刚地弓形虫培养上清对卵巢癌SKOV-3细胞的影响

目的:研究体外培养条件下的弓形虫培养上清对卵巢癌细胞SKOV-3细胞增值的影响及诱导其凋亡的情况.方法:取对数生长期的SKOV-3细胞(数量为5×107/L)分别接种于不同细胞培养板,对照组加入RPMI-1640孵育,试验组加入相同体积不同数量(3×1010/L,6×1010/L,12×1010/L)弓形虫速殖子培养上清,四甲基氮噻唑蓝(MTT)法检测吸光度(A490nm值)并计算SKOV-3细胞增值抑制率;Annexin-V-FITC/PI染色细胞后上流式细胞仪检测各个时间点细胞凋亡率;并以荧光显微镜观察SKOV-3细胞形态改变情况;以琼脂糖凝胶电泳观察SKOV-3细胞凋亡DNA条带.结果:MTT法检测结果显示SKOV-3细胞增殖抑制率随着弓形虫速殖子培养上清数量和作用时间增加均明显增大,12×1010/L数量组72h抑制率最高可达(33.52±2.63)%,弓形虫速殖子培养试验组抑制率与对照组之间比较差异均有统计学意义(P<0.05).弓形虫培养上清流式细胞仪检测显示SKOV-3细胞凋亡率随着时间增加有升高趋势,48h达到凋亡最高值(18.23%),48h后凋亡率开始下降,死亡率增加.荧光显微镜观察到试验...     

神经元损伤度对小胶质细胞表型的影响

目的：探讨不同的神经元损伤度对小胶质细胞表型的影响。方法将原代培养的神经元进行缺氧处理,不同的时长（0.5、1、2、4 h）后,复氧处理24 h ,收集神经元条件培养液（neuron‐conditioned media ,NCM ）,然后将NCM刺激原代培养的小胶质细胞24 h（NCM∶小胶质细胞培养液＝1∶1,V/V ）。采用Western blot法检测小胶质细胞内的M2表型标记物精氨酸酶‐1（arginase‐1）和激活标记物离子钙结合衔接分子‐1（Iba‐1）的表达变化规律,采用免疫荧光法检测ar‐ginase‐1的表达变化规律。同时,采用 ELISA 法检测小胶质细胞培养液上清中的营养因子,如脑源性神经营养因子（BDNF）、胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）和炎性因子,如肿瘤坏死因子‐α（TNF‐α）、白细胞介素‐1β（IL‐1β）、白细胞介素‐6（IL‐6）的分泌变化规律。最后,将不同损伤度的NCM 诱导小胶质细胞形成不同表型,将小胶质细胞和缺氧处理2 h后的神经元共培养24 h ,MTT法检测神经元的活力。结果轻微损伤（缺氧0.5、1 h）的NCM 明显下调M2型标记物arginase‐1的表达水平,中度（缺氧2 h）和重度（缺氧4 h）损伤的 NCM 能够上调arginase‐1的表达,各种损伤度的NCM都能上调Iba‐1的表达水平,提示其在一定程度上激活小胶质细胞。同时,轻微损伤的NCM明显上调小胶质细胞TNF‐α、IL‐1β和IL‐6的分泌,而中度和重度损伤的NCM 对这些促炎因子的释放没有影响,各种损伤度的NCM 都能明显上调营养因子的分泌。M T T法检测表明,轻微和重度损伤处理的NCM刺激的小胶质细胞进一步加重缺氧处理的神经元损伤,而中度损伤的NCM对缺氧处理后的神经元具有保护作用。结论神经元损伤度是决定小胶质细胞表型的重要因素,进而使小胶质细胞进一步发挥神经毒性或保护作用。     

刚地弓形虫RH株对小鼠胎盘滋养细胞凋亡的影响

目的 通过研究刚地弓形虫强毒株RH株对体外培养的孕期小鼠胎盘滋养层细胞凋亡的影响,初步探讨不同毒力虫株引起病理妊娠的机制.方法 将小鼠胎盘滋养层细胞分别接种于不同细胞培养瓶,对照组加入DMEM培养基孵育,实验组加入相同体积不同数量(2×106/ml、4×106/ml、8×106/ml)弓形虫速殖子培养2、4、8 h,Annexin-V-FITC/PI染色细胞后上流式细胞仪检测各个时间点细胞凋亡率变化;荧光显微镜观察细胞形态改变情况;Western blot分析凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达或活性.结果 流式细胞仪检测弓形虫感染后的滋养层细胞凋亡率较对照组有下降趋势(P<0 05),呈量效依赖性,弓形虫数量8×106/ml实验组8 h凋亡率最低,为(15.81±0.19)%;荧光显微镜观察到8 h不同数量实验组滋养细胞凋亡形态改变情况,各组均有典型的早期凋亡细胞:细胞膜着绿色,细胞核拒染.随着弓形虫感染数量增加,凋亡细胞数目有所减少.Western blot 检测刚地弓形虫RH株作用于滋养层细胞8 h后实验组的Bax、Bcl-2蛋白表达较对照组分别有明显的降低与升高(P<0.05).结论 刚地弓形虫RH株可抵抗体外培养的孕期小鼠滋养细胞正常凋亡,其机制可能与滋养细胞Bax表达下调和Bcl-2表达上调有关.     

刚地弓形虫致生殖毒性的研究进展

刚地弓形虫寄生于人或动物的有核细胞内,除引起宿主重要脏器的损伤,也可引起生殖内分泌和性周期紊乱,性行为和生育力低下,甚至不育不孕等不良后果,孕妇感染还可引起早产、流产、死胎、畸胎等严重毒性作用。本文就近年来弓形虫致生殖毒性的研究作一简要综述。     

刚地弓形虫分子疫苗研究新进展

刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）是一种专性细胞内寄生的重要机会致病性原虫（Opportunistic protozoan），因其生活史和致病机理复杂，直至目前尚未找到理想的治疗药物^[1]。近年来，弓形虫疫苗和免疫保护性研究已逐渐引起了重视，并认为疫苗接种可能是预防弓形虫病的最佳策略^[2]。随着生命科学高新技术的应用和发展，     

刚地弓形虫ME49株对体外培养的小鼠胎盘滋养细胞凋亡的影响

目的研究刚地弓形虫ME49株对体外培养的孕期小鼠胎盘滋养层细胞凋亡的影响。方法制备小鼠胎盘滋养层细胞并分别接种于不同细胞培养板,对照组加入DMEM高糖培养液孵育,实验组加入相同体积不同密度(2×106/ml、4×106/ml、8×106/ml)弓形虫速殖子培养8h后,AnnexinⅤ-FITC/PI染色细胞后上流式细胞仪检测各个时间点细胞凋亡率变化,以蛋白质印迹法分析凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达。结果流式细胞仪检测弓形虫感染后的滋养层细胞凋亡率较对照组有升高趋势(P0.05),呈量效依赖性,弓形虫密度8×106/ml组8h凋亡率最高,为28.37%;荧光显微镜观察,随弓形虫感染密度增加,滋养层细胞凋亡数目增多。蛋白质印迹法检测刚地弓形虫ME49株作用于滋养层细胞8h后实验组的Bax、Bcl-2蛋白表达(与β-actin比值)各为1.24±0.05、1.37±0.03、1.78±0.04与1.15±0.03、1.09±0.05、0.97±0.01,较对照组的比值(1.17±0.06和1.23±0.02)有明显的改变(P0.05)。结论刚地弓形虫ME49株可促进体外培养的孕期小鼠滋养细胞正常凋亡,其机制可能与滋养细胞Bax表达上调和Bcl-2表达下调有关。     

刚地弓形虫表面抗原的功能和应用

刚地弓形虫的表面抗原是弓形虫在感染宿主的过程中有着重要作用的一类蛋白,它们在弓形虫吸附和侵入宿主、免疫调节、虫体的存活等方面发挥着重要的作用。因此,对这些蛋白进行研究,将有助于我们更好的了解刚地弓形虫的致病机制、探寻预防和治疗弓形虫病的有效方法。现就目前为止发现的刚地弓形虫表面抗原及其功能作一综述。     

小胶质细胞变性可能导致阿尔茨海默病

新的研究表明,阿尔茨海默病（AD）可能是由小胶质细胞变性引起的,小胶质细胞在中枢神经系统中有保护神经元的作用。     

雷公藤内酯对海人酸诱导大鼠脑小胶质细胞MHC分子表达的影响

目的:评价雷公藤内酯对海人酸致痫大鼠神经元的免疫保护作用。方法:结晶紫染色观察神经元形态,免疫组化技术检测小胶质细胞MHC-Ⅰ、Ⅱ类分子的表达。结果:30μg/kg雷公藤内酯可使大鼠的癫痫抽搐状态明显较海人酸组缓和,出现时间较海人酸组晚(P<0.05),且可使海人酸诱导大鼠活化小胶质细胞的数量减少,凋亡神经元数量减少。30μg/kg雷公藤内酯可下调海人酸诱导大鼠脑小胶质细胞表达MHC-Ⅰ、Ⅱ类分子(P<0.01)。结论:雷公藤内酯通过抑制小胶质细胞表达MHC-Ⅰ、Ⅱ类分子和免疫应答对海人酸诱导大鼠神经元凋亡具有免疫保护作用。     

弓形虫速殖子感染对HeLa细胞凋亡的影响

目的: 探讨不同数量弓形虫速殖子感染对HeLa细胞凋亡的影响。方法: 24孔板培养HeLa细胞16 h,各孔接种不同数量弓形虫速殖子继续培养4 h,在培养液中加入终质量浓度为0.5 μg/mL放线菌素D诱导凋亡,于加放线菌素D后8、12、24、36 h收集细胞,采用Hoechst 33258染色法和Annexin V FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡率。结果： 当虫体量/细胞量（MOI）≤1时,弓形虫感染表现为抑制放线菌素D诱导的HeLa细胞凋亡;随着虫体数量增加（MOI＞1）和感染时间延长（≥24 h）,虫体感染则表现为促进HeLa细胞凋亡。结论： 弓形虫感染可影响体外培养的HeLa细胞的凋亡,影响程度与感染虫体数量相关。     

弓形虫可溶性速殖子抗原和霍乱毒素滴鼻免疫小鼠诱导的鼻通道细胞免疫应答

目的研究弓形虫可溶性速殖子抗原(solubletachyzoiteantigen,STAg)和霍乱毒素(choleratoxin,CT)佐剂滴鼻免疫BALB/c小鼠后鼻通道(nasalcavity,NC)的免疫效应及持续时间。方法BALB/c小鼠96只随机分为实验组和对照组,实验组以STAg(20!g/只)为抗原,CT(1!g/只)为佐剂滴鼻免疫,对照组以PBS滴鼻。滴鼻2次(间隔2周)后分别于第1、2、3、4、6、8、10、12周处死6只小鼠。分离NC的淋巴细胞,计数并涂片,用免疫细胞化学法检测其CD4 T、CD8 T细胞亚群水平。结果小鼠免疫后,NC淋巴细胞第1周至第10周持续显著增生(P<0.05);NC中CD4 T细胞水平第1周至第8周持续显著增高(P<0.05),CD8 T细胞在第1、2、3周(P<0.05)显著增高,持续至免疫后第3周,CD4 /CD8 比值无明显变化。结论STAg和CT佐剂滴鼻免疫BALB/c小鼠可有效诱导NC的免疫应答,并可持续较长时间。     

STAg和霍乱毒素不同程序滴鼻免疫小鼠诱导抗弓形虫作用

目的观察弓形虫可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen,STAg)和霍乱毒素(cholera toxin,CT)佐剂不同程序滴鼻免疫小鼠诱导的抗弓形虫感染能力,确定STAg和CT滴鼻免疫的最佳程序。方法BALB/c小鼠随机分为3组:1次、2次和3次免疫组,用20 μg STAg 1 μg CT/只分别滴鼻免疫1次,2次或3次,前2次间隔2周,末次间隔1周。末次免疫后第14天,用4×104个速殖子/只灌胃攻击所有小鼠,观察小鼠健康及死亡情况,攻击后第30天处死,ELISA法检测血清IgG和粪便IgA,计数肝、脑组织内弓形虫速殖子,分离并计数派伊尔结(Peyer′spatches,PP)和脾淋巴细胞数。结果2次和3次免疫组小鼠存活率明显高于1次免疫组(P<0.05),肝、脑组织内虫荷显著低于1次免疫组(P<0.001),血清IgG和粪便IgA高于1次免疫组,PP和脾淋巴细胞数无显著性变化。结论STAg和CT佐剂滴鼻免疫2次或3次能有效诱导小鼠抗弓形虫感染。     

具有免疫反应性的弓形虫多表位抗原在大肠杆菌中的可溶性表达和鉴定

目的 获得弓形虫多表位基因在原核系统中可溶性表达产物,为弓形虫病重组抗原试剂盒的制备及疫苗的研究奠定基础.方法 以PCR法扩增弓形虫多表位基因,使其两端带有与载体pET2a相匹配的酶切位点,插入载体pET2a,酶切并测序鉴定后,转入大肠杆菌BL21(DE),以IPTG进行诱导,SDS-PAGE分析和鉴定该基因的表达水平、表达产物的可溶性及其相对分子质量,Western-blot分析表达产物的免疫反应性.结果 该基因在原核表达系统中经诱导,得到了M_r1000的可溶性融合表达产物.经Ni-NTA纯化,纯度可达90%以上.免疫印迹实验表明该产物能够被弓形虫B6感染的小鼠血清和弓形虫RH感染的兔血清特异识别.结论 弓形虫多表位基因在原核中的可溶性表达产物在弓形虫病诊断及疫苗研究中有潜在的应用价值.     

先天弓形虫感染儿童的发育及干预效果追踪

目的 了解先天弓形虫感染对儿童身体、智力发育的影响。方法选1990-1996年保定市级医院脐血弓形虫检测阳性的167例婴儿为出生阳性组，同期脐血弓形虫检测明性的160例婴儿为出生阴性组。用比内、韦氏智力量表测定其智商值（Intelligence Quotient，IQ值）采用全国9市城区和郊区健康儿童体格发育测量数字为标准，均数加减2个标准差为正常，分析弓形虫感染与儿童智力、身体发育的关系，观察干预措施效果。站果先天弓形虫感染儿童智力发育明显偏低，视力发育差，对身高、体重无明显影响，给予干预，能提高智力。站论先天弓形虫感染婴儿出生后，应给予干预措施，减轻损害，促进其健康发育。     

家用微波炉对弓形虫PRU株包囊的杀伤作用

目的：探寻微波炉杀灭弓形虫包囊的最佳条件。方法：将含有等量弓形虫包囊的小鼠脑组织匀浆液利用微波炉的不同功率、不同时间处理后灌饲小鼠,于感染后第42天检测小鼠脑组织包囊数、血清IgG抗体效价和SAG1基因,以评价经微波处理后的包囊是否仍具有感染性。结果：镜检出未处理组与微波炉低温处理1 min组的包囊数分别为（833.33±274.03）个、（655.56±363.79）个,其余各组均未查出包囊。ELISA法检查结果显示未处理组与微波炉低温处理1 min组呈阳性,其余各组均为阴性。PCR技术检测结果证实未处理组与低温处理1 min组均扩增出弓形虫SAG1基因片段,但中温与高温各组亦有部分样品扩增出目的基因片段。结论：低温处理1 min不能有效杀灭弓形虫包囊,其他条件能否有效杀灭弓形虫包囊还有待进一步验证。     

调控宿主细胞自噬对弓形虫在宿主细胞内增殖的影响

目的：研究细胞自噬在弓形虫增殖复制中的作用。方法分别用自噬抑制剂Bafilomycin A1及自噬诱导剂氯化锂作用于人胚胎成纤维细胞( HEF),然后将弓形虫( RH株)速殖子悬液分别以虫/细胞2∶1、4∶1、8∶1、16∶1感染HEF细胞,作用1、2、4、8、24、48、96 h。采用吖啶橙( AO)荧光染色和丹酰尸胺( MDC)荧光染色检测HEF细胞自噬情况,采用Giemsa染色检测不同时间点的弓形虫感染复制动力学。结果 AO 和 MDC 荧光染色结果表明自噬抑制剂Bafilomycin A1及自噬诱导剂氯化锂可分别抑制和促进HEF细胞自噬,Giemsa染色结果显示使用自噬诱导剂氯化锂可以促进弓形虫在 HEF细胞内的增殖,使用自噬抑制剂 Ba-filomycin A1可以抑制弓形虫在HEF细胞内的增殖。结论调控宿主细胞自噬可调控弓形虫增殖复制。     

尖吻蝮蛇蛇毒对弓形虫速殖子侵入Hela细胞的影响

目的：观察刚地弓形虫速殖子在来源于安徽省南部地区的尖吻蝮蛇蛇毒的作用下侵入Hela细胞的数量，探讨尖吻蝮蛇蛇毒对弓形虫速殖子侵入Hela细胞的作用。方法：以不同浓度尖吻蝮蛇毒加入分孔培养的细胞中，于不同时间观察感染弓形虫速殖子细胞的数量。结果：尖吻蝮蛇蛇毒对弓形虫速殖子侵入细胞有明显的促进作用，弓形虫速殖子在蛇毒的作用下在同一时间内对宿主细胞侵入的数量均高于对照组(P＜0．05——P＜0．01)，但不同剂量的尖吻蝮蛇毒对弓形虫速殖子侵入细胞的作用差异无显著性(P＞0．05)。5．0μg/ml和0．25μg/ml的剂量分别比对照组平均提高了125．49％和81．37％。结论：尖吻蝮蛇毒可以明显增加弓形虫速殖子对宿主细胞的感染率。     

阿奇霉素对弓形虫病患儿外周血细胞免疫功能的影响

目的探讨阿奇霉素治疗对弓形虫病患儿外周血淋巴细胞亚群和Th1、Th2细胞免疫功能的影响。方法选取2005年1月-2007年12月在海南省人民医院儿科健康保健门诊和住院患儿，分为三组，阿奇霉素治疗弓形虫病组患儿20例，未经治疗处理的弓形虫病组患儿19例，健康对照组儿童15例，其中阿奇霉素治疗组在4个疗程结束后，每组患儿各抽取外周静脉血。用流式细胞仪检测CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋、Th1、Th2、NK、B细胞在外周血中的百分率以及CD4^＋／CD8^＋、Th1／Th2细胞的比值。结果未经治疗处理组CD3^＋、Th1、NK细胞百分率、CD4^＋／CD8^＋比值较阿奇霉素治疗组和健康对照组高，而CD8^＋细胞百分率较低，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论弓形虫感染的患儿T淋巴细胞失衡，阿奇霉素可能通过影响免疫应答反应发挥保护作用，能有效治疗弓形虫感染给机体带来的损害。     

弓形虫感染对大鼠、小鼠血清一氧化氮水平的影响

目的测定正常大鼠、地塞米松处理大鼠以及小鼠感染弓形虫前后的血清一氧化氮水平,探讨弓形虫感染对其血清一氧化氮水平的影响。方法将36只雌性SD大鼠分为6组,每组6只。Ⅰ组:正常对照组;Ⅱ组:弓形虫感染组;Ⅲ组:地塞米松2mg/kg体重,隔天皮下注射2周后停止注射;Ⅳ组:地塞米松2mg/kg体重,隔天皮下注射2周后感染弓形虫,并停止注射地塞米松;Ⅴ组:实验期间,地塞米松2mg/kg体重,隔天皮下注射;Ⅵ组:地塞米松2mg/kg体重,隔天皮下注射2周后感染弓形虫,继续注射地塞米松。每周采集实验大鼠血液并分离血清。第6周时处死大鼠,收集血清,将弓形虫感染鼠的脑组织匀浆转种小鼠,并以脑组织为模板PCR扩增弓形虫SAG1基因。雌性昆明小鼠36只,于感染弓形虫后0,1,2,3,4,5d时每天处死6只,收集血清。硝酸根还原酶法测定大鼠、小鼠血清一氧化氮浓度。结果正常组大鼠6周平均一氧化氮浓度为(29.30±2.77)μmol/L;地塞米松注射2周后,Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组、Ⅵ组大鼠血清一氧化氮水平分别为(13.24±2.30)μmol/L、(13.33±2.41)μmol/L、(14.98±1.71)μmol/L、(14.55±2.99)μmol/L;Ⅱ组大鼠感染弓形虫后,血清一氧化氮第3周时升至(76.79±6.93)μmol/L,而后持续下降,至第6周时为(52.34±4.50)μmol/L;Ⅲ组大鼠停止注射地塞米松后血清一氧化氮水平逐渐上升,至第4周时为(26.32±2.93)μmol/L,其后维持在正常水平;Ⅳ组大鼠感染弓形虫后第3周时其一氧化氮水平升至(36.19±7.42)μmol/L,然后继续上升,至第5周时达最高至(63.60±16.32)μmol/L,然后下降;Ⅴ组大鼠的一氧化氮浓度则维持在从(13.96±2.50)μmol/L到(14.98±1.71)μmol/L之间的较低水平;Ⅵ组大鼠感染弓形虫后血清一氧化氮水平缓慢上升,至第5周时升至最高,为(58.89±21.70)μmol/L,然后下降。采用PCR的方法从Ⅳ组中的1只大鼠的脑组织扩增出SAG1片段,Ⅵ组有2只大鼠的脑组织扩增出SAG1片段,并且其脑组织匀浆转种小鼠后回复分离出弓形虫速殖子;PCR阳性的3只大鼠血清一氧化氮浓度在实验期间均维持在较低水平。小鼠感染弓形虫前一氧化氮水平为(27.47±4.41)μmol/L,感染后1d其血清一氧化氮水平有所降低,为(19.29±3.07)μmol/L,然后快速升高,至感染后5d达最高峰(114.51±8.19)μmol/L,此时小鼠处于频死状态。结论地塞米松可降低大鼠血清一氧化氮水平,弓形虫感染可升高大鼠血清一氧化氮水平;注射地塞米松或未注射地塞米松的大鼠感染弓形虫后其血清一氧化氮水平都有升高,但升高的幅度与速度有所不同,未注射地塞米松的大鼠升高的速度更快、幅度更高。小鼠感染弓形虫后血清一氧化氮水平先降低而后升高,但不能防止小鼠因急性感染而死亡。