人和兔雪旺氏细胞的体外培养及形态学观察和生物特性研究

雪旺氏细胞(Schwann cell,SC)在神经再生过程中起着重要作用。我们取人胚及兔之坐骨神经,采用“植块多次移出法”培养出纯净度达99％的人和兔的SC。对培养的SC进行了冻存和复苏处理,复苏后的细胞可保持原有的生长特性。     

pSVPoMcat微基因在雪旺氏细胞中的表达

探讨ｐＳＶＰｏＭｃａｔ微基因表达产物对体外培养雪旺氏细胞（ＳＣ）的影响。     

雪旺氏细胞基底膜与晚期神经再生

本文采用日本大耳白种兔１０只，将双侧腓总神经切断术后５个月（此时胫前肌运动终板已证实完全消失），取一侧远端退变的腓总神经３．２ｃｍ，将其放入液氮内冷冻并复温后再移植到对侧腓总神经上，经３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４５天及术后６０天，于近端吻合口远端１．０ｃｍ处取材，高压透射电镜观察．结果发现：雪旺氏细胞基底膜不但能长久存在，而且有很强的抗冷冻及热损伤能力；基底膜在诱导神经再生过程中起重要作用，再生轴突均位于移植神经的基底膜管内，未发现轴突在基底膜外生长；近端神经轴突在向远端生长过程中有扩张皱缩、狭窄神经鞘管能力．     

培养中的雪旺氏细胞对脊髓前角神经元的营养作用

通过隔玻片ＳＤ大鼠瓦勒氏变性远段坐骨神经获得的雪旺氏细胞（ＳＣ）与胎龄１４天的ＳＤ大鼠胚胎脊髓前角神经元（ＳＡＨＮ）联合培养，用倒置显微镜、Ｎｉｓｓｌ染色、ＳＡＨＮ免疫学观察，证实培养中的ＳＣ具有维持神经元成活和促进突起生长的作用。在这二种神经营养因子作用下，脊髓前角神经元胞体增大，突起生长可达数倍胞体长度。为认识和研究运用神经营养学说促进神经再生提供了新资料。     

消化法培养成年猴许旺细胞

目的　探讨猴许旺细胞在标准条件下的培养、扩增与传代。　方法　根据Wallerian变性后许旺细胞增殖的原理 ,利用双酶消化法及阿糖胞苷 (Ara c)抑制成纤维细胞生长分裂的方法获取许旺细胞。用S 10 0抗体鉴定所培养的细胞并用MTT法检测这些细胞的增殖能力。　结果　猴许旺细胞培养 15d后可达 5× 10 6,纯度为 92 % ,MTT测定证实该细胞生长良好。　结论　神经预变性后 ,通过消化法和Ara c处理能获取量大纯度高、活力良好的许旺细胞 ,可用于组织工程化人工神经的种子细胞。     

人体许旺细胞培养及扩增的实验研究

目的探索适合于人体应用的人类许旺细胞的培养方法及其扩增条件,为其应用于组织化人工神经作准备。方法人体截肢或神经移植中多余的肢体外周神经共19条,显微镜下去除结缔组织,修剪成2～3mm神经段,进行组织块培养,其中12条加入F-12培养液,7条神经用标准培养液;经重复种植6～8次,在倒置显微镜下观察,当主要为许旺细胞生长时,用无细胞毒性的胶原酶消化分离许旺细胞。得到的细胞用台酚蓝染色计数细胞数和存活率,S-100蛋白染色鉴定许旺细胞纯度。结果两种培养液经培养消化后获得的细胞存活率分别为85.54%和86.93%,许旺细胞纯度分别为82.64%和86.37%,差异均无统计学意义,但用F-12培养液获得的细胞数明显多于标准培养液,分别为14.2×10~7和5.9×10~7。结论F-12培养液的添加物均为能应用于人体的制剂,它与标准培养液一样能用于人类许旺细胞的培养,且能促进许旺细胞的增殖。     

许旺细胞在支架材料中的三维生长与迁移的研究

目的 研究许旺细胞在聚乳酸(PLA)无纺纤维布及聚羟基乙酸(PLGA)纤维丝上的粘附、三维生长及迁移情况。方法 将许旺细胞／ECM凝胶悬液与PLA无纺纤维布及经胶原、多聚赖氨酸和ECM预处理的PLGA纤维丝复合培养，相差和激光扫描共聚焦显微镜观察许旺细胞在纤维丝中的三维生长和迁移。结果 许旺细胞／ECM悬液，与PLA无纺纤维布复合，随着凝胶的形成，大部份许旺细胞滞留在纤维网孔中，多数细胞和纤维丝贴附，形成多层排列的类似Beungner带状的许旺细胞柱。许旺细胞能贴附在PLGA纤维丝上生长并沿纤维丝移行，ECM凝胶能显著增加贴附和移行细胞数量。结论 ECM凝胶能促进许旺细胞在支架中的黏附、生长与迁移，是构建组织工程化人工神经的良好整合材料。     

许旺细胞在聚羟基乙酸纤维上三维定向培养

目的 为制备组织工程化的神经桥接物。方法 将体外扩增的许旺细胞（ＳＣｓ）接种在纵向排列的、可吸收材料ＰＧＡ纤维支架上，并对这种立体培养的细胞进行光镜、电镜和免疫组化观察，结果 发现许旺细胞可与聚羟基乙酸（ＰＧＡ）纤维良好吸附。并在其上边分裂边迁移从而形成了类似Ｂｕｅｎｇｎｅｒ带的纵向排列的细胞链，且其间含有一定的间隙，同时细胞大量分泌的层粘蛋白（ＬＮ）沉积在纤维表面形成了纵向的、类似变性神经的结构     

分离培养骨巨细胞瘤破骨样细胞的方法学研究

本文通过组织块贴壁法、机械分离法和酶消化法对骨巨细胞瘤的破骨样细胞进行分离、培养。通过比较,结果显示：酶消化法提纯程度最高,收获量较多;机械分离法居中,但操作简单,对原位杂交、免疫组织化学和骨吸收功能检测具有一定的应用价值;组织块培养法需要时间长,各细胞成分混杂,对研究各细胞成分之间的关系,有一定帮助     

运用组织工程学原理构建许旺细胞三维培养体系

目的 探讨普通重力和模拟微重力条件下构建许旺细胞三维培养体系的方法。方法 对聚羟基乙酸细丝支架进行化学改性处理后再以层粘连蛋白进行生物学修饰;分别在普通重力和模拟微重力条件下把原代许旺细胞悬液接种在支架材料上,观察许旺细胞的粘附生长情况。结果 两种重力条件下许旺细胞在聚羟基乙酸支架表面都能良好贴壁生长,培养2d时细胞生长稳定、密度适中;模拟微重力条件下许旺细胞在支架表面的分布更均匀。结论 普通重力和模拟微重力环境都适宜构建许旺细胞的三维培养体系,模拟微重力环境可能为有利。     

基膜黏连蛋白和Ⅳ型胶原对培养许旺细胞贴壁及增殖的作用

目的：了解基膜黏连蛋白和Ⅳ型胶对体外培养条件下许旺细胞的贴壁及增殖作用的影响。方法：用基膜黏连蛋白和Ⅳ型胶原包被培养板，以结合了相应抗体的培养板及包被Ⅰ型胶原和多聚赖氨酸的培养板为对照，将培养的许旺细胞以相同浓度加入各组培养板内。测定2、6、24h细胞贴壁率，培养72h进行^3H-TdR掺入试验，双道液体闪烁计数器测定各组的放射性计数。结果：基膜黏连蛋白和Ⅳ型胶原组早期贴壁率较Ⅰ型胶原和多聚赖氨酸组高，抗基膜黏连蛋白和抗Ⅳ型胶原且贴壁率较低。基膜黏连蛋白和Ⅳ型胶原组^3H-TdR掺入量高于其它组。结论：基膜黏连蛋白和Ⅳ型胶原对体外培养条件下的许旺细胞贴壁及增殖有促进作用。     

复方红芪提取液对许旺细胞分化的影响

目的　在对复方红芪提取液的研究中 ,发现其能促进外周神经损伤的修复 ,并发现其有促进许旺细胞增殖的作用。为了进一步探索复方红芪提取液对神经修复影响的机制 ,观察其对许旺细胞中的酪氨酸蛋白激酶 (PTKs)活性的影响。　方法　使用按 1∶160 0 ,1∶32 0 0 ,1∶64 0 0 ,1∶12 80 0稀释的复方红芪提取液 ,培养新鲜切取的SD大鼠坐骨神经。于培养后第 2 4、48和 96h时 ,使用 [Iγ 32 P]ATP掺入、液闪计数法 ,观察许旺细胞中PTKs的活性变化。使用神经生长因子 (NGF)作阳性对照 ,正常培养液作阴性对照。　结果　正常培养条件下 ,离体神经中许旺细胞的PTKs呈无活性状态。神经生长因子组可见PTKs轻度升高 ,至 96h活性仍有活性且较前稍强 ,峰值为 0 15 48。红芪组可见PTKs活性显著增加 ,随后即下降。峰值出现在第 48h ,1∶160 0 ,1∶32 0 0和 1∶64 0 0三种浓度间变化不明显 ,峰值分别为0 44 60、0 332 6和 0 4169,1∶12 80 0浓度时PTKs活性无变化。秩和检验第 48h、1∶64 0 0以上浓度的红芪培养与神经生长因子及正常对照组差异有显著性 (P <0 0 0 5 ) ,以后各时间间差异则无统计学意义。不同浓度的红芪提取液培养不同时间 ,PTKs活性呈负相关变化 ,秩和检验差异有显著性 (P <0 0 0 5 )。　结论　复方红     

三步法纯化雪旺细胞源神经营养蛋白

目的探索三步法纯化及获得雪旺细胞源神经营养蛋白的方法，为获得纯化蛋白进行单克隆抗体研究奠定基础。方法收集预损伤大鼠坐骨神经２００条，用酶消化结合差速粘附法纯化并收集其中雪旺细胞，将细胞超声粉碎、离心，收集上清液超滤，再经ｓｅｐｈａｄｅｘＧ１００层析，得到两个主峰，分段收集，将其中活性部分过高效液相色谱柱。结果得到三个主峰，相对分子质量分别为６８×１０３、５４×１０３和３０×１０３，用ＭＴＴ法测定生物活性，５４×１０３蛋白生物活性最大，经ＳＤＳＰＡＧＥ电泳证实基本为单一蛋白带。结论应用三步法同时各步采用合适方案是纯化雪旺细胞源神经营养蛋白的较好方法。     

阴道粘膜上皮细胞的分离培养和鉴定

目的 初步建立阴道粘膜上皮细胞体外培养方法,为阴道粘膜上皮研究提供实验模型.方法 取雌性新西兰大白兔阴道粘膜组织小块,胶原酶Ⅳ和胰蛋白酶联合消化分离法收集上皮细胞,接种于角朊细胞无血清培养液中静置培养、传代.动态观察细胞生长增殖情况,扫描和透射电镜观察超微结构,流式细胞仪测定细胞增殖周期,并进行免疫组织化学鉴定.结果 体外培养的阴道粘膜上皮细胞为二倍体细胞,增殖状态良好,细胞间可见桥粒连接,免疫组化角蛋白染色阳性.细胞的超微结构和免疫组化染色均具有上皮细胞特征.结论 在本实验条件下,体外培养的阴道粘膜上皮细胞具有较好的增殖能力,可作为阴道粘膜上皮研究的理想实验模型.