抑癌基因p16与乙肝病毒相关性肝癌研究进展

p16蛋白是细胞周期素依赖性蛋白激酶CDK4特异性的抑制子，通过抑制CDK4的活性，使细胞分裂停滞于G1-S期而阻止细胞的异常增殖，因而p16基因为重要的抑癌基因。乙型肝炎病毒(HBV)感染后，其DNA可整合入宿主肝细胞基因组中，并引起抑癌基因的改变，HBV与p16的改变有相关性。p16基因的改变在HBV相关性肝癌的发病机制中占重要地位。     

p16抑癌基因与肿瘤

p16基因位于人类染色体9p21,其编码蛋白特异性抑制CDK4和CDK6的活性,参与正常细胞周期调控。在肿瘤中,p16基因存在广泛而频繁的缺失和突变,被认为是新的抑癌基因。就p16基因的发现、结构和生物学特性,基因改变与肿瘤的关系,以及在p16基因研究的意义和前景做简要概括。     

P16基因与肿瘤

众所周知，癌基因的结构或表达异常以及抑癌基因缺失或失活可以引起细胞癌变而致肿瘤的发生。因而，癌基因和抑癌基因的研究是近年来研究的热门课题。有关抑癌基因，继Rb、P53之后，新近又发现了一种肿瘤抑制基因P16，此基因的缺失或失活与多种肿瘤的发生有密切关系，所以又称多种肿瘤抑制基因（Multipletu-morsuppressor1，MTS1），其编码蛋白质P16蛋白可与细胞周期蛋白依赖性激酶4（CDK4）结合，从而抑制CyclinD／CDK4复合物的活性，所以也叫作CDK4抑制因子（CDK4I或P16INK4）[1，2]。通过对P16基因的研究将有助于进一步了解…     

慢性乙型肝炎病毒感染与p16INK4A基因启动子甲基化关系的研究

目的探讨慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染对p16INK4A基因启动子甲基化的影响及其在HBV相关肝细胞癌(HCC)形成中的作用。方法选取23例HBV相关HCC癌及癌旁组织、25例慢性乙型肝炎肝穿刺组织,采用甲基化特异性PCR(MSP)检测p16INK4A基因启动子的甲基化状态;免疫组化EnVision二步法测定肝组织内HBsAg、HBcAg、HBeAg和HBx蛋白的表达;荧光实时定量PCR检测肝组织HBV DNA含量;PCR扩增和直接测序检测HBV x基因变异。结果癌组织p16INK4A基因启动子甲基化阳性率(47.83%)明显高于癌旁组织(17.39%),慢性乙型肝炎患者p16INK4A基因启动子甲基化阳性率(36.00%)与癌组织、癌旁组织差异无统计学意义。在癌旁组织和慢性乙型肝炎, p16INK4A基因启动子甲基化者HBx蛋白表达中位数分别为3.000和0.250,明显高于非甲基化者(0.500和0.000),但在癌组织中,HBx蛋白的表达与p16INK4A基因启动子甲基化状态无关。HBsAg、HBcAg、组织HBV DNA含量和x基因突变均与p16INK4A基因启动子甲基化状态无关。结论在癌前病变中,p16INK4A基因启动子甲基化与HBx蛋白高表达有关,HBx蛋白可能通过诱导p16INK4A基因启动子甲基化而使该抑癌基因失活,在HBV相关HCC形成中起重要作用。     

抑癌基因p16INK4a与p53抑制白血病细胞株生长作用的比较

 目的 比较野生型p16INK4a、p53抑癌基因的表达对白血病细胞株K562和HL60的生长抑制。方法 采用脂质体介导野生型p16INK4a、p53抑癌基因转染K562、HL60细胞并进行G418筛选，免疫印渍检测p16INK4a、p53基因的表达，通过细胞生长曲线检测细胞活力，流式细胞仪进行细胞DNA周期分析及细胞凋亡分析，采用联苯胺氧化试验检测K562细胞的分化。结果 转染后p53、p16INK4a在K562及HL60细胞中表达；与对照细胞相比，实验组细胞生长受到明显的抑制，G1期细胞数增加，S期细胞减少。与p16INK4a相比，抑癌基因p53使细胞表达Annexin V增加，显示出更强的致凋亡现象，尤其在HL60细胞株。结论 抑癌基因p16INK4a、p53能有效抑制白血病细胞株的生长，可能更适合复发、难治性白血病的基因治疗。     

抑癌基因p16INK4a与p53抑制白血病细胞株生长作用的比较

目的比较野生型p16INK4a、p53抑癌基因的表达对白血病细胞株K562和HL60的生长抑制。方法采用脂质体介导野生型p16INK4a、p53抑癌基因转染K562、HL60细胞并进行G418筛选,免疫印渍检测p16INK4a、p53基因的表达,通过细胞生长曲线检测细胞活力,流式细胞仪进行细胞DNA周期分析及细胞凋亡分析,采用联苯胺氧化试验检测K562细胞的分化。结果转染后p53、p16INK4a在K562及HL60细胞中表达;与对照细胞相比,实验组细胞生长受到明显的抑制,G1期细胞数增加,S期细胞减少。与p16INK4a相比,抑癌基因p53使细胞表达Annexin V增加,显示出更强的致凋亡现象,尤其在HL60细胞株。结论抑癌基因p16INK4a、p53能有效抑制白血病细胞株的生长,可能更适合复发、难治性白血病的基因治疗。     

CDKN2A研究进展

对抑癌基因CDKN2A(p16INK4a和p14AFP)在肿瘤中的研究进行了总结，结合肝癌的研究进展，探讨CDKN2A在肝癌中的作用机制：CDKN2A的缺失、突变和甲基化导致基因表达产物p16INK4a不能与CDK4和CDK6结合，使pRb磷酸化和转录调节因子E2F释放，引起细胞周期的延长，有助于肝癌的发生；p14AFP不能与mdm2结合，使得mdm2降解p53蛋白，诱发肝癌。这一机制普遍存在于各种肿瘤中。     

乙肝病毒HBX抗原与p53相互作用及其对肝细胞癌发生的影响

HBX抗原是乙肝病毒最小编码框x基因区编码的蛋白，研究证明它与HBV相关性肝癌的发生有关；抑癌基因p53的变异或失活也与肝细胞癌(HCC)的发生密切相关。研究HBX抗原与p53的相互作用关系，有助于进一步揭示HBV相关性肝癌的发病机制。     

乙肝病毒HBX抗原与p53相互作用及其对肝细胞癌发生的影响

HBC抗原是乙肝病毒最小编码杠X基因区编码的蛋白，研究证明它与HBV相关性肝癌的发生有关；抑癌基因p53的变异或失活也与肝细胞癌（HCC）的发生密切相关。研究HBX抗原与p53的相互作用关系，有助于进一步揭示HBV相关性肝癌的发病机制。     

肿瘤抑制基因p16与卵巢癌

p16基因为一肿瘤抑制基因.1993年Serrano等首先克隆了p16的载体DNA(cDNA),并对其表达产物p16~(INK4)蛋白进行了分析.p16的cDNA分析表明,该基因编码一个含148个氨基酸残基分子量的15.85KD的蛋白质,称p16~(INK4).功能上p16~(INK4)能与CDK_4特异性结合,从而抑制Cyclin/CDK4激酶的活性.Kamb等研究了各型肿瘤与人类染色体9p21,从9p21上克隆出了基因MTS_1,其含1个307bp的序列,与Serrano测定的p16编码序列一致,MTS_1的全部序列是在p16cDNA上增加两个内含子,从而分隔成3个外显子:①外显子1含126bp;②外显子2含307bp;③外显子3含11bp.可见,抑癌基因p16定位于染色体9p21,同时还发现此区带存在1个与MTS_1第2个外显子高度同源的DNA序列,命名为MTS_2推测可能存在一个包括多个抑癌基因的p16家族.     

p16在鼻咽癌中的研究进展

鼻咽癌是发生于鼻咽部上皮组织的恶性肿瘤。鼻咽癌虽在世界大多数国家少见,但在我国却属常见的恶性肿瘤之一。许多研究结果显示,鼻咽癌的发生、发展与多种原癌基因的活化或多种抑癌基因的失活有关。抑癌基因p16为细胞周期蛋白依赖性激酶（cyelin dependent kinase,CDK）的主要抑制因子,是迄今为止人类所发现的第一个最直接抑制肿瘤发生的细胞固有成分,     

p16影响乙肝病毒相关性肝细胞肝癌的发生

目的　探讨乙肝病毒 (HBV)基因整合和p16基因表达改变及其与肝细胞肝癌发生发展的关系。方法　 35例肝癌及癌旁肝组织为标本 ,采用聚合酶链式反应 (PCR)及Southernblot检测HBVX基因整合 ,以单链构象多态性分析确定p16基因突变 ,以RT PCR检测p16mRNA ,以Westernblot检测p16蛋白。结果　肝癌中X基因整合与p16mRNA及蛋白表达相关 (P <0 .0 5 ) ,肝癌及癌旁肝组织中p16蛋白表达缺失率分别为 6 2 .9%和 4 0 .0 % ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;癌组织中p16蛋白表达缺失与肝癌分化程度、癌细胞浸润有相关性 (P <0 .0 5 )。结论　X基因整合与p16蛋白缺陷有关 ,p16改变在肝细胞癌变各阶段发挥重要作用 ,并与肝癌的演进和侵袭有关。     

CDKN2A研究进展

对抑癌基因CDKN2A(p16INK4a和p14AFP)在肿瘤中的研究进行了总结,结合肝癌的研究进展,探讨CDKN2A在肝癌中的作用机制CDKN2A的缺失、突变和甲基化导致基因表达产物p16INK4a不能与CDK4和CDK6结合,使pRb磷酸化和转录调节因子E2F释放,引起细胞周期的延长,有助于肝癌的发生;p14AFP不能与mdm2结合,使得mdm2降解p53蛋白,诱发肝癌.这一机制普遍存在于各种肿瘤中.     

p16基因在恶性肿瘤研究中的应用

人体细胞的正常生长有赖于细胞周期中各种调节因子的平衡调控，任何一种调控因子发生紊乱将导致细胞异常增殖，从而诱发肿瘤。p16基因是1994年Kamb和Nobori同时发现的新型抑癌基因，位于人类第9号染色体短臂上（9p21），编码由148个氨基酸组成，相对分子质量为16000。p16蛋白与周期素依赖性激酶4（CDK4）结合，拮抗CDK4的作用，阻止细胞由G1期进入S期（DNA合成期），如p16缺失或突变，可导致p16蛋白失活，使CDK4作用过度，     

C—erbB—2、p16、nm23—H1蛋白在鼻咽癌中表达的相关性及与预后的关系

目的探讨癌基因C-erbB-2、抑癌基因p16和转移抑制基因在鼻咽癌中表达的相关性及与鼻咽癌发生、发展和预后的关系.方法采用SPTM(过氧化酶标记的链霉卵白素)免疫组化法,对125例鼻咽癌组织中三种基因蛋白进行检测.结果①C-erbB-2,p16,nm23-H     

食管鳞癌抑癌基因甲基化表达的相关性分析

[目的]研究食管鳞癌肿瘤组织及外周血多基因甲基化状态,以及不同基因甲基化的相关性。[方法]应用real-time MSP技术对76例食管鳞癌患者肿瘤组织、配对的癌旁正常组织、术前外周血中APC、RARβ2、CDH1、p16INK4α、RASSF1A抑癌基因的甲基化状态进行检测。随机选取60名年龄配对的健康志愿者外周血浆DNA作对照。[结果]肿瘤组织APC、RARβ2、CDH1、p16INK4α、RASSF1A的甲基化率显著高于对应癌旁正常组织（P=0.000）。术前外周血中这5种基因的甲基化率显著高于健康对照组（P=0.000）。RARβ2、CDH1、p16INK4α、RASSF1A甲基化有显著性相关,APC与这4个基因甲基化无相关性。[结论]食管癌患者癌组织及外周血抑癌基因APC、RARβ2、CDH1、p16INK4α、RASSF1A高甲基化,RARβ2、CDH1、p16INK4α、RASSF1A甲基化有显著相关性。     

cyclin D1、Rb和p16基因在食管早期癌组织中的表达及其相关性研究

目的探讨cyclinD1、Rb和p16基因在食管癌发生中的作用及其相关性。方法应用免疫组织化学S-P法检测cyclinD1、Rb和p16基因在19例食管早期癌、20例异型增生以及10例正常食管黏膜标本中的表达。结果cyclinD1在早期癌中的表达高于正常食管黏膜（P〈0．05）,Rb与p16在早期癌中的表达低于正常食管黏膜（P〈0．05）。结论cyclinD1、Rb、p16与食管癌的发生有关,他们的变化是食管癌发生中的早期事件,CDK4／cyclinD1／p16／Rb通路在食管癌的早期发生过程中可能起重要作用。     

p27-CyclinD1/CDK4-Rb蛋白在不同类型甲状腺肿瘤组织中的表达及临床意义

目的：探讨细胞周期调控基因蛋白p27、CyclinD1、CDK4、Rb在不同类型甲状腺肿瘤组织中的变化，为甲状腺肿瘤的发生学以及临床诊断提供参考。方法：应用流式细胞术和免疫荧光技术对甲状腺乳头状癌（40例）、甲状腺腺瘤（16例）、结节性甲状腺肿（21例）、正常甲状腺组织（10例）的CyclinD1、CDK4、p27、Rb基因蛋白的表达进行定量检测。结果：CvclinD1和CDK4基因蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的表达量显著高于其它三组（P〈0．01），而后三组间差异无显著性（P〉0．05）；p27基因蛋白在结节性甲状腺肿、甲状腺腺瘤和甲状腺乳头状癌表达量依次减少，均低于正常甲状腺组织（P〈0．05）；Rb基因蛋白的表达量在正常甲状腺组织、甲状腺腺瘤、结节性甲状腺肿、甲状腺乳头状癌中依次减少，但各组间无显著性差异（P〉0．05）。结论：CyclinD1／CDK4高表达、p27低表达在甲状腺乳头状癌的发生中起着重要的作用．而Rb基因在甲状腺乳头状癌的发生中可能不起主要作用。     

INK4a／ARF抑癌基因

细胞增殖失控和细胞凋亡障碍是癌变的根本原因,而大多数肿瘤细胞都是通过干扰 Rb（ retinoblastoma,Rb）蛋白和 p53的功能,导致细胞周期调节紊乱和凋亡反应阻抑的。 INK4a/ARF（ inhibitor of CDK4/ alternative reading frame）基因可同时调控这两条控制细胞增殖和凋亡的通路,它编码两种蛋白： p16INK4a,一种细胞周期素依赖蛋白激酶抑制蛋白 (CKI),可以上调 Rb蛋白的活性; p19ARF,可以阻抑 mdm2抑制 p53的活性（ mdm2：小鼠双微 -2, murine double minute-2）。这种同一基因—两个产物—两条途径的方式,在哺乳动物中相当罕见,为探索肿瘤的发生提供了一种新的思路。 1 p16INK4a的发现与结构 细胞周期是由细胞周期素（ cyclin）、细胞周期素依赖蛋白激酶 (CDK) 和细胞周期素依赖蛋白激酶抑制蛋白 (CKI)来进行调控的。 CKI分为两类： INK4（ inhibitor of CDK4）和 KIP家族,其中 INK4a和 INK4b位于染色体 9p21。 1992年, Cannon-Albright[1]在研究黑色素瘤的易感基因时,发现 9p21有一个抑癌基因所在位点; 1993年, Xiong Y[2]在用 DNA肿瘤病毒 SV40转化的二倍体成纤维细胞中 ,发现了一个与 CDK4紧密结合的 16 kDa的多肽 (p16);同年, Serrano[3]用酵母双杂合蛋白相关性筛选法,把两个融合蛋白 CAL4ad和 GALR4db与 p16基因表达蛋白进行筛选,发现 p16的 cDNA编码的蛋白与 CAL4ad 相同,命名为 p16INK4a蛋白; 1994年, Kamb[4]利用染色体步移法（ chromosal walk）的物理图和序列标记位点图 (sequence tagged sites,STSs),研究肺癌、乳腺癌、膀胱癌等多种细胞系,发现 9p21存在一个与 p16 cDNA序列相同的多肿瘤抑制基因,命名为 MTS1(multiple tumor suppressor 1),以后由 HUGO正式命名为 CDKN2(cyclin dependent kinase inhibitor 2)。     

人类肝癌发生过程中cyclinD1和CDK4及p16蛋白的表达

目的 研究肝细胞癌（HCC）发生过程中细胞周期调控因子cyclinD1、CDK4和p16蛋白表达及其意义。方法 应用免疫组织化学SP染色法检测正常肝组织、慢性肝炎，肝硬化，癌周肝硬化和肝癌组织中cyclinD1，CDK4和p16蛋白表达。对免疫组化结果进行计算机图象定量分析。结果 cyclinD1，CDK4和p16蛋白的阳性单位（positive unit，PU）和面数密度（area number density，NA）从慢性肝炎（PU分别为39．4、41．0和33．3；NA分别为236．7、272．7和237．4），肝硬化（PU分别为40．8、45．2和43．6；NA分别为313．8，354．6和322．9）癌周肝硬化（PU分别为55．5、59．4和54．4；NA分别为481．9、488．9和432．6）到肝癌（PU分别为59．6、63．7和58．1；NA分别为549．2、587．7和451．3）表达逐渐增强。癌周肝硬化和肝癌组织中cyclinD1、CDK4、p16的表达明显高于慢性肝炎和肝硬化（P值分别为0．034、0．020、0．030、0．007、0．003和0．005）但癌周肝硬化和肝癌组织之间差异无统计学意义，P值分别为0．433、0。535和0．447。慢性肝炎和肝硬化中cyclinD1、CDK4、p16阳性信号主要定位于胞核，而癌周肝硬化和HCC中主要定位于胞质。P16与HCC的分化程度有关，但未发现cyclinD1、CDK4与肿瘤分化程度之间有相关性。结论 cyclin-细胞周期蛋白依赖性激酶（CDKs）．细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子（CKIs）调控网络中，相关调控因子的异常可能参与了HCC的发生、发展。CyclinDl、CDK4的过度表达可能是肝癌发生过程中的早期事件。在HCC的发生过程中p16高表达可能是细胞周期正反馈调控的结果，在HCC的发生中可能属于早期事件，而p16表达下降或缺失可能是肝癌发生过程中的晚期事件。