全反式维甲酸对不同增殖潜能的结肠癌细胞株HIF-1α表达的影响

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对不同增殖结肠癌细胞系的生长抑制作用,以及对低氧诱导因子(HIF-1α)表达的抑制作用。方法:采用体外培养属于结肠癌DukesC期的HCT-8细胞和LOVO细胞,不同浓度的全反式维甲酸(ATRA)干预。利用MTT观察ATRA对结肠癌细胞系的生长,采用半定量RT-PCR和Western印迹检测ATRA干预后在低氧状态下结肠癌细胞中HIF-1α的表达。结果:全反式维甲酸(ATRA)对结肠癌细胞的增殖有抑制作用,对不同增殖能力的结肠癌细胞HIF-1α的表达量有抑制作用。结论:全反式维甲酸可以抑制结肠癌细胞的增殖,对结肠癌细胞HIF-1α的表达有明显的抑制作用。     

不同增殖能力结肠癌细胞株iNOSmRNA表达的比较研究

目的:探讨iNOSmRNA在结肠癌不同增殖能力细胞株中的表达和作用,研究ATRA对于结肠癌不同增殖能力细胞株iNOSmRNA表达的影响。方法:采用MTT方法确定结肠癌细胞株CW-2和LS174T的生长增殖状况,用RT-PCR和Northernblot方法检测结肠癌中iNOSmRNA的表达量。结果:MTT生长曲线显示结肠癌细胞株LS174T的生长增殖比CW-2快;RT-PCR显示CW-2细胞株有较强的iNOSmRNA表达,而LS174T细胞株iNOSmRNA的表达较弱;Northernblot检测在CW-2中有明显的iNOSmRNA表达,但在细胞株LS174T中表达相对较弱;ATRA对结肠癌CW-2和LS174T细胞株iNOSmRNA的表达量无明显影响。结论:iNOSmRNA对结肠癌细胞株生长有双重作用,即在低增殖结肠癌CW-2呈高表达,可以通过细胞毒或诱导细胞凋亡等作用发挥抗肿瘤效应;在高增殖结肠癌LS174T呈低表达,产生NO作为信号转导的重要分子,增加血供和血管生成,促进肿瘤生长、侵袭和转移。ATRA可以抑制结肠癌细胞株的生长。     

全反式维甲酸对人结肠癌LoVo细胞化疗药物敏感性及Survivin基因表达的影响

目的 探讨全反式维甲酸(ATRA)对人结肠癌LoVo细胞化疗药物敏感性及Survivin表达的影响,为ATRA的临床应用提供理论依据.方法 应用流式细胞仪检测经不同浓度(10-5、10-6、10-7mol/L)的ATRA作用不同时间(24、48、72 h及第5、9、15天)后结肠癌LoVo细胞的周期变化.将细胞分为AT...     

全反式维甲酸对人结肠癌LoVo细胞化疗药物敏感性及Survivin基因表达的影响

Objective To study the effects of all-trans-retinoic acid (ATRA) on chemotherapeutics sensibility and expression of Survivin in human LoVo colon cancer cell line, and to provide a theoretical basis for clinical application of ATRA.Methods Flow cytometer (FCM) was used to detect the cell cycle of LoVo colon cancer cell line after treated with various dose of ATRA (10-5 mol/L, 10-6 mol/L and 10-7 mol/L)for 24 h, 48 h, 72 h, 5 d, 9 d and 15 d respectively.The cells were divided into ATRA group (10-6 mol/L)and control group (cultured in routine medium RPMI1640).Meanwhile, each group were divided into subgroups respectively treated with 0 g/L, 2 g/L, 4 g/L and 6 g/L 5-fluorouracil(5-FU) , or with 0 mg/L, 200 mg/L, 400 mg/L and 600 mg/L mitomycin (MMC).MTT assay was used to detect the viability of cells so as to analyze the change in chemotherapeutics sensibility.Drug interactions were analyzed according to the interaction effects.Staining with acridine orange (AO) and ethidium bromide (EB) was used to study the apoptosis in control group(RPMI1640) , ATRA group (10-6 mol/L), 5-FU group (4 g/L), MMC group (400 mg/L), ATRA (10-6 mol/L) + 5-FU (4 g/L) group and ATRA (10-6 mol/L) + MMC (400 mg/L) group.The expression of Survivin in the LoVo cell line was investigated by immunofluorescence technique.Results Compared with the control group, the percentage of cell in Go-G1 phase increased after interference with various doses of ATRA for 24 hours, peaked at 48 h, and gradually decreased afterwards, while the percentage of cells in stages S and G2-M decreased, reach the trough at 48 h, and then increased gradually.Effects of 10-6 mol/L ATRA were most significant at all time spots.Compared with control group, 10-6 mol/L ATRA reduced cell survival rate (P＜0.05),and the survival rates in control subgroups treated with various doses of 5-FU were significantly higher than those in ATRA group (all P＜0.05).In MMC-treated control group, cell survival rate with 200 mg/L MMC was lower than that in ATRA group (0.72±0.02 vs 1.03±0.13, P＜0.05) , while treatment with 400 mg/L or 600 mg/L MMC did not result in lower cell survival compared with the ATRA group (0.52±0.05 vs 0.39±0.02, 0.36±0.02 vs 0.36±0.01, all P>0.05).Positive interactions of 10-6 mol/L ATRA with 5-FU (2 g/L, 4 g/L, 6 g/L) or MMC (200 mg/L, 400 mg/L) were found.Under fluorescence microscope, cells in ATRA + 5-FU group and ATRA + MMC group showed significantly small size, pyknosis and chromatin condensation and formation of apoptotic bodies when compared with control group, ATRA group, 5-FU group and MMC group.Expression of Survivin was inhibited after 10-6 mol/L ATRA treatment for 48 h compared with control group (33.33% vs 27.96% , P＜0.05).Conclusion ATRA enhances the chemosensibility of LoVo colon cancer cell line to 5-FU and MMC,and induces cell apoptosis, potentially through inhibition of Survivin gene expression.     

结肠癌组织中MMP-10、VEGF表达和MVD的相关性

目的　探讨结肠癌组织MMP -10、VEGF的表达和MVD值在血管生成、侵袭和转移中的作用及其相关性。方法　采用免疫组化S P法,检测44例结肠癌和5例正常结肠组织的MMP 10、VEGF、FⅧRAg、Ⅳ型胶原的表达情况。结果　44例结肠癌中MMP- 10和VEGF的表达阳性率分别为77 .2%和81. 8%,MMP 10表达阳性的结肠癌组织MVD值明显高于表达阴性者(P<0 .01); MMP- 10、VEGF的表达和MVD值与肿瘤分化、淋巴结转移、Dukes分期有明显相关(P<0 .01或<0 .05);MMP- 10与VEGF在结肠癌组织中表达呈正相关。结论　MMP -10和VEGF的表达以及MVD值与结肠癌侵袭转移密切相关,可能成为结肠癌治疗的标靶和预后指标。     

VEGFsiRNA对肝癌SMMC 7721细胞株VEGF表达和增殖的抑制作用

目的：探讨VEGFsiRNA对肝癌SMMC 7721细胞株VEGF表达和增殖的抑制作用。 方法： 采用siRNA设计法则并用计算机辅助设计9条VEGFsiRNA序列，长度为19个核苷酸；体外构建9条VEGFsiRNA序列，通过脂质体介导转入肝癌SMMC 7721细胞株，培养72 h，采用CCK8试验分析VEGFsiRNA（25nmol/L）对细胞增殖的抑制效果，用ELISA法检测培养液中VEGF蛋白水平，流式细胞仪检测细胞周期的改变。 结果： VEGFsiRNA1-VEGFsiRNA 9序列对肝癌细胞的增殖有明显抑制作用，与脂质体对照组和空白对照组相比均有显著差异（P<0.05）；其中，VEGFsiRNA 2、VEGFsiRNA 4、VEGFsiRNA 6、VEGFsiRNA 7、VEGFsiRNA 8、VEGFsiRNA 9对细胞增殖的抑制效果均强于反义寡核苷酸组。VEGFsiRNA1- VEGFsiRNA 9序列均能下调肝癌细胞VEGF蛋白的表达水平，以VEGFsiRNA 7和VEGFsiRNA2的效果最强，抑制率分别为52.65%和50.43%。VEGFsiRNA将肝癌细胞阻滞在S期，但未引起细胞凋亡现象。 结论： 成功地设计和合成VEGFsiRNA。后者能有效地抑制肝癌细胞的增殖，降低VEGF蛋白的表达量。     

血清胰岛素样生长因子Ⅰ水平对结肠癌组织中VEGF表达的影响

目的探讨血清中胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)水平与结肠癌组织中VEGF的表达的关系,进一步探讨血清中IGF-Ⅰ水平在刺激小鼠结肠癌生长和转移中的作用。方法 将Colon 38腺癌组织块(碎片)植入肝脏特异性IGF-Ⅰ基因缺失(LID)小鼠和对照组小鼠的盲肠表面。总共156只5周龄的雄鼠接受了肿瘤移植,其中对照组74只,LID组82只。两组小鼠分别又随机分成两个亚组:对照组30只鼠、LID组31只鼠接受腹腔注射重组人IGF-Ⅰ(2 mg/kg),每天2次,共6周;对照组44只鼠、LID组51只鼠接受盐水注射。结果接受IGF-Ⅰ注射组的LID和对照小鼠,血清IGF-Ⅰ和水平均升高。较高血清IGF-Ⅰ水平的小鼠的结肠癌发生率,肝脏转移率,VEGF表达及血管密度均显著高于较低血清IGF-Ⅰ水平的小鼠。结论结肠癌组织VEGF的表达和血管的密度依赖于血液中IGF-Ⅰ水平。血液循环中IGF-Ⅰ水平在结肠癌发展和转移中起了重要作用。     

全反式维甲酸抑制微血管内皮细胞增殖

目的：研究不同浓度的全反式维甲酸（all-trans retinoic acid,atRA）对体外培养的小鼠脑微血管内皮细胞株bEnd.3增殖的影响。 方法： 将体外培养的bEnd.3细胞随机分为五组：空白对照组（加入atRA溶剂二甲亚砜, DMSO）、10-9、10-8、10-7和10-6mol/L atRA组。分别在24 h、48 h和72 h收集细胞，通过流式细胞术、MTT法检测不同浓度的atRA对bEnd.3增殖的影响，并采用免疫细胞化学法检测bEnd.3增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。在作用明显的时点（20 h）做小鼠血管新生相关基因芯片检测。 结果： 10-6mol/L atRA组在24 h明显抑制细胞增殖；PCNA表达明显降低；20 h时11种血管新生相关基因表达明显下调。 结论： 在体外细胞培养中，10-6mol/L 的atRA作用20-24 h 时，通过部分血管新生相关基因表达下调和PCNA的表达减少抑制bEnd.3细胞增殖。     

全反式维甲酸对内皮细胞增殖和凋亡的影响及其机制

全反式维甲酸(ATRA),是体内一种重要的生物活性物质[1],以往发现在胚胎发育、抑制细胞增殖、促进细胞分化和凋亡以及视觉循环中起着重要的作用[2].有研究表明[3],其在内皮细胞的生长和塑形方面发挥调节作用,目前的研究发现ATRA做为维甲酸受体(RARs)和维甲酸X受体(RXRs)的配体可诱导碱性成纤维细胞生长因子(fibroblast geowthfactor-2,bFGF)的产生,促使内皮细胞的增殖和分化.还发现其人工合成的衍生物4-HPR具有促进内皮细胞凋亡的作用.     

全反式维甲酸对结直肠癌LOVO、SW480细胞系增殖、凋亡及受体表达的影响

目的探讨全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)对微卫星稳定(microsatellite stable,MSS)和微卫星不稳定(mic-rosatellite instability,MSI)结直肠癌细胞系的生长抑制作用,以及对LOVO、SW480和维甲酸受体α(retinoic acid receptor-α,RAR-α)表达的影响。方法体外培养MSI结直肠癌细胞系LOVO及MSS结直肠癌细胞系SW480,应用不同浓度的ATRA进行刺激,并设置空白对照组和RAR-α抑制剂对照组。用MTT法分析两种细胞系肿瘤细胞的增殖变化,用RT-PCR技术及平均光密度比值分析RAR-αmRNA表达,用Western blot技术及平均光密度比值分析细胞凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-8表达。结果与对照组相比,ATRA对两种细胞系的增殖均有抑制作用,并能有效刺激两种细胞系RAR-αmRNA和凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-8的表达(P<0.05)。ATRA刺激后,MSS细胞系RAR-αmRNA、凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-8表达高于MSI细胞系(P<0.05)。结论 ATRA能抑制结直肠癌细胞系MSS和MSI肿瘤细胞的增殖,促进这两种特性细胞系的凋亡并增加RAR-α的表达,其对MSS细胞系作用高于MSI细胞系。实验结果间接提示RAR-α减少可能与锯齿状病变广基途径发病机制有关。     

人反义VEGF基因对肾癌细胞VEGF表达的影响

目的：构建反义VEGF基因真核表达载体，研究其对肾癌细胞VEGF表达的影响。 方法： 克隆人VEGF基因，将反义VEGF基因定向克隆于质粒pcDNA3.1(-)真核表达载体，酶切鉴定；转染人肾癌细胞，G418筛选阳性克隆。RT-PCR方法检测VEGFmRNA的表达，免疫组化法检测VEGF基因的蛋白表达，MTT法测细胞生长，流式细胞术检测细胞周期。 结果： 成功构建反义VEGF基因真核表达载体；反义 VEGF组VEGFmRNA的表达受到抑制，明显低于空载体组和对照组VEGFmRNA的表达,空载体组VEGFmRNA的表达没有受到影响；反义 VEGF组的VEGF蛋白表达明显低于空载体组和对照组，空载体组和对照组VEGF蛋白的表达无显著差异；反义 VEGF组细胞生长减慢，G1期细胞比例增加，S期细胞比例减少。 结论： 人反义VEGF基因可明显降低肾癌细胞VEGF基因在转录和翻译水平的表达，抑制肾癌细胞生长，为肾癌基因治疗提供一定的实验依据。     

Tiam1对结直肠癌细胞生物学特性的影响

目的探讨Tiam1(Tlymphomainvasionandmetastasis)对结直肠癌细胞株生物学特性的影响。方法用逆转录聚合酶链反应方法检测Tiam1基因在结直肠癌细胞株中的表达,筛选Tiam1不表达的细胞株;将Tiam1/C1199HAcDNA导入内源性不表达Tiam1基因的人结直肠癌HT29细胞株中,G418筛选抗性克隆,免疫组织化学和Western蛋白印迹法鉴定转染后Tiam1基因在细胞中的表达,利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测Tiam1对细胞增殖的影响,体外侵袭实验检测Tiam1对结直肠癌侵袭转移的影响。结果Tiam1基因在高转移的LoVo和SW620中高表达,在低转移的HT29中不表达,在SW480和HCT116细胞表达相应较低。通过7d的连续比较,HT29/mock和HT29/Tiam1两组的细胞增殖能力差异有统计学意义(F=10.512,P=0.003)。Tiam1基因的导入使结直肠癌细胞的增殖能力明显增强,体外侵袭转移能力显著增加,HT29/Tiam1穿过细胞为(88.6±9.2)个/200倍视野,HT29/mock为(46.8±3.4)个/200倍视野,二者的差异具有统计学意义(t=9.54,P<0.01)。结论Tiam1基因具有促进结直肠癌细胞增殖的能力,Tiam1与结直肠癌的侵袭转移密切相关,Tiam1表达可作为结直肠癌侵袭转移过程中一个有价值的指标。     

血管内皮生长因子反义基因转染对高转移人巨细胞肺癌细胞系生 …

目的 探讨反义血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）基因转染在抑制恶性肿瘤生长和转移的抗肿瘤血管基因治疗中的意义。方法 利用基因重组技术构建正义和反义ＶＥＧＦ１２１ ｃＤＮＡ真核表达载体,用脂质体法转染高转移性人巨细胞肺癌细胞（ＰＧ）,经Ｎｏｒｔｈｅｍ杂交和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹免疫化学检测ＶＥＧＦ ｍＲＮＡ和蛋白质的表达水平,并对转染前后细胞进行体外生长和裸鼠体内生长转移等多项生物学行为实验,结果 转染反义转     

血管内皮生长因子C及其受体3在非小细胞肺癌组织中的表达及意义

目的　探讨血管内皮生长因子C(VEGF C)和受体 (VEGFR) 3在人非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其与微血管、微淋巴管形成、淋巴转移、预后之间的关系。方法　对 76例人NSCLC及相应癌旁组织行VEGF C、VEGFR 3及CD34免疫组织化学染色链霉素抗生物素蛋白 过氧化物酶 (SP)法检测 ,进行淋巴管密度计数、微血管密度 (MVD)计数 ,并结合临床和病理资料进行分析。结果　NSCLC中 ,VEGF C的表达与肺癌分化程度负相关 (P =0 0 0 9)。VEGF C和VEGFR 3的表达水平与淋巴结转移呈正相关 (分别P =0 0 0 8,P =0 0 13) ,与淋巴浸润呈正相关 (分别P =0 0 2 7,P =0 0 2 0 )。VEGF C的表达与VEGFR 3在肺癌细胞中的表达呈正相关 (P =0 0 0 9)。VEGF C与淋巴管密度 (P =0 0 0 6 )、MVD(P =0 0 4 6 )呈正相关。淋巴管密度与淋巴结转移 (P =0 0 10 )、淋巴浸润 (P =0 0 19)、TNM分期 (P =0 0 15 )呈正相关 ,MVD与血行转移 (P <0 0 0 1)、TNM分期 (P <0 0 0 1)呈正相关。VEGF C阳性表达与生存时间、5年生存率呈负相关 (P <0 0 0 1)。结论　NSCLC中 ,VEGF C通过自分泌方式作用于受体VEGFR 3,促进肺癌组织生长 ,抑制分化。VEGF C促使肺癌内淋巴管形成 ,促进肺癌淋巴结转移。VEGF C和VEGFR 3表达增高、淋巴管密度增加     

DPC4基因转染结肠癌细胞对VEGF表达的影响

目的研究DPC4基因转染人结肠癌细胞株SW620对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法利用DNA的限制性内切酶双酶切技术鉴定重组质粒PCDNA3.1-DPC4;利用脂质体介导转染技术和G418筛选得到稳定表达Smad4蛋白的DPC+4-SW620(PCDNA3.1-DPC4转染的SW620高转移性结肠癌细胞株)细胞模型;采用Western blot检测细胞中Smad4的表达;采用ELISA检测细胞上清液中VEGF的蛋白表达量;采用半定量逆转录多聚酶链反应RT-PCR技术检测细胞中VEGF的mRNA表达量.结果阳性质粒组DPC+4-SW620细胞的Smad4蛋白表达强于空白质粒组PCDNA3.1-SW620和未转染组SW620;DPC+4-SW620组细胞上清液VEGF蛋白分泌明显减少,与PCDNA3.1-SW620组和SW620组比较差异有显著性(P＜0.05),DPC+4-SW620组细胞与PCDNA3.1-SW620组细胞中VEGF mRNA半定量结果和SW620组比较,其表达量分别下降28.3%和4.5%.结论 DPC4可抑制人结肠癌细胞株SW620中VEGF的表达.     

血管内皮细胞生长因子和血管生成与胃癌发展的关系

目的探讨血管内皮细胞生长因子（ＶＥＧＦ）和血管生成与胃癌发展的关系。方法应用免疫组织化学和原位分子杂交技术,检测５６例人胃癌组织ＶＥＧＦ蛋白表达和微血管密度（ＭＶＤ）及部分胃癌ＶＥＧＦｍＲＮＡ表达,分析ＶＥＧＦ和ＭＶＤ、及其与胃癌组织学分型、浸润深度、生长方式、淋巴结转移、远处转移和预后的关系。结果ＶＥＧＦ阳性者ＭＶＤ值显著高于阴性者（Ｐ＜００１）,ＶＥＧＦ表达和ＭＶＤ与胃癌浸润深度（Ｐ＜００１）、淋巴结转移（Ｐ＜００５）和远处转移（Ｐ＜０．０５）密切相关,而与组织学分型和生长方式无关（Ｐ＞００５）;ＶＥＧＦ表达阳性或ＭＶＤ≥４３的胃癌患者５年生存率较低;ＶＥＧＦｍＲＮＡ表达与ＶＥＧＦ蛋白表达具有一致性,但其分布不同。结论ＶＥＧＦ与胃癌的血管生成密切相关,对胃癌的生长和浸润转移有促进作用,ＶＥＧＦ和ＭＶＤ可作为反映胃癌生物学行为的指标之一     

木犀草素对卵巢癌细胞株转移能力的影响

目的：研究木犀草素对卵巢癌细胞株HO-891 0PM的体外侵袭能力的影响，并探讨其可能的作用机制。方法：HO-8910P M细胞经木犀草素处理后用Boyden小室法检测其体外、侵袭和运动能力。并采用明胶酶 谱法检测HO-8910PM细胞分泌的明胶酶活性。RT-PCR检测TIMP-1、NM23基因mRNA的表达情况，蛋白印迹法检测ERK2的蛋白表达变化。结果：HO-8910PM细胞经木犀草 素处理后，体外侵袭、运动能力呈剂量依赖性下降。HO-8910PM细胞MMP-9的分泌下降。ERK2 蛋白表达明显降低，但TIMP-1、NM23基因mRNA的水平无明显变化。结论:木犀草素在体外剂量依赖性地抑制卵巢癌细胞HO-8910PM的转移能力，这可能与木犀草素 抑制MMP-9的分泌及下调ERK2表达有关。