噬菌体展示抗体文库的研究进展

噬菌体展示技术 (Phagedisplaytechniques)兴于 2 0世纪 90年代初。该技术能将目的基因表达的多肽或蛋白质展示在噬菌体表面 ,并保持目的蛋白 (或多肽 )相对独立的空间结构和生物学活性。噬菌体展示技术以其将基因 (DNA信息 )与表型(蛋白表达 )直接相连接的表面筛选优势 ,简化了抗体库构建及单克隆抗体 (mAb)的筛选过程 ,在基因工程抗体制备领域有广泛应用。本文简要介绍了用噬菌体展示技术制备抗体文库的过程 ,重点介绍了在制备过程中一些改进措施以及新技术、新发展。1　噬菌体展示技术简介噬菌体展示技术是一种用于蛋白质筛选的新技术 …     

单链抗体在基因治疗方面的应用

单链抗体（ｓｉｎｇｌｅ－ｃｈａｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）即众所周知的单链可变区片段（Ｓｉｎｇｌｅ－ｃｈａｉｎ ｖａｒｉ－ａｂｌｅ ｆｒａｇｍ ｅｎｔｓ，ｏｒ ｓＦｖ）是将抗体重链可变区和轻链可变区以一个弹性连接肽连接成为一个单个的多肽，它们能较好地保持原代抗体的亲合性和特异性，是一种新的基因治疗的手段。本文对使用单链抗体治疗癌症以及控制传染病的一些新的研究进展作一综述，并对这一技术的进一步应用进行了讨论。     

噬菌体肽库的免疫学应用研究

噬菌体展示肽库技术是一种用于筛选蛋白、多肽的强有力的生物技术,将外源蛋白与噬菌体外壳蛋白融合而表达于噬菌体颗粒表面,被展示的外源蛋白可以保持相对独立的空间结构和生物活性.本文总结了这一技术及其相关展示系统在蛋白质相互作用的研究、抗体及疫苗的制备、多肽药物的研制等方面的应用潜力和独特的优点.     

高效电泳系统

高效电泳系统高效电泳系统（Ｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｅｌｅｃｌｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｓｙｓｔｅｍ，ＨＰＥ）能分离多肽、蛋白质、ＤＮＡ、氨基酸、细菌和病毒。层析与电泳是现代生命科学研究中２项基本分离技术。由于高压泵的产生以及各种填料性能的改进，层析技...     

变异链球菌表面蛋白抗原真核表达质粒的构建及免疫动物的研究

变异链球菌 (Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｍｕｔａｎｓ,Ｓ .ｍｕｔａｎｓ)是龋病主要致病菌 ,Ｓ .ｍｕｔａｎｓ的表面蛋白质抗原ＰＡｃ是其主要毒力因子之一 ,参与了唾液介导的Ｓ .ｍｕ ｔａｎｓ在牙面的粘附。Ｓ .ｍｕｔａｎｓＰＡｃ分子的氨基端不仅富集免疫显性Ｔ、Ｂ细胞表位 ,而且含有唾液糖蛋白结合区 ,因此氨基端是理想的表位多肽防龋疫苗选择区。此外 ,Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｓｏｂｒｉｎｕｓ(Ｓ .ｓｏｂｒｉｎｕｓ)的ＰＡｇ分子与Ｓ .ｍｕｔａｎｓＰＡｃ分子的氨基端具有保守的Ｂ细胞表位 ,以ＰＡｃ分子该区段制备的多肽疫苗…     

重组人G—CSF免疫小鼠全套单链抗体噬菌体表面展示文库？…

利用全套噬菌体抗体表面展示技术，绕过杂交瘤技术，从重组人Ｇ－ＣＳＦ免疫的小鼠脾淋巴细胞中提取总ＲＮＡ，反转录成ｃＤＮＡ后，用抗体中变区ＰＣＲ混合引物进行全套抗体重，轻链可变区（ＶＨ和ＶＬ）基因的扩增，经重叠延伸反应，在体外随机装配成单链抗体（ＳｅＦｖ）将其克隆至噬菌粒载体ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ中，电转化含ＳｕｐＥ的Ｅ．ｃｏｌｉ菌株，以辅助噬菌体Ｍ１３Ｋ０７超感染噬菌粒文库，构建成全套ＳｃＦｖ表面展示文     

抗GAM合成多肽抗体的制备和鉴定

根据ＧＡＭ ｃＤＮＡ所编码的氨基酸序列合成了ＧＡＭ分子羧基端２３个氨基酸的多肽，并利用ＧＭＢＳ双功能试剂将人工合成多肽成功地与ＯＶＡ进行了交联，免疫家兔制备了抗ＧＡＭ合成多肽的抗体，并经亲和层析进行了纯化。对此抗体进行鉴定的结果表明，抗ＧＡＭ合成多肽的抗体可与天然ＧＡＭ分子发生特异性反应，并可用于免疫沉淀和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ，为ＧＡＭ分子功能的研究提供了有力的工具。     

噬菌体表面展示技术进展

噬菌体表面展示技术 (PhageDisplayTechniques ,PDT)是近年发展起来的 ,将外源肽或蛋白基因与噬菌体表面特定蛋白基因在其表面进行融合表达的新技术。可用来构建肽文库、抗体库 ,并从中筛选出有价值的活性肽或蛋白。随着该技术的不断发展和完善 ,已在许多领域得到了广泛应用     

噬菌体表面展示技术进展

噬菌体表面展示技术(Phage Display Techniques,PDT)是近年发展起来的,将外源肽或蛋白基因与噬菌体表面特定蛋白基因在其表面进行融合表达的新技术。可用来构建肽文库、抗体库,并从中筛选出有价值的活性肽或蛋白。随着该技术的不断发展和完善,已在许多领域得到了广泛应用。     

083噬菌体表面展示技术进展

噬菌体表面展示技术(Phage Display Techniques,PDT)是近年发展起来的,将外源肽或蛋白基因与噬菌体表面特定蛋白基因在其表面进行融合表达的新技术.可用来构建肽文库、抗体库,并从中筛选出有价值的活性肽或蛋白.随着该技术的不断发展和完善,已在许多领域得到了广泛应用.     

原子力显微镜在生命科学中的应用

早在八十年代初期 ,人们已能使用扫描隧道显微镜 (ｓｃａｎｎｉｎｇｔｕｎｎｅｌｉｎｇｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ ,ＳＴＭ)获得原子分辨率的物体表面地形图[1] 。从那时起 ,人们便期待ＳＴＭ能够成为ＤＮＡ测序和获得原子分辨率的蛋白质表面图像工具。虽然以上的这些梦想尚未成为现实 ,然而由此却发展了一系列的扫描探针显微镜(ｓｃａｎｎｉｎｇｐｒｏｂｅｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ ,ＳＰＭ )。其中原子力显微镜 (ａｔｏｍｉｃｆｏｒｃｅｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ ,ＡＦＭ ) [2 ] 的应用更是逐渐从最初的物理学、材料科学与工程领域拓宽到生命科学领域 ,…     

癌胚抗原单链抗体的基因构建表达及免疫活性检测

目的　研制识别癌胚抗原的基因工程单链抗体,使其能够应用于肿瘤的免疫诊断和治疗。方法　利用ＲＴＰＣＲ 方法扩增抗体可变区基因并表达于噬菌体表面。通过免疫筛选获得癌胚抗原特异单链抗体ＣＬ３ｓｃＦｖ 。结果　ＥＬＩＳＡ 和免疫组化均显示抗体ＣＬ３ｓｃＦｖ 能够结合ＣＥＡ,而不与正常胃肠道组织起反应。结论　 该抗体将成为胃肠道恶性肿瘤辅助诊断和治疗的有效试剂。     

单链抗体经流式细胞仪检测细胞表面受体

用流式细胞仪检测两个自然杀伤细胞抑制受体的单链抗体（ＮＫＡＴ２－ｓｃＦｖ；ＮＫＡＴ４－ｓｃＦｖ），识别细胞表面受体分子的能力。单链抗体是吸附固相的抗原筛选一噬菌体抗体库而获得。结果显示，含ＮＫＡＴ２－ｓｃＦｖ的细菌上清及胞质提取物均可识别到表达在细胞表面的ＮＫＡＴ２受体分子，但含ＮＫＡＴ４－ｓｃＦｖ的细菌上清及胞质提取物均未成功     

噬菌体展示技术在全人源性抗体发现中的应用北大核心CSCD

噬菌体展示技术是目前应用最广泛的体外抗体筛选技术，它以噬菌体为载体，将外源抗体库基因插入到噬菌体衣壳蛋白基因中，在噬菌体表面表达衣壳蛋白的同时也展示了抗体分子。抗体药物因靶向优势在肿瘤免疫和病原生物感染中都发挥着重要作用，是其成为医药研发领域热点的重要推动力。因此，本文对噬菌体展示技术的研发背景、基本原理、抗体库构建类型及抗体展示片段类型进行综述，并对基于噬菌体展示的全人源性抗体的最新进展和应用前景进行了展望。     

人朊病毒多肽抗体的制备及应用

目的 利用人工合成人朊病毒蛋白（ＰｒＰ）多肽制备特异性抗ＰｒＰ抗体,以期用于朊病毒相关疾病的临床诊断。方法 根据ＰｒＰ基因编码的氨基酸序列合成多肽,与载体偶联合免疫动物,所制备的抗血清用ＥＬＩＳＡ及Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ鉴定。结果 ＥＬＩＳＡ检测表明所制备的抗血清可同多种ＰｒＰ发生一反应;Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ结果显示抗血清可与正常组织ＰｒＰ＾ｃ和病理组织的ＰｒＰ＾ｓｃ反应;用蛋白酶Ｋ处理,可     

抗人免疫缺陷病毒1型gp120人源单链抗体的表达

目的研究人源抗人免疫缺陷病毒１型（ＨＩＶ－１）ｇｐ１２０单链抗体（ＳｃＦｖ）。方法以人工合成的ＨＩＶ－ｌｇｐ１２０Ｖ３环多肽为抗原，利用噬菌体抗体库技术，筛选含有抗－ｇｐ１２０ＳｃＦｖ基因的噬菌体，提取质粒，转化大肠杆菌ＨＢ２１５１，表达可溶性ＳｃＦｖ。结果经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析，表达产物分子量为２８ｋＤ左右，且具有ｃ－ｍｙｃ活性；ＥＬＩＳＡ和Ｄｏｔｂｌｏｔ结果表明，可溶性ＳｃＦｖ具有较好的抗原结合活性和较强的特异性；竞争性ＥＬＩＳＡ实验结果进一步证明表达产物的特异抗－ｇｐ１２０活性。结论该技术便捷有效，可大量获得人源抗ＨＩＶ抗体片段，为进一步研究抗ＨＩＶ抗体的生物活性和ＨＩＶ感染诊治打下基础     

316L不锈钢表面抗体的固定及体外细胞相容性研究

表面快速内皮化是预防支架植入后血栓和再狭窄的新途径。本实验分别将合成的仿生海洋生物粘性多肽及对内皮细胞特异性结合的CD34抗体固定到316L不锈钢片及支架表面，并对其体外细胞相容性进行了初步研究。结果表明：固定的多肽及抗体促进了内皮细胞在钢片表面的粘附和增殖，提高了细胞活性，增加了细胞与不锈钢基体的结合强度。提高多肽浓度，可以促进内皮细胞的粘附，但浓度过高，反而抑制细胞的粘附；提高抗体浓度，可以增加抗体的固定及细胞的粘附。支架固定抗体后，内皮化速度加快。该方法促进了材料表面的原位内皮修复速度，因此可用于支架材料及组织工程材料等的表面改性。     

细胞因子与心血管疾病

细 胞因子 (Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ)是一类由细胞产生的、具有调节细胞功能的高活性、多功能的蛋白质或多肽分子。其功能是调控细胞增殖、分化、生长和代谢活动。历史上 ,曾经出现过 4类细胞因子 :病毒学家们研究干扰病毒复制的细胞因子———干扰素 (ｉｎｔｅｒｆｒｏｎ ,ＩＦＮ) ;细胞生物学家对影响组织细胞生长和分化的因子———多肽生长因子感兴趣 ;血液学家们研究的焦点是促进骨髓细胞增殖、分化形成集落的因子———集落刺激因子 (ｃｏｌｏｎｙｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｆａｃ ｔｏｒ,ＣＳＦ) ;免疫学家们则更热衷于来自淋巴细胞和巨噬细…     

变性乙型肝炎病毒表面s抗原抗体的制备和应用

在新型乙型肝炎基因工程疫苗 (ｓ ｐｒｅｓ1,ｓｓ1)的研制中 ,对ｓ抗原的免疫学鉴定至关重要 ,但我国现有的乙型肝炎病毒表面抗体不能有效地用于蛋白印迹法 (Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ)鉴定变性乙型肝炎病毒表面ｓ抗原。常规的从ＳＤＳ -ＰＡＧＥ凝胶上回收变性抗原多肽免疫动物 ,可诱导免疫应答 ,产生抗体 ,但从凝胶上回收的变性抗原量很少 ,无法用来大量制备抗血清 ;电泳结束后 ,切下含特异多肽的凝胶条 ,制成凝胶碎末 ,或凝胶转至硝基纤维素滤膜 ,剪下相应部分 ,溶于二甲基亚砜 ,再加佐剂免疫动物 ,整个方法操作步骤多、耗时长、切割相应…     

抗人aFGF单克抗抗体抗原表位的筛选

成纤维细胞生长因子ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒＦＧＦ是一类多功能的分子,现已发现其有多种同源结构形式,形成了一个生长因子的家族。酸性ＦＧＦａｃｉｄｉｃＦＧＦａＦＧＦ,也称为ＦＧＦ－１,是ＦＧＦ家族中的主要成员,其结构与功能方面的研究受到广泛的关注１２。本室曾制备了抗人ａＦＧＦｈａＦＧＦ的单克隆抗体ｍＡｂ,并建立了检测ｈａＦＧＦ的双抗体夹心测定方法３４。在此基础上,我们采用噬菌体多肽展示技术,筛选出抗ｈａＦＧＦｍＡｂ的抗原表位,为ｈａＦＧＦ的免疫分析…