生物素交联补骨脂素标记HPV基因探针的制备

对含ＨＰＶ１６和ＨＰＶ１８ＤＮＡ质粒的大肠杆菌进行培养、扩增，提取大量质粒ＤＮＡ，纯化、酶切、回收ＨＰＶＤＮＡ片段，用国产生物素交联补骨脂素标记，再经纯化鉴定。制备的ＨＰＶＤＮＡ探针用亲合素辣根过氧化物酶显色，敏感性可达ｌｐｇ。检测靶核苷酸的敏感性可达５ｐｇ。该探针用于原位杂交检测１０例食管癌组织及相应癌旁粘膜组织中的ＨＰＶＤＮＡ，也取得良好结果。结果提示：用生物素交联补骨脂素标记基因探针是一种简单的方法，且效果良好，适于研究和临床检测。     

应用聚合酶反应制备HBV DNA生物素探针

通过聚合酶链反应将Ｂｉｏ－１１－ｄｕＴＰ掺入扩增的ＨＢＶ ＤＮＡ中，制备了长度为１２０ｂｐ的生物素探，检测到０．１ｐｇ的ＨＢＶ ＤＮＡ。ＰＣＲ标记法简便迅速，特异性，用ＤＮＡ量少且无需分离纯化，其标记探针得率高，活性强。     

多重多聚酶链反应和原位杂交检测成人咽喉病变中人乳头瘤病毒感染

用多重我聚酶链反应（ＰＣＲ）和生物素标记探针的原位杂交方法对３６例石蜡包埋的成人咽、喉部乳头状瘤、上皮不典型增生和鳞状细胞癌的组织标本进行了检测。结果共检出６例ＨＰＶＤＮＡ阳性病例，全部为ＨＰＶ６／１１，其中仅１例伴ＨＰＶ１６型感染。６例阳性病例包括喉乳头状瘤３例，咽乳头状瘤、喉粘膜上皮高度不典型增生及喉鳞癌各１例。原位杂交显了ＨＰＶＤＮＡ在肿瘤组织、组织中的分布。     

用原位杂交技术检测人子宫颈癌组织中HPV16E6转化基因的研究

应用地高辛非放射性标记与检测系统制备人乳头瘤病毒１６型Ｅ６（ＨＰＶ１６Ｅ６）转化基因ＤＮＡ探针，经用斑点杂交检测，探针特异性强，灵敏度达０．１ｐｇ，应用组织切片原位杂交技术检测了４４例子宫颈癌组织。结果表明，ＨＰＶ１６Ｅ６阳性２７例、占６１．３６％，５例正常对照子宫颈组织中未检出。提示ＨＰＶ１６Ｅ６转化基因与子宫颈癌密切相关，为阐明子宫颈癌的病因和ＨＰＶ１６Ｅ６在诊治子宫颈癌中的作用提供了理论依据     

用原位杂交技术检测人子宫颈癌组织中HPV16E_6转化基因的研究

应用地高辛非放射性标记与检测系统制备人乳头瘤病毒１６型Ｅ６（ＨＰＶ１６Ｅ６）转化基因ＤＮＡ探针，经用斑点杂交检测，探针特异性强，灵敏度达０．１ｐｇ，应用组织切片原位杂交技术检测了４４例子宫颈癌组织。结果表明，ＨＰＶ１６Ｅ６阳性２７例、占６１．３６％，５例正常对照子宫颈组织中未检出。提示ＨＰＶ１６Ｅ６转化基因与子宫颈癌密切相关，为阐明子宫颈癌的病因和ＨＰＶ１６Ｅ６在诊治子宫颈癌中的作用提供了理论依据。     

DIG—DNA探针检测宫颈癌组织中人乳头瘤病毒6,11,16,18型DNA

用地高辛配基分别标记，制备ＨＰＶ－６、ＨＰＶ－１１、ＨＰＶ－１６及ＨＰＶ－１８的ＤＮＡ探针，应用核酸杂交技术，对３７例宫颈癌活检组织ＤＮＡ作了检测，各型ＨＰＶＤＮＡ的检出率为：ＨＰＶ－６０％、ＨＰＶ－１１２．７、ＨＰＶ－１６６７．５％、ＨＰＶ－１８１３．５％，联合应用ＨＰＶ－１６和ＨＰＶ－１８探针共同检测结果为８１％。结果显示：我国宫颈癌的发生与ＨＰＶ感染密切相关，联合应用高危型ＨＰＶ探针可提高检     

口腔颌面外科学

口腔颌面外科学邱蔚六一、颌面肿瘤人类乳头瘤病毒（ＨＰＶ）与口腔癌发生的关系又引起了人们的兴趣。以放射性核素３２Ｐ标记ＨＰＶ１１，ＨＰＶ１６和ＨＰＶ１８ＤＮＡ探针，用核酸斑点杂交法检测了部分口腔癌的ＨＰＶ相关序列。３种探针总和的检测结果证明：１２例口腔...     

复发尖锐湿疣皮损内HPVDNA的PCR的检测

目的：检测复发光湿疣皮损表皮和真皮内的人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）ＤＮＡ，探讨其反复复发的原因。方法：对取自１６例复发尖锐湿疣（ＲＣＡ）患者的１６个皮损组织，用溴化的钠溶液分离表皮和真皮，从组织中提取的ＤＮＡ和溴化钠分别用聚合酶链反应ＨＰＶＤＮＡ，阳性病例采用地高辛标记的型特异性寡核苷酸探针斑点杂交法进行盼型。结果：１６例ＲＣＡ表皮内均检出了ＨＰＶＤＮＡ，ＨＰＶ。阳性占６２．５％，ＨＰＶ１１阳生占２５．     

地高辛标记探针与生物素标记探针用于斑点杂交检测HBV DNA的初步研究

为研究地高辛标记和生物素标记核酸探针斑点杂交检测ＨＢＶ ＤＮＡ的敏感性、特异性和稳定性，用两种探针和＾３２Ｐ标记探针进行平行检测对照。结果表明，地高辛探针检测灵敏度为０．１Ｐｇ，已达到＾３２Ｐ标记探针水平。生物素探针为１￣１０Ｐｇ。两种探针与＾３２Ｐ标记探针相比。符合率分别９６．６５％和８９．１３％；敏感性分别为９４．４４％和８３．３３％；特异性分别为９６．４３％和９２．８６％。两种探针在－２０℃     

PCR结合核酸分子杂交放射自显影检测HPV16,18实验条件的研究

为建立一种快速、简便、高敏感性和特异性的检测消化道肿瘤组织中ＨＰＶ１６，１８ＤＮＡ序列的方法，用ＰＣＲ扩增ＨＰＶ１６早期区Ｅ６的１２０ｂｐ片段和扩增ＨＰＶ１８Ｅ６、Ｅ７区２６７ｂｐ片段，扩增产物与相应的５′－末端Ｐ３２标记的特异性寡核苷酸探针进行斑点杂交放射性自显影。探讨了影响ＰＣＲ和杂交的关键因素，从中选出较佳的反应条件：即ＰＣＲ退火温度及杂交温度均为５５℃，反应缓冲液镁离子浓度为１．５ｍｍｏｌ／Ｌ，引物浓度各为５０ｐｍｏｌ／１００μｌ，探针浓度各为１．０ｐｍｏｌ／ｍｌ，杂交时间３ｈ，放射性自显影时间２４ｈ。在上述条件下，该方法可检出低至０．０１ｆｇ的ＨＰＶ１６或ＨＰＶ１８质粒ＤＮＡ，ＨＰＶ１６与ＨＰＶ１８之间无交叉反应，为进一步探讨ＨＰＶ与消化道肿瘤的关系奠定了基础。     

人乳头瘤病毒与呼吸道肿瘤关系的研究：Ⅰ.HPV与喉癌的关系

应用α－３２Ｐ－ｄＣＴＰ标记ＨＰＶ－１１及ＨＰＶ－１６ＤＮＡ为探针，以Ｓｌｏｔｂｌｏｔ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ两种核酸杂交技术，检测了取自青岛及北京两个地区的３７例喉鳞癌组织ＤＮＡ中ＨＰＶ－１１及ＨＰＶ－１６ＤＮＡ相关序列。结果表明，Ｓｌｏｔｂｌｏｔ杂交中，与ＨＰＶ－１１探针杂交阳性者占８６％（３２／３７），与ＨＰＶ－１６探针杂交阳性者占８１％（３０／３７）。在同一癌组织中，与两型探针同时呈现阳性者占８１％（３０／３７）。Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交中，与所用探针ＤＮＡ的内切酶ＰｓｔⅠ酶切图谱比较，有４６％（１３／２８）与ＨＰＶ－１６ＤＮＡ的酶切图谱相同，可定为ＨＰＶ－１６型。当用ＨＰＶ－１１探针时无一例出现与ＨＰＶ－１１相同的图谱。提示喉癌的发生与ＨＰＶ－１６有关。     

人类乳头状瘤病毒与子宫颈腺癌关系初探

目的：检测子宫颈腺癌组织中人类乳头状瘤病毒存在的证据。方法：利用ＤＮＡ原位杂交方法，生物素标记的ＨＰＶ６／１１，１６，１８，３１／３３／３５探针，检测组织中的病毒。结果：３２例受检标本中，无阳性标本存在，对照组标本均为阳性。结论：浸润性宫颈腺癌组织中，较少有人类乳头状病毒存在的证据，说明子宫颈腺癌与人类乳头状病毒感染关系较小。     

光敏生物素标记DNA探针检测海南大劣按蚊

光敏生物素标记ＤＮＡ探针检测海南大劣按蚊刘斌陆晓林刘忠湘（第四军医大学寄生虫学教研室西安７１００３３）关键词大劣按蚊光敏生物素斑点杂交中图号Ｒ３９１．１同位素３２Ｐ标记的质粒ｐＡＤ－３２０是一株特异性、敏感性均较好的海南大劣按蚊探针．但是，由于同位素...     

用PCR和地高辛标记的核酸杂交技术检测女性下生殖道人乳头瘤病毒感染

应用多聚酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ）和地高辛标记的ＨＰＶＤＮＡ的斑点及Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交３种方法，同时检测了１７例外阴和宫颈湿疣的标本。检测结果表明ＰＣＲ结合地高辛标记的斑点杂交技术是目前检测女性下生殖道人乳头瘤病毒ＨＰＶ感染较为敏感、特异、简便的分子生物学方法。因杂交中所使用的ＨＰＶＤＮＡ探针为非放射性标记的，弥补了３２Ｐ标记探针的缺点，可制成试剂盒在临床推广、应用。从而为临床对ＨＰＶ感染的诊断提供一条有效的检测方法。     

地高辛标记DHBVDNA探针的制备及应用

采用随机引物法制备地高辛标记含鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）基因片段的质粒ＰＢＲ３２２作为探针，建立ＤＨＢＶＤＮＡ斑点杂交试验，结果：探针可检出１．０ｐｇ同源ＤＮＡ片段，不与人乙肝病毒（ＨＢＶ）及鸭肝细胞ＤＮＡ发生杂交，与￣３５Ｓ－ＤＨＢＶＤＮＡ探针的灵敏度相似。该探针检出重庆地区２－３月龄麻鸭血清ＤＨＢＶ自然感染率为２５．４８％；用ＤＨＢＶ血清经腹腔感染１－２日龄雏鸭，１周后阳性感染率为８２．９０％，并可持续感染至少２月。     

地高辛甙元标记DNA探针的试剂研究

利用补骨脂素(Psoralen)在可见光照射下可与DNA双链结合的性质,Sheldon提出在DNA探针的末端连结一段双链DNA,用连有生物素的补骨脂素与其光反应则可在DNA探针的末端标记生物素。据报道其检测灵敏度可达1×10~4拷贝。我们在研究补骨脂素与双涟DNA光反应时发现,补骨脂素不仅可与双链DNA交联而且也可与单链DNA结合,与补骨脂     

人乳头瘤病毒DNA在原发性肺癌组织中的表达

目的：探讨人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）ＤＮＡ在原发性肺癌组织中的表达．方法：利用西京医院病理科２７５例肺癌病理标本进行研究,以同期３２例支气客粘膜鳞状化生和３４例粘膜慢性炎症标本作为双非肿瘤对照组．采用随机引物法制备地高辛标记ＨＰＶ６Ｂ／１１,１６,１８,３１型ＤＮＡ探针,应用原位杂交检测肺癌组织中的ＨＰＶ－ＤＮＡ存在情况．结果：ＨＰＶ感染总阳性率为３３．８％（９３／２７５）而各细胞类型阳性率为：肺鳞癌     

PCR结合核酸分子杂交放射自显影检测HPV16,18实验条件的研究

为建立一种快速，简便，高敏感性和特异性的检测消化道肿瘤组织中ＨＰＶ１６，１８ＤＮＡ序列的方法，用ＰＣＲ扩增ＨＰＶ１６早期区Ｅ６的１２０ｂｐ片段和扩增ＨＰＶ１１８Ｅ６，Ｅ７区２６７ｂｐ片段，扩增产物与相应的５′－末端Ｐ３２标记的特异性寡核苷酸探针进行斑点杂交放射性自显影，探讨了影响ＰＣＲ和杂交的关键因素，从中选出较佳的以应条件，即ＰＣＲ退火温度及杂交温度均为５５℃，影响ＰＣＲ和杂交的关键因素，从中选     

人喉癌组织中人乳头瘤病毒DNA的检测

目的：为探讨喉癌与人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）感染的关系和ＨＰＶ在喉癌中基因组型的分布与表达。方法：应用聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）制备非放射性探针标记物－地高辛标记ＨＰＶ共有引物探针，对１４６例喉不同病变的新鲜组织标本（喉癌６８例，喉其他病变４８例，正常喉组织３０例），进行ＨＰＶ６，１１，１６，１８，３１，３３，３５，４２，５８共９型ＨＰＶＤＮＡ感染的检测；阳性者用多重引物ＰＣＲ方法分型。结果：喉癌ＨＰＶ感染阳性率４５．６％（３１／６８），喉癌颈转移淋巴结组织阳性率２０．０％（３／１５），喉癌前病变阳性率１１．８％（２／１７），声带息肉阳性率６．３％（１／１６），１５例癌旁及１５例癌周正常喉组织均为ＨＰＶＤＮＡ阴性。ＨＰＶＤＮＡ型别分布在喉癌中以ＨＰＶ１６，１８型为主，喉良性病变中以ＨＰＶ６，１１型为主。结论：喉癌发生与ＨＰＶ感染有关。     

咽喉鳞状细胞癌组织中HPV的检测

用免疫组化及ＤＮＡ斑点杂交技术检测人咽喉部鳞状细胞癌组织中ＨＰＶ壳蛋白抗原及ＨＰＶ６、１１、１６、１８型ＤＮＡ序列。４５例鳞状细胞癌组织ＨＰＶ抗原阳性率为２２．２％，ＨＰＶＤＮＡ阳性率为３１．１％，５例正常粘膜ＨＰＶ抗原及ＨＰＶＤＮＡ均阳性。结果提示咽喉部鳞状细胞癌的发生和发展与ＨＰＶ感染有关系。