小鼠去信号肽AFP/DC疫苗体外抗肝癌免疫活性的检测

目的构建Balb/c小鼠具有分泌性信号肽的AFP1cDNA和去掉信号肽的AFP2cDNA真核表达载体,分别在小鼠树突状细胞(DCs)中表达,观察其抗肝癌的免疫活性。方法构建AFP1cDNA和AFP2cDNA,真核表达载体,体外转染DC,制备AFP1-DC和AFP2-DC疫苗,以ELISA、MTT方法等检测其免疫活性。TUNEL法检测肝癌细胞凋亡情况。结果所构建的真核表达质粒PcDNA3.1( )/AFP1和PCDNA3.1( )/AFP2在小鼠树突状细胞中获得稳定高效表达,其中PcDNA3.1( )/AFP2明显刺激T细胞增殖,刺激指数(SI)明显高于空质粒组,AFP2/DC疫苗诱导出肿瘤特异性杀伤肝癌细胞活性明显高于空质粒组。结论成功地构建了真核表达载体PcDNA3.1( )/AFP1和PcDNA3.1( )/AFP2,AFP2/DCS能够诱导较强的特异性抗肝癌免疫效应,其机制可能与诱导肝癌细胞凋亡有关。     

IL-21在肝癌细胞株H22细胞中的表达及其活性

摘 要　目的：构建小鼠IL-21（mIL-21）真核表达载体mIL-21-pcDNA3.1,转染肝癌H22细胞,探讨其生物学活性。方法：RT-PCR法扩增mIL-21基因,构建mIL-21真核表达载体mIL-21-pcDNA3.1,并经DNA测序证实。脂质体法介导mIL-21-pcDNA3.1转染H22细胞,RT-PCR和Western boltting鉴定其表达,MTT法检测mIL-21-pcDNA3.1对T细胞增殖和NK细胞杀伤活性的影响。结果：DNA序列分析证实构建的mIL-21-pcDNA3.1正确无误,RT-PCR和Western boltting证实转染的H22细胞中有mIL-21的表达。MTT法显示,转染mIL-21的H22细胞培养上清刺激T细胞增殖的刺激指数（stimulation index,SI）为3.412±0.312,联合ConA的刺激指数为4.673±0.450,均显著高于转染空质粒组的1.465±0.103和未转染组的1.447±0.245,(P<0.01）。转染mIL-21的H22细胞培养上清NK细胞杀伤率为(81.66±4.26)%,显著高于转染空质粒组的（34.74±5.52)%和未转染对照组的（33.61±1.42)%。结论：mIL-21-pcDNA3.1载体在H22细胞中的表达可显著增强T细胞增殖及NK细胞的杀伤功能,为其在抗肝癌治疗中的应用奠定了基础。     

树突状细胞对肿瘤浸润淋巴细胞抗小鼠肝癌活性影响的研究

目的探讨H22细胞全细胞性抗原致敏的DC激活的TIL体外抗小鼠肝癌活性,并将H22-DC-TIL过继免疫荷瘤小鼠,研究其对荷瘤小鼠免疫功能的影响及抑瘤作用。方法从小鼠四肢长骨骨髓中获取DC,应用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-4(IL-4)和肿瘤全细胞性抗原致敏DC,然后用DC激活TIL,观察TIL在体外对H22细胞、Hepal-6细胞和B16细胞的杀伤活性;检测应用H22-DC-TIL后荷瘤小鼠的脾淋巴细胞的NK、LAK、CTL活性、血清TNF活性、抑瘤作用以及瘤体病理改变,并与对照组相比较。结果①H22-DC-TIL具有很强的对H22细胞杀伤活性[杀伤率为(71.31±3.11)%],明显高于其对Hepal-6和B16细胞的杀伤活性[杀伤率分别为(50.11±3.03)%,(30.31±2.89)%],也明显高于未经DC激活的TIL、H22-DC-脾淋巴细胞和未经DC激活的脾淋巴细胞对H22细胞杀伤活性[杀伤率分别为(49.80±3.21)%,(48.76±3.60)%和(19.23±2.71)%]和对Hepal-6细胞杀伤活性[杀伤率分别为(39.40±3.21)%,(38.62±2.87)%和(18.73±2.40)%]以及对B16细胞杀伤活性[杀伤率分别为(26.38±2.51)%,(25.82±2.70)%和(18.34±3.01)%],同时B16-DC-TIL(TIL来源于H22瘤体)也可诱导相对较低的对B16细胞的特异性细胞杀伤活性。②H22-DC-TIL可明显诱导提高荷瘤脾淋巴细胞NK、LAK和CTL活性[活性为(30.43±1.35)%、(31.40±1.80)%、(35.30±1.20)%],并可检测到血清TNF水平明显上升[血清TNF为(40.41±1.85)U/ml],它们均达正常对照组水平,与未经DC激活的TIL组、H22-DC-脾淋巴细胞组、未经DC激活的脾淋巴细胞组、生理盐水组分别对应比较,差异均有显著性(P<0.01)。该组瘤体内淋巴细胞浸润程度也高于对照组,其瘤体生长明显受到抑制。结论①H22-DC-TIL可产生很强的体外针对H22细胞的特异性杀伤活性。②H22-DC-TIL具有很强的特异性抗小鼠肝癌作用。     

小鼠肝癌H22细胞LDL受体活性的研究

目的 :观察小鼠肝癌H2 2 细胞LDLR活性。方法 :对小鼠肝癌H2 2 细胞和正常肝细胞进行受体结合的Scatchard分析和单点分析。结果 :①H2 2 细胞对LDL的亲和性与正常肝细胞相同 ,但H2 2 细胞Bmax明显增多 ;②H2 2 细胞对LDL的非特异性结合、内移和降解能力与正常肝细胞相同。结论 :小鼠肝癌H2 2 细胞LDLR活性增高 ,其对LDL的内移和降解功能未变。     

pVAX-iNOS真核表达载体的构建及其抗肺癌作用研究

背景与目的 iNOS与NO介导的抗肿瘤效应有关.本研究旨在构建pVAX-iNOS载体并转染A549肺癌细胞,检测其基因的表达并初步探讨iNOS基因表达增高后对A549肺癌细胞的抗肿瘤作用.方法 应用RT-PCR方法扩增人iNOS编码序列的CDS片段,构建pVAX-iNOS载体后转染肺癌A549细胞,通过RT-PCR和Western blot方法检测目的基因的表达;采用MTT法、Hoechst 3235染色和划痕实验分别检测iNOS高表达在体外对肺癌A549细胞增殖、凋亡和迁移作用的影响.结果 真核表达质粒载体pVAX-iNOS构建成功,iNOS蛋白在转染后的A549细胞中表达升高.pVAX-iNOS转染A549肺癌细胞后能明显诱导细胞发生凋亡并抑制肿瘤细胞的生长和迁移.结论 本研究成功构建pVAX-iNOS真核表达质粒,高表达iNOS能明显抑制A549细胞的增殖、迁移并促进细胞发生凋亡.本研究有望为临床治疗肺癌提供一个新的有效策略.     

小鼠SLC基因真核表达载体的构建及表达

次级淋巴组织趋化因子(secondary lymphoid tissue chemokine,SLC)是重要的CC趋化因子,对多种免疫细胞特别是T淋巴细胞、树突状细胞(dendritic cell,DC)及NK细胞具有趋化作用.研究证实,SLC通过募集T淋巴细胞、DC和NK等免疫效应细胞到肿瘤组织、促进细胞因子的释放以增强肿瘤局部非特异性免疫以及抑制肿瘤血管生成等作用,达到其显著的抗肿瘤效果,是目前肿瘤免疫治疗的理想效应分子.为了进一步探索SLC在肿瘤基因治疗中的应用,我们构建了小鼠SLC基因的真核表达载体pVAX1-mSLC,为今后开展体内基因治疗肿瘤奠定基础.     

树突状细胞诱导抗裸鼠人肝癌移植瘤免疫

[目的]讨究树突状细胞（DC）体外诱导的抗肝癌细胞免疫能否预防裸鼠人肝癌移植癌发生及抑制课鼠人肝癌移植瘤生长。[方法]联合应用粒／巨噬细胞集落刺激因子（GM－CSF）及白介素－4（IL－4）直接从肝癌患者外周血中培养DC：以人肝癌细胞系HepG2肿瘤细胞的肿瘤抗原粗提物刺激DC；DC激活同源的T淋巴细胞产生细胞毒性T淋巴细胞（CYL）；以DC激活的CIL预防性接种于探鼠皮下观察其后接种的人肝癌细胞系HepG2移植瘤发生率；并观察该CTL对已接种裸鼠的人肝癌细胞系HepG2移植瘤生长的影响。[结果]DC诱导的工体外对HepG2肿瘤细胞具有高效而特异杀伤作用，在裸鼠体内不能预防探鼠人肝癌细胞系HepG2移植瘤发生，而且能抑制该移植瘤生长。[结论]经肝癌肿瘤相关抗原激活的肝癌患者外用血DC体外诱导的抗肿瘤细胞免疫在体内外均具有良好的抗肿瘤作用。提示DC作为一新概念上的抗肿瘤疫苗有可能在人肝癌的预防及治疗中发挥重要作用。     

小鼠移植性肝癌和乳腺癌中端粒酶的表达及其生物学特性

目的　探讨实验动物肿瘤的端粒酶表达及其生物学特性。方法　将 40只BALB/c小鼠随机分为H2 2 及MA782 2个组 ,每只小鼠左腹股沟皮下分别接种H2 2 、MA782 活细胞 5× 10 6个。连续观察移植瘤的生长 ,并对其组织切片进行观察及端粒酶PCRELISA检测。结果　H2 2 和MA782 的接种成功率均为 10 0 %。H2 2 的肿瘤生长速度较MA782 快 ,H2 2 的肿瘤体积显著大于MA782(P <0 .0 1)。H2 2 的核分裂像较MA782 更多见。H2 2 和MA782 的端粒酶活性均为阳性 ,且H2 2 的端粒酶A值 ( 1.6 72± 0 .15 6 )显著高于MA782 的端粒酶A值 ( 0 .817± 0 .14 2 ) ,P <0 .0 1。结论　H2 2 和MA782 是较好的移植性肿瘤动物模型。H2 2 与MA782 比较 ,H2 2 的核分裂像更多见 ,肿瘤生长更快。H2 2 和MA782 均表达端粒酶活性 ,且H2 2 较MA782 高 ,H2 2 有更高的恶性潜能。     

4-1BBL基因真核表达载体构建及在肝癌细胞中表达的研究

目的 研究含鼠源性4-lBBL真核表达载体体系的构建及其在大鼠肝细胞癌(HCC)细胞系CBRH7919中获得稳定、高效表达的方法。方法 将4-lBBL全长cDNA亚克隆到真核表达载体PCI-neo中,获得4-1BBL定向插入重组子PCI-neo-4-lBBL,采用酶切法和测序法鉴定。用阳离子脂质体将PCI-neo-4-1BBL转染CBRH7919,经G418筛选,获得阳性克隆,命名为PCI-neo-4-lBBL-CBRH7919 细胞。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测4-1BBL在CBRH7919中的表达。结果 PCI-neo-4-1BBL经限制性内切酶切,电泳后显示有980bp的4-lBBL目的基因片段和5．4kb的线性化PCI-neo载体片段;重组子测序结果与Genbank中4-lBBL cDNA序列相符,证实构建成功。RT-PCR检测到4-lBBL在PCI-neo-4-1 BBL-CBRH7919 细胞中获得稳定表达。结论 重组4-1BBL真核表达载体构建正确,并在PCI-neo-4．1 BBL-CBRH7919 细胞中获得稳定、高效表达。     

益气清毒方联合CTX对H22肝癌小鼠抑瘤实验研究及机制探讨

[目的]观察益气清毒方联合环磷酰胺(CTX)的抗肿瘤效果并探讨其作用机制。[方法]水煎煮制备益气清毒方汤剂,建立H22荷瘤小鼠动物模型,接种后第2d开始给药,腹腔注射CTX及益气清毒方灌胃,第9d称重后处死小鼠,眼眶取血做血液学检查,并观察小鼠胸腺、脾脏及肿瘤瘤体生长情况。[结果]与CTX低剂量组相比,CTX+益气清毒方高、中剂量组小鼠胸腺指数明显增加,瘤重下降,白细胞及血小板计数无明显下降。[结论]益气清毒方能明显加强CTX的抗肿瘤作用,抑制H22荷瘤小鼠肿瘤生长,减轻CTX不良反应,提高免疫功能。     

人微管不稳定蛋白基因真核表达载体的构建与表达及对食管癌细胞的作用

目的 构建人微管不稳定蛋白基因(stathmin)真核表达载体,研究其对食管癌细胞EC9706的作用.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增stathmin cDNA,克隆至pMDl8-T载体并酶切鉴定后,亚克隆至pEGFP-C2真核表达载体.将测序鉴定正确的重组载体和空载体经脂质体转染EC9706细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞株.通过荧光显微镜观察转染细胞荧光蛋白的表达,采用Western blot检测转染细胞中增强型荧光蛋白(EGFP)和stathmin融合蛋白的表达.选取稳定转染的细胞株,采用细胞计数法绘制细胞生长曲线,采用流式细胞仪分析细胞的增殖状态,平板克隆形成实验、裸鼠移植瘤实验分析转染细胞成瘤性.结果 RT-PCR扩增获得450 bp的cDNA编码序列;克隆至pMD18-T载体,经酶切鉴定后获反向插入质粒;亚克隆至pEGFP-C2载体后,经酶切与测序鉴定,重组载体pEGFP-stathmin构建成功.重组载体和空载体转染EC9706细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞株.通过荧光显微镜观察到,转染细胞中呈现绿色荧光;经Western blot证实,重组载体表达46 000的融合蛋白.与空载体转染细胞相比,转染重组载体的EC9706细胞形态变大,增殖速度减慢,细胞分裂阻滞于G2/M期,细胞克隆形成数减少,裸鼠体内成瘤性降低(P＜0.05).结论 构建的真核表达载体pEGFP-stathmin在食管癌EC9706细胞中能够稳定表达,并抑制肿瘤细胞的增殖和成瘤性.     

负载小鼠端粒酶逆转录酶基因的树突状细胞体内诱导抗肝癌免疫应答

目的 探讨小鼠端粒酶逆转录酶(mTERT)基因修饰的树突状细胞(Ad-mTERT-DC)在体内诱导抗肝癌活性的情况.方法 选用Bal B/c小鼠肝癌种植模型,用携带mTERT基因的重组腺病毒载体(Ad-mTERT)转染小鼠体外培养的DC,对同系小鼠进行免疫.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测脾细胞体外抗原再刺激后白介素2(IL-2)和γ干扰素(IFN-γ)水平,酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测分泌IFN-γ细胞的数量,51Cr释放法检测细胞毒T淋巴细胞杀伤活性.接种H22细胞后,观察肿瘤大小及荷瘤小鼠存活情况.并进一步观察,在H22移植瘤存在的情况下,Ad-mTERT-DC是否能够有效抑制肿瘤生长.结果 小鼠脾细胞体外接受抗原再刺激后,Ad-mTERT组IL-2和IFN-γ水平以及IFN-γ分泌细胞的数量分别为871.25 pg/ml、169.15 ng/ml和378/106个脾细胞,显著高于Ad-GFP组(131.6 pg/ml、15.4 ng/ml和36/106个脾细胞,均P<0.05)、DC组(71.3 pg/ml、10.5ng/ml和21/106个脾细胞)和PBS组(65.8 pg/ml、7.4 ng/ml和18/106个脾细胞,均P<0.05).Ad-mTERT-DC能诱导特异性CTL的产生,在效靶比为90:1时,Ad-mTERT组的特异性杀伤率为58.7%,明显高于Ad-GFP组(10.3%)、DC组(2.9%)和PBS组(1.7%).接种后第27天,Ad-mTERT组中成瘤小鼠的肿瘤平均直径明显低于各对照组(P<0.05),小鼠存活时间明显延长(P<0.05).Ad-mTERT组抑瘤率为43.6%,明显高于PBS组、DC组和Ad-GFP组(均P<0.01).结论 Ad-mTERT-DC在小鼠体内可诱导出mTERT抗原特异性的抗肿瘤活性,对肝癌有预防和治疗作用.     

未知基因KH的真核表达载体构建及其对细胞增殖的影响

目的 构建未知基因KH的开放阅读框架(KH-ORF)的真核表达体系,初步探讨未知基因KH对细胞增殖的影响。方法 采用DNA重组技术构建KH-ORF的表达载体pCI-neo-KH-ORF,通过脂质体法转染COS-7细胞和K562细胞,RT-PCR检测目的基因的表达。采用流式细胞术检测：KH-ORF对COS-7细胞和K562细胞周期的影响,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测KH-ORF对COS-7细胞增殖速度的影响,生长曲线与乳酸脱氢酶(LDH)活性测定检测KH-ORF对K562细胞增殖速度的影响。结果 (1)KH-ORF在COS-7细胞与K562细胞中获得表达。(2)KH-ORF对COS-7细胞的细胞周期与增殖速度无明显影响。(3)流式细胞术检测显示,KH-ORF使K562／pCi-KH-ORF细胞周期中S期细胞增多;生长曲线显示,KH-ORF促进K562／pCI-KH-ORF细胞增殖;LDH活性测定结果表明,K562／pCI-KH-ORF细胞LDH比活性上升,高于对照组细胞。结论 KH基因可能是一个与K562细胞增殖有关的白血病未知基因。     

人类前列腺凋亡反应因子4基因真核表达载体的构建及其在K562细胞中的表达

 目的　构建带有绿色荧光蛋白的人类前列腺凋亡反应因子4（Par-4）基因真核表达载体pIRES2-EGFP／Par-4,并转染K562细胞。方法　以 pDNR／Par-4质粒为模板,PCR扩增Par-4基因,T-A 克隆,亚克隆至pIRES2-EGFP上,并对重组表达载体进行酶切、测序鉴定。采用Superfect转染试剂转染K562细胞。提取细胞总蛋白,Western blotting检测Par-4表达。结果　经限制性酶切鉴定及测序分析证实pIRES2-EGFP／Par-4载体序列正确;荧光显微镜下可见转染的K562细胞有绿色荧光蛋白的表达,Western blotting证实转染细胞中存在Par-4蛋白的表达。结论　pIRES2-EGFP/Par-4表达载体构建成功,并在K562细胞内成功表达。     

真核表达载体ｐＩＲＥＳ２-ＥＧＦＰ-ＫＡＩ１的构建及其在胆管癌细胞的表达

目的　构建真核表达载体ｐＩＲＥＳ２-ＥＧＦＰ-ＫＡＩ１,并在胆管癌细胞系ＱＢＣ９３９中进行表达。方法　采用ＲＴ-ＰＣＲ法从人胆管组织中克隆ＫＡＩ１基因,连接Ｔ载体并测序正确后与真核表达载体ｐＩＲＥＳ２-ＥＧＦＰ连接,经ＥｃｏＲⅠ和ＳａｌⅠ双酶切鉴定后通过脂质体法转染ＱＢＣ９３９细胞中,用荧光显微镜检测细胞中增强型绿色荧光蛋白（ＥＧＦＰ）的表达,用免疫组化染色的方法检测细胞中ＫＡＩ１的表达。结果　成功构建真核表达载体ｐＩＲＥＳ２-ＥＧＦＰ-ＫＡＩ１,用脂质体法转染胆管癌细胞ＱＢＣ９３９后,经荧光显微镜和免疫组化染色法检测可见细胞内有ＥＧＦＰ及ＫＡＩ１的表达。结论　真核表达载体ｐＩＲＥＳ２-ＥＧＦＰ-ＫＡＩ１构建成功并在胆管癌细胞ＱＢＣ９３９中得到稳定表达,为研究ＫＡＩ１对肿瘤的生物学作用以及ＫＡＩ１在肿瘤基因治疗中的应用奠定了基础。     

CONSTRUCTION OF EUKARYOTIC EXPRESSION VECTOR FOR HUMAN CCL21 AND CHARACTERIZATION OF ITS CHEMOTACTIC ACTIVITY

Objective： To obtain recombinant human CCL21 with biological activity from eukary0tic expression system for further use in cancer gene therapy. Methods： A fragment of human CCL21 gene was obtained from pSK-hCCL21 plasmid digested by Xho I and BamH I, inserted into the responding sites of eukaryotic expression vector pVAX1, and then transfected into COS-7 cells by electroporation method. The expression of hCCL21 protein was detected by western blotting analysis. The in vitro chemotaxis assay was used to test the chemotactic function of the expression product to lymphocytes. Results： Human CCL21 protein was expressed by transfected COS-7 cells with recombinant plasmid containing hCCL21 gene, and was verified by western blotting. The in vitro chemotaxis assay demonstrated that human CCL21 protein had a potent chemotactic function to lymphocytes. Conclusion： Human CCL21 was successfully and transiently expressed in eukaryotic cells, which lays some foundation for the study of CCL21 gene therapy in murine tumor models.     

甲胎蛋白基因转染树突状细胞瘤苗对诱发性小鼠肝癌发生发展的免疫抑制作用

目的 构建小鼠甲胎蛋白(mAFP)基因转染的树突状细胞(DC)瘤苗,评价其在C57BL/6J小鼠自然肝癌诱发过程中的免疫保护作用.方法 诱导、扩增DC.将表达mAFP的重组腺病毒颗粒转染DC,检测转染前后DC细胞表面分子MHC Ⅰ、MHC Ⅱ、CDl8a(LFA)、CD54(ICAM)、CD80(B7.1)和CD86(B7.2)等的变化.80只C57BL/6J雄性小鼠随机分为单纯接种DC组、接种转mAFP基因DC(pAdBM5-mAFP-DC)组、单纯接种重组质粒(pAdBM5-mAFP)组和正常对照组,每组20只.实验组在每只小鼠的左肋部注射5×105个细胞,连续免疫3 d,以后每7 d接种疫苗1次,继续免疫4次;正常对照组仅注射0.1 ml PBS.在接种免疫的同时,给以二乙基亚硝胺(DEN)、四氯化碳(CCl4)和乙醇联合诱癌.诱癌20周后处死小鼠,检查成瘤情况,并对肝脏标本进行组织病理学检查.结果成功构建了转基因pAdBM5-mAFP-DC瘤苗;mAFP基因转染后的DC表面高表达MHC Ⅰ、MHC Ⅱ、CD18a、CD54、CD80和CD86等共刺激分子,其分子表达率分别为69.3%、41.0%、42.1%、63.2%、39.4%和38.6%,与转染前差异有统计学意义(P＜0.05).单纯接种DC组、pAdBM5-mAFPDC组、pAdBM5.mAFP组和正常对照组的肝癌发生率分别为65.0%、25.0%、70.0%和75.0%,pAdBM5-mAFP-DC组与其他组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 pAdBM5-mAFP-DC瘤苗免疫自然诱癌的C57BL/6J小鼠,可降低肝癌的发生率,对肝癌的发生有免疫保护作用.     

TSLC1真核表达载体的构建及在HepG2肝癌细胞中的表达

目的构建TSLC1真核表达载体,并转染到肝癌细胞HepG2中使之表达,为研究TSLC1的抗肝癌作用奠定基础。方法利用RT-PCR技术扩增TSLC1基因全长,并与真核表达载体pRe-ceiver-M29进行连接;应用双酶切、PCR以及测序鉴定此连接载体;脂质体Lipofectamine 2000介导重组载体转染到HepG2细胞中,经G418筛选建立稳定转染细胞株,分别采用RT-PCR和免疫组化法检测其表达。结果RT-PCR获得了约1 329 bp大小的TSLC1基因片段;经过双酶切、PCR以及测序鉴定证实TSLC1基因片段正确插入真核表达载体pReceiver-M29中;与对照组比较,RT-PCR方法可见显示转染组细胞TSLC1mRNA表达明显增多,免疫组化法可见显示转染组细胞TSLC1蛋白表达明显增高。结论成功构建了真核表达载体pReceiver-M29-TSLC1,建立了稳定转染TSLC1的HepG2细胞株。     

双向电泳分析肝癌细胞线粒体的差异表达蛋白

背景与目的:线粒体在细胞凋亡中扮演关键的角色,对线粒体蛋白质组的研究可能有助于解释癌症的发生、早期诊断以及抗癌药物的研发。本研究对正常肝细胞L02线粒体、表阿霉素干预前后肝癌细胞QGY-7703线粒体进行二维电泳图谱的比较分析,筛选差异表达蛋白斑点。方法:运用蔗糖密度梯度的超离心方法分离纯化线粒体,双向凝胶电泳分离线粒体蛋白质,ImageMaster2D软件对所得图谱进行图像分析。结果:L02细胞线粒体、表阿霉素干预前QGY-7703细胞线粒体、表阿霉素干预后QGY-7703细胞线粒体三种标本超离心后,其纯化线粒体琥珀酸脱氢酶比活力分别提高13.8、11.8、10.2倍。L02细胞线粒体和表阿霉素干预前后QGY-7703细胞线粒体经双向凝胶电泳分辨出206、217、214个蛋白斑点,L02细胞与QGY-7703细胞比较筛选出49个差异表达蛋白斑点;表阿霉素干预前后的QGY-7703细胞进行比较,筛选到29个差异表达蛋白斑点。结论:运用超离心和双向电泳的方法成功筛选出一批在QGY-7703细胞线粒体中差异表达的蛋白斑点。