度的重组荞麦胰蛋白酶抑制剂体外作用于HL-60细胞,采用MTT比色法检测其对HL-60细胞的抑制率,应用光学显微镜观察细胞核的形态学变化,用DNA凝胶电泳法检测HL-60细胞的凋亡,用流式细胞术检测该抑制剂作用于HL-60细胞后引起的凋亡现象。结果表明：重组荞麦胰蛋白酶抑制剂对HL-60细胞的生长具有明显的抑制作用,且随着蛋白质浓度的增加对HL-60细胞生长抑制愈加明显,而对正常人外周血单个核细胞（PBMNC）无作用;荧光显微镜下观察发现经该蛋白作用后HL-60细胞核的形态呈现凋亡特征;流式细胞术分析表明,HL-60细胞经100μg/ml重组荞麦胰蛋白酶抑制剂作用后,凋亡率达到52％;琼脂糖凝胶电泳显示细胞DNA呈梯状降解。结论：重组荞麦胰蛋白酶抑制剂在体外能够明显抑制HL-60细胞的增长,并诱导细胞凋亡,这为重组荞麦胰蛋白酶抑制剂应用于急性髓细胞性白血病的治疗提供依据,也为重组基因工程植物蛋白药物的临床应用提供新思路。     

正常人骨髓基质细胞对HL-60和HL-60/VCR 细胞凋亡易感性的影响

为了观察正常人骨髓成纤维样基质细胞系HFCL对白血病敏感细胞HL-60和多药耐药细胞HL-60／VCR凋亡易感性的影响，先建立HL-60或HL-60／VCR细胞与HFCL细胞共培养体系；采用瑞氏-吉姆萨染色和吖啶橙／溴化乙啶(AO／EB)染色，分别在光镜和荧光显微镜下进行形态学观察；TUNEL检测晚期凋亡细胞，流式细胞术检测细胞周期、凋亡峰和annexin V阳性的早期凋亡细胞；Western blot检测Bcl-2、活化的胱冬蛋白酶(caspase)-3蛋白和P糖蛋白(Pgp)的表达变化。结果表明，经topotecan(TPT)处理后的HL-60和HL-60／VCR细胞，在光镜和荧光显微镜下均有典型的凋亡细胞形态学改变，这些改变具有时间和剂量依赖性；annexin V染色后能检测到早期凋亡细胞；细胞周期显示：G1期细胞比例增高，S期减低，并有明显凋亡峰；TUNEL能检测到许多阳性细胞；同时出现活化的caspase-3，伴有Bcl-2的表达下调，但与HFCL细胞共培养后，经TPT处理的HL-60和HL-60／VCR细胞中早期和晚期凋亡细胞有所减少，凋亡峰减低，而且活化的Caspase-3表达减弱，Bcl-2蛋白表达上调，且以直接接触组为甚。结论：正常骨髓成纤维样基质细胞HFCL能轻度降低白血病HL-60和HL-60／VCR细胞对TPT的凋亡易感性，并有caspase-3和Bcl-2重要信号传导分子的参与。     

和厚朴酚对HL-60细胞增殖抑制作用及其相关机制研究

本研究旨在探讨和厚朴酚（honokiol,HNK）对急性髓系白血病细胞HL-60增殖和凋亡的影响及其作用机制。MTT法检测HNK对HL-60细胞增殖抑制作用。流式细胞术检测细胞周期变化。Annexin V/PI法检测细胞凋亡情况。Western blot检测细胞周期蛋白（cyclins）、细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）、P53、P21、P27、BCL-2、BCLXL、BAX、caspase-3、-9、M APK信号通路蛋白。结果表明：HNK能够抑制HL-60细胞增殖,呈时间剂量依赖性。HNK阻滞HL-60细胞于G0/G1期,S期细胞显著减少（P〈0.05）。HNK作用HL-60细胞24 h后,cyclin D1、cyclin A、cyclin E、CDK2、4、6表达显著下调（P〈0.05）,P53、P21表达显著上调（P〈0.05）。HNK作用24 h后HL-60细胞凋亡增加,活化的caspase-3、-9表达显著增加;BCL-2和BCL-XL表达下调,而BAX表达上调。MAPK亚族P38、JNK表达无明显变化;而M EK1/2-ERK1/2的表达显著下调（P〈0.05）。结论：HNK通过干预M EK1/2-ERK1/2信号通路阻滞HL-60细胞于G0/G1期并诱导HL-60细胞凋亡。     

曲古菌素A对HL-60细胞组蛋白乙酰化水平和凋亡的作用

本研究旨在探讨曲古菌素A(trichostatinA ,TSA)高效低毒的抗癌机理。应用细胞培养、MTT法 ,免疫细胞化学技术和Annexin V FITC PI双标流式细胞术观察TSA对HL 6 0细胞和正常人外周血单个核细胞 (normalhumanperipheralbloodmononuclearcell,NPBMNC)的生长抑制 ,组蛋白乙酰化水平以及诱导凋亡的影响。结果表明 :TSA能够以时间、剂量依赖性方式抑制HL 6 0细胞增殖 ,36小时IC50 为 10 0ng ml。TSA能够诱导HL 6 0细胞凋亡 ,其作用也呈时间、剂量依赖性。TSA在显著诱导HL 6 0细胞凋亡的浓度和时间范围内对NPBMNC无明显的诱导凋亡作用。TSA处理 4小时后 ,HL 6 0细胞和NPBMNC组蛋白乙酰化水平上调显著高于未用TSA各组 (P<0 .0 5 ) ,但两者之间无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 :TSA对HL 6 0细胞有明确的抑制增殖能力 ;TSA有明确的诱导HL 6 0细胞凋亡的能力 ,这可能是TSA体外抑制白血病细胞系HL 6 0生长和发挥抗白血病作用的主要机理之一 ;与NPBMNC相比较 ,TSA能够选择性诱导HL 6 0细胞凋亡 ;TSA选择性抑制HL 6 0细胞的机理与TSA调控HL 6 0细胞和NPBMNC组蛋白乙酰化水平的差异无关。     

补骨脂素联合长波紫外线A诱导HL-60细胞凋亡作用的研究

本研究探讨中药补骨脂素（psoralen，PSO）加长波紫外线A（ultraviolet A，UVA）（PUVA）诱导人白血病细胞HL-60凋亡的作用及其可能的作用机制。采用MTT法观察PUVA对HL-60细胞增殖的影响；采用电子显微镜技术观察细胞超微结构改变；流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率、线粒体跨膜电位水平以及细胞Fas、FasL蛋白的表达；荧光定量PCR技术检测细胞Fas、FasL mRNA的表达；免疫细胞化学法（immunocytochemistry，ICC）检测caspase 8、caspase3蛋白的表达。结果表明，PUVA可抑制HL-60细胞的增殖，使凋亡率增加，作用呈时间、浓度依赖性；UVA照射时间15分钟和PSO浓度为80μg／ml时，HL-60细胞增殖的抑制率、凋亡率达峰值；PUVA作用后HL-60细胞超微结构出现明显的凋亡形态学改变，细胞线粒体跨膜电位水平下降；PUVA作用4小时Fas mRNA的表达升高，FasL mRNA的表达下降；PUVA作用24小时Fas、FasL在蛋白水平的表达亦呈现相同规律；PUVA可使HL-60细胞caspase 8、caspase 3蛋白的表达增强，在作用后8小时强度达峰值。结论：PUVA能够抑制HL-60细胞的增殖，并诱导其凋亡，可能的机制是PUVA作用于Fas／FasL系统，使Fas基因表达升高、FasL基因表达下降，激活下游caspase 8、caspase 3的表达，线粒体膜电位水平降低亦可能参与了这个过程。