ZO-1基因甲基化状态在非霍奇金淋巴瘤骨髓检测中的临床意义

目的探讨紧密连接蛋白-1（ZO-1）基因启动子区甲基化状态在非霍奇金淋巴瘤（NHL）检测中的临床意义。方法采用甲基化特异性PCR方法（MS-PCR）分析10例非血液系统肿瘤者骨髓及45例NHL患者骨髓标本的ZO-1基因启动子区甲基化状况。结果ZO-1基因在10例良性血液病及正常人中呈完全非甲基化状态,在39例初治、复发、未完全缓解的淋巴瘤患者中甲基化阳性率53．85％（P〈0．05）。在39例初治或复发或未达到完全缓解的NHL患者中28例Ⅲ、Ⅳ期的NHL患者ZO-1基因甲基化阳性率64．29％,11例Ⅰ、Ⅱ期的NHL患者ZO-1基因甲基化阳性率27．27％（P〈0．05）。初治、复发患者28例中甲基化阳性16例（57．14％）,经治疗达到部分缓解的11例患者中甲基化阳性5例（45．45％）,临床缓解的6例患者均为完全非甲基化。结论ZO-1基因启动子区高甲基化与疾病分期及缓解明显相关,它可以作为判断NHL进展和评价预后的辅助指标,并以此指导临床治疗。     

非霍奇金淋巴瘤SHP-1、SOCS-1基因甲基化状态及其意义

目的探讨蛋白质酪氨酸磷酸酶1（SHP-1）、细胞因子信号转导抑制蛋白1（SOCS1）基因启动子区CpG岛异常甲基化状态与非霍奇金淋巴瘤（NHL）发生、发展的关系。方法收集89例初治NHL及20例良性淋巴组织增生患者病理组织,以甲基化特异性PCR法测定SHP-1、SOCS1基因启动子区CpG岛甲基化状态。结果 NHL病理组织SHP-1、SOCS1基因启动子区CpG岛甲基化频率分别为80.90%、2.25%,对照组20例良性淋巴组织增生病理组织未见SHP-1及SOCS1基因启动子区CpG岛甲基化。结论 SHP-1基因启动子区CpG岛在NHL中存在高度甲基化,而SOCS1基因甲基化现象在NHL中少见。SHP-1基因甲基化可作为NHL一个良好的分子诊断标记及可能的治疗靶点。     

同型半胱氨酸对强直性脊柱炎患者MTHFR基因启动子甲基化状态的影响

目的探讨同型半胱氨酸（Hcy）对强直性脊柱炎（AS）患者亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因启动子甲基化状态的影响。方法运用酶联免疫吸附法测定36例AS患者及30例对照组血浆Hcy水平,采用MS—PCR法分析MTHFR基因启动子甲基化水平。结果AS患者血浆Hcy水平明显高于对照组,两组间比较差异具有统计学意义（P〈0．05）;AS组中有29例患者其MTHFR基因启动子出现非甲基化特异PCR条带,与对照组比较有显著性差异（P〈0．05）;AS组中血浆Hcy〉20μmol／L的患者其MTHFR基因启动子甲基化状态与对照组比较,存在显著性差异（P〈0．05）。结论部分AS患者MTHFR基因启动子区出现去甲基化,高Hcy血症影响了AS患者MTHFR基因启动子区的去甲基化过程。     

慢性粒细胞白血病ZO-1基因启动子区甲基化状态分析及临床意义探讨

目的通过对慢性期及急变期慢性粒细胞白血病（CML）患者骨髓标本中人紧密连接蛋白1（ZO-1）基因启动子区甲基化状态的分析,初步探讨其在CML病情发展变化中的临床意义。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应（MS-PCR）检测5例CML慢性期和10例CML急变期患者骨髓标本中ZO-1基因启动子区的甲基化状态。结果在5例CML-CP患者中ZO-1基因启动子区呈非甲基化状态;在7例CML-BP患者中ZO-1基因启动子区呈高甲基化状态,甲基化阳性率为70%（7/10）;1例CML患者其慢性期骨髓标本ZO-1基因启动子区呈非甲基化状态,而急变期则呈甲基化状态,经治疗恢复到慢性期时,则又表现为非甲基化状态。结论 ZO-1基因启动子区甲基化状态可能与CML病情发展变化密切相关,可能是一个提示CML急变的分子标志物。     

胰腺癌患者血浆TFPI-2基因启动子区甲基化状态检测及意义

目的观察胰腺癌患者血浆中组织因子途径抑制物-2（TFPI-2）基因启动子区甲基化状态,并探讨其临床意义。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测62例胰腺癌患者（观察组）及30例胆胰非肿瘤疾病患者（对照组）血浆中的TFPI-2基因甲基化状态。结果观察组血浆TFPI-2基因甲基化阳性率为66．13％（41／62）,明显高于正常对照组的3．33％（1／30）,P〈0．01。血浆TFPI-2基因甲基化与胰腺癌的临床分期、组织分化程度有关（P均〈0．05）。结论胰腺癌患者血浆中TFPI-2基因出现异常甲基化;血浆TFPI-2基因甲基化检测可能有助于胰腺癌的早期诊断。     

上皮型钙黏素基因启动子甲基化与胃肠腺癌的关系及意义

目的探讨上皮型钙黏素（E—cad）基因启动子CpG岛甲基化与胃腺癌（GAC）和大肠腺癌（CRAC）的关系及意义。方法用甲基化特异性PCR技术检测82例GAC组织（GAC组）、30例十二指肠球部溃疡胃窦黏膜组织（对照组）、30例慢性胃炎伴肠上皮化生或异型增生胃黏膜组织（胃炎组）、94例CRAC组织（CARC组）及其癌旁非肿瘤组织中的E—cad基因启动子CpG岛甲基化状况。结果GAC组E—cad甲基化率显著高于对照组和胃炎组（P〈0．01,〈0．05）,低分化者显著高于高、中分化者（P〈0．05）,Ⅲ～Ⅳ期肿瘤显著高于Ⅰ～Ⅱ期（P〈0．05）CRAC组显著高于癌旁非肿瘤组织（P〈0．01）。结论E—cad基因启动子CpG岛甲基化可能参与胃肠腺癌发生。     

胃癌维甲酸信号通路相关基因启动子区协同高甲基化的研究

背景：启动子区高甲基化与胃癌中多种抑癌基因表达沉默密切相关。目的：探讨维甲酸信号通路相关基因维甲酸受体B（RAR13）、细胞维生素A结合蛋白1（CRBP1）和他扎罗汀诱导基因1（TIG1）启动子区高甲基化与胃癌的关系。方法：以甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测40例胃癌标本、10例正常胃黏膜标本和6株胃癌细胞株的RAR13、CRBPI和TIG1基因启动子区甲基化状态，分析i者甲基化状态的相关性及其与胃癌1晦床病理特征的关系。以逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测胃癌细胞株RAR13、CRBP1和TIG1mRNA表达。结果：40例胃癌组织的RAR13、CRBPI和TIG1基因甲基化率分别为45．0％、32．5％和57．5％，10例正常胃黏膜组织均未检测到上述基因甲基化（P〈0．05）。胃癌组织中RAR13的甲基化状态与CRBP1和TIG1的甲基化状态显著相关（P〈0．05），但三者的甲基化状态与胃癌临床病理特征无相关性。启动子区高甲基化胃癌细胞株相应基因mRNA表达缺失或减弱。结论：胃癌组织常发生维甲酸信号通路相关基因RAR13、CRBP1和TIG1启动子区高甲基化，高甲基化可能是相应基因转录失活的重要原因。     

甲状腺乳头状癌组织中TSHR基因启动子甲基化研究

目的探讨甲状腺乳头状癌组织中促甲状腺激素受体基因（Thyroid Stimulating Hormone Receptor,TSHR）基因启动子区5端CpG岛甲基化改变的特点与临床特征的关系。方法采用甲基化特异性PCR（MSP,methylation-specific PCR）方法检测TSHR基因启动子甲基化情况。结果（1）22／34例甲状腺乳头状癌组织中检测到TSHR基因启动子甲基化,9／34例甲状腺乳头状癌癌旁组织中检测到TSHR基因启动子甲基化,癌组织中TSHR基因启动子甲基化率显著增高（χ^2=10．019,P=0．002〈0．05）;（2）有淋巴结转移的甲状腺乳头状癌组织（15／18例）TSHR基因启动子的甲基化显著高于无淋巴结转移组（7／16例）（χ^2=5．812,P=0．016〈0．05）。结论TSHR基因启动子异常甲基化是甲状腺乳头状癌发展过程中的分子事件之一,可能影响了甲状腺乳头状癌细胞的摄碘的功能。     

死亡相关蛋白激酶基因高甲基化在胃癌形成过程中作用的初步研究

背景：DNA启动子区甲基化可导致肿瘤抑制基因表达沉默，在胃癌的发生、发展中发挥重要作用。目的：观察正常胃黏膜、慢性萎缩性胃炎伴肠化生、异型增生和早期胃癌组织中死亡相关蛋白激酶（DAPK）基因启动子区甲基化状态，探讨其与胃癌发生、发展的关系。方法：以甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测20例正常胃黏膜、14例慢性萎缩性胃炎伴肠化生、27例异型增生和16例早期胃癌组织中DAPK基因启动子区甲基化状态．并分析其与患者临床病理特征的关系。结果：早期胃癌组织中DAPK基因启动子区甲基化率显著高于正常胃黏膜、慢性萎缩性胃炎伴肠化生和异型增生组织（43.8％对0％、7．1％和11．1％，P〈0．05），而后三者之间DAPK基因启动子区甲基化率无明显差异。DAPK基因启动子区甲基化与患者性别、年龄和病变部位均无关，与幽门螺杆菌（H.pylori）感染和血清癌胚抗原（CEA）水平显著相关（P〈0．05）。结论：DAPK基因启动子区高甲基化是胃癌发生的早期分子事件，在由慢性萎缩性胃炎伴肠化生和异型增生进展至早期胃癌的过程中起重要作用。     

老年肺癌患者血清RASSF1A基因启动子异常甲基化检测及其临床意义

目的探讨老年肺癌患者血清RASSF1A基因启动子区域的甲基化状态及其临床意义。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）技术，检测45例老年肺癌患者、20例肺部良性病变患者及15例健康志愿者血清RASSF1A基因启动子区域的甲基化状态，并分析其与临床病理参数之间的相关性。结果45例老年肺癌患者血清RASSF1A基因启动子区域异常甲基化15例，检出率为33．3％，而20例肺部良性疾病患者及15例健康志愿者中检出率均为0，差异有统计学意义（均为P〈0．01）。RASSF1A启动子异常甲基化在小细胞肺癌（SCLC）中有更高的检出率，但不同病理类型的非小细胞肺癌（NSCLC）异常甲基化的频率无明显差异。RASSF1A启动子异常甲基化与患者的性别、年龄、分化、分期和治疗干预无显著相关。结论RASSF1A启动子异常甲基化在老年肺癌患者血清中有着较高的检出率，可能成为肺癌诊断的分子标记。     

肺癌组织中RKIP基因启动子区甲基化状态观察

目的观察肺癌组织中Raf激酶抑制蛋白（RKIP）基因启动子区甲基化状态变化,探讨其与肺癌临床病理特征的关系。方法采用RT-PCR和甲基化特异性PCR法（MSP）分析肺癌及相应癌旁肺组织中RKIP基因表达情况及其启动子区甲基化状态。结果肺癌组织中RKIP基因启动子区甲基化率为45．8％（27／56）,明显高于癌旁肺组织的13．3％（2／56）,P〈0．05。所有甲基化的肺癌组织中RKIP基因均无表达。有淋巴结转移的43例肺癌组织中,27例RKIP基因启动子甲基化;无淋巴结转移的40例中,11例RKIP基因启动子甲基化（P〈0．05）。结论肺癌组织中RKIP基因失表达与其启动子区甲基化有关,这可能是肺癌发生发展以及转移的原因之一。     

髓系白血病患者SHP-1与c-kit基因检测的临床意义

目的探讨造血细胞磷酸酶（SHP-1）基因与原癌基因c—kit在髓系白血病患者中的表达,以及其与白血病发生和预后的关系。方法用半定量逆转录-聚合酶链反应法检测67例髓系自血病患者（患者组）及33例正常对照组的白细胞SHP-1与c-kit mRNA表达。结果患者组中,急性髓系白血病（AML）、慢性粒细胞白血病慢性期（CML—CP）和急变期（CML—BP）患者的SHP-1平均表达水平均低于对照组（P〈0．05）;CML-CP患者的c—kit平均表达水平高于对照组,CML—CP和CML—BP患者比较有统计学差异（P〈0．05）;34例初治AML患者中,SHP-1^＋的完全缓解率高于SHP-1^-,而c—kit则相反。SHP-1^＋c—kit^＋的完全缓解率高于SHP-1^-c-kit^＋。结论SHP-1可能作为潜在的抑癌基因与c-kit基因参与白血病的发病,检测SHP-1与c—kit基因表达可作为判断髓系白血病患者预后的指标。     

胃癌组织中E-cadherin、S100A2基因启动子区甲基化的临床意义

目的探讨胃癌组织中E-cadherin、S100A2基因启动子区甲基化的临床意义。方法采用甲基化特异性PCR方法,检测64例胃癌患者（胃癌组）病变组织及15例胃溃疡患者（对照组）正常胃组织中的E-cadherin、S100A2基因启动子区甲基化,分析二者与胃癌生物学特征的关系。结果胃癌组E-cadherin基因启动子区甲基化38例（59.38%）,S100A2基因启动子区甲基化36例（56.25%）;对照组分别为2、2例（13.3%、13.3%）。在胃癌不同大体分型、分化程度及淋巴结转移患者中,E-cadherin、S100A2基因启动子区甲基化率均有统计学差异（P〈0.05或〈0.01）。结论胃癌组织中的E-cadherin、S100A2基因启动子区呈高甲基化状态,甲基化状态与胃癌的分化、转移、侵袭有关。     

基质金属蛋白酶抑制因子3甲基化与急性白血病的相关性研究

目的探讨基质金属蛋白酶抑制因子3（TIMP3）基因启动子区域甲基化在急性白血病发病机制中的作用。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应（PCR）法检测50例急性白血病患者骨髓单个核细胞、巨核细胞白血病CHRF细胞株、人组织细胞淋巴瘤U937细胞株、人慢性粒细胞白血病K562细胞株及10名健康供者外周血单个核细胞内TIMP3基因启动子区域的甲基化情况。结果50例患者骨髓单个核细胞、3种白血病细胞株及健康供者外周血单个核细胞中均未检测到TIMP3启动子区域甲基化。结论TIMP3基因启动子区域甲基化与急性白血病发病可能无相关性。     

散发性乳腺癌组织中EMSY基因启动子甲基化状态观察

目的观察散发性乳腺癌组织中EMSY基因启动子CpG岛甲基化的状态。方法用特异性甲基化PCR法检测66例散发性乳腺癌和32例正常乳腺组织中EMSY基因启动子区甲基化情况。结果乳腺癌组织有11例（16．7％）、正常乳腺组织有12例（37．5％）EMSY基因启动子发生甲基化,两者相比,P〈0．05。结论散发性乳腺癌组织中EMSY基因启动子区呈低甲基化状态,可能与散发性乳腺癌的发生发展有关。     

5-氮杂-2＇-脱氧胞苷对胃癌AGS细胞增殖、凋亡的影响及机制探讨

目的观察5-氮杂-2＇-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对胃癌AGS细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其机制。方法分别用低、中、高浓度5-Aza-CdR处理AGS,对照组不处理。CCK-8检测AGS细胞增殖状态,流式细胞仪检测AGS细胞周期及凋亡率,MSP检测AGS中DAPK基因启动子甲基化状态,RT-PCR和Western blot法分别检测AGS中的DAPKmRNA及其蛋白。结果低、中、高浓度组AGS细胞增殖速度显著低于对照组（P均〈0.05）,并呈浓度、时间依赖性（P均〈0.05）。5-Aza-CdR使AGS细胞停滞在G0/G1期（P均〈0.05）,细胞凋亡率增加（P均〈0.05）。对照组DAPK基因启动子表现甲基化状态,低、中、高浓度组DAPK基因启动子被逆转成未甲基化状态。低、中、高浓度组AGS细胞DAPK mRNA及蛋白表达量均显著高于对照组（P均〈0.05）,并呈浓度依赖性。结论 5-Aza-CdR可抑制AGS细胞增殖、促进其凋亡,可能与逆转DAPK基因启动子甲基化状态并使其重新表达有关。     

血浆Runx3基因启动子甲基化检测诊断早期肝细胞癌的临床价值

目的探讨血浆Runt相关转录因子3（Runx3）基因启动子甲基化检测诊断早期肝细胞癌（HCC）的临床价值。方法采用DNA甲基化特异性PCR方法,检测81例HCC患者的癌组织、癌旁正常组织及血浆Runx3基因启动子异常甲基化情况。结果癌旁正常组织未发现Runx3异常甲基化现象;癌组织Runx3异常甲基化率43．2％（35／81）,血浆39．5％（32／81）;血浆Runx3甲基化改变与癌组织甲基化改变显著相关（P〈0．05）。Runx3基因异常甲基化与HCC患者的临床病理参数无显著相关性（P〉0．05）。结论血浆Runx3基因启动子甲基化检测对早期诊断HCC有一定参考价值。     

骨髓增生异常综合征患者SOCS-1基因启动子甲基化及表达异常研究

目的:检测骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓SOCS-1基因的表达水平及其启动子区甲基化情况,探讨SOCS-1基因异常甲基化在MDS发生、进展中的作用,为去甲基化药物治疗MDS提供新靶点。方法:应用甲基化特异性聚合酶链反应、逆转录PCR检测30例MDS患者骨髓SOCS-1基因mRNA表达水平及启动子区甲基化状态。结果:30例MDS患者骨髓中有16例检测到SOCS-1基因启动子甲基化,阳性率为53.3%。根据MDS的IPSS危险度分组,在高危MDS中65.2%(15/23)患者SOCS-1基因发生甲基化,而在低危MDS中甲基化比例只有14.3%(1/7),2组SOCS-1基因甲基化率差异有统计学意义(P0.05)。在SOCS-1基因表达减低或缺失的16例患者中,10例(62.5%)发生启动子甲基化;而在SOCS-1基因表达正常的14例患者中,无一例发生SOCS-1基因启动子区异常甲基化,2组间SOCS-1基因甲基化率差异有统计学意义(P0.05)。结论:MDS患者骨髓SOCS-1基因启动子区存在异常甲基化,此异常甲基化与SOCS-1基因表达失活密切相关。     

hMLH1基因高甲基化在胃癌发生、发展中的作用

基因启动子区CpG岛甲基化使许多基因失活，从而导致恶性肿瘤的发生和发展。目的：检测hMLHl基因启动子区CpG岛甲基化水平，探讨其胃癌发生、发展中的作用。方法：以甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测41例胃癌、40例癌前病变和38例对照组织中hMLHl基因启动子区CpG岛甲基化状态，并分析其与胃癌患者临床病理特征的关系。结果：胃癌组织中hMLHl基因启动子区CpG岛甲基化阳性率为34．1％，显著高于癌前病变组的5．0％和对照组的0％（P〈0．05）。hMLHl基因甲基化阳性率与胃癌患者的年龄和肿瘤浸润深度有关（阳性率分别为46．4％对7．7％和55．0％对14.3％，P〈0．05），与性别、肿瘤分化程度和淋巴结转移无关（阳性率分别为34．8％对33．3％、28．0％对43．8％和38．1％对30．0％）。结论：胃癌组织中存在hMLHl基因启动子区CpG岛高甲基化，可能与胃癌的发生、发展有关．且可能在老年胃癌患者的肿瘤发生过程中起重要作用。     

白血病患者造血细胞磷酸酶与半胱氨酸蛋白酶基因表达及其临床意义

目的探讨造血细胞磷酸酶（SHP-1）基因和天冬酰胺特异酶切的半胱氨酸蛋白酶（Caspase-1、3）基因表达与白血病患者的化疗效果的关系。方法用RT-PCR方法检测白血病患者骨髓单个核细胞中SHP-1和Caspase-1、3的mRNA表达。结果急性白血病（AL）患者SHP-1和Caspase-1、3表达率分别为33．3％、80．0％、100．0％;慢性髓细胞白血病（CML）患者SHP-1表达率在急变期、慢性期分别为0．0％、37．5％。SHP-1和Caspase-1、3基因阳性患者的首次完全缓解（CR）率分别为85．0％、64．3％、55．8％,明显高于阴性患者（分别为15．6％、20．0％）,差异均有统计学意义（P〈0．05）;Caspase-1、3与SHP-1表达呈正相关。结论SHP-1可能是一个潜在的抑癌基因,它可能是通过激活下游的凋亡基因Caspase-1、3发挥作用;Caspase-1、3与SHP-1基因表达呈正相关且与病人的CR率有关,表明它们均参与了白血病的转归,可同时作为判断白血病患者的疗效和预后指标。