小红参醌对低温储存皮肤活力的影响

目的：探讨小红参醌作为抗冻剂添加剂，在皮肤的低温储存中对皮肤活力折影响。方法：皮肤的低温储存采用速冻玻璃化法和慢地，将小红参醌分别按照０．５μｇ／ｍｌ和１μｇ／ｍｌ的浓度加入抗冻液中，每种方法分为常规组、０．５μｇ／ｍｌ小红参醌组和１μｇ／ｍｌ小红参醌组。利用三个实验组分别对小块离体豚鼠皮和异体尸体皮进行处理，然后在液氮温度下进行深低温储存。对储存后皮肤分别进行氧耗量、琥珀酸脱氢酶活性的测定，并计算平均活力。结果：对于豚鼠皮和异体尸体皮，无论速冻法和慢冻法两种浓度的小红参醌对低温储存后皮片的活力均未发现有明显的提高。除大块异体皮慢冻组琥珀酸脱氢酶，小块异体皮慢冻组耗氧量之间尚有差异以外，其他组别氧耗量、琥珀酸脱氢酶活性测定值以及平均活力之间均无显著差异。结论：抗氧化剂小红参醌在皮肤的低温储存中对皮肤的活力没有影     

猪皮、尸体皮在-80℃冰箱降温-LN_2冻存中细菌学的动态观察

目的 :探讨猪皮、尸体皮在冷冻保存过程中 ,消毒剂、冷冻及抗冻剂对皮肤细菌的影响。方法 :将新鲜消毒的中厚猪皮、尸体皮和经过 - 80℃降温 ,LN2 冻存的猪皮、尸体皮各取 6块行需氧菌和厌氧菌培养 ,而后做细菌学检测。结果 :猪皮冷冻前后三组各时间点均检出细菌 ,尸体皮仅冷冻前和冷冻后对照组及 10 %D -KR组检出细菌 ,余未检出细菌。所检出的需氧菌为表皮葡萄球菌和棒状杆菌 ,厌氧菌为丙酸杆菌和贪婪丙酸杆菌。猪皮所检细菌量 3- 5CFulog/g ,尸体皮 <4CFulog/ g。结论 :猪皮细菌检出率明显高于尸体皮 ,冷冻对细菌检出率有一定影响 ,温度越低影响越大 ,但与冷冻时间长短无关。抗冻剂对皮肤细菌无影响。常规清洗消毒方法不能完全清除皮肤细菌。     

猪皮、尸体皮在-80℃冰箱降温-LN2冻存中细菌学的动态观察

目的探讨猪皮、尸体皮在冷冻保存过程中,消毒剂、冷冻及抗冻剂对皮肤细菌的影响.方法将新鲜消毒的中厚猪皮、尸体皮和经过-80℃降温,LN2冻存的猪皮、尸体皮各取6块行需氧菌和厌氧菌培养,而后做细菌学检测.结果猪皮冷冻前后三组各时间点均检出细菌,尸体皮仅冷冻前和冷冻后对照组及10%D-KR组检出细菌,余未检出细菌.所检出的需氧菌为表皮葡萄球菌和棒状杆菌,厌氧菌为丙酸杆菌和贪婪丙酸杆菌.猪皮所检细菌量3-5CFu log/g,尸体皮＜4CFu log/g.结论猪皮细菌检出率明显高于尸体皮,冷冻对细菌检出率有一定影响,温度越低影响越大,但与冷冻时间长短无关.抗冻剂对皮肤细菌无影响.常规清洗消毒方法不能完全清除皮肤细菌.     

复方甘油抗冻剂对低温冻存精子的影响

用复方甘油作为抗冻剂对8份志愿者精液进行了冻存（－196℃），比较了冻存前后精子的密度和精子的活动率。结果，冻存前与冻存10天复温后精子的密度和活动率均无明显差异（P＞0．05）。提示，复方甘油在精子的冻存中是一种良好的抗冻剂。     

皮片低温 (0～-40℃) 冷冻损伤的实验研究

验证皮片在０－－４０℃冷冻降温区域组织细胞损伤后的变化及其活力的改变。方法依据ＭｃＧａｍ梯度冷冻实验原理与方法。结果采用皮片在无低温保护抗剂的前题下,观察出０－－４０℃皮片冷冻在Ｔｈａｗ组与ＬＮ２组之间的变化趋势以及两种活力指标活力的变化规律。     

复方甘油抗冻剂对低温冻存精子的保护作用

目的　了解复方甘油冻存剂对精子冻存前后活力的影响。方法　取 8份志愿者精液 ,加入复方甘油作为抗冻剂 ,冻存 10d ,比较冻存前后精子的密度和活动率。结果　冻存前与冻存后 10d精子的密度和活动率均无明显差异 (P >0 0 5 )。结论　复方甘油是冻存精子的一种良好的抗冻剂     

低温储存对皮肤组织α辅肌动蛋白和纽蛋白表达的影响

目的:观察α辅肌动蛋白和纽蛋白在不同温度保存皮肤组织中的分布,以探讨其与皮肤冷冻损伤的关系。方法:用α-actinin、vinculin抗体对5种保存条件下的皮肤组织作免疫组化染色,用图像分析仪测定表皮组织中的含量,并用HE染色观察皮肤的组织结构变化。结果:与新鲜皮片组相比,-196℃H抗冻液中保存皮肤组织结构保存较好,α-actinin、vinculin含量变化不明显,而4℃、-20℃、-80℃保存皮肤组织结构破坏明显,含量亦明显下降。结论:皮肤低温保存冷冻损伤与黏附分子α-actinin、vinculin破坏有关。     

﹣80°C冰箱长期冻存外周血造血干细胞研究

目的对外周血造血干细胞活性在深低温（-80℃）下保存3年的效果进行评价。方法对30例经MCS＋血细胞分离机采集所得的外周血造血干细胞加入细胞冻存保护剂分别予以-196℃液氮冻存和-80℃冰箱深低温冻存,并检测和比较冻存前后单个核细胞（mononuclear cells,MNC）、CD34＋细胞的计数及细胞回收率,细胞活性。结果 -80℃冰箱冻存组MNC、CD34＋细胞冻存3年与冻存前比较差异均无统计学意义冻存3年后MNC回收率与冻存1年后比较差异无统计学意义。3年后-80℃冰箱冻存组干细胞与-196℃液氮冻存组比较,差异无统计学意义。结论 -80℃冰箱深低温保存法快速、简便、安全、费用低廉,可有效用于外周血造血干细胞长期保存。     

低温储存对皮肤组织E-钙黏素和β-连接素表达的影响

目的：观察黏附分子E-钙黏素(E-cadherin)、β-连接素(β-catenin)在不同温度储存皮肤组织中的分布，以探讨其与皮肤冷冻损伤的关系。方法：用E-cadherin、β-catenin抗体对5种储存条件下的皮肤作免疫组化染色，用图像分析仪测定表皮组织中的含量。结果：与新鲜皮片组相比，-196℃ H抗冻液中储存皮肤组织结构保存较好，E-cadherin、β-catenin含量变化不明显，而4℃、-20℃、-80℃储存皮肤组织结构破坏明显，含量亦明显下降。结论：皮肤低温储存冷冻损伤与黏附分子破坏有关。     

磷酸肌酸对低温储存皮肤活力的影响

将新鲜离体皮片置入含磷酸肌酸（PCr)的储存液中4℃储存，以琥珀酸脱氢酶（SDH）及氧耗测定法动态观察皮片活力。结果发现，含PCr的实验组皮片活力下降速度慢于不含PCr的对照组，提示：PCr对于防止储存皮肤活力下降有一定作用，将PCr与常规保存液中的有效成分结合，有可能找到更为简便有效和经济实用的皮肤保存液。     

低温下皮肤力学信号相关蛋白表达与活力关系研究

目的:探讨皮肤力学信号相关蛋白整合素(integrin)、踝蛋白(talin)在不同低温条件下的表达与皮肤活力改变的关系,进一步揭示皮肤低温损伤的机制。方法:从同一个体取标本后用5种不同的温度保存,分为新鲜组、4℃组、-20℃组、-80℃组和-196℃组,并在保存48 h后进行实验观察,用integrinβ1、talin抗体对5种储存条件下的皮肤作免疫组化染色,图像分析方法定量,同时采用氧耗量的方法对不同低温保存后皮肤活力进行检测。结果:新鲜组、-196℃组、-80℃组、-20℃组、4℃组活力依次下降,同时-80℃组、-20℃组、4℃组两种蛋白表达亦有明显下降。结论:低温保存后活力的改变与皮肤力学信号相关蛋白的表达下降关系密切。     

皮肤低温储存后纤维连接蛋白和层黏连蛋白表达的研究

目的：观察细胞外基质中纤维连接蛋白(FN)、层黏连蛋白(LN)在不同温度储存皮肤组织中的分布，以探讨其与皮肤冷冻损伤的关系。方法：用FN、LN抗体对5种储存条件下的皮肤作免疫组化染色，用图像分析仪测定表皮组织中的含量，并用H．E染色观察皮肤的组织结构变化。结果：与新鲜皮片组相比，-196℃H抗冻液中储存皮肤组织结构保存较好，FN、LN含量变化不明显，而4℃、-20℃、-80℃储存皮肤组织结构破坏明显，含量亦明显下降。结论：皮肤低温储存后冷冻损伤与细胞外基质中FN、LN破坏有关。     

脐血造血干细胞不同温度长期冻存效果的实验研究

目的通过观察在不同温度条件下长期冻存的效果,以探讨脐血造血干细胞适宜的保存时间。方法以终浓度为5%二甲基亚砜(DMSO)、3%羟乙基淀粉(HES)和4%人血白蛋白(HSA)作为细胞冷冻保护剂,分别采用-80℃冰箱直接冻存和程控降温-196℃液氮冻存,冻存前及冻存3、6及12个月后,应用全自动血细胞分析仪测定脐血单个核细胞(MNC)计数,台盼蓝拒染法显微镜下计数细胞存活率及流式细胞仪测定CD34 细胞计数。结果在-80℃冰箱冻存3个月后,脐血MNC计数、台盼蓝拒染率及CD34 细胞计数冻存前后比较差异均无显著性。冻存6个月后,脐血台盼蓝拒染率较冻存前差异有显著性(P<0.05)。冻存12个月后,脐血各项指标较冻存前差异均有显著性,其中台盼蓝拒染率差异存在非常显著性(P<0.01)。在-196℃液氮冻存3、6及12个月后,脐血MNC计数、台盼蓝拒染率及CD34 细胞计数冻存前后比较均无显著差异。结论以终浓度为5%二甲基亚砜(DMSO)、3%羟乙基淀粉(HES)和4%人血白蛋白(HSA)作为细胞冷冻保护剂,脐血造血干细胞在-80℃冰箱中可以有效保存3个月,6个月后存在部分细胞损害,此时的脐血不适合作干细胞移植。脐血经程控降温-196℃液氮冻存12个月后,造血干细胞仍保存完好,适宜长期保存。     

-20 ℃不结冰抗冻液保存人体皮的实验研究

目的 对研制的－20℃不结冰的抗冻液－20℃保存人体皮的效果进行探讨。方法 测定皮肤琥珀酸脱氢酶（SDH）、皮肤组织块培养生长年、人－鼠皮肤移植成活率及成活期、表皮细胞与淋巴细胞混合培养、HLA－DR及CD86抗原测定等方法，对该抗冻液保存人体皮的保存效果、抗原性变化进行研究。结果 该抗冻液保存人体皮（－20℃条件下）2月内皮肤质量仍较好。冷冻皮肤免疫原性下降，但HLA－DR表达没有显著变化，而CD86表达显著降低。结论 ①该方法可保存人体皮2月。②冻存皮肤的抗原性下降的原因与CD86抗原分子减少有关。     

海藻糖对低温储存皮肤β1 integrin及活力的影响

目的:比较海藻糖与传统低温保护剂对皮肤组织β1整合素(β1 integrin)低温保存后表达的影响,揭示海藻糖的低温抗冻机制。方法:新鲜成人皮肤组织分为2组,海藻糖-二甲基亚砜(T-D)、二甲基亚砜-丙二醇(D-P)作为低温保护剂保存,-196℃液氮冻存7 d、14 d复温,设新鲜组为对照组,免疫组织化学染色对各组间皮肤进行比较。RT-PCR方法检查β1 integrin基因表达水平。采用皮肤内琥珀酸脱氢酶的定量测定法(SDH)检测两种低温保护剂组合对皮肤活力影响,并通过透射电镜观察不同低温保护剂对皮肤基底膜变化的影响。结果:结果显示T-D能够很好保护皮肤组织,T-D 7 d组β1 integrin的基因表达量(0.769±0.052)与新鲜皮肤组(0.789±0.082)相似。琥珀酸脱氢酶(18.360±3.060)与新鲜组(20.517±1.976)无明显差异。结论:T-D对基底膜有优势保护作用,海藻糖对β1 integrin的保护作用在海藻糖的低温抗冻机制中发挥重要作用。     

两种低温保护剂对皮肤储存后α-辅肌动蛋白表达及活力的影响

目的比较两种不同低温保护剂对皮肤组织α-辅肌动蛋白（α-actinin）低温保存后表达的影响,为寻求皮肤组织低温保护剂的最佳配方提供实验依据。方法新鲜成人皮肤组织分为3组,新鲜对照组和海藻糖-二甲基亚砜（T—D）组、二甲基亚砜-丙二醇（D-P）低温保护剂保存组,-196％液氮冻存7d、14d复温,免疫组织化学染色对各组间皮肤进行比较。同时对各组皮片进行氧耗量测定。结果0．5mol／L海藻糖-二甲基亚砜能够很好保护皮肤组织,α-actinin的表达量与新鲜皮肤组相似。结论海藻糖与二甲基亚砜联合应用对皮肤组织α-actinin的保护作用优于传统组。     

-80℃一步法冻存对成人骨髓间充质干细胞成骨分化能力的影响

目的 观察-80℃一步法冻存法对成人骨髓间充质干细胞成骨分化能力的影响.方法 体外分离、培养正常成人骨髓MSCs,于-80℃分别冻存6个月和9个月,通过检测碱性磷酸酶和I型胶原等指标比较两组冻存细胞与非冻存组MSCs成骨分化能力.结果 三组细胞成骨指标相比较无显著性差异.结论 在一定的冻存时间内,-80℃一步法冻存对成人骨髓间充质干细胞成骨分化能力没有明显影响.     

造血干细胞采集、分离与冻存的研究

目的 :研究外周血造血干细胞的采集、分离、冻存及干细胞活性的检测。方法 :用封闭式动脉采血法采集 10例脐血 ,经Ficoll溶液分离获得干细胞 ,分成 3组 ,分别用 10 %二甲亚矾 (DMSO)、自配的 5 % DMSO+6 %羟乙基淀粉 (HES) +4 %人体白蛋白及 CP- 13种不同的冷冻保存液冻存于 196℃的液氮和 80℃的低温冰箱中 ,对冷冻后的样本进行单个核细胞 (MNC)计数。锥虫蓝拒染试验及流式细胞仪 CD+ 34 细胞计数。结果 :采集的血量平均数为 (72 .2± 17.3) ml,3种不同冷冻保存液对造血干细胞的保存效果在 1、3、6个月差异无显著性 (P>0 .0 5 )。随着冷冻时间的延长 ,特别是 6个月后 ,流式细胞仪对 CD+ 34 细胞检测的相对数逐渐增高。在 6个月内 ,80℃低温冰箱中的冻存与 196℃液氮内的冻存相比 ,对造血干细胞的影响差异无显著性 (P>0 .0 5 )。结论 :自配的冷冻保存液效果良好 ,短期造血干细胞的冻存可以在 80℃低温冰箱内进行 ,冷冻保存造血干细胞 1、3、6个月对细胞的活性影响不大。     

原代大鼠肝细胞分离方法与冻存条件的优化

目的 :优化原代大鼠肝细胞 (PRH)分离方法与冻存条件。方法 :建立低浓度胶原酶原位循环灌流法分离肝细胞 ;分别采用含 2 %与l0 %DMSO的冻存液于 - 70℃或液氮中冻存PRH ,并比较各组冻存后PRH活力。结果 :1.该分离方法肝细胞产量为 1.5 84± 0 .5 2 5× 10 8/10 0g大鼠体重 ,存活率达 95 .2± 2 .9% ,肝细胞纯度 >95 % ,胶原酶用量减少为 4 .5mg/10 0 g大鼠体重。 2 .含 2 %DMSO冻存液于 - 70℃组与液氮组PRH存活率均可达 90 %～ 95 % ;ALB冻存 14d - 70℃组PRH明显高于液氮组与新鲜分离组 ,LDH值于冻存 7d的 - 70℃组与液氮组明显低于新鲜分离组 ,其它各组间均无显著差异。结论 :低浓度胶原酶原位循环灌流法为高效的PRH分离技术 ;含 2 %DMSO冻存液于 - 70℃可作为原代肝细胞冻存的理想条件。     

一种伊氏锥虫低温冷冻保种新方法研究

目的：探索一种简便易行的伊氏锥虫（Trypanosoma evansi）低温冷冻保种新方法.方法：感染伊氏锥虫小鼠的肝和脾组织分别冻存于-20 ℃和-80 ℃低温冰箱7、10、60 d,观察复苏后伊氏锥虫的形态、活力及对小鼠的感染力.结果：伊氏锥虫在-20 ℃和-80 ℃温度下冻存7、10、60 d后,光镜下形态与新鲜组织内虫体一致.随着冻存时间延长虫体活力稍有下降.肝、脾组织-20 ℃或-80 ℃冻存60 d后虫体活力分别为74.47%,74.43%和74.62%,74.96%,差异无统计学意义（P〉0.05）.经-20 ℃和-80 ℃冷藏保存7、10 d后接种,小鼠虫血症出现时间均为5 d,保存60 d者为7 d.两种温度,不同时间保存虫体复苏后对小鼠感染成功率和致死率均为100%.结论：不加保护剂直接冷冻受染小鼠肝或脾组织保存伊氏锥虫,不失为一种经济、便捷的保种方法.