EGF对大鼠真皮成纤维细胞增殖的影响

目的观察EGF对大鼠真皮成纤维细胞增殖活性的影响.方法将传代培养的第3代大鼠真皮成纤维细胞(FB)以含有新生牛血清的DMEM培养基进行培养,当细胞培养至对数生长期时,分别改用添加有不同浓度EGF的培养液继续培养,以MTT法测定细胞增殖活性.结果在培养液中添加不同浓度的EGF,FB的增殖活性均有不同程度的增加.结论EGF对体外培养大鼠真皮成纤维细胞的增殖具有促进作用.     

表皮生长因子及胶原网架对培养成纤维细胞的影响

目的：观察表皮生长因子（EGF）及胶原网架对体外培养的皮肤成纤维细胞（FB）增殖的影响。方法：酶消化法分离大鼠皮肤FB,以含有10%新生牛血清的DMEM培养液进行培养,采用细胞计数、MTT法、组织学方法测定细胞增殖能力和形态变化。结果：培养液中EGF浓度大于5 μg•L^-1时,FB的增殖活性随EGF浓度的增加而增加,在 20 μg•L^-1浓度时达到最大。植入胶原网架中的FB,随着培养时间的延长,细胞数量增加缓慢。结论：EGF对FB的增殖具有促进作用,而胶原网架对FB的增殖速率具有一定的调节作用。     

EGF与bFGF对体外大鼠巩膜成纤维细胞增殖的影响

目的研究表皮生长因子（EGF）和碱性成纤维生长因子（bFGF）在体外对大鼠巩膜成纤维细胞生长的影响。为进一步了解近视发生的分子机制提供依据。方法采用植块法培养大鼠巩膜成纤维细胞。细胞经传代纯化鉴定后，取第3～4代细胞加入不同浓度的EGF（0．1～200ng／mL）、bFGF（0．1～50ng／mL）。分别培养24、48、72h用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞的增殖密度。观察不同浓度、时间下细胞增殖情况。结果发现0．1～100ng／mL的EGF和0．1～50ng／mL的bFGF对大鼠巩膜成纤维细胞均有明显的促增殖作用，且呈剂量相关性。结论一定浓度的EGF、bFGF对体外培养的大鼠巩膜成纤维细胞的生长具有促进作用。     

EGF对真皮成纤维细胞中cyclinD1和CDK-4表达的影响

目的　探讨表皮生长因子 (EGF)对作为皮肤组织工程种子细胞之一的真皮成纤维细胞中 cyclin D1和 CDK- 4表达的影响 ,以从细胞周期探讨 EGF促进真皮成纤维细胞生长的机制 .方法　用含 10 0 m L· L- 1 胎牛血清的 DMEM,加入5 0 mg· L- 1的 EGF培养 SD大鼠的真皮成纤维细胞 ,通过MTT检测、流式细胞仪分析观察细胞的生长状态 ,免疫组化检测 cyclin D1和 CDK- 4的表达 ,结合流式细胞仪分析观察细胞的周期变化 .结果　 MTT检测、流式细胞仪结果都显示 5 0mg· L- 1 的 EGF能显著促进真皮成纤维细胞的生长增殖 ,免疫组化结果显示 ,二者一致 .结论　 5 0 mg· L- 1 的 EGF对真皮成纤维细胞的生长有极大的促进作用 ,促进了细胞周期蛋白 cyclin D1和 CDK- 4的表达 ,使细胞 G1期变短 .     

EGF对大鼠深Ⅱ度烫伤创面成纤维细胞的影响

目的探讨鼠表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF)对大鼠深Ⅱ度烫伤创面成纤维细胞的影响. 方法采用流式细胞仪测定成纤维细胞的细胞周期,透射电镜观察成纤维细胞的形态, HE染色观察肉芽组织范围以了解成纤维细胞的功能变化. 结果应用EGF组和对照组大鼠分别于用药后第3、6d有成纤维细胞增殖活性的增加,后又迅速恢复近正常水平,电镜下可见用药组大鼠成纤维细胞明显增生迹象;两组大鼠在肉芽组织范围及肉眼观察创面愈合天数上无明显不同. 结论按临床常规用药方法,EGF可在一定时相内增加成纤维细胞增殖活性,但对创面愈合并未产生明显影响.     

EGF对大鼠深Ⅱ度烫伤创面成纤维细胞的影响

目的：探讨鼠表皮生长因子（epidermal growth factor,EGF)对大鼠深Ⅱ度汤伤创面成纤维细胞的影响。方法：采用流式细胞仪测定成纤维细胞的细胞周期，透射电镜观察成纤维细胞的形态，HE染色观察肉芽组织范围以了解成纤维细胞的功能变化。结果：应用EGF组和对照组大鼠分别于用药后第3，6d有成纤维细胞增殖活性的增加，后又迅速恢复近正常水平，电镜下可见用药组大成纤维细胞明显增生迹象，两组大鼠在肉芽组织范围及肉眼观察创面愈合天数上无明显不同。结论：按临床常规用药方法，EGF可在一定时相内增加成纤维细胞增殖活性，但对创面愈合并未产生明显影响。     

大鼠角朊细胞增殖活性的影响因素

目的：探讨大鼠角朊细胞增殖活性的影响因素。方法：将传代培养的第2代大鼠角朊细胞（KCs）,以含有新生牛血清的DMEM-F12培养基进行无滋养层法培养,当细胞培养至对数生长期时,分别改用含有不同浓度表皮生长因子（EGF）、肝细胞生长因子（HGF）、成纤维细胞生长因子（FGF）、霍乱毒素（CT）、氢化可的松（HVB）、胰岛素（Insulin）、三碘甲腺原氨酸（T₃）的培养液继续培养,以MTT法测定细胞增殖活性。 结果：在一定浓度范围内,EGF(5～25 μg•L^-1)、HGF(0.1～10 μg•L^-1)、FGF(0.05～2.0 μg•L^-1)、CT(2～10 μg•L^-1)、HVB(0.1～0.8 mg•L^-1)、Insulin(0.5～6.0 mg•L^-1)及T₃(0.1～2.0 μg•L^-1)对KCs的增殖均具有不同程度的促进作用。 结论：采用无滋养层法培养大鼠表皮角朊细胞时,在培养液中加入一定浓度的EGF、HGF、FGF、CT、HVB、Insulin及T₃是必要的。     

尿激酶对大鼠胸膜成纤维细胞增殖与细胞凋亡的影响

目的:研究尿激酶(UK)对大鼠胸膜成纤维细胞(FB)增殖与细胞凋亡的影响. 方法:将大鼠胸膜FB原代培养,4～12代用于实验,FB与不同浓度UK共培养24～96 h;用光学显微镜观察其形态学改变;荧光染色查找凋亡小体;流式细胞技术观察有无凋亡细胞出现. 结果:UK以时间和浓度依赖的方式抑制细胞生长,但未发现凋亡小体,流式细胞技术没有检测到凋亡细胞. 结论:UK能够抑制FB增殖,其机制与细胞凋亡无关.     

新型猪胶原基真皮支架细胞毒性及亲和性的实验研究

目的通过对一种新型的猪胶原基真皮支架（PCDM）的细胞毒性和与成纤维细胞（FB）的亲和性进行评价,为这种新型生物材料的安全应用及工艺改良提供依据。方法用MTT法检测真皮支架不同浓度的浸提液对细胞增殖的影响情况,按医用生物材料细胞毒性分级标准进行评级;用MTT法测定种植24 h后FB在PCDM乳头层面的黏附情况,并与空白培养板对照,确定细胞在支架上的黏附率;在PCDM乳头层面种植人FB,于接种后1、7、14天通过苏木精-伊红染色、扫描电镜观察FB在PCDM上的生长情况。结果PCDM细胞毒性评级为0～1级,可认为无细胞毒性;FB在PCDM上的黏附数目相当于在培养板上的50%;FB在真皮支架乳头层表面增殖良好,但无法长入支架内部。结论猪胶原基真皮支架是一种无毒的天然异种真皮替代物,细胞亲和性较好,但需要改良生产工艺,以提高细胞黏附率和细胞相容性。     

杞叶含药血清对长波紫外线损伤人皮肤成纤维细胞的保护作用

目的探讨不同浓度枸杞叶（LBL）含药血清对长波紫外线（UVA）辐射致人真皮成纤维细胞（HSF）损伤的防护作用及其作用机制。方法采用强度2.8J.cm^-2的UVA照射HSF损伤造模,实验分为空白组、对照组、UVA模型组、空白血清组、UVA＋0.15g.mL^-1LBL组,UVA＋1.5 g.mL^-1LBL组和VitC阳性对照组,用MTT法检测细胞增殖活性,酶生化法检测MDA含量及培养液中LDH漏出量。结果正常大鼠血清不影响HSF功能,UVA照射HSF损伤法可造成HSF增殖活性降低,MDA含量升高,LDH漏出增加,与空白组相比差异有统计学意义（P均〈0.05）;不同浓度的LBL及VitC均能增加细胞的增殖活性,减少MDA含量和LDH的漏出量,但LBL作用更优（P〈0.05）。结论不同浓度LBL对UVA损伤的HSF均有一定的保护作用,其机制可能与LBL的抗氧化作用及促进细胞增殖活性有关。     

bFGF对牙周膜细胞合成纤维连接蛋白的影响

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人牙周膜细胞(PDLF)合成纤维连接蛋白(Fn)的影响. 方法 取体外培养的PDLF,按加入的bFGF终浓度分为0 ng/ml(对照),1 ng/ml,10 ng/ml,50 ng/ml,100 ng/ml bFGF五组,继续培养72 h后应用免疫细胞化学方法 观察细胞胞质中Fn的合成情况. 结果 与对照组相比,PDLF中Fn的表达在1-100 ng/ml bFGF都明显增多,差异均有统计学意义(P<0.05),其中在10-50 ng/ml bFGF时增加水平最为显著,达到最佳效果. 结论 bFGF有促进PDLC合成纤维连接蛋白的作用.     

不同浓度表皮生长因子对小鼠2-细胞胚胎体外发育的影响

目的:研究不同浓度表皮生长因子(ep iderm al growth factor,EGF)对ICR小鼠2-细胞胚胎体外发育的影响。方法:在mKSOM培养液中添加不同浓度(0.1,1.0,10和100 ng/m l)的EGF对小鼠2-细胞胚胎进行体外培养72 h、96 h,观察囊胚发育率、孵化率和胚胎细胞数的变化。结果:实验组加入四种不同浓度EGF胚胎培养72 h后,其囊胚率分别为93.8%、92.4%、91.8%、91.2%;96 h后其孵出率分别为61.1%、61.8%、63.0%、60.1%,均显著高于对照组(79.9%、43.1%,P<0.05),囊胚细胞数分别为73.1±13.4、73.8±7.0、74.3±12.2、77.6±8.2,与对照组(72.1±6.9)比较,差异无显著性(P>0.05);四个实验组间差异亦无显著性(P>0.05)。结论:EGF浓度在0.1,1.0,10和100 ng/m l范围内可提高体外培养鼠胚的囊胚率与孵出率;胚囊细胞数无变化;不同浓度EGF对早期鼠胚未见有毒性作用。     

IL-13对正常人表皮成纤维细胞产生炎症因子作用的实验研究

目的探讨白介素-13（IL-13）对正常人表皮成纤维细胞（NHDF）产生炎症因子的影响。方法使用不同浓度IL-13（0.1、1、10ng/ml）刺激体外培养的NHDF,应用ELISA方法检测IL-13刺激NHDF24h后,白介素-6（IL-6）,白介素-8（IL-8）,巨噬细胞趋化蛋白-1（MCP-1）和嗜酸性粒细胞趋化因子（Eotaxin）的蛋白表达水平。结果0.1ng/mlIL-13刺激下,IL-6、MCP-1和Eotaxin的蛋白表达水平分别为（727.33±39.88）pg/ml、（414.67±13.01）pg/ml、（124.67±8.67）pg/ml;1ng/mlIL-13刺激下,分别为（1222.50±49.95）pg/ml、（705.33±25.15）pg/ml、（205.33±16.59）pg/ml;10ng/mlIL-13刺激下,分别为（1502.83±5.31）pg/ml、（1329.17±56.08）pg/ml、（457.50±15.32）pg/ml,均明显高于对照组[（283.50±15.86）pg/ml、（205.17±3.76）pg/ml、（13.50±5.01）pg/ml,P〈0.05或0.01],并具有浓度依赖性。IL-8蛋白表达水平与对照组无显著性差异（P〉0.05）。结论IL-13可刺激NHDF产生IL-6、MCP-1和Eotaxin,这些炎症因子的大量表达可能参与了IL-13在皮肤组织纤维化过程中的病理性作用。     

表皮生长因子对小鼠早期胚胎体外发育影响的研究

目的：探讨表皮生长因子对小鼠植入前胚胎体外发育的影响。方法：用添加不同浓度EGF(epidermal growth factor)的CZB培养液对小鼠早胚进行体外培养，观察囊胚发育率和胚胎细胞数的变化。结果：HCG(human chorionic gonadotropin)注射后138h，0．1ng／ml EGF添加组扩张囊胚率、孵化囊胚率显著高于其他各组。100．0ng／ml EGF添加组扩张囊胚率和孵化囊胚率显著低于其余各组，且囊胚细胞死亡较多。结论：EGF通过刺激囊胚期细胞分化而促进胚胎体外发育。但高浓度EGF抑制胚胎体外发育并使早期胚胎受损。     

表皮生长因子对角膜成纤维细胞生长的影响

目的　研究表皮生长因子 (EpidermalGrowthFactor,EGF)对角膜成纤维细胞生长的影响。方法　通过含不同浓度EGF的培养基培养角膜成纤维细胞 ,分别于 2 4、48和 72h用 0 .5 %台盼蓝法对每组进行细胞活力的测定。结果　 0 .1、1.0mg/L的EGF在细胞培养 48、72h后对细胞生长有一定的促进作用 (P <0 .0 5 ) ,但在 2 4h时对细胞生长无明显影响 (P >0 .0 5 )。浓度为 0 .0 1mg/L的EGF对角膜成纤维细胞生长无明显影响 (P >0 .0 5 )。结论　一定浓度的EGF对角膜成纤维细胞的生长具有促进作用     

正常人毛乳头细胞和真皮鞘细胞的生长特性观察

目的 观察毛乳头细胞和真皮鞘细胞在体外培养条件下的生长特性。方法 采用胶原酶消化法培养正常人头皮毛囊的毛乳头细胞和真皮鞘细胞,在体外进行传代培养,测定毛乳头细胞不同时相点的细胞数,并观察表皮细胞生长因子、氢化可的松＋胰岛素、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子对毛乳头细胞和真皮鞘细胞增殖的影响。结果 毛乳头细胞、真皮鞘成纤维细胞和真皮成纤维细胞的生长呈现３个时相,即停滞期、指数生长期和缓慢生长期。３种细胞都有４ｄ的停滞期,５～１１ｄ为指数生长期,之后呈现出缓慢生长。ＥＧＦ对３种细胞都有显的促进作用（Ｐ〈０．００１）,尤其是对真皮鞘成纤维细胞的作用更强。氢化可的松和胰岛素、ＧＭ－ＣＳＦ对３种细胞的作用不明显。毛乳头细胞、真皮鞘细胞和成纤维细胞的倍增时间分别为６０、５９．２、７６．８ｈ。结论 ＥＧＦ对毛乳头细胞、真皮鞘细胞和     

生长因子(EGF和PDGF-BB)对小鼠骨髓基质干细胞增殖的作用及其意义

目的探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)和血小板源生长因子(platet-derived growth factor,PDGF-BB)对体外培养的小鼠骨髓基质干细胞(murine bone marrow stromal stem cells,mMSCs)增殖的作用,探索小鼠骨髓基质干细胞体外快速增殖的条件和方法.方法将小鼠骨髓基质干细胞进行分离和纯化培养后,加入EGF和PDGF-BB,利用3H胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入反映细胞增殖效果,倒置显微镜下观察细胞增殖及分化状态.结果EGF和PDGF-BB干预后,3H-TdR掺入(11456.14±968.86)dpm较对照组(3271.88±420.91)dpm明显增高,说明EGF和PDGF-BB可促进小鼠骨髓基质干细胞的增殖;倒置显微镜下观察可见EGF和PDGF-BB处理组mMSCs具有增殖优势,分化相对延迟,而对照组提前显示出自然分化现象.结论生长因子(EGF和PDGF-BB)可促进小鼠骨髓基质干细胞的增殖,是小鼠骨髓基质干细胞体外大量培养和快速增殖的有效刺激因子.     

血小板衍生生长因子-BB对血管内皮细胞、平滑肌细胞及成纤维细胞胶原蛋白合成的影响

目的:观察血小板衍生生长因子-BB对培养的人血管内皮细胞、平滑肌细胞和成纤维细胞胶原蛋白合成的影响.方法:采用培养的人血管内皮细胞、平滑肌细胞和成纤维细胞,应用3H-脯氨酸掺入方法,观察血小板衍生生长因子-BB对3种细胞胶原蛋白合成的影响.结果:血小板衍生生长因子-BB可促进处于静止状态的成纤维细胞和平滑肌细胞胶原蛋白合成,并呈现出明显的浓度依赖关系,成纤维细胞和平滑肌细胞胶原蛋白合成分别在30 ng/ml和40 ng/ml时达到高峰,血小板衍生生长因子-BB对血管内皮细胞胶原蛋白合成总量无明显促进作用.在30 ng/ml的血小板衍生生长因子-BB作用下,成纤维细胞和平滑肌细胞分别在36 h和48 h时胶原蛋白合成达到高峰.结论:血小板衍生生长因子-BB可明显促进培养的人血管平滑肌细胞和成纤维细胞的胶原蛋白的合成,对血管内皮细胞胶原蛋白合成总量无明显促进作用.