BRI基因在一对转移能力不同的肺腺癌细胞系中的序列分析与表达研究

目的 确认淀粉样纤维蛋白基因(amyloid fibrils，BRI)基因在l对同源但转移能力不同的肺腺癌细胞系AGZY83-a和Anip973中的序列并分析其表达。方法 采用测序技术，Northern印迹杂交。G显带后荧光原位杂交分析BRI基因在肺腺癌细胞系的序列与表达。结果 BRI基因在高转移肺腺癌细胞系Anip973中高表达，在其低转移母系AGZY83-a中低表达，两细胞系BRI基因染色体定位区均存在断裂重排。该基因染色体定位区在Anip973中出现扩增。已知BRI基因的-116bp～-5bp处碱基序列和-115bp～-5bp处碱基序列在AGZY83-a和Anip973中分别突变为CTCAGCAGCCCGC和TCAGCCGC。结论 BRI基因在转移能力不同的肺腺癌细胞系差异表达与该基因的染色体定位区域的断裂重排无关，与该基因染色体定位区拷贝数增加及5′非翻译区存在不同的突变可能相关。     

用基因芯片研究人肺癌转移相关基因

目的 自制肿瘤转移相关基因芯片研究人肺癌高、低转移细胞系PG和PAa间以及肺癌、淋巴结转移癌与正常肺组织间的基因表达谱差异，筛选与肺癌转移相关的特异基因。方法 提取2种肺癌细胞系、人肺癌、淋巴结转移癌及周围正常肺组织的mRNA后逆转录标记cDNA探针，与自制的含399个肿瘤转移相关基因的微阵列膜杂交，QuantArray软件分析杂交信号强度获得差异表达基因。结果 正常肺组织与肺原发癌的基因表达谱有显著差异。淋巴结转移癌组织与PG高转移细胞系表达基因行聚类分析，共同表达且最具统计学意义的基因有64个，包括上调基因27个，下调基因37个。结论 多基因参与肺癌的转移过程，肺转移癌与高转移细胞系共同差异表达的基因可能与肺癌的高转移特性密切相关。     

CRKL在人非小细胞肺癌中的表达及意义

目的 CRKL(Crk-Like)基因在肺癌细胞系中存在着一定程度的扩增,我们将探讨接合物蛋白CRKL在非小细胞肺癌中的表达情况及与临床病理因素的关系。方法采用免疫组织化学和WB方法,分别检测了131例非小细胞肺癌组织和30例新鲜的非小细胞肺癌标本中CRKL的表达情况。结果 CRKL在正常支气管上皮细胞中呈阴性表达,而在肺癌组织中有44.3%(58/131)的病例存在阳性表达,WB检测发现肺癌中CRKL的表达明显高于对应的癌旁正常肺组织,CRKL蛋白在肺腺癌中的阳性表达为60.34%明显高于鳞癌(P=0.001),其表达与肺癌的低分化、高p-TNM分期(P=0.0035)、高Ki-67(P=0.0062)增殖指数和不良预后明显相关(P=0.0183)。结论 CRKL在肺癌中高表达,并与分化、分期和不良预后相关,提示CrkL蛋白可能在非小细胞肺癌的发生、发展中发挥作用。     

非小细胞肺癌中CD44v6的表达

目的　探讨CD4 4v6表达与非小细胞肺癌临床病理特征之间的关系。方法　采用免疫组化S P法检测 132例非小细胞肺癌、6 6例淋巴结转移癌和 115例正常肺组织CD4 4v6表达的情况。结果　非小细胞肺癌CD4 4v6阳性表达率为4 8 4 8% ,高于正常肺组织 17 39%的阳性表达率。CD4 4v6阳性表达与淋巴结转移状况、TNM分期、肿瘤大小和组织学类型有相关性。非小细胞肺癌淋巴结转移组、TNMⅢ期患者、直径 >3cm的肿瘤和鳞癌CD4 4v6阳性表达率分别高于无淋巴结转移组、TNMⅠ期和Ⅱ期患者、直径≤ 3cm的肿瘤和腺癌。淋巴结转移癌CD4 4v6阳性表达率高于肺原发癌。CD4 4v6阳性表达与患者的性别、年龄和组织学分级无相关性。结论　CD4 4v6阳性表达预示非小细胞肺癌具有较强的侵袭和转移能力 ,可作为一项预测非小细胞肺癌转移潜能生物学指标。     

非小细胞肺癌中C6orf106的表达及意义

目的检测C6orf106在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织及细胞系中的表达情况,探讨其与临床病理学特点及预后的关系。方法采用免疫组化SP法检测129例NSCLC及其癌旁肺组织中C6orf106的表达,Western blot检测人类正常支气管上皮HBE及肺癌细胞A549、H1299和SPC中C6orf106的表达。结果 C6orf106在肺癌组织和癌旁肺组织中的阳性率分别为75.19%(97/129)和8.53%(11/129),两组差异具有统计学意义(χ~2=117.788,P0.001);C6orf106在肺癌细胞A549,H1299和SPC中的表达均显著高于HBE细胞(P0.01);C6orf106与肺癌患者的TNM分期(P=0.004)、淋巴结转移(P=0.04)和预后有关(P=0.002);Cox单因素及多因素分析结果显示C6orf106的阳性表达是影响NSCLC预后的独立危险因素(P=0.007和P=0.019)。结论 C6orf106在肺癌组织及细胞系中高表达,且与肺癌的TNM分期、淋巴结转移和不良预后相关,C6orf106是影响NSCLC预后的独立危险因素。     

BCAR1在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的探讨BCAR1在非小细胞肺癌中的表达及意义。方法应用免疫组化方法检测BCAR1在135例非小细胞肺癌和30例正常肺组织中的表达,并分析其表达与肿瘤临床病理因素及预后的相关性。结果 BCAR1在非小细胞肺癌中高表达,在正常肺组织中低表达(P<0.001);在非小细胞肺癌中,BCAR1的高表达与患者的高淋巴结转移及TNM分期正相关(P=0.006和P=0.025);BCAR1高表达的患者在单因素和多因素分析中均表现出更差的预后(P=0.001和P=0.002)。结论BCAR1促进非小细胞肺癌的发生发展,并与其差的预后相关。     

Annexin A2基因沉默对肺癌细胞转移能力的影响

目的:研究膜联蛋白A2(Annexin A2)基因沉默对体外培养的肺腺癌细胞系转移能力的影响。方法:体外培养4种转移潜能不同的肺腺癌细胞,采用Transwell迁移模型观察细胞的迁移能力。采用RT-PCR和Western blot分析分别检测细胞中Annexin A2 mRNA及蛋白的表达。应用RNA干扰技术沉默细胞中Annexin A2表达,观察Annexin A2基因沉默前后细胞迁移能力的变化以及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)表达的变化。结果:Annexin A2在高转移潜能的肺腺癌细胞系中呈高表达状态(P<0.01)。Annexin A2基因沉默后,高转移潜能的肺腺癌细胞的迁移能力下降(P<0.05)。p-mTOR在高转移潜能的肺癌细胞中呈明显高表达(P<0.01),Annexin A2基因沉默后,细胞中p-mTOR表达明显下降(P<0.01)。结论:Annexin A2基因沉默显著抑制肺癌细胞的转移能力,Annexin A2对肺腺癌细胞转移能力的调控可能与其激活mTOR信号通路有关。     

STAT3、 Bcl-xL、 Bax和CyclinD1在非小细胞肺癌中的表达

目的：分析STAT3、 Bcl-xL、 Bax和CyclinD1在非小细胞肺癌和正常肺组织中的表达及关系, 以进一步探讨其与非小细胞肺癌发生发展的关系.方法：利用SABC免疫组织化学技术检测84例非小细胞肺癌组织及30例正常肺组织中STAT3、 Bcl-xL、 Bax和CyclinD1的表达.结果：（1）STAT3、 Bcl-xL和CyclinD1在非小细胞肺癌组织中的表达水平明显高于正常肺组织（P＜0.05）, Bax在非小细胞肺癌组织有一定表达, 但与其在正常肺组织的表达比较无统计学意义（P＞0.05）;（2）STAT3、 Bcl-xL表达水平与非小细胞肺癌组织学类型有关, 在腺癌组织中的表达明显高于鳞癌, 与肿瘤大小、组织分化程度、 TNM分期及淋巴结转移无关;（3）Bax、 CyclinD1的表达水平与与组织学类型、肿瘤大小、组织分化程度、 TNM分期及淋巴结转移无关（P＞0.05）.结论：STAT3、 Bcl-xL和CyclinD1可能在肺癌的发生发展中发挥重要作用, 由此可望寻找到新的非小细胞肺癌的诊断方法和治疗靶点.     

ANKRD49在非小细胞肺癌的表达

目的探讨ANKRD49蛋白质在非小细胞肺癌中的表达及其与多种临床参数的关系。方法收集75例非小细胞肺癌患者的癌组织及癌旁组织,制成组织芯片后用免疫组织化学法检测ANKRD49在癌组织及癌旁组织中的表达,同时分析ANKRD49的表达与肺癌不同临床参数之间的关系。用免疫印迹技术分析ANKRD49蛋白质在人气道上皮细胞及多种不同肺癌细胞系中的表达。结果 ANKRD49在肺癌组织中的表达率为82.67%,显著高于癌旁组织的49.33%(P0.05);ANKRD49在低分化肺癌组织中的表达为80%,高于高分化肺癌组织的42.6%(P0.05);ANKRD49仅在肺腺癌细胞系A549和NCI-H1650中表达,而在人正常气道上皮细胞及其他肺癌细胞系中无表达。结论 ANKRD49可能参与非小细胞肺癌的发生发展过程。     

抗人肺癌细胞转移相关抗原单克隆抗体的制备及初步鉴定

用转移能力及其它生物学特性不同的2个人肺腺癌细胞系免疫BALB/c小鼠,制备出一组可与人肺腺癌细胞发生特异性反应,而与其它脏器肿瘤组织无交叉反应的单克隆抗体。经初步鉴定,其中的3个单抗分别识别低转移或高转移肺腺癌细胞系表面抗原。     

高低转移肺腺癌细胞系中肿瘤抑制基因p16、p21和p53表达研究

目的 探讨肿瘤抑制基因对肺腺癌细胞生长的抑制作用。方法 利用FuGene转染方式分别将p21和p16基因的表达质粒转入－对肺腺癌细胞系Anip973和AGZY83－a中,同时用含野生型p53 基因的腺病毒感染p16基因转染前后的这一对细胞系。对P16和P21蛋白过表达的细胞系进行了细胞生长曲线、克隆形成率、原位末端标记分析和流式细胞仪分析。结果 p16基因的过表达只能使细胞系的G1期细胞比例提高,但细胞生长曲线,克隆形成率均未出现改变,未检测到凋亡信号。P21蛋白过表达的一对细胞系细胞生长曲线斜率降低,克隆形成能力下降,并出现明显的G1期阻滞,但未检测到凋亡信号。p53基因感染AGZY83－a,Anip973及经过p16基因转染的细胞AGZY83－ap16和Anip973p16后呈现时间依赖性表达,细胞生长曲线和四唑盐比色法分析提高,野生型p53基因的大量表达明显抑制以上4种细胞的生长,Anip973和Anip973p16的生长抑制率高于AGZY83－a和AGZY83－ap16;Anip973p16和AGZY83-ap16的生长抑制率高于Anip973和AAGZY83－a。这4种细胞在感染p53后出现典型的凋亡信号。结论p16基因的过表达并不能抑制细胞系的生长,而p21基因的过表达通过G1期阻滞抑制这1对肺腺癌细胞的生长;野生型p53基因在AGZY83－a和Anip973中高效表达可产生明显的细胞生长抑制效应;野生型p53基因对肺腺癌高转移细胞系Anip973抑制作用更为明显。     

Differential expression of RAB5A in human lung adenocarcinoma cells with different metastasis potential

For the sake of better understanding the molecular mechanism of neoplasia, we have used the mRNA differential display technique to analyze two human lung adenocarcinoma cell lines, AGZY83-a and Anip973. Anip973 was isolated from AGZY83-a, but manifested much higher metastatic potential than the parent line. We found that a significant differential cDNA fragment in Anip973 was over-expressed, then over-expressed cDNA fragment was cloned and sequenced. It showed that the over-expressed cDNA in Anip973 was RAB5A cDNA. And the RAB5A cDNA sequence was corresponding between the two cells. To determine whether RAB5A may be differentially expressed in the two human lung adenocarcinoma cells at protein level, we further detected RAB5A protein in the two cells by using immunofluorescent method. RAB5A protein was upregulated in highly metastatic Anip973. We also detected the difference in RAB5A gene expression at RNA level in human non-small cell lung carcinoma by RT-PCR. Using immunohistochemical staining, we also examined RAB5A change at protein level in 45 cases human non-small cell lung carcinoma paraffin sections. The results proved the evidence of upregulation of RAB5A in malignant tumor, indicated over-expression of RAB5A gene was correlated with the malignant degree and metastatic potential of lung cancer(² test, p <0.01). The RAB5A gene is a member of RAS superfamily, which can transcribe GTP-binding protein that plays an important role in signal transduction of protein trafficking at the cell surface and GDP/GTP cycle in the regulation of endocytotic membrane traffic. Thus our results indicated that over-expression of the RAB5A gene was involved in the process of transformation from AGZY83-a to the higher metastatic cell line Anip973. The result may be a powerful experimental evidence that over-expression of RAB5A gene associated with neoplasia metastasis.     

应用mRNA差异显示技术克隆人肺腺癌转移相关基因

肿瘤转移是恶性肿瘤最基本的生物学特征。为了探讨恶性肿瘤的侵袭和转移的机理，选择两株具有相同的细胞来源、但具有不同转移能力的人肺腺癌细胞系ＡＧＺＹ８３ａ和Ａｎｉｐ９７３作为研究材料，采用ｍＲＮＡ差异显示（ｍＲＮＡｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｄｉｓｐｌａｙ）技术，对这两个细胞系的基因表达差异情况进行了分析。结果显示，在这两个细胞系之间存在明显的基因表达差异，说明在低转移的ＡＧＺＹ８３ａ向高转移的Ａｎｉｐ９７３演变过程中涉及多个基因的激活与失活。研究结果还提示，在高转移的Ａｎｉｐ９７３细胞系中，某些基因的表达或高表达与人类逆转录病毒基因ＬＴＲ的整合有关。另一个克隆与人类线粒体基因ＮＤ４具有高度同源性，其高度表达与Ａｎｉｐ９７３的转移表型有关。表明肿瘤的转移是一个多基因参与的过程，由于这些基因的相互作用及细胞内外环境因素的影响，最终决定了肿瘤细胞的转移表型。     

野生型p53基因诱导凋亡相关基因ANNEXIN A2的表达研究

目的探讨胡基因过表达介导不同转移潜能肿瘤细胞的凋亡分子机理，寻找与细胞凋亡和肿瘤转移的相关基因。方法应用mRNA差异显示方法分析腺病毒介导的野生型,053基因感染不同转移潜能的肺癌细胞系前后存在的表达差异基因，并用逆转录一聚合酶链反应、Northern印迹和Western印迹方法加以验证。结果分析发现，在柳基因诱导后ANNEXIN A2基因的表达显著差异有统计学意义，经加基因诱导后ANNEXIN A2基因的表达有明显下调。并且以Arfip 973细胞的表达缺失最为显著。经逆转录一聚合酶链反应、Northern印迹和Western印迹方法也验证了这种差异的存在。结论表明ANNEXIN A2基因的表达与p53基因诱导的肿瘤细胞凋亡存在密切的相关性。     

Inhibition of Cyclooxygenase‐2 Suppresses Lymph Node Metastasis via VEGF‐C

Most experimental work addressing cyclooxygenase‐2 (COX‐2) inhibitor has focused on suppressing hematogenic spread. Little is known about the mechanism by which this inhibitor can also block lymphatic metastasis. Here, the effects of COX‐2 inhibitor on vascular endothelial growth factor‐C (VEGF‐C) expression, lymphangiogenesis and lymph node metastasis were investigated. Utilizing the highly metastatic human lung adenocarcinoma cell line Anip973 and its parental line AGZY83‐a, which has a low metastatic capacity, we found elevated VEGF‐C and COX‐2 immunoreactivity in Anip973 cells compared with AGZY83‐a cells. Celecoxib down‐regulated expression of VEGF‐C mRNA and protein in Anip973 cells while PGE₂ up‐regulated expression of VEGF‐C mRNA and protein in AGZY83‐a cells in a concentration‐dependent manner. The expression of COX‐2 and VEGF‐C was significantly increased in xenografted Anip973 tumors compared with AGZY83‐a tumors. The Anip973 tumors showed more lymphatic vessels and lymph node metastasis than the AGZY83‐a tumors. In vivo, celecoxib decreased VEGF‐C expression in Anip973 tumor‐treated mice to a similar level to that in the AGZY83‐a tumor‐treated mice. Consistent with this decrease in VEGF‐C expression, the density of lymphatic vessels and lymph node metastasis in Anip973 tumor‐treated mice were suppressed to approximately that found in the AGZY83‐a tumor‐treated ones. Taken together, our results suggest that the differential expression of COX‐2 and VEGF‐C might help explain the different metastasis phenotype of lung adenocarcinoma cancer, and that COX‐2 inhibitor mediates VEGF‐C to block lymphangiogenesis and lymph node metastasis. Thus, COX‐2 may be a potential therapeutic target for blocking lymph node metastasis in lung adenocarcinoma. Anat Rec, 2009. © 2009 Wiley‐Liss, Inc.     

Wip1在非小细胞肺癌组织及细胞中的表达

目的： 检测肺癌组织和3种肺癌细胞中Wip1的表达水平,探讨肺癌中Wip1的表达水平与其各种临床病理特征之间的关系。方法: 利用实时荧光定量PCR检测44例肺癌及相应正常肺组织中Wip1 mRNA的表达,分析Wip1 mRNA表达与各临床病理参数之间的关系;利用实时荧光定量PCR的方法检测人肺腺癌细胞A549、人鳞癌细胞NCI-1299、人大细胞肺癌细胞NCI-H460和人正常支气管上皮细胞HBE中Wip1 mRNA的表达量,进行相对定量分析。结果: 44例非小细胞肺癌及相应正常肺组织均有Wip1 mRNA的表达,其中17例肺癌中Wip1 mRNA高表达,占38.6%,两者表达差异显著(ratio=2.1644±1.3940,P＜0.05);分化程度低的肿瘤细胞Wip1 mRNA表达量显著高于分化程度高者（P<0.05）。3种肺癌细胞中的Wip1 mRNA表达量显著高于正常支气管上皮细胞,差异显著(均P＜0.05)。结论: Wip1mRNA在非小细胞肺癌中过表达,可能与肿瘤发生有关,有望成为非小细胞肺癌基因治疗的新靶点。Wip1 mRNA在非小细胞肺癌中的表达与肿瘤细胞分化程度有关,可能成为确定肿瘤恶性程度的分子生物学参考指标。