岩藻黄素对胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗的影响

摘要：目的 建立胰岛素抵抗细胞模型,探讨岩藻黄素体外改善胰岛素抵抗及降血糖活性。方法 采用高浓度胰岛素诱导HepG2细胞,筛选最佳诱导条件建立IR-HepG2细胞模型。用不同浓度岩藻黄素处理模型细胞,用葡萄糖氧化酶法（GOD-POD) 检测岩藻黄素对IR-HepG2细胞葡萄糖消耗量的影响。结果 10-6 mol/L胰岛素处理细胞24 h为建立IR-HepG2细胞模型的最佳条件。5~20 μmol/L的岩藻黄素均可促进IR-HepG2细胞对葡萄糖的利用,10、12.5和15 μmol/L组的糖消耗量显著高于模型组(P<0.01)。结论 岩藻黄素可改善体外IR-HepG2细胞的胰岛素抵抗,促进IR-HepG2细胞的葡萄糖消耗,具有改善胰岛素抵抗和降血糖活性。     

氧化苦参碱对HepG2细胞胰岛素抵抗模型的影响

目的 探讨氧化苦参碱对Hep G2细胞胰岛素抵抗(IR-Hep G2)模型的影响。方法 采用以棕榈酸为诱导剂建立IR-Hep G2细胞模型,给予不同剂量的氧化苦参碱溶液(12.5~100μg·m L-1),分别测定葡萄糖消耗量、己糖激酶活力、丙酮酸激酶活力和肝糖原含量。结果 与正常组相比,模型组细胞的葡萄糖消耗量、己糖激酶活力、丙酮酸激酶活力和肝糖原含量均显著降低,表明胰岛素抵抗模型建立成功;与模型组相比,25~100μg·m L-1的氧化苦参碱可显著增加IR-Hep G2细胞的葡萄糖消耗量,50~100μg·m L-1的氧化苦参碱可显著提高IR-Hep G2细胞的己糖激酶活力、丙酮酸活力和肝糖原合成量。结论 氧化苦参碱可通过增加葡萄糖消耗量、己糖激酶活力、丙酮酸活力和肝糖原合成量改善IRHep G2细胞的胰岛素抵抗。     

橙皮苷对胰岛素抵抗HepG2细胞体外糖代谢的影响

目的探讨橙皮苷(hesperidin)对胰岛素抵抗HepG2细胞体外糖代谢的影响。方法采用高浓度胰岛素(INS)持续作用HepG2 12h建立胰岛素抵抗(IR-HepG2)模型,同时培养液中给予不同质量浓度橙皮苷(10,40和60μg.mL-1)或盐酸二甲双胍(30μg.mL-1)干预。药物作用12h后,换含低浓度INS的培养液培养细胞12h,使细胞同步化。然后,测定各组细胞葡萄糖消耗量、细胞内肝糖原含量、己糖激酶(hexokinase,HK)和丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)的活力。结果与正常组相比,模型组细胞葡萄糖消耗量、肝糖原含量及HK和PK酶活力显著下降(P<0.01);与模型组相比,40和60μg.mL-1的橙皮苷可极显著增加IR-HepG2细胞葡萄糖消耗量、肝糖原合成量及HK酶活力(P<0.01),显著增加PK酶活力(P<0.05)。结论橙皮苷可增加IR-HepG2细胞对葡萄糖的利用,增加肝糖原合成量,提高HK、PK活力,从而促进IR-HepG2细胞糖代谢,改善胰岛素抵抗能力。     

软脂酸诱导HepG2细胞胰岛素抵抗及其机理

目的 研究游离脂肪酸（FFA）诱导人肝癌细胞（HepG2）产生胰岛素抵抗及其分子机理。方法 用含0．25mmol／L的软脂酸（软脂酸组）或100nmol／L胰岛素（高胰岛素组）的DMEM培养基培养HepG2细胞,再用100nmol／L胰岛素刺激后,测定其培养液中的葡萄糖浓度、细胞内的糖原含量以及胰岛素受体底物2（IRS-2）的蛋白水甲。加入磷酯酰肌醇3激酶（P13K）的抑制剂wortmannin,再次检测IRS-2的蛋白水平。结果 软脂酸组和高胰岛素组培养液中葡萄糖含量明显高于正常对照组（P＜0．05）,而细胞内糖原含量显著减少（P〈0．01）。软脂酸组胰岛素刺激的IRS2蛋白水平显著低于正常对照组（P〈0．01）。用wortmannin处理后,软脂酸组中的IR导2蛋白水平差异无显著意义（P〉0．05）,而正常细胞组中IRS-2蛋白水平差异有显著意义（P〈0．01）。结论 0．25mmol／L的软脂酸培养24h后,HepG2细胞可产生胰岛素抵抗,且胰岛素信号转导途径存在障碍;P13K是胰岛素信号转导途径中的关键调节点,可能IRS-2和一些P13K相关分子缺陷与游离脂肪酸诱导的肝胰岛素抵抗的形成有关。     

红枣多糖对人肝癌 HepG2细胞的抑制作用

目的：研究红枣多糖对体外培养肝癌细胞增殖的抑制作用并初步探究其可能的作用机理。方法采用M T T法测定红枣多糖对体外培养的人肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用;流式细胞术检测红枣多糖对人肝癌细胞HepG2周期和凋亡的影响;Real time RT-PCR检测红枣多糖对人肝癌细胞HepG2中Bcl-2和caspase3 mRNA表达的影响。结果 MTT检测发现随着药物浓度的增高OD值呈现梯度递减,红枣多糖对 HepG2的IC50＝13 mg／mL ,最高浓度40 mg／mL下所得最大抑制率为68．79％;流式细胞仪检测细胞凋亡结果可见早期凋亡率随药物浓度的增加而变大;流式细胞周期分析结果可见G0-G1期细胞数逐渐增多,S期细胞数有下降趋势,并有剂量依赖性;Real time RT-PCR检测发现Bcl-2凋亡抑制基因mRNA表达随药物浓度增高而降低,而凋亡关键基因caspase-3 mRNA的表达随药物浓度增高而升高。结论红枣多糖对体外培养的肝癌细胞增值具有抑制作用,将肝癌细胞HepG2阻滞于G1期,并通过下调Bc 1-2而上调caspase-3 mRNA表达诱导 HepG2细胞凋亡。     

蜕皮甾酮对HepG2细胞葡萄糖消耗的影响

目的探讨蜕皮甾酮体外降糖的作用特点或机制,即能否通过刺激胰岛素分泌而产生降糖作用。方法检测HepG2细胞24 h培养液中葡萄糖的消耗量;另外测定βTC3细胞胰岛素的释放量。结果蜕皮甾酮在1×10-6~10-4mol.L-1浓度范围内可使HepG2细胞的葡萄糖消耗量增加(44%~77%);蜕皮甾酮的降糖效能随着培养液中葡萄糖浓度的升高而降低;胰岛素对蜕皮甾酮的降糖作用没有明显的影响。蜕皮甾酮没有刺激βTC3细胞胰岛素分泌的作用。结论蜕皮甾酮可通过肝细胞发挥非胰岛素依赖的降糖作用,但不能刺激胰岛素的分泌。     

胰岛素抵抗HepG2细胞模型建立的正交实验研究

目的探索联合应用胰岛素(INS)、棕榈酸(PA)和高糖建立HepG2细胞胰岛素抵抗(IR)模型的最佳实验方法。方法单因素考察INS、PA浓度及孵育时间对HepG2细胞增殖活性的影响;正交实验确定建立HepG2细胞IR模型的最佳条件。蒽酮法检测细胞糖原含量,油红O染色观察细胞形态变化。结果影响HepG2细胞葡萄糖消耗的主次因素顺序为:孵育时间>PA>INS,10 μmol·L-~1 PA联合1.0 μmol·L-~1 INS的高糖培养基孵育HepG2细胞48 h,葡萄糖消耗减少了22.36%。模型组细胞糖原合成较对照组显著减少,细胞脂肪颗粒明显增加。模型细胞IR作用可持续存在48 h,但24 h时作用最强。结论高糖培养基联合小剂量PA和INS,较长时间作用于HepG2细胞建立的IR模型,稳定可靠,重复性好,接近人体IR的病理生理状态,为防治IR药物筛选及发病机制研究奠定基础。     

荔枝核皂苷和荔枝核黄酮对HepG2细胞胰岛素抵抗作用研究

目的 探讨荔枝核皂苷、荔枝核黄酮对胰岛素抵抗HepG2细胞糖代谢的影响。 方法 采用高浓度胰岛素培养基诱导HepG2细胞形成胰岛素抵抗模型,葡萄糖氧化酶法测定对照组、荔枝核皂苷组、荔枝核黄酮组、罗格列酮组细胞培养上清液中的葡萄糖含量,观察荔枝核皂苷、荔枝核黄酮对HepG2细胞胰岛素抵抗的作用。 结果 HepG2细胞在10^-6mol/L的胰岛素中作用24 h,细胞对胰岛素的抵抗作用最为明显。以此条件构建胰岛素抵抗细胞模型,对该模型给予荔枝核皂苷、荔枝核黄酮干预后,细胞培养上清液中葡葡糖含量未能显著降低。 结论 本研究提示荔枝核皂苷、荔枝核黄酮不能有效改善胰岛素抵抗。     

鬼针草总黄酮对HepG2细胞胰岛素抵抗的影响

目的 探究鬼针草总黄酮(TFB)对人肝癌HepG2细胞胰岛素抵抗(IR)的影响.方法 取鬼针草,用80％乙醇回流提取,制得TFB.利用棕榈酸体外诱导HepG2细胞复制IR模型,考察低、中、高质量浓度(20、40、80 mg/L)TFB对细胞葡萄糖消耗量的影响;以二甲双胍为阳性对照,考察低、中、高质量浓度(20、40、8...     

白子菜水提液对胰岛素抵抗HepG2细胞关键酶活性的影响

摘要 目的 探讨白子菜水提液对胰岛素抵抗HepG2细胞关键酶活性的影响。方法采用葡萄糖临床检测试剂盒、肝糖原测定试剂盒检测白子菜水提液对胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗和HepG2细胞的糖原含量的影响;采用葡萄糖 6 磷酸脱氢酶耦联比色法、乳酸脱氢酶耦联比色法及钼酸铵定磷法测定葡萄糖激酶（GK）、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）和葡萄糖 6 磷酸酶（G 6 Pase）的活性。结果白子菜水提液能够促进胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗,使G 6 Pase及PEPCK活性分别降低71.41%,82.14%,使GK活性和糖原含量分别提高28.77%,96.73%。结论白子菜水提液可降低胰岛素抵抗HepG2细胞G 6 Pase和PEPCK的活性,抑制糖异生作用,从而减少细胞内源性葡萄糖的产生。此外,白子菜水提液还提高GK活性,加快糖酵解的进行,增加糖原含量,减轻HepG2细胞的胰岛素抵抗状态。     

枸杞多糖对人肺癌A549细胞影响的研究

目的:探讨枸杞多糖(LBP)对人肺癌A549细胞的影响及作用机制。方法:将LBP作用于肺癌A549细胞,应用M TT法、电镜和钙离子测定等技术测定LBP的抗肿瘤作用及作用机理。结果:LBP呈剂量依赖性(100m g/L~2000m g/L)地抑制人肺癌A549细胞的增殖,诱导其凋亡,并可使细胞内钙离子浓度升高。结论:LBP可诱导A549细胞凋亡,其作用机制可能与细胞内钙离子浓度升高有关。     

芒果苷对胰岛素抵抗HepG2细胞糖脂代谢的影响

目的:分析芒果苷(MGF)对胰岛素抵抗HepG2细胞(IR-HepG2细胞)糖脂代谢的影响,并探讨潜在机制.方法:以人肝癌HepG2细胞为对象,以1 mmol/L棕榈酸+2 mmol/L油酸联合培养建立IR-HepG2细胞模型.以盐酸二甲双胍为阳性对照,分别检测低、中、高浓度MGF(125、250、500μmol/L)...     

丹参对HepG2细胞胰岛素抵抗状态的影响

［摘要］ 目的采用高胰岛素体外诱导培养HepG2细胞，建立胰岛素抵抗（IR）的细胞模型；探讨丹参对胰岛素敏感性的影响。方法细胞培养分4组：Ⅰ组为模型组，含5×10-7 mol&#8226;L-1胰岛素；Ⅱ组为对照组，不含胰岛素；Ⅲ组以12 mg&#8226;mL-1丹参溶液处理IR模型细胞；Ⅳ组以3.2 μg&#8226;mL-1罗格列酮处理IR模型细胞。采用3H D 葡萄糖掺入技术，观察丹参对HepG2细胞葡萄糖掺入率的影响。结果①高胰岛素诱导培养的HepG2葡萄糖掺入率明显低于未用高胰岛素诱导的HepG2细胞（对照细胞）的葡萄糖掺入率（P＜0.01）。②含有丹参的胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖掺入率明显高于不含丹参的胰岛素抵抗HepG2细胞（对照细胞）葡萄糖掺入率（P＜0.05）。结论①将HepG2置于5×10－7 mol&#8226;L-1胰岛素环境中16 h，该细胞对胰岛素的生物学效应产生抵抗。②丹参对细胞水平的胰岛素抵抗病理状态的进展有一定的阻止作用。     

乙酰氧基胡椒酚乙酸酯亚微乳对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究乙酰氧基胡椒酚乙酸酯（ACA）亚微乳对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法：以处于对数生长期的人肝癌HepG2细胞为模型,采用MTT比色法检测5、10、20、40、80、160／amol／LACA亚微乳和ACA原料药作用24、48、72、96h后对细胞增殖的影响,计算半数抑制浓度（IC50）;流式细胞仪检测分析20、40、80pmol／LACA亚微乳和ACA原料药作用48h后细胞的周期分布和凋亡率。结果：与ACA原料药比较,ACA亚微乳对HepG2细胞的增殖抑制作用更明显（P〈0．05）,且呈浓度和时间依赖性;作用于细胞24、48、72、96h后,ACA原料药的IC51分别为160．05、135．56、124．18、109．30gmol／L,ACA亚微乳的IC。。分别为74．89、29．36、16．80、7．32lamol／L。ACA亚微乳可显著影响HepG2细胞周期的进程,使G。／G。期细胞减少、S期细胞增多;同等条件下,20、40、80lamol／LACA亚微乳作用后细胞的凋亡率[（34．60±0．73）％、（40．30±1．75）％、（50．60±2．12）％1均明显高于ACA原料药作用后细胞的凋亡率[（8．10±1．58）％、（11．80±1．62）％、（38．50±O．47）％]（P〈0．05）。结论：与ACA原料药比较,ACA亚微乳对HepG2细胞增殖的抑制作用更强,促凋亡作用更显著。     

异博定逆转肝癌细胞多药耐药的研究

肿瘤细胞对化疗药物产生多药耐药(MDR)是肿瘤化疗失败的主要原因,为了寻找克服肿瘤细胞多药耐药的方法,将异博定加入体外培养诱导的人肝癌细胞多药耐药株SMMC-7721/ADM中,MTT法检测显示异博定增加了化疗药对SMMC-7721/ADM细胞的毒性,并随异博定浓度的增加其逆转活性也增强,(VPL25μg/ml时,SMMC-7721/ADM的活细胞为65％,而VPL20μg/ml时,SMMC-7721/ADM的活细胞率为39％,两者有显著差异)。流式细胞技术显示异博定使耐药细胞表面P-糖蛋白的浓度降低和耐药细胞内柔红霉素的浓度增加(P-gp由70.13下降到22.68,DNR浓度由133上升到163),因此研究表明异博定逆转肿瘤细胞的多药耐药机理是通过使肿瘤细胞表面的P-糖蛋白表达减少,增加肿瘤细胞内的化疗药物浓度而起作用。     

高糖和胰岛素对内皮细胞产生一氧化氮的影响

目的：探讨高胰岛素和（或）高糖对培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）产生一氧化氮（NO）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）和超氧阴离子（O2-）的影响。方法：不同浓度的葡萄糖和胰岛素加入体外培养的人脐静脉内皮细胞，24h后取细胞培养液分别测定NO、AngⅡ和O2-的浓度。结果：5.5mmol／L葡萄糖对内皮细胞NO、O2-产生无明显影响，25mmol／L葡萄糖使NO、O2-产生增加；10、100、1000mu／L的胰岛素使NO产生增加，但对O2-产生无影响。而在25mmol／L葡萄糖存在的情况下加入不同浓度（10、100、1000mu／L）的胰岛素，可使内皮细胞NO产生减少，使O2-产生明显增加。5．5、25mmol／L葡萄糖及各浓度的胰岛素均可使AngⅡ升高。25mmol／L葡萄糖与10、100、1000mu／L胰岛素合用组AngⅡ浓度升高。加入19．5mmol／L甘露醇对N0、AngⅡ和O2-无明显影响，除外高渗对结果的影响。结论：NO、AngⅡ和O2-平衡失调在胰岛素抵抗引起心血管疾病的发生、发展过程中具有重要的病理意义。     

肺癌A549耐药裸鼠移植瘤模型的建立

目的探讨肺癌A549耐药裸鼠移植瘤模型的建立方法,为克服肿瘤多药耐药新药的筛选提供体内研究的模型。为进行肿瘤的体内相关研究和抗癌药物的筛选提供实验基础。方法使用顺铂诱导肺癌A549细胞,以建立其多药耐药细胞株A549/DDP;MTT细胞毒实验检测细胞对顺铂的敏感性;皮下接种法建立裸鼠移植瘤模型;绘制移植瘤生长曲线,观察其增值特性。结果经过8个月的诱导建立了肺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP;MTT细胞毒实验结果显示与A549细胞比较,A549/DDP细胞对顺铂约耐药8倍,并且A549/DDP耐药细胞建立的裸鼠移植瘤仍然保持对顺铂的耐药性;生长曲线结果显示A549/DDP细胞裸鼠移植瘤的增殖速度与A549细胞之间没有显著性差异。结论成功建立了肺癌A549/DDP耐药细胞裸鼠移植瘤模型,可为肺癌耐药的研究提供较理想的动物模型。     

利巴韦林对人肺腺癌细胞A549、人乳腺癌细胞Hela迁移和凋亡的影响研究

目的:研究利巴韦林对人肺腺癌细胞A549、人乳腺癌细胞Hela迁移和凋亡的影响。方法:以A549、Hela细胞为模型细胞,分别分为对照组和利巴韦林低、中、高剂量(20、40、80μmol/ml)组,作用24 h后检测各组细胞的存活率、迁移能力、凋亡情况、酸性膜泡积累情况、自噬标志蛋白LC3(以LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ为指标)的表达情况。结果:与对照组比较,利巴韦林能降低A549、Hela细胞的存活率(中、高剂量组差异均有统计学意义,P<0.05或P<0.01)和迁移能力,增加A549、Hela细胞的凋亡率(低、中、高剂量差异均有统计学意义,P<0.05或P<0.01)、酸性膜泡积累数量与剂量呈反相关,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值(中、高剂量差异均有统计学意义,P<0.01),作用与剂量呈正相关。结论:利巴韦林可能通过诱导细胞自噬降低A549、Hela细胞的迁移并诱导其凋亡。     

氨甲喋呤对映体药物对A549人肺腺癌细胞株增殖抑制作用及诱导凋亡作用

目的探讨氨甲喋呤对映体[（＋）MTX,（-）MTX]对A549细胞的增殖抑制作用及诱导凋亡作用。方法采用培养的A549细胞,应用MTT比色法分析其活性;用光学显微镜和荧光显微镜观察细胞的形态学变化;碘化丙啶（PI）单染流式细胞术检测细胞周期;DNA梯度电泳检测凋亡。结果在0.1～150μmol·L-1范围内,（＋）MTX和（-）MTX作用于A549细胞24,48,72h,均抑制细胞A549增值,但抑制强度为（＋）MTX〉（-）MTX,倒置显微镜和荧光显微镜观察不同浓度（＋）MTX和（-）MTX作用A549细胞不同时间后,出现细胞不同程度的形态学改变;用10μmol·L-1的（＋）MTX和（-）MTX作用A549细胞48h后,PI单染流式细胞术检测A549细胞周期的影响,表明氨甲喋呤对映体干扰A549细胞DNA合成;DNA梯度电泳检测结果发现MTX作用组有凋亡条带出现,其中（＋）MTX最为明显。结论 （＋）MTX和（-）MTX对A549细胞的抗增殖作用具有化学结构的立体选择性,（＋）MTX的抗A549细胞增殖作用明显强于（-）MTX。