颞叶内侧型癫痫大鼠模型海马GABAA受体亚单位α1 β3 γ2表达研究

目的通过测定颞叶内侧型癫痫大鼠模型海马的GABAA受体的三个亚单位α1β3γ2的mRNA表达水平,来探讨它们在该病的发病机制和发展过程中的作用,为癫痫的病因学研究和临床治疗提供可能的理论依据。方法用锂和匹罗卡品腹腔注射20只成年大鼠,制作颞叶内侧型癫痫大鼠模型。用断头法完整采集大鼠海马,RT-PCR技术扩增三个亚单位α1β3γ2的mRNA,通过t-检验与正常大鼠进行对比。结果实验组有16只大鼠制作癫痫模型成功,与β-actin电泳条带比值:α1(0.369±0.164),β3(0.499±0.273)γ2(0.429±0.346);对照组分别为α1(0.518±0.212),β3(0.291±0.116),γ2(0.231±0.132)。t-检验结果P<0.05,存在统计学差异。结论实验组大鼠GABAA受体可能发生了重组,它的三个亚单位α1β3γ2可能参与了颞叶内侧型癫痫的发病机制。     

内侧颞叶癫痫脑缺省模式网络改变的研究

目的 探讨内侧颞叶癫痫脑缺省模式网络改变.方法 2009年1月至2011年1月诊治的内侧颞叶癫痫患者36例为观察组,选取同期健康体检人员40例为对照组进行脑缺省模式网络检测.结果 均获得到典型的脑DMN的统计参数图,暖色区:内在脑DMN 中mTLE患者比正常人连接度增强,外在网络中mTLE患者比正常人负向连接度减弱.冷色区:外在网络中mTLE患者比正常人负向连接度增强的区域.结论 内侧颞叶癫痫患者的脑缺省模式网络受到不同效果的影响,在癫痫的发生发展中起着重要和复杂的作用.在一定程度上揭示了内侧颞叶癫痫患者行为学表现的内在神经机制.     

内侧颞叶癫痫脑缺省模式网络改变的功能MRI研究

目的 探讨功能MRI在内侧颞叶癫痫脑缺省模式网络改变的研究价值及临床意义.方法 选取我院2008年1月至2010年12月收治的20例内侧颞叶癫痫脑缺省模式网络改变患者,将其大脑电生理特性与无癫痫疾病的病例做分析比较,摘取其中可供临床应用要点.结果 20例内侧颞叶癫痫脑缺省模式网络改变患者功能MRI研究下可有负激活电生理及异常图像,内侧颞叶区域激活减弱.结论 功能MRI研究对于掌握内侧颞叶癫痫脑缺省模式网络改变患者的电生理具有积极的临床意义,可用于判断指导该病的发病规律和状态,值得临床应用.     

前颞叶切除术(ATL)与选择性海马杏仁核切除术(SAH)治疗海马硬化性颞叶内侧癫痫的疗效评价

目的探讨前颞叶切除术(ATL)与选择性海马杏仁核切除术(SAH)治疗海马硬化性颞叶内侧癫痫的临床疗效。方法将我院2009年至2012年间收治的68例海马硬化性颞叶内侧癫痫患者随机分为ATL治疗组和SAH治疗组,每组各34例,比较两组患者的临床疗效。结果两组患者手术均告成功,无手术死亡病例,患者术后未发生颅内感染及颅内血肿等并发症。术后随访6个月发现,两组患者在癫痫发作控制效果方面的差异无统计学意义(P>0.05),两组患者癫痫发作情况均取得了满意的控制效果。结论 ATL与SAH治疗海马硬化性颞叶内侧癫痫聚能取得较好的临床疗效,手术应严格把握手术适应证,并完善术前的各项辅助检查,根据术者的临床经验选择合理的手术方式,以提高临床治疗效果,保证患者安全。     

梭曼中毒后不同时间大鼠海马N-甲基-D-天冬氨酸受体亚单位2A/2B及GABAα1受体表达的变化

目的观察梭曼染毒大鼠海马组织N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体亚单位NR2A,NR2B及GABAα1受体在中毒后不同时间mRNA与蛋白表达的变化。方法大鼠先ip给予HI-6 125mg·kg-1一次性sc给予梭曼160μg·kg-1,采用HE染色及TUNEL染色观察中毒后不同时间大脑海马组织病理损伤及神经元细胞凋亡;实时荧光定量PCR及Western印迹法测定海马组织中NR2A,NR2B及GABAα1受体在梭曼染毒后30min,1h,2h,6h,24h,48h及7d的表达变化。结果组织病理学检查结果显示,在梭曼染毒后1h出现明显的细胞损伤,在染毒后24 h细胞损伤最为严重;TUNEL染色显示,在染毒后6h出现明显细胞凋亡,在染毒后24h凋亡最为严重。染毒后2h,与正常对照组比较,NR2A及NR2B蛋白表达均显著上调,但GABAα1受体到染毒后24h才出现表达明显增加。梭曼染毒后2～6h,与正常对照组比较,海马NR2A,NR2B及GABAα1受体mRNA表达显著上调,染毒后24～48h,NR2A及NR2B受体mRNA出现不同程度降低,至染毒后7d恢复正常水平。结论梭曼染毒后期,出现NMDA受体亚单位NR2A,NR2B及GABAα1受体mRNA及蛋白表达异常;该表达异常可能与海马神经细胞损伤及凋亡存在一定关系。     

小剂量反复注射匹罗卡品建立颞叶癫痫大鼠模型的研究

癫痫是一种中枢神经系统常见疾病,颞叶癫痫是难治性癫痫的常见类型,对癫痫发病机理和抗癫痫药物的研究主要依靠动物实验,迄今尚无一种动物模型能完全模拟人类颞叶癫痫的所有临床、病理、生理学特征.目前常用氯化锂—匹罗卡品腹腔注射法建立癫痫大鼠模型,但所用匹罗卡品的剂量和用法等差异较大,尚无统一标准.已有文献报道使用单次大剂量匹罗卡品腹腔注射法可以获得较高的致痫鼠比率,但致死率较高[1].本实验选择小剂量反复腹腔注射匹罗卡品建立大鼠颞叶癫痫模型,并对所构建的大鼠模型行为学、病理学进行研究,旨在摸索一种能获得较高致痫率及较低致死率的造模方法,现报道如下.     

自发性癫痫大鼠海马Ⅰ型与Ⅲ型钠通道α亚基表达上调

目的通过对照实验探讨自发性癫痫大鼠(SER)与野生型正常大鼠(WTC)海马Ⅰ型和Ⅲ型电压门控性钠通道α亚基mRNA与蛋白的表达情况。方法发现SER癫痫大发作后即刻提取海马组织总RNA,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)表达α1与α3亚基mRNA;应用免疫荧光与免疫组化定位与表达α1亚基蛋白与α3亚基ⅢN蛋白。结果SER海马Ⅰ型与Ⅲ型钠通道α亚基mRNA表达高于WTC(P<0·01);SER海马Ⅰ型钠通道α亚基蛋白表达高于WTC(P<0·01);α3亚基ⅢN型蛋白在SER成鼠有表达,而WTC成鼠无表达。结论SER脑内海马Ⅰ型与Ⅲ型电压门控性钠通道α亚基表达上调,可能是神经元高兴奋性的原因或癫痫发作的继发表现。     

对锂-匹罗卡品致颞叶癫痫模型大鼠学习记忆功能影响的研究

目的:探讨锂-匹罗卡品致颞叶癫痫模型大鼠自发性癫痫发作后学习记忆功能障碍的情况.方法:建立锂-匹罗卡品颞叶癫痫模型,应用Morris水迷宫和八臂迷宫实验评价颞叶癫痫模型大鼠自发性癫痫发作后的学习记忆功能障碍.结果:颞叶癫痫模型大鼠自发性癫痫发作后,Morris水迷宫和八臂迷宫实验均出现不同程度的障碍,障碍程度随着自发性癫痫发作时间延长而加重.结论:锂-匹罗卡品诱导颞叶癫痫长期自发性癫痫发作后会出现明显的学习记忆功能障碍.     

姜黄素对慢性颞叶内侧癫痫大鼠脑脊液和血浆中MMP-9水平及血脑屏障通透性的影响

目的探究姜黄素对慢性颞叶内侧癫痫大鼠脑脊液和血浆中基质金属蛋白酶(MMP)-9水平及血脑屏障通透性的影响。方法本研究于2021年2月至2023年2月在广州医科大学附属脑科医院开展。32只大鼠(6～8周, 雌性, 体质量160～180 g)中成功构建颞叶内侧癫痫模型大鼠17只, 将17只成功建模的慢性颞叶内侧癫痫大鼠随机分到姜黄素组(9只)和生理盐水组(8只)。姜黄素组大鼠予以腹腔注射姜黄素(100 mg/kg)干预, 生理盐水组大鼠予以腹腔注射生理盐水。分别检测两组大鼠干预前后脑脊液和血浆中白蛋白及MMP-9水平。采用t检验、单因素方差分析、事后多重比较。结果姜黄素组大鼠白蛋白商(脑脊液白蛋白/血浆白蛋白比值)从干预前的(14.443±1.700)下降至干预后的(12.822±1.450)(P<0.05), 脑脊液MMP-9水平从干预前的(43.753±3.787)μg/L下降至干预后的(39.507±4.015)μg/L(P<0.05);而生理盐水组脑脊液和血浆中白蛋白水平、白蛋白商及MMP-9水平干预前后均无显著变化(均P>0.05)。结论姜黄素可能通过改变脑脊液...     

自发性癫痫大鼠海马电压门控性钠通道β_1亚基表达与基因突变分析

目的与正常Wistar大鼠作对比,探讨自发性癫痫大鼠(SER)海马中电压门控性钠通道β1亚基mRNA与蛋白的表达情况及基因突变分析。方法应用RT-PCR技术检测β1亚基mRNA的表达;免疫组化方法定位β1亚基蛋白;免疫印迹方法检测β1亚基蛋白的表达;直接测序技术筛查β1亚基全部外显子基因突变位点。结果SER海马β1亚基mRNA表达高于Wistar大鼠(P<0.05);免疫组化结果显示β1亚基蛋白在SER大鼠海马各区中均有表达,且位于细胞膜上;β1亚基蛋白的表达高于Wistar大鼠(P<0.01);直接测序法筛查了β1亚基全部外显子的突变位点,结果未见任何突变。结论SER海马β1亚基表达异常可能会促进癫痫样兴奋活动的产生,进而构成SER癫痫表型的发作基础。     

遗传性癫痫大鼠海马内GAT-1和GAT-3表达上调

目的探讨遗传性癫痫大鼠(TRM)海马内GAT-1和GAT-3mRNA与蛋白的表达。方法应用RT-PCR技术检测GAT-1和GAT-3mRNA的表达;应用Westernblot方法检测GAT-1和GAT-3蛋白的表达;应用免疫组化方法定位GAT-1和GAT-3蛋白的分布。结果TRM大鼠海马内GAT-1mR-NA和蛋白表达均高于正常Wistar大鼠(P<0.01);GAT-3mRNA表达高于正常Wistar大鼠(P<0.05);GAT-3蛋白表达亦高于正常Wistar大鼠(P<0.01);免疫组化结果显示GAT-1在TRM和Wistar大鼠海马的CA1、CA3和DG区均有明显分布,且在TRM鼠海马的CA1、CA3和DG区中均比在正常Wistar鼠中明显;而GAT-3蛋白只在TRM和Wistar大鼠海马的CA1区中表达丰富,同时,和正常Wistar鼠比较,TRM鼠海马CA1区中GAT-3蛋白的表达明显增加。结论TRM大鼠海马内GAT-1和GAT-3表达上调可能促进了癫痫的发生,可能是癫痫治疗的靶点。     

氯巴占耐受听源性惊厥大鼠脑GABAA受体亚单位表达的变化

目的探讨氯巴占耐受听源性惊厥大鼠中枢GABAA受体亚单位表达的变化和这种改变与氯巴占耐受性机制关系.方法腹腔注射氯巴占2 wk,产生听源性惊厥大鼠氯巴占耐受模型.用竞争性定量RT-PCR测定大鼠脑皮质运动区和海马区的GABAA受体α1、α3、α5、γ2L和γ2S亚单位mRNA的含量.结果氯巴占耐受组大鼠皮质运动区α1亚单位下降27%,α5上升73%,γ2L下降43%,γ2S下降37%;海马区的α1下降28%,γ2L下降32%,γ2S下降31%,与对照组相比差异均有显著性.结论听源性惊厥大鼠的氯巴占耐受机制与中枢GABAA受体α1、α5、γ2L和γ2S亚单位表达的适应性改变有关.     

癫痫大鼠颞叶和海马区PX1mRNA与CX36mRNA表达及甘珀酸的干预

目的观察戊四氮点燃大鼠颞叶和海马区PX1mRNA和CX36mRNA的表达及阻断剂甘珀酸的干预作用。方法 K组、CBX、NS组SD大鼠各10只,K组、CBX组用PTZ点燃,再分别用生理盐水CBX干预3d,NS组注射生理盐水。观察3组大鼠的行为变化,采用RT-PCR方法观察颞叶和海马区PX1mRNA和CX36mRNA的表达。结果①K组,CBX组28d左右均达到点燃,NS组大鼠行为学无变化。②PX1mRNA在海马和颞叶的表达均为K组〉CBX组〉NS组（P〈0.05）,各组海马区的表达高于颞叶（P〈0.05）。CX36mRNA在海马和颞叶的表达均为K组〉CBX组〉NS组（P〈0.05）,各组颞叶的表达高于海马区（P〈0.05）。结论 PX1和CX36可能参与癫痫的发生发展,其阻断剂CBX有潜在的抗惊厥作用。     

左乙拉西坦对癫痫大鼠海马组织中GFAP及5-HT2A受体表达的影响

目的:通过建立氯化锂-匹罗卡品(Li-PILO)诱导的癫痫大鼠模型,观察左乙拉西坦(LEV)对癫痫大鼠海马组织中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及5-羟色胺2A(5-HT2A)受体动态表达的影响,进一步阐明左乙拉西坦的抗癫痫机制。方法:108只Wistar大鼠随机分为4组:生理盐水组(NS)24只、左乙拉西坦对照组(LEV)24只、模型组(Li-PILO)30只、模型组+左乙拉西坦组(Li-PILO+LEV)30只,分别给予LEV组和Li-PILO+LEV组大鼠LEV 200 mg/kg每日1次灌胃,连续28d。采用RT-PCR方法分别在第7天、第14天、第28天动态检测大鼠海马组织中GFAP和5-HT2A受体的表达。结果:(1)各组大鼠海马组织中GFAP表达水平:与NS组比较,Li-PILO组大鼠海马组织中GFAP在第7天、第14天、第28天表达水平显著升高(P<0.05),且随时间延长升高更明显;与Li-PILO组比较,Li-PILO+LEV组GFAP表达水平明显降低(P<0.05)。(2)各组大鼠海马组织中5-HT2A受体表达水平:LEV对照组与NS组比较差异无统计学意义(P>0.05);与NS组比较Li-PILO组在第7天时表达水平降低,且随时间延长降低水平越明显,即在第14天、第28天5-HT2A受体表达水平明显降低(P<0.05);与Li-PILO组比较,Li-PILO+LEV组5-HT2A受体在第7天、第14天、第28天表达水平明显升高(P<0.05)。结论:LVE的抗癫痫作用可能与通过上调5HT-2A受体的表达及抑制GFAP的表达有关,但具体作用机制还需进一步探讨。     

灵芝孢子粉对癫痫大鼠海马区TNF-α、ET-1影响的研究

目的：观察和探讨灵芝孢子粉对戊四氮（PTZ）致痫大鼠海马区肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、内皮素-1（ET-1）含量变化的影响。方法：用亚惊厥刑量的戊四氮（PTZ）复制慢性癫痫模型,用药组以灵芝孢子粉灌胃,记录癫痫发作的级别及潜伏期,并采用放射免疫法检测各组海马区TNF—α、ET-1的含量。结果：癫痫模型组与正常对照组相比,TNF—α、ET-1的含量明显增高（P〈0．01）;灵芝孢子粉组与癫痫模型组相比,造模第17、21、25天时癫痫发作的潜伏期二者差异有显著性（分别为P〈0．05;P〈0．05;P〈0．01）,TNF—α、ET-1的含量明显降低（P〈0．05）。结论：TNF—α、ET-1可能参与了PTZ致痫的发生发展过程,灵芝孢子粉能明显减弱TNF—α、ET-1过度表达对癫痫大鼠中枢神经系统的毒性损害,可能是通过调节神经系统免疫炎症反应而实现的,对癫痫发作导致的神经细胞损伤具有保护作用。     

孕酮对大鼠大脑皮质神经元氨基酸受体亚单位GBR1和NR2B表达的影响

目的:研究孕酮(PROG)对大鼠大脑皮质神经元氨基酸受体亚单位GBR1和NR2B表达的影响。方法:不同剂量(1,10,100μmol.L-1)的孕酮处理原代培养的大鼠大脑皮质神经元,采用免疫细胞化学法测定神经元氨基酸受体亚单位GBR1和NR2B表达的变化。结果:与对照组相比,1,10,100μmol.L-1 PROG使GBR1表达分别增加45.9%、172.0%、211.6%(P<0.01),使NR2B表达分别增加42.1%、51.4%、88.4%(P<0.05或P<0.01)。结论:孕酮可增强氨基酸受体亚单位GBR1和NR2B的表达水平。     

脱氢表雄酮对大鼠大脑皮质神经元氨基酸受体亚单位NR2B和GBR1表达的影响

目的研究脱氢表雄酮(DHEA)对大鼠大脑皮质神经元氨基酸受体亚单位NR2B和GBR1表达的影响。方法不同剂量(1、10、100μmol.L-1)的DHEA处理原代培养的大鼠大脑皮质神经元,采用免疫细胞化学法测定神经元氨基酸受体亚单位NR2B和GBR1表达的变化。结果与对照组相比,低、中、高剂量DHEA使NR2B表达分别增加15.6%、19.9%、49.4%(P<0.05或P<0.01);使GBR1表达分别增加4.3%(P>0.05)、14.5%、58.5%(P<0.05或P<0.01)。结论DHEA可增强氨基酸受体亚单位NR2B和GBR1的表达水平。     

α_(1D)-肾上腺素受体的稳定表达及其Ca~(2+)调控

目的探讨人α_(1D)-肾上腺素受体（α_(1D)-adrcnerslcreceptor,α_(1D)-AR）触发细胞的Ca(2+)释放和Ca(2+)内流机制。方法：将编码人α_(1D)-ARcDNA转染到缺乏α1－AR的中国仓鼠卵巢（CHO）细胞,建立稳定表达纯一α_(1D)-AR的细胞系。采用Fura－2技术观察细胞胞浆Ca(2+)浓度变化。结果：肾上腺素激活α_(1D)-AR后既触发了CHO细胞的Ca(2+)释放又引起细胞外Ca(2+)内流。磷脂酶C（phospholipaseC,PLC）抑制剂U－73122抑制α_(1D)-AR激发Ca(2+)释放的同时也抑制了Ca(2+)内流。结论：人α_(1D)-AR与PLC激活途径相耦联释放细胞内储存Ca(2+)并通过“充电式Ca(2+)内流”机制触发细胞外Ca(2+)内流。     

NMDA受体2A亚单位mRNA和蛋白质在大鼠海马前脑缺血再灌注损伤中的变化

目的观察分析大鼠前脑缺血再灌注早期,NMDA受体2A亚单位mRNA和蛋白质表达的改变,探讨两者在缺血性脑损伤中的变化和相互关系。方法选择SD大鼠30只,随机为分正常对照组（NC组）6只,假手术对照组（SC组）12只,缺血再藻注组（IR组）12只,大鼠脑8μm厚石蜡切片,原位杂交染色,TUNEL染色,焦油紫染色。图像和镜下分析。结果（1）NR2A mRNA在海马的CA1区缺血24h后,显著高于NC组水平,是SC组的141．5％（P〈0．01）。（2）NR2A蛋白质水平在海马的CA1区缺血复灌48h后,显著下降,是SC组的59．3％（P〈0．01）。结论缺血性脑损伤早期中,NMDA受体2A亚单位mRNA和蛋白质表达并不呈现一致变化,提示缺血过程中2A亚单位的转录水平未受影响,而翻译水平受到了干扰。