缺血缺氧对星形胶质细胞合成和分泌BDNF的影响

目的:观察缺血缺氧对星形胶质细胞合成和分泌脑源性神经营养因子(BDNF)的影响.方法:培养的星形胶质细胞分别在低氧去血清中培养1 h、3 h、6 h、12 h、1 d、3 d,采用逆转录PCR检测星形胶质细胞BDNF mRNA的表达,ELISA检测培养上清液中BDNF的浓度.结果:低氧去血清培养1 h时星形胶质细胞BDNF mRNA表达达峰值,之后逐渐降低,培养12 h后BDNF mRNA持续低于正常培养水平.在低氧去血清刺激下培养上清液中BDNF的浓度迅速增加,培养12 h时达峰值,之后逐渐降低,保持低水平.结论:缺血缺氧促进星形胶质细胞活化,反应性增加BDNF的合成和分泌,这种变化与缺血后神经营养补给有关.     

BDNF对脊神经根结扎大鼠脊髓背角星形胶质细胞活化的影响

目的观测脊神经根结扎(SNL)大鼠脊髓背角中脑源性神经营养因子(BDNF)与星形胶质细胞活化标记蛋白胶质细胞纤丝酸性蛋白(GFAP)表达的变化,以及BDNF清除剂TrkB/Fc对GFAP表达和疼痛的影响。方法取18只SD大鼠,随机分为空白对照组、假手术组和SNL组(n=6)。分别于术前、术后第1～6天测定大鼠50%机械缩爪阈值(50%PWT),末次测定后取腰膨大处脊髓背角经Western blotting检测GFAP和BDNF的表达。另取18只SD大鼠,随机分为对照组、SNL+安慰剂组和SNL+TrkB/Fc组(n=6),其中对照组仅行鞘内置管术;SNL+安慰剂组和SNL+TrkB/Fc组分别在行SNL术前,予鞘内注入PBS或TrkB/Fc 10μL,术后1次/d×6 d,每次注药前1 h测定50%PWT,末次给药后1 h取大鼠腰膨大处脊髓背角经Western blotting检测GFAP的表达。结果术后第1～6天,SNL组手术同侧后肢50%PWT均较术前基础值显著下降(P<0.01);术后第6天,SNL组手术同侧脊髓背角BDNF和GFAP表达均较空白对照组显著升高(P<0.01);SNL+TrkB/Fc组大鼠手术同侧50%PWT与基础值比较无明显变化(P>0.05),手术同侧脊髓背角GFAP表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 BDNF活化的脊髓星形胶质细胞对SNL诱发的神经病理性疼痛具有调控作用。     

鞘内注射经外源性BDNF活化的星形胶质细胞对正常大鼠痛觉的影响

目的探讨外源性脑源性神经营养因子(BDNF)对星形胶质细胞的活化作用,分析活化的星形胶质细胞鞘内注射与正常大鼠痛觉过敏的关系。方法体外培养的原代星形胶质细胞以外源性BDNF(100 ng/mL)分别孵育0(基线)、15、60、120 min,Western blotting检测细胞内纤丝酸性蛋白(GFAP)的表达。24只雄性SD大鼠经鞘内置管后随机分为活化细胞注射组(鞘内注射经BDNF孵育15 min的星形胶质细胞)、阴性对照组(鞘内注射未经BDNF孵育的星形胶质细胞)、安慰剂注射组(鞘内注射PBS)和空白对照组(未行鞘内注射),每组6只;分别于单次注射前和注射后0.5、2、4和8 h时间点,von Frey纤维丝法测定各组大鼠50%机械痛缩足阈值(50%PWT)。结果经BDNF孵育15、60和120 min的星形胶质细胞内GFAP蛋白表达均显著高于基线值(P0.01)。活化细胞注射组大鼠注射后各时间点的50%PWT均较注射前显著降低(P0.01);阴性对照组大鼠50%PWT仅在注射后30 min时间点呈现一过性下降,与注射前比较差异有统计学意义(P0.01);安慰剂注射组和空白对照组大鼠注射前和注射后各时间点50%PWT比较,差异均无统计学意义(P0.05)。结论外源性BDNF可活化体外培养的星形胶质细胞,鞘内注射经外源性BDNF活化的星形胶质细胞可直接诱发正常大鼠的痛觉过敏。     

电针血清对体外培养星形胶质细胞活性的影响

目的探讨电针血清对星形胶质细胞增殖活力及分泌脑源性神经营养因子(BDNF)的影响。方法采用100 Hz高频电针针刺正常大鼠百会、风府两穴,电针2周后采血制备电针血清,加入体外培养的星形胶质细胞培养基。MTT法检测电针血清对星形胶质细胞活力的影响,免疫组化技术显示星形胶质细胞BDNF表达。结果电针血清能够促进星形胶质细胞增殖,但其作用无明显量效关系,在观察范围内,10％电针血清为最佳效应浓度;电针组细胞培养时间延长,星形胶质细胞活力增加,二者增长呈平行关系,48 h电针组OD值为0.372;10％电针血清培养星形胶质细胞5d后BDNF阳性细胞数较对照组明显增多。结论电针血清能够激活星形胶质细胞,促进星形胶质细胞增殖,激活的星形胶质细胞通过分泌BDNF发挥对神经元的保护作用。     

星形胶质细胞条件培养液影响神经干细胞突触形成的神经营养机制探讨

目的 探讨神经营养素家族蛋白[包括脑源性神经营养因子(BDNF),神经生长因子(NGF),神经营养素-3(NT-3)]是否参与星形胶质细胞条件培养液(ACM)影响神经干细胞(NSC)突触形成的过程.方法 实验分两步,(1)PC12细胞分别经10μg/ Aβ1-4诱导不同时间点(0、4、612、24 h)后分为两部分,一部分应用流式细胞技术检测不同时间点PC12细胞凋亡率,另一部分别与星形胶质细胞共育2 d,将收集的ACM分为两部分,一部分应用ELISA法检测ACM中的BDNF、NGF、NT-3蛋白含量.(2)将另一部分ACM以1:3比例同DMEM/F12培养基混合,分别对胚胎大鼠皮质神经干细胞进行诱导分化,激光共聚焦扫描显微镜观察突触素和生长相关蛋白-43(GAP-43)表达,透射电镜观察成熟突触结构数目.结果 在AB1-40作用6 h时间点,PC12细胞凋亡率达高峰(P<0.05);星形胶质细胞与Aβ1-40诱导6 h后的PC12细胞共育2 d后,收集到ACM中的BDNF蛋白总量(A值=1.53±0.25)明显增高(P<0.05),并且收集到的ACM诱导神经干细胞突触素(A值=33.39 4±2.71)、GAP-43(A值=49.18±6.45)表达明显升高、成熟突触结构数目(4.70±0.52个/视野)明显增多,与其他组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 星形胶质细胞与AB1-40枷诱导凋亡的PCI2细胞共育后,ACM提高了神经干细胞突触形成,ACM中BDNF可能参与了这一过程.     

星形胶质细胞钙调蛋白在损伤后胶质瘢痕形成中的作用

目的:探讨钙调蛋白对星形胶质细胞损伤后增生及胶质瘢痕形成的影响.方法:体外纯化培养星形胶质细胞,机械划痕法构建星形胶质细胞损伤模型,动态观察星形胶质细胞损伤前后钙离子浓度的变化,以及损伤后应用钙调蛋白抑制剂三氟拉嗪(Trifluoperazine dihydrochloride,TFP)处理,星形胶质细胞增生的主要标志物GFAP表达的变化.采用激光共聚焦观察细胞内游离钙离子浓度动态变化,免疫组织化学染色方法检测星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(Glia fibrillary acidic protein,GFAP)表达量的变化.结果:星形胶质细胞损伤后细胞内钙离子浓度迅速上升,2 min后明显下降至接近基础水平.星形胶质细胞损伤后钙调蛋白抑制剂能够抑制星形胶质细胞GFAP蛋白表达量的增加.结论:星形胶质细胞损伤后钙离子浓度明显变化,激活细胞内钙离子信号传导并参与星形胶质细胞损伤后的增生反应,而钙调蛋白抑制剂三氟拉嗪对星形胶质细胞损伤后的增生反应有显著的抑制作用.     

腺苷预处理对氧糖剥夺星形胶质细胞的胶质源性神经营养因子的影响

目的探讨腺苷预处理对氧糖剥夺星形胶质细胞的胶质源性神经营养因子(GDNF)的影响。方法体外培养SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞,将培养至第3代或第4代的星形胶质细胞传代至96孔板内,细胞贴壁并长出突起后,随机分为正常对照组、氧糖剥夺组和腺苷预处理组。观察氧糖剥夺8 h复氧糖24 h后星形胶质细胞形态,检测细胞培养液中GDNF水平。结果氧糖剥夺组GDNF水平显著高于对照组(P<0.05);腺苷预处理组GDNF水平显著高于氧糖剥夺组(P<0.05)。结论腺苷预处理能进一步增强缺氧缺糖后GDNF的表达,GDNF的表达上调可能是腺苷预处理诱导缺血耐受,产生神经保护作用的分子机制之一。     

培养大鼠星形胶质细胞牵张损伤后超微结构的变化

目的：研究体外培养星形细胞牵张损伤后超微结构的变化。方法：取新生1－2d大鼠的皮层细胞原代培养，经纯化后传代培养于乳胶膜培养皿中，采用计算机控制的牵张损伤装置，分别以50，150，250kPa压力牵张损伤培养于乳胶膜上的大鼠皮层星形胶质细胞，用3％戊二醛固定后，行扫描电镜和透射电镜观察，结果：当用50kPa驱动压力进行牵张损伤时，细胞结构即有明显破坏，表现为细胞间隙增宽，部分胞体和突起被撕裂。以50kPa牵张损伤后1h，透射电镜下可见线粒体肿胀，嵴减少，损伤后6h可见线粒体致密，细胞器减少等，当牵引应力增大，星形细胞损伤程度加重，细胞器明显减少，线粒体空泡化，微丝，微管明显减少，直至水样胞质或致密胞体，结论：较小的应力即可致星形细胞紧密连接的破坏和超微结构的改变，可能与脑外伤后产生广泛的脑水肿有关。     

不同切肝量对大鼠肝脏HSP 70表达的影响

目的探讨大鼠肝脏HSP70在评价手术创伤程度中的意义。方法建立不同肝切量的大鼠创伤模型,160只健康雄性SD大鼠随机分成正常对照组及轻度、中度、重度创伤组,采用western blotting方法,动态观察各创伤组术后2、8、12、24、48 h肝组织中HSP70的表达情况。结果各创伤组伤后HSP70的表达迅速增加,8 h达到峰值后逐渐下降,48 h降至正常水平,随着肝切量的增多这种变化更加明显。结论手术创伤后肝组织HSP70表达升高,于8 h达到峰值,提示HSP70可能是创伤后早期参与肝细胞损伤机制启动的一个重要因素。随着肝切量的增加,HSP70的表达增高,提示HSP70的表达可作为判断肝脏手术创伤程度的一个指标。     

热消融对甲状腺良性结节组织内HSP70表达的影响

目的探讨甲状腺良性结节射频消融后组织内热休克蛋白70(heat shock protein,HSP70)表达的变化及其潜在意义。方法对50枚甲状腺良性实性结节实施超声引导下射频消融治疗,设定结节的中央区、边缘区和过渡区,于消融前后对应各穿刺取材1次,采用免疫组织化学染色法半定量测定其内HSP70的表达,对比消融前后及消融后不同区域HSP70的表达差异。结果 50枚甲状腺实性结节中央区和边缘区HSP70的表达在消融前、后无明显差异,过渡区HSP70的表达消融后强于消融前(P<0.05);消融治疗后HSP70的表达存在过渡区强于中央区和边缘区(P<0.05),而中央区与边缘区无明显差异。结论热消融治疗过程中存在甲状腺结节周围过渡区HSP70高表达,这可能有助于保护正常腺体组织免受热损伤。     

氯胺酮对严重烧伤大鼠脑组织HSP70表达的影响

目的观察氯胺酮对严重烧伤大鼠脑组织HSP70表达的影响,探讨氯胺酮对烧伤后脑组织保护作用的机制。方法124只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(N组)(n=20), 烧伤对照组（B组）(n=52)和烧伤氯胺酮组（BK组）(n=52)3组。其中B组和BK组分别于给药3、6、12、24?h后处死大鼠,采集脑组织,每组各时间点8只。用Western blot检测脑组织HSP70的表达。其余的大鼠分别在3、6、12、24?h,2、4、8、10?d观察各组大鼠的存活率。结果BK组和B组的HSP70表达在3、6、12、24?h强于N组(P＜0.05),12?h达高峰;BK组HSP70表达在3、6?h强于B组(P＜0.05),BK组第10天的存活率也高于B组(P＜0.05)。结论氯胺酮可增强严重烧伤早期大鼠脑组织HSP70的表达,这是氯胺酮保护烧伤后脑组织的机制之一。     

人急性白血病淋巴细胞HSP70及 HSP70 mRNA的表达研究

目的：检测急性白血病病人血淋巴细胞热休克蛋白70（HSP70）及其mRNA的表达。方法：ELISA法检测HSP70,RT－PCR法检测HSP70 mRNA。结果：化疗前急性白血病病人淋巴细胞HSP70及mRNA明显低于正常人;而化疗后,急性白血病病人淋巴细胞HSP70及mRNA明显高于正常人（P＜0．01）,结论：HSP70与急性白血病癌细胞关系密切,对癌细胞起保护作用。     

反义波形蛋白逆转录病毒对损伤的星形胶质细胞的作用

目的探讨重组反义波形蛋白cDNA逆转录病毒重组质粒对体外培养损伤的星形胶质细胞(astrocyte,AST)波形蛋白(vimentin)表达的影响.方法采用体外培养AST划伤模型,设实验组及对照组,通过免疫荧光、RT-PCR、Western blot等方法,研究反义波形蛋白逆转录病毒感染对损伤AST波形蛋白表达的影响.结果反义波形蛋白逆转录病毒使损伤AST生长抑制,突起回缩,波形蛋白mRNA及蛋白水平表达降低.结论反义波形蛋白可有效抑制体外培养损伤AST的生长及其波形蛋白的表达.     

右美托咪定对脓毒症小鼠认知功能及HSP70表达的影响

目的 探讨右美托咪定（Dex）对脓毒症小鼠认知功能及热休克蛋白70（HSP70）表达的影响,为其脑保护机制的研究提供参考。方法 将80只C57BL/6小鼠随机分为对照组（CON组）、单纯Dex组（Dex组）、脓毒血症组（LPS组）和Dex +脓毒血症组（D + L组）,每组20只。首先,Dex组和D + L组腹腔注射Dex 25 μg/kg,CON组和LPS组腹腔注射等剂量的生理盐水;30 min后LPS组和D + L组腹腔注射5 mg/kg脂多糖（LPS）复制脓毒血症模型,CON组和Dex组腹腔注射等剂量的生理盐水。采用Morris水迷宫实验评估小鼠学习记忆能力,酶联免疫吸附试验检测血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-1β（IL-1β）水平,化学比色法检测海马组织过氧化物歧化酶（SOD）活性和谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）水平,苏木精-伊红染色观察海马CA1区病理变化,免疫组织化学染色和实时荧光定量聚合酶链反应检测海马HSP70蛋白、mRNA表达。结果 各组小鼠第1、2、3、4、5天逃避潜伏期比较,经重复测量设计的方差分析,结果 ①不同时间点的逃避潜伏期比较,差异有统计学意义（P <0.05）;②各组小鼠的逃避潜伏期比较,差异有统计学意义（P <0.05）,LPS组较CON组延长,D + L组较LPS组缩短;③各组小鼠逃避潜伏期变化趋势比较,差异有统计学意义（P <0.05）。各组小鼠游泳速度比较,差异无统计学意义（P >0.05）。LPS组目标象限停留时间短于CON组（P <0.05）,D + L组长于LPS组（P <0.05）;LPS组穿越平台次数少于CON组（P <0.05）;D + L组多于LPS组（P <0.05）。LPS组血清TNF-α、IL-1β水平较CON组升高（P <0.05）,D + L组较LPS组降低（P <0.05）。LPS组GSH、SOD水平较CON组降低（P <0.05）,MDA水平较CON组升高（P <0.05）,D + L组GSH、SOD水平较LPS组升高（P <0.05）,MDA水平较LPS组下降（P <0.05）。LPS组HSP70蛋白阳性表达率较CON组升高（P <0.05）,D + L组较LPS组升高（P <0.05）,Dex组与CON组比较,差异无统计学意义（P >0.05）。LPS组HSP70 mRNA相对表达量较CON组升高（P <0.05）,D + L组较LPS组升高（P <0.05）;Dex组与CON组比较,差异无统计学意义（P >0.05）。结论 Dex能够降低脓毒症小鼠体内炎症和氧化应激水平,改善认知功能,其机制可能与上调HSP70表达有关。     

芪丹通脉片对大鼠海马局部缺血及HSP70蛋白表达的影响

目的: 探讨芪丹通脉片(QDTMT)对大鼠海马局部梗死的影响和机制.方法:雄性SD大鼠72只,随机分为6组(n=12),即空白对照组、假手术组、缺血组、QDTMT高剂量组(QDTMTH),QDTMT中剂量组(QDTMTM),QDTMT低剂量组(QDTMTL).采用光化学法诱导大鼠单侧海马梗死模型, 对缺血脑组织进行病理形态学分析及HSP70免疫组化.结果:QDTMT各给药组缺血灶内HSP70表达明显高于缺血组:缺血组23±3,QDTMTH组89±8,QDTMTM组78±6,QDTMTL组46±6(P<0.05).结论:QDTMT能减轻大鼠海马局部脑梗死损伤程度,可能与上调HSP70表达有关.     

散血明目片对兔视网膜静脉阻塞热休克蛋白70表达的影响

目的 观察活血通脉利水明目之散血明目片对免实验性视网膜静脉阻塞视网膜组织中热休克蛋白70(HSP70)表达的影响.方法 将36只家兔(72只眼)随机分为健康空白组、模型组、散血明目片组3组,每组12只(24只眼).模型组和散血明目片组免采用激光光凝视网膜中央静脉造模法制造RVO动物模型.健康空白组与模型组每日以生理盐水5 mL/kg灌胃,散血明目片组每日以散血明目片混悬液5 mL/kg灌胃,均灌胃2周,1次/d.采用免疫组化法观察免视网膜组织中HSP70的表达.结果 造模后第3天,散血明目片组及模型组HSP70表达明显升高,与空白组比较差异均具有统计学意义(P＜0.01),但散血明目片组与模型组之间差异无统计学意义(P＞0.05).造模后7 d,各组间差异具有统计学意义(P＜0.01).造模后14 d,散血明目片组与模型组及空白组间比较差异均具有统计学意义(P＜0.01),但模型组与空白组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 散血明目片能明显增强实验性视网膜静脉阻塞兔视网膜组织中HSP70的表达.     

HSP70在肾脏缺血预适应中的作用

目的 探讨缺血预适应对肾脏HSP70表达的影响.方法 大鼠3个循环的2min缺血加5min再灌注缺血预适应模型,免疫组化观察在体肾脏HSP70的表达.结果 缺血预适应后肾脏HSP70的表达显著升高.结论 缺血预适应可升高缺血再灌注损伤后肾脏HSP70的表达,改善肾功能.     

当归对大鼠缺血再灌注心肌HSP70和NF-κB的影响

目的观察当归注射液对缺血再灌注(I/R)过程心肌热休克蛋白70(HSP70)和核转录因子κB(NF-κB)表达的影响,探讨当归抗心肌缺血再灌注损伤的可能作用机理.方法45只SD大鼠随机分成3组(每组n=15)假手术组(Ⅰ组),缺血再灌注组(Ⅱ组),当归治疗组(Ⅲ组),建立在体心肌缺血再灌注动物模型.每组5只动物再灌注40 min用化学扩增法测定SOD活性,TBA法测定MDA含量;10只动物再灌注120 min测定HSP70免疫组化SP法观察心肌细胞HSP70蛋白表达,用ESMA法观察NF-κB的变化,在电镜下观察心肌细胞的超微结构.结果再灌注前注射当归注射液显著降低了再灌注心肌MDA水平(P<0.01),增强了SOD活性(P<0.01)和HSP70的表达(P<0.01),减低NF-κB的活性,同时减轻了心肌的超微结构损伤.结论当归注射液可通过抗氧化作用、增加HSP70的表达和减低NF-κB的活性发挥抗心肌缺血再灌注损伤,对心肌有明显的保护作用.