左归丸对免疫性卵巢早衰小鼠卵巢Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的探讨左归丸对免疫性卵巢早衰小鼠(POF)卵巢Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法以小鼠透明带3为抗原,皮下多点注射免疫BALB/c雌性小鼠建立免疫性卵巢早衰模型。设左归丸低、中、高剂量进行治疗,以泼尼松、己烯雌酚为阳性对照,免疫组化法检测卵泡、卵巢间质Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果与空白对照组比较,模型组大卵泡及小卵泡Bcl-2蛋白的表达均减少,Bax蛋白的表达均增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组相比,左归丸高剂量组大卵泡及小卵泡Bcl-2蛋白的表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.001);左归丸高、中、低剂量组卵巢间质Bcl-2蛋白的表达均明显增加,差异有统计学意义(P<0.05～0.001),大卵泡及小卵泡Bax蛋白的表达均减少,差异有统计学意义(P<0.01～0.001);左归丸中剂量组卵巢间质Bax蛋白的表达减少,差异有统计学意义(P<0.05)。左归丸各剂量组卵泡Bcl-2蛋白的表达呈现一定的量效关系。结论卵泡凋亡过快可能导致卵巢早衰,左归丸可能通过上调卵泡及卵巢间质Bcl-2蛋白的表达,下调Bax蛋白的表达,抑制卵泡的过快凋亡,从而改善卵巢功能。     

左归丸对免疫性卵巢早衰小鼠抗卵巢抗体的影响

目的探讨左归丸对免疫性卵巢早衰(POF)小鼠生殖内分泌及抗卵巢抗体(AoAb)的影响。方法以SD雌性大鼠卵巢组织制备卵巢抗原,皮下多点免疫接种BALB/C雌性小鼠,建立POF模型。用左归丸处理造模过程中不同时间点小鼠,以泼尼松为阳性对照,光镜下观察卵巢组织的形态学特征,放射免疫法检测外周血血清卵泡刺激素(FSH)及雌二醇(E2)水平,酶联免疫法检测外周血AoAb。结果POF小鼠卵巢间质可见淋巴细胞浸润,外周血FSH升高,E2下降,AoAb阳性。左归丸能减缓POF小鼠外周血FSH升高,提高体内E2水平,抑制AoAb产生,早期用药比后期用药作用显著。结论左归丸能改善POF小鼠卵巢免疫性炎症的损伤,对POF具有一定的预防和治疗作用。     

左归丸对卵巢早衰小鼠卵巢超微结构及自噬相关基因表达的影响

目的 观察左归丸对卵巢早衰小鼠卵巢超微结构及自噬相关基因表达的影响。方法 取60只ICR小鼠,采用腹腔注射环磷酰胺方式建立卵巢早衰模型,将造模成功小鼠随机分为模型组、戊酸雌二醇组及左归丸低、中、高剂量组各12只,另选取12只ICR小鼠作为正常组。左归丸低、中、高剂量组分别给予13.65 g/kg、40.95 g/kg、122.85 g/kg左归丸浸膏灌胃,戊酸雌二醇组给予0.13 mg/kg戊酸雌二醇溶液灌胃,正常组和模型组给予等量蒸馏水灌胃,均连续灌胃30 d。观察各组小鼠动情周期情况;ELISA法检测灌胃10 d、20 d血清抗苗勒管激素(AMH)水平和灌胃结束后血清AMH、雌二醇(E₂)、促卵泡激素(FSH)水平;透射电镜观察卵巢颗粒细胞超微结构;Western blot及qRT-PCR法分别检测卵巢组织中自噬相关基因Beclin-1、LC3B、p62蛋白和mRNA表达情况,并通过激光共聚焦显微镜对以上基因进行定位和定量分析。结果 与正常组比较,模型组小鼠动情周期紊乱;血清AMH水平呈持续下降趋势(P<0.05),血清E₂水平明显...     

左归丸对化疗致卵巢早衰小鼠卵巢功能的影响

目的通过观察左归丸(熟地、山药、枸杞、山茱萸、川牛膝、菟丝子、鹿角胶、龟板胶)对化疗致卵巢早衰模型小鼠卵巢功能的影响,探讨其作用机制。方法将72只昆明雌性小鼠随机分为空白组,模型组,戊酸雌二醇片组,左归丸低、中、高剂量组。除空白组小鼠腹腔注射等量生理盐水外,其余各组小鼠腹腔注射环磷酰胺复制卵巢早衰模型,连续灌胃给药30 d。每天测小鼠动情周期。末次给药2 h后各组小鼠取血,ELISA法测定外周血清雌二醇(E_2)、促卵泡激素(FSH)含有量。子宫称重计算脏器系数。HE染色进行双侧卵巢组织病理学检查。部分卵巢采用DNA末端原位标记法,以TUNEL细胞凋亡检测试剂盒检测卵巢颗粒细胞凋亡。结果左归丸可有效改善化疗致卵巢早衰小鼠动情周期紊乱,有效升高血清E_2含有量,降低FSH含有量,提高子宫、卵巢系数,改善卵巢组织病理学改变,下调卵巢颗粒细胞凋亡。结论左归丸可有效改善化疗致卵巢早衰小鼠衰老进程,恢复卵巢功能。     

左归丸及右归丸对卵巢早衰小鼠卵巢衰老的预防作用

目的研究左归丸及右归丸对卵巢早衰小鼠卵巢功能及卵巢沉默调节蛋白(SIRTs)表达的影响。方法 48只C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组(给予生理盐水)、左归丸及右归丸4组,除正常组外,其余3组动物腹腔注射环磷酰胺建立卵巢早衰模型。给药8周后,采用卵泡计数和血清黄体生成素(LH)、基础卵泡刺激素(FSH)、抗苗勒管激素(AMH)、基础抑制素B(INHB)评价卵巢功能。RT-PCR法和Western blot法测定卵巢组织SIRTs mRNA和蛋白的表达。结果模型组小鼠卵巢卵泡计数、SIRT1、SIRT3及血清AMH、INHB显著低于正常组;血清LH、FSH显著高于正常组。左归丸和右归丸组卵泡计数、SIRT1及血清AMH、INHB显著高于模型组;血清LH、FSH显著低于模型组。右归丸组原始卵泡数显著高于左归丸组。结论左归丸和右归丸具有显著的抗卵巢衰老作用,其作用机制与对卵巢SIRT1表达的上调作用有关。     

补肾活血方对卵巢早衰小鼠颗粒细胞凋亡的影响

目的探讨补肾活血方抑制卵巢早衰(POF)小鼠卵泡颗粒细胞凋亡的作用机制。方法以小鼠透明带3为抗原,皮下多点注射免疫BALB/c雌性小鼠建立免疫性POF模型。取40只清洁级雌性小鼠,随机分为空白组、模型组、阳性药组、补肾活血方组。补肾活血方组给予补肾活血方药液灌胃,阳性药组给予戊酸雌二醇药液灌胃,模型组和空白组给予等量生理盐水灌胃,2次/d,连续15 d。取卵巢、子宫、胸腺进行称重,计算其脏器指数;HE染色观察颗粒细胞凋亡情况;采用放射免疫法检测雌二醇(E2)、促黄体生成激素(LH)和促卵泡生成激素(FSH)的水平;采用RT-PCR分析卵巢颗粒细胞中Fas、Fas-L m RNA表达情况。结果与空白组比较,模型组卵巢、胸腺、子宫质量和E2水平显著降低(P0.05,P0.01),FSH、LH水平和Fas、Fas-L m RNA表达显著升高(P0.01);与模型组比较,给药组颗粒细胞凋亡明显减少,卵巢指数、子宫指数、胸腺指数增加(P0.05),E2水平升高(P0.01),FSH、LH水平及Fas、Fas-L m RNA表达明显降低(P0.05,P0.01)。结论补肾活血方可调节下丘脑-垂体-卵巢轴的激素水平,通过降低Fas、Fas-L的m RNA表达抑制细胞凋亡。     

左归丸对免疫性卵巢早衰模型小鼠卵巢GDF-9/ Smad2信号转导的影响

目的 观察左归丸对免疫性卵巢早衰（premature ovarian failure,POF）模型小鼠卵巢生长分化因子-9（growth differentiation factor-9,GDF-9）/Smad2信号转导的影响,探讨左归丸治疗POF的机制。方法 将84只雌性Balb/c小鼠随机分为空白对照组（12只）、模型组（24只）、左归丸组（24只）及己烯雌酚组（24只）。除空白对照组外,其余3组以小鼠透明带多肽3（zona pellucida 3, ZP3）为抗原,皮下多点注射建立POF模型,左归丸组及己烯雌酚组分别给予2.7 g/（kg·d）左归丸及0.15 mg/（kg·d）己烯雌酚水溶液灌胃,每日1次,每周6次,连续灌胃4、8周。观察各组小鼠卵巢生长卵泡比率;分别采用免疫组化法及Western blot法检测小鼠卵巢组织GDF-9及Smad2蛋白表达水平。结果 与空白对照组比较,模型组造模4、8周小鼠卵巢生长卵泡比率及GDF-9、Smad2蛋白表达均明显减少（P<0.05）;与模型组同期比较,左归丸及己烯雌酚组小鼠卵巢生长卵泡比率、GDF-9蛋白水平表达明显升高（P<0.05）,左归丸组8周Smad2蛋白水平表达升高（P<0.05）。结论 POF的发病可能与卵巢GDF-9蛋白表达水平不足,GDF-9/Smad2信号转导功能低下,导致始基卵泡不能有效募集,原位闭锁有关。左归丸能增加卵泡GDF-9蛋白表达,其机制可能是通过GDF-9/Smad2信号转导通路对卵泡生长发育进行调节,从而发挥治疗POF的作用。     

左归丸对卵巢早衰小鼠免疫功能的影响

目的：探讨补肾复方左归丸对免疫性卵巢早衰（POF）小鼠免疫功能的影响。方法：以小鼠透明带3为抗原，皮下多点注射免疫BALB／C雌性小鼠建立免疫性卵巢早衰模型。设左归丸低、中、高不同剂量进行治疗，以泼尼松、己烯雌酚为阳性对照，流式细胞仪检测脾淋巴细胞T淋巴细胞亚群，ELISA法检测外周血清抗透明带抗体（AZpAb）水平。结果：POF小鼠CD4^＋／CD8^＋比值、NK1．1明显增高，AZpAb明显增加。左归丸各剂量组CD4^＋／CD8^＋比例较恒定；NK1．1明显增高，但幅度不及模型组；AZpAb增幅也不及模型组，差异显著；各剂量组间无线性量效差异。结论：POF小鼠CD4^＋／CD8^＋比例失衡，AZpAb水平增加，免疫机制失衡，左归丸可调节POF CD4^＋／CD8^＋平衡，抑制AZpAb水平，对POF小鼠免疫功能有一定改善作用。     

补肾养血方对卵巢早衰小鼠凋亡调控蛋白Bcl-2/Bax的影响

目的：探讨补肾养血方对免疫性卵巢早衰（POF）小鼠卵巢凋亡调节基因B细胞淋巴瘤/白血病-2原癌基因（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）表达的影响。方法：以小鼠透明带3（Zp3）为抗原,皮下多点注射免疫 BALB/c雌性小鼠,14 d后强化免疫,建立免疫性卵巢早衰模型。设补肾养血方低、中、高剂量（5.1,10.2,20.4 g·kg^-1）进行治疗,以补佳乐（戊酸雌二醇0.6 mg·kg^-1）为阳性对照,于造模后15 d开始灌胃给药1次/d,连续6周（每1周休息1 d）。放射免疫法检测小鼠血清激素水平,Western法检测卵巢组织 Bcl-2,Bax蛋白的表达。结果：与空白对照组相比,模型组小鼠卵巢Bcl-2蛋白的表达减少,Bax蛋白表达增加,（P<0.05）,模型组小鼠卵巢Bcl-2/Bax下降（P<0.01）,提示模型组卵泡Bcl-2蛋白的低表达、Bax蛋白的高表达可能加速了卵泡的凋亡,导致卵巢早衰;与模型组相比,补肾养血方高、中、低剂量组及西药组小鼠卵巢Bcl-2蛋白的表达明显增加（P<0.01,P<0.05）,卵巢Bax蛋白的表达均减少（P<0.05）,Bcl-2/Bax明显降低（P<0.05）。结论：卵泡凋亡过快可能导致卵巢早衰,补肾养血方可能通过上调卵泡及卵巢间质Bcl-2蛋白的表达,下调Bax蛋白的表达,抑制卵泡的过快凋亡,从而改善卵巢功能。     

左归丸联合干细胞治疗对化疗后卵巢早衰大鼠的影响

目的 探讨补肾养阴药左归丸联合干细胞（MSCs）治疗对化疗后卵巢早衰大鼠的影响。方法60只大鼠按随机数字表法分为空白组、模型组、干细胞组、补肾养阴组及干细胞+补肾养阴组,每组12只。除外空白组,其余各组连续腹腔注射环磷酰胺（CTX）15 日建立卵巢早衰模型。干细胞组：单次尾静脉注射MSCs（3×106/mL,1 mL）,之后生理盐水灌胃（2 mL/d）28 日。补肾养阴组：单次尾静脉注射生理盐水 1 mL,之后左归丸灌胃（3 g/kg）28日。干细胞+补肾养阴组：单次尾静脉注射MSCs（3×106/mL,1 mL）,之后左归丸灌胃（3 g/kg）28日。空白组及模型组：单次尾静脉注射生理盐水1 mL,之后生理盐水灌胃（2 mL/d）28 日。观察大鼠给药前、给药14 日及28 日的体重,左归丸给药结束后称取卵巢、子宫湿重,HE染色观察卵巢及子宫组织病理变化;ELISA法检测外周血雌二醇（E2）、卵泡刺激素（FSH）及黄体生成素（LH）水平。结果 与空白组比较,模型组大鼠体重随造模时间延长而日趋降低（P<0.01）;与模型组比较,干细胞组、补肾养阴组、干细胞+补肾养阴组大鼠在左归丸给药14 日及28 日体重增加（P<0.01）。与模型组比较,各治疗组成熟卵泡、黄体细胞及颗粒细胞均增多,子宫内膜增厚、腺体增多,尤以干细胞+补肾养阴组最显著。与空白组比较,模型组卵巢、子宫湿重下降（P<0.01）,E2水平下降,FSH、LH水平升高（P<0.01）;与模型组比较,补肾养阴组和干细胞+补肾养阴组卵巢、子宫湿重增加（P<0.05, P<0.01）,干细胞+补肾养阴组LH水平降低（P<0.05）,干细胞组、补肾养阴组、干细胞+补肾养阴组E2水平均升高,FSH水平均降低 （P<0.05, P<0.01）,治疗组中以干细胞+补肾养阴组各指标改善最为显著（P<0.05）。结论 左归丸及干细胞治疗可改善化疗所致的卵巢功能损害,其能显著提高E2含量,降低FSH、LH含量,且能有效抑制卵巢颗粒细胞凋亡,二者联合应用疗效更佳。     

左归丸对小鼠自身免疫性卵巢损伤的保护作用

目的探讨补肾复方左归丸对卵巢早衰（premature ovarian failure,POF）的影响。方法以SD雌性大鼠卵巢组织制备卵巢抗原,皮下多点注射免疫BALB／C雌性小鼠,建立卵巢早衰模型。于造模过程中不同时间点用左归丸处理小鼠,以泼尼松为阳性对照,放射免疫法检测外周血卵泡刺激素（FSH）、雌二醇水平（E2）,酶联免疫法检测外周血抗卵巢抗体（AoAb）,原位杂交法检测卵巢组织生长分化因子-9（GDF-9）mRNA的表达。结果POF小鼠卵巢间质可见淋巴细胞浸润,外周血FSH升高,E2下降,AoAb阳性,卵母细胞GDF-9 mRNA阳性细胞数减少,生长卵泡及成熟卵泡数减少。左归丸能减缓POF小鼠外周血FSH升高,提高体内E2水平,抑制AoAb产生,提高卵母细胞GDF-9 mRNA阳性细胞数,使生长卵泡及成熟卵泡数增加,早期用药比后期用药作用显著。结论左归丸能改善卵巢免疫性炎症的损伤,对免疫性卵巢早衰具有治疗作用。     

抗苗勒氏管激素在免疫性卵巢早衰中的发病意义及左归丸的作用机制

目的:研究抗苗勒氏管激素(AMH)在免疫性卵巢早衰(POF)中的发病意义及左归丸对POF小鼠AMH及其信号转导通路[AMH/活化素蛋白激酶2(ALK2)/Smad1]的影响,探讨左归丸的作用机制。方法:8周龄Balb/c雌性小鼠随机分为正常组、模型组、戊酸雌二醇组、左归丸组。以小鼠透明带3多肽建立POF动物模型,予左归丸及戊酸雌二醇进行治疗。电化学发光法检测小鼠血清AMH,卵泡刺激素(FSH)的水平,光学显微镜检测小鼠生长卵泡比率,免疫组化法及蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测小鼠卵巢AMH及其信号转导蛋白ALK2,Smad1蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠血清AMH水平明显降低,FSH水平明显升高(P0.05);与模型组比较,左归丸组明显升高小鼠血清AMH水平,明显降低FSH水平(P0.05)。与正常组比较,模型组小鼠卵巢生长卵泡比率明显减少(P0.01),与模型组比较,左归丸组生长卵泡比率明显增高(P0.05)。AMH,ALK2,Smad1蛋白均在卵泡颗粒细胞胞浆表达。与正常组比较,模型组小鼠卵巢AMH,ALK2,Smad1蛋白表达明显下降(P0.05);与模型组比较,左归丸组小鼠卵巢AMH蛋白表达明显升高(P0.05),免疫组化检测显示ALK2,Smad1表达均有上升,但无统计学差异,Western blot检测显示ALK2,Smad1表达也均明显升高(P0.05)。结论:POF的发生与AMH分泌不足、卵巢AMH蛋白表达低下有关,其通过影响AMH/ALK2/Smad1信号转导,影响始基卵泡的募集,从而使卵泡消耗过快,卵巢功能过早衰竭,卵巢处于衰老状态。左归丸可促进POF小鼠AMH分泌,上调卵巢AMH蛋白的表达,并通过影响AMH/ALK2/Smad1信号转导,抑制始基卵泡的过快募集和消耗,改善卵巢功能。     

左归丸治疗卵巢储备功能减退的方解及其药理研究

卵巢储备功能减退是严重影响妇女生殖健康及心理健康的一种疾病,其发病机制不明。张氏左归丸为补肾名方,有不少医家将其应用于治疗卵巢储备功能减退,发现其确能提高血清雌激素水平,但对其机理研究未能明确,本文就其方中各味方药入手,从药学性味及现代药理来剖析其治疗卵巢储备功能减退的机制,为临床用药提供理论依据。     

补肾活血方对免疫性卵巢早衰小鼠的影响

目的:探讨补肾活血方对免疫性卵巢早衰(POF)小鼠的治疗作用。方法:以重组猪卵透明带(pZP4)蛋白两后脚掌和皮下多点注射免疫雌性BALB/c小鼠建立POF动物模型。小鼠随机分为正常组、模型组、雌二醇组和补肾活血方高、中、低剂量组(按生药量计分别为15.0,7.5,3.75 g.kg-1),分析ig 20 d后阴道脱落细胞涂片、外周血雌二醇(E2)浓度、血清抗透明带(pZP4)抗体变化及卵巢组织炎形态学观察。结果:补肾活血方高剂量组小鼠阴道涂片显示动情周期基本规则为6～7 d;高剂量组可明显升高小鼠血清E2浓度(P<0.01);高剂量组小鼠的血清抗pZP4抗体滴度显著下降(P<0.05);高剂量组小鼠初级卵泡和次级卵泡的数量显著增加(P<0.05)。结论:补肾活血方能改善卵巢的生殖内分泌功能和卵巢内各期卵泡和黄体的发育状况,并可在一定程度上抑制自身免疫早衰作用。     

清心滋肾汤辅助西药治疗卵巢早衰疗效探讨

目的:探讨中医验方清心滋肾汤辅助雌孕激素序贯治疗卵巢早衰临床效果。方法:研究对象选取杭州市中医院2014年3月—2015年3月收治的卵巢早衰患者120例,采用随机抽样方法分为对照组和中医组,各60例;其中对照组患者采用雌孕激素序贯治疗,中医组患者则在此基础上加用国医大师夏桂成中医验方清心滋肾汤辅助治疗;比较两组患者临床疗效,治疗前后Kupperman评分及血清激素水平等。结果:对照组和中医组患者治疗总有效率分别为60.00%,81.67%;中医组患者临床疗效优于对照组(P0.05);中医组患者治疗后Kupperman评分显著优于治疗前和对照组(P0.05);中医组患者治疗后卵泡刺激素(FSH),黄体生成激素(LH),血清雌二醇(E2)及抗苗勒氏管激素(AMH)水平明显优于治疗前和对照组(P0.05)。结论:中医验方清心滋肾汤辅助西药治疗卵巢早衰可有效缓解临床症状体征,促进月经周期恢复,并有助于改善血清激素水平。     

细胞凋亡途径探讨二仙汤治疗大鼠卵巢早衰实验研究

目的：通过卵泡颗粒细胞的凋亡途径探讨二仙汤对化疗性损伤卵巢早衰的影响。方法：将SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性组和二仙汤组,腹腔注射顺铂建立化疗性损伤大鼠卵巢早衰动物模型。造模后连续4周各组灌胃给予相应药物治疗。观察大鼠一般情况;测定血清中E2、FSH、LH和Pro含量;观察卵巢组织形态;TUNEL法分析卵泡颗粒细胞的凋亡;免疫组化检测BAX、Bcl-2和VEGF蛋白的表达情况。结果：模型组体质量下降,动情周期紊乱,治疗后体质量增加,动情周期恢复。与正常组比较,模型组E2、LH下降,FSH水平升高,Pro含量各组比较无显著差异。TUNEL检测模型组较正常组阳性表达增多,二仙汤组较模型组阳性表达减少。模型组较正常组BAX表达明显升高,Bcl-2下降,二仙汤治疗后与模型组比较BAX表达量下降,Bcl-2表达升高;VEGF蛋白在模型组中表达明显低于正常组,二仙汤组较模型组表达增多,阳性组表达略有恢复。结论：顺铂可致卵泡颗粒细胞凋亡,造成卵巢功能过早衰退;二仙汤通过调节血清中各激素含量,改变凋亡细胞相关蛋白的表达量来降低顺铂对卵巢的损害,促进卵泡发育,改善并增强卵巢功能。     

中西医结合治疗卵巢早衰的临床观察

目的：探讨中西医结合治疗卵巢早衰的临床疗效。方法：将60例患者按数字表法随机分为两组,对照组30例采用雌孕激素人工周期方案。治疗组30例在对照组治疗的基础上服用中药左归丸加减[方药组成：熟地黄24 g,鹿角胶（烊化）12 g,山药12 g,山茱萸12 g,枸杞子12 g,菟丝子12 g,龟板胶（烊化）12 g,川牛膝9 g]。每日1剂,水煎服,分早晚2次服用。疗程均为3个月经周期,观察两组临床疗效,观察指标为血清E2、FSH、LH水平的变化,以及症状的改善。结果：中西药结合治疗组有效率为66.7%,高于西药对照组有效率为55.0%,并且乳腺反应最小。结论：中西医结合治疗卵巢早衰疗效显著。     

艾灸结合中药治疗卵巢功能早衰临床观察

探讨艾灸结合中药治疗卵巢功能早衰的临床疗效。方法：采用艾灸结合中药滋肾健脾、疏肝解郁、调理冲任治疗卵巢功能早衰38例。疗程3个月。结果：治愈14例,好转20例,无效4例,总有效率89.5%。结论：艾灸结合中药内服治疗卵巢功能早衰疗效较好。