猪皮、尸体皮在-80℃冰箱降温-LN2冻存中细菌学的动态观察

目的探讨猪皮、尸体皮在冷冻保存过程中,消毒剂、冷冻及抗冻剂对皮肤细菌的影响.方法将新鲜消毒的中厚猪皮、尸体皮和经过-80℃降温,LN2冻存的猪皮、尸体皮各取6块行需氧菌和厌氧菌培养,而后做细菌学检测.结果猪皮冷冻前后三组各时间点均检出细菌,尸体皮仅冷冻前和冷冻后对照组及10%D-KR组检出细菌,余未检出细菌.所检出的需氧菌为表皮葡萄球菌和棒状杆菌,厌氧菌为丙酸杆菌和贪婪丙酸杆菌.猪皮所检细菌量3-5CFu log/g,尸体皮＜4CFu log/g.结论猪皮细菌检出率明显高于尸体皮,冷冻对细菌检出率有一定影响,温度越低影响越大,但与冷冻时间长短无关.抗冻剂对皮肤细菌无影响.常规清洗消毒方法不能完全清除皮肤细菌.     

猪皮、尸体皮在-80℃冰箱降温-LN_2冻存中细菌学的动态观察

目的 :探讨猪皮、尸体皮在冷冻保存过程中 ,消毒剂、冷冻及抗冻剂对皮肤细菌的影响。方法 :将新鲜消毒的中厚猪皮、尸体皮和经过 - 80℃降温 ,LN2 冻存的猪皮、尸体皮各取 6块行需氧菌和厌氧菌培养 ,而后做细菌学检测。结果 :猪皮冷冻前后三组各时间点均检出细菌 ,尸体皮仅冷冻前和冷冻后对照组及 10 %D -KR组检出细菌 ,余未检出细菌。所检出的需氧菌为表皮葡萄球菌和棒状杆菌 ,厌氧菌为丙酸杆菌和贪婪丙酸杆菌。猪皮所检细菌量 3- 5CFulog/g ,尸体皮 <4CFulog/ g。结论 :猪皮细菌检出率明显高于尸体皮 ,冷冻对细菌检出率有一定影响 ,温度越低影响越大 ,但与冷冻时间长短无关。抗冻剂对皮肤细菌无影响。常规清洗消毒方法不能完全清除皮肤细菌。     

-80℃冰箱非程控降温冻存脐血造血干细胞

目的:为脐血造血干细胞(CBHSC)的冻存建立简便、经济且有效的方法。方法:采用5％二甲基亚砜(DMSO)加6％羟乙基淀粉(HES)为冷冻保护剂,不用程控降温装置,直接置CBHSC于-80℃冰箱中冻存1～6个月。结果:冻存6个月后,单个核细胞(MNC)、粒-单系造血祖细胞(CFU-GM)和CD_(34)~+细胞的回收率及台盼兰拒染率分别为(91.6±1.8)％,(83.1±15.6)％,(88.2±1.8)％,(77.7±2.0)％。结论:这种简便、经济的方法能很好地保存CBHSC的造血潜能,因此,能为脐血移植冻存CBHSC。     

贴壁培养细胞直接用培养瓶置-80℃冻存

目的：探讨贴壁培养细胞直接用培养瓶置4℃、-20℃,最后置-80℃低温冰箱冻存的可行性.方法：采用培养瓶常规培养贴壁细胞L929,去上清后,加冻存液覆盖细胞.-80℃低温冰箱冻存,然后,每2个月复苏1次,计数活细胞,观察细胞传代效果.结果：L929细胞置-80℃低温冰箱冻存1年,复苏良好,随着冻存时间延长,存活细胞逐渐减少,复苏耗时延长.结论：贴壁培养细胞直接用培养瓶置-80℃低温冰箱冻存1年,复苏良好.     

4℃普通冰箱储存皮片的活力观察

利用4℃普通冰箱储存皮肤,对于保证皮肤在短期内具有良好活力,是一种简便易行的方法［1］,尤其是对基层医院。本实验目的是观察六种方法,五种溶液在相同条件下保存后的皮片活力变化,以指导临床应用。1 材料与方法采用临床病人取皮术后剩余皮肤,厚度约（0.4±0.2）mm,大小约2 cm×2 cm。分6组于相同消毒容器储存：分别置于以下等量溶液中：（1）未加溶液的空瓶中（A）;（2）我院产0.9%生理盐水3 ml（NS）（B）;（3）复方氯化钠溶液3 ml（C）;（4）平衡液3 ml（0.25%碳酸氢钠SB∶NS=1∶2）（D）;（5）平衡液加25%的氨基酸（2∶…     

-80℃冻存外周血造血干细胞的应用研究

目的:探求一种操作简便实用、造血干细胞回收率和存活率高、成本低的外周血造血干细胞的冻存方法。方法:CP-1和5%白蛋白作保护剂在?80℃条件下直接冻存,并检测冻存前后外周血干细胞的活性,单个核细胞(MNC)和CFU-GM、CD34 细胞的回收率。结果:冻存前后外周血干细胞活性,单个核细胞(MNC)和CFU-GM、CD34 细胞的回收率无明显差异(P>0.05),输注后造血均重建。结论:CP-1和5%白蛋白作保护剂在?80℃条件下直接冻存干细胞是一种简便、可靠、安全、成本低的外周血干细胞冻存方法,具有广泛的临床推广价值。     

不同冻存液对人羊膜间充质干细胞-80 ℃冻存与复苏效果的影响

目的:观察不同冻存液对人羊膜间充质干细胞冻存复苏后的存活率及再培养情况的影响,并探索简单有效的冻存与复苏方法.方法:将含有血清培养基短期体外培养的人羊膜间充质干细胞分为4组,分别加入不同冻存液(体积分数):A组10%二甲基亚砜 40%胎牛血清 50%DMEM/F12,B组10%二甲基亚砜 90%胎牛血清,C组5%二甲基亚砜 4.5%羟乙基淀粉 20%胎牛血清 70.5%DMEM/F12,D组10%胎牛血清 90%DMEM/F12.以相同方法冻存并复苏细胞,比较4组细胞回收率及再培养情况.结果:A、C 2组细胞复苏后回收率高于另外2组(P均<0.05),且于复苏后再培养24 h内出现较多贴壁细胞.结论:以5%二甲基亚砜 4.5%羟乙基淀粉 20%胎牛血清 70.5%DMEM/F12作冻存液冻存羊膜间充质干细胞效果好.     

非程控降温,—80℃冻存自体外周血干细胞的研究

目的：观察非程控降温、－80℃冻存的方法对自体外周血十细胞（APBSC）的保存效果。方法：以6％羟乙基淀粉（HES）、5％二甲基亚砜（DMSO）及4％人血白蛋白（ALB）的混合物为冷冻防护剂，将APBSC直接置于－80℃下保存，冻存前反复苏后测定APBSC的CFU－GM、BFU－E；观察移植后造血功能重建情况。结果：13例患者白细胞在十3～＋7天下降至（0．0～0．1）×10／L，白细胞（0．0～0．2）×109／L持续时间3～6天，于＋9～＋11天恢复至1．0X109／L以上．中性粒细胞绝对值（ANC）于＋9～＋11天达到0．5X109／L。血小板在＋3～＋7天下降至（2．0～21）×109／L，于＋8～＋15天恢复至20×109／L以上。CFU－GM、BFU－E回大率分别为76．5％、78．4％。结论：非程控降温、－80℃冻存是一简便、经济、有效的自体外周血于细胞保存方法。     

-80℃简易冻存外周造血干细胞临床应用观察

目的:探索一种简便易行、安全有效、成本低的干细胞的冻存方法。方法:6份外周造血干细胞以1640培养液和二甲基亚砜、10%白蛋白作保护剂在-80℃条件下直接冻存,检测冻存前后外周血干细胞的活性、单个核细胞(MNC)数和CD34+细胞数及回收率。结果:冻存前后外周血干细胞活性、MNC和CD34+细胞的数量及回收率满足移植要求,输注后造血均重建。结论:1640培养液和二甲基亚砜、10%白蛋白作保护剂在-80℃条件下直接冻存干细胞是一种简便、可靠、安全、成本低的外周血干细胞冻存方法。     

-80℃冰箱降温-液氮冻存脐血造血干细胞

为脐血造血干细胞 (CBHSC)的冻存建立简便有效的方法 ,采用 5 %二甲基亚砜 (DMSO)加 6 %羟乙基淀粉 (HES)为冷冻保护剂 ,不用程控降温装置 ,直接置CBHSC于 -80℃冰箱中降温 ,次日移至液氮液中保存 1周、1个月、3个月、6个月。结果冻存 6个月后 ,单个核细胞 (MNC)、粒 -单系造血祖细胞 (CFU -GM )和CD+34 细胞的回收率及MNC的台盼蓝拒染率分别为 90 .5± 1.7% ,87.6± 19.5 % ,91.9± 2 .9% ,75 .8± 1.8%。认为这一简便的方法能很好地保存CBHSC的造血潜能 ,因此它能为脐血移植冻存CBHSC。     

机采浓缩血小板-80℃长期冻存的动态的体外黏附、聚集功能和Ⅲ因子活性变化

目的 跟踪观察机采浓缩血小板(platelet apheresis concentrates,PCs)在5%DMSO条件下于-80℃冻存1～5年的体外功能变化.方法 玻璃珠柱检测血小板黏附功能,花生四烯酸诱导后检测血小板聚集功能,蝰蛇毒检测血小板Ⅲ因子活性.结果 对深低温保存的冻存血小板的动态观察发现:PCs冻存期为1～5年融化复苏后的黏附和聚集功能未发现有统计学意义(P＞0.05);冻存至第4年的血小板复苏时4/10样品发生凝集,第5年的有3/11发生凝集;冻存至第5年时,多数样品血小板Ⅲ因子失活.对22℃常温保存的液体血小板的观察发现:血小板的黏附功能和最大聚集能力随保存时间的延长逐渐下降,72 h有差异(P＜0.05),96 h有显著性差异(P＜0.01);5 d之内血小板Ⅲ因子活性无明显改变(P＞0.05).结论 22℃保存的液体血小板发生渐进的代谢损伤,而-80℃保存期在3年内的冻存血小板未见明显异常.     

机采浓缩血小板-80 ℃长期冻存条件下CD62p表达与ADP诱导的再表达

目的 通过对冻存损伤关键因素的了解评估冻存血小板潜在的冻存期限.方法 采用流式细胞技术观察冻存1～6年复苏后血小板CD62p表达和ADP诱导后CD62p再表达能力.结果 在-80℃保存12～48个月,冻存血小板CD62p的表达受得良好抑制,可与22℃保存28 h的液体血小板质量相近;而ADP-CD62p再表达能力充分,36个月时为(70.2±10.3)%,与常温24 h的液体血小板的(70.4±21.5)%相比无显著性差异(P＞0.05);但48个月时下降至(35.2±18.2)%,与冻存36个月比较有非常显著性差异(P＜0.01).作为对照,液体血小板在采集后1 h的CD62p表达率为(2.2±1.5)%,在22℃条件下随保存时间的延长迅速升高,24 h有显著性差异(P＜0.05),48 h和72 h有极显著性差异(P＜0.01);而采集后1 h的ADP-CD62p再表达率为(83.5±14.7)%,其后迅速下降,48 h后有极显著性差异(P＜0.01).结论 新鲜血小板常温条件下待冻期间发生的代谢损伤是影响冻存血小板质量的关键因素,选择≤24 h的新鲜血小板用于-80℃冻存至少可以保存3年.     

冻存人胎胰岛组织治疗Ⅱ型糖尿病2例

目的了解冻存人胎胰岛组织治疗Ⅱ型糖尿病的作用及效果。方法无菌条件下冻存人胎胰岛组织块,复温后培养48h,移植治疗Ⅱ型糖尿病病人。观察移植前后血糖、尿糖变化。结果移植治疗后病人血糖分别从8.5mmol·L-1、7.9mmol·L-1降至6.2mmol·L-1、6.0mmol·L-1,尿糖(2+)降至(-),临床症状消失。结论冻存人胎胰岛组织治疗Ⅱ型糖尿病疗效可靠,值得推广。     

胃肠道肿瘤冻存组织原代细胞培养的实验研究

目的探讨冻存胃肠道肿瘤组织复苏后原代细胞培养的可行性方法。方法采用胎牛血清、RPMI Medium 1640培养液、二甲基亚砜（DMSO）配制冻存液,复苏以此冻存液冷冻保存的8例胃肠道肿瘤组织并行原代细胞培养,另复苏2例未加冻存液直接冻存的胃肠肿瘤组织为对照组。结果8例冻存液保存的胃肠道肿瘤组织原代细胞培养均获成功,成功率为100%。对照组2例未加冻存液冻存的肿瘤组织培养失败。结论 复苏应用冻存液冻存的胃肠道肿瘤组织进行原代细胞培养可获得成功,细胞生长时间与冻存时间及肿瘤细胞恶性程度有关,采用高浓度血清冷冻保存效果较好。     

IL-2依赖细胞株的冻存方法

小鼠细胞毒T-淋巴细胞(CTLL-2)的生长增殖必须特异地依赖白细胞间素Ⅱ(IL-2),许多实验室常以该细胞增殖的程度作为检测IL-2活性的指标。但是CTLL-细胞株对生长环境的要求相当严格,用常规方法难以在液氮中冻存。有的实验室虽冻存成功,但复     

成人脂肪间充质干细胞冻存的实验研究

目的 探寻成人脂肪间充质干细胞冻存和复苏的条件,观察冻存前后脂肪间充质干细胞的形态学特征以及向心肌细胞诱导分化的潜能.方法 自成人脂肪组织分离培养脂肪间充质干细胞,流式细胞仪检测细胞表面分子.将脂肪间充质干细胞于液氮中低温冻存,经3个月后复苏,倒置相差显微镜及透射电子显微镜下观察细胞形态.5-氮杂胞苷进行诱导,免疫荧光技术检测心肌特异性肌钙蛋白-Ⅰ.比较冻存前后脂肪间充质干细胞的形态学特征及诱导转化率.结果 脂肪间充质干细胞较幼稚,冻存前后光镜下的形态及电镜下的超微结构无明显差别,脂肪间充质干细胞呈CD29阳性表达,HLA-DR阴性表达.冻存前后脂肪间充质干细胞经5-氮杂胞苷诱导后第28天均可表达心肌特异性肌钙蛋白-Ⅰ,诱导转化率无差异.结论 脂肪间充质干细胞可耐受低温冻存,复苏后细胞的形态学特征以及诱导分化潜能无明显变化.     

冻存增强人外周血单个核细胞产生IL－2的机理初探

作者用ＥＬＩＳＡ法研究了冻存对人外周血革个核细胞（ＰＢＭＣ）产生白介素２（ＩＬ－２）的影响。结果表明，冻存后ＰＢＭＣ产生ＩＬ－２能力明显增强；去除ＣＤ８＋细胞或加入消炎痛后，ＰＢＭＣ产生ＩＬ－２能力增强，且与ＰＢＭＣ冻存后产生ＩＬ－２水平相同。研究提示：冻存过程有可能通过抑制ＰＧＥ２分泌细胞及使ＣＤ８＋细胞失活，使ＰＢＭＣ增加ＩＬ－２的产生。     

人卵巢组织两种超低温冻存方法的研究

【目的】探索两种人卵巢组织冷冻方案用于生殖细胞保存的效果。【方法】活检卵巢组织来自15名经知情同意的手术患者。组织被随机分配到新鲜组、玻璃化冷冻组和慢速冷冻组。观察和比较各组卵巢组织冻融后的原始卵泡形态完整率,并通过体外培养系统测定培养液中的雌二醇和孕酮水平,观察和比较冻融后卵巢组织内分泌功能。【结果】本研究中新鲜组、慢速冻融组和玻璃化冻融组的原始卵泡形态完整率分别是97.6%、72.6%和80.3%。两冻融组与新鲜组相比明显下降(P<0.001),而在两冻融组间差异并无统计学意义(P=0.237)。在体外组织培养期间,两种冻融卵巢组织都能持续分泌雌二醇和孕酮,两组间差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】本研究中两种人类卵巢组织超低温冷存的方法是可行的,可适应不同需要。     

改良hela细胞冻存与复苏方法的实验研究

目的:建立一种改良的hela细胞冻存和复苏的方法.方法:取生长状态良好的HELA细胞分别进行传统和改良方法冻存,于冻存后1年分别行传统和改良的复苏方法.用MTT法测细胞生长曲线,应用两因素析因分析统计方法评定不同冻存方法、不同复苏方法单独和/或组合对细胞复苏率的影响.结果:HELA体外生长良好.电镜观察细胞超微结构没有明显改变.细胞的复苏率均受不同冻存方法和复苏方法单、双因素影响.冻存复苏后生长曲线良好.结论:改良后的HELA冻存和复苏方法可使细胞保持最佳生物学特性,细胞的复苏率高,适合用于体外实验研究.     

-80 ℃冰箱冷冻保存恶性血液病患者自体外周血造血干细胞的临床应用

自体干细胞移植(autologous peripheral blood stem cell trans-plantation,APBSCT)是治愈某些恶性血液病的有效手段之一.